Введение к работе
Актуальность проблемы. Интегративная роль системы гемостаза в реализации транспортной функции крови многообразна. В условиях физиологической нормы она проявляется способностью к поддержанию жидкого состояния крови и быстрому тромбированию поврежденных участков сосудов, что требует слаженного взаимодействия всех компонентов гемостаза. При реакциях напряжения происходит ускорение непрерывно протекающего свертывания, нередко выходящее за рамки нормокоагулемии и проявляющееся тромбогеморрагическими осложнениями (Шахматов И.И., Киселев В.И., 2010; Датиева Ф.С. с соавт., 2011; Хозяева Е.А., 2011; Липай Н.В., 2011; Rau J.C., 2007). Возможность развития последних зависит не только от интенсивности возмущающего воздействия, но и функционального потенциала отдельных звеньев регуляции агрегатного состояния крови, что требует поиска новых средств направленного воздействия на гемостаз.
Усилия специалистов в области гемостазиологии до сих пор в большей степени были направлены на борьбу с последствиями усиленного тромбиногенеза (тромбин является основным энзимом плазмокоагуляции). В клинической практике широко используются прямые ингибиторы тромбина (Николаева Л.С., 2011; Суханова Г.А. с соавт., 2011; Crawley J.T.B. е.а., 2007), антагонисты витамин К-зависимых факторов свертывания (Галявич А.С., 2012; Кропачева Е.С., 2012), уже достаточно известные (ацетилсалициловая кислота) и новые антиагреганты, в основе механизма действия которых лежит их способность блокировать GP ПЬ/Ша- (Ткачева О.Н. с соавт., 2011; Ferguson J., 2004), P2Y12- (Зиганшин А.У., 2010; Zafar M.U. e.a., 2010), PAR-1- и PAR-4-рецепторы (Люсов B.A., Таратухин E.O., 2011; Goto S.H. e.a., 2010) клеточных мембран тромбоцитов. Ряд данных свидетельствует о позитивном эффекте ингибиторов самосборки фибрина и тромбиногенеза животного и растительного происхождения, обладающих антитромбогенной в отношении сосудистой стенки, и антиагрегационной активностями (Бушин А.Е., 2009; Дрозд Н.Н. с соавт., 2011; Калинина Т.Б. с соавт., 2011), регуляторных пептидов (Калинин Е.П. с соавт., 2011; Тарнуев В.А., 2011).
Вместе с тем, применение различных антикоагулянтов и антиагрегантов в профилактических целях ограничивается рядом побочных эффектов -кумулятивными свойствами (что требует постоянного контроля за гемокоагуляцией), возможностью развития тромбоцитопений, тромбоэмболии при отмене препарата, нейтропений, апластических анемий и других осложнений (Шилов A.M., 2012; Patrono С, Rocca В., 2008).
В исследованиях, проведенных за последние десятилетия, была обоснована возможность снижения интенсивности внутрисосудистого свертывания крови с помощью неспецифических воздействий, в частности, синтетическими и природными антиоксидантами. Так, в условиях эксперимента и клиники было установлено, что предварительное введение витаминов-антиоксидантов, а также некоторых ненасыщенных жирных кислот
ограничивает вероятность тромбообразования (Шаповалова Е.М., 2008; Громова О.А. с соавт., 2011; Barden А. е.а., 2011; Larson М.К. е.а., 2011).
Вместе с тем, в естественных условиях антиоксиданты содержатся в источниках растительного и животного происхождения. Среди последних выделяются т.н. «животные жиры» - природные микст-субстанции, обладающие достаточной концентрацией мононенасыщенных и полиненасыщенных (ю-З и об) жирных кислот, а также жирорастворимых витаминов. Для настоящего исследования в качестве биологически активной добавки был выбран жир бурого медведя, широко используемый в нетрадиционной («народной») медицине в качестве средства, обладающего противовоспалительным, иммуностимулирующим и регенераторным эффектами, отличающегося высокой эффективностью и малой токсичностью при условии рационального употребления.
Учитывая тесную взаимосвязь гемостаза с липопероксидацией (Бышевский А.Ш., 2003; Богданова А.С. с соавт., 2012), данные об антиоксидантных свойствах липидных компонентов медвежьего жира (олеиновая, линолевая и линоленовая кислоты, витамины А и Е), а также отсутствие сведений об их комплексном влиянии на гемостаз, нам представлялось перспективным изучить характер, направленность, а также возможные механизмы влияния БАД «Медвежий жир» (далее медвежий жир) на непрерывно протекающее свертывание крови в условиях физиологической нормы и при интенсивной индукции тромбиногенеза.
Цель работы:
Изучить характер и механизмы влияния медвежьего жира на различные звенья гемостаза в условиях физиологической нормы и при экспериментальной тромбинемии различного происхождения.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
-
Изучить состояние плазменного и клеточного гемостаза, а также ПОЛ в клетках крови лабораторных животных в условиях физиологической нормы на фоне дополнительного введения медвежьего жира.
-
Охарактеризовать влияние медвежьего жира на состояние плазменного и клеточного гемостаза, состояние ПОЛ и толерантность животных к тромбину при введении в кровоток тромбина (экзогенная тромбинемия).
-
Оценить влияние медвежьего жира на параметры тромбоцитарного (тромбоцитограмма) и плазменного гемостаза (АЧТВ, ПТВ, ТВ, АТ-Ш, РКМФ, содержание фибриногена) в условиях эндогенной тромбинемии, вызываемой комбинированным стрессом и необратимой ишемией.
-
Исследовать влияние медвежьего жира на функциональное состояние сосудистой стенки в условиях экспериментальной ишемии (неполная окклюзия магистрального сосуда).
-
Охарактеризовать влияние медвежьего жира на содержание циркулирующих в плазме надмолекулярных фрагментов и биохимических маркеров стресса при тромбинемии различного генеза.
Научная новизна:
Экспериментальными исследованиями впервые установлено, что введение медвежьего жира в дозе 0,08 мл на 100 г массы тела животного, не оказывая существенного влияния на гемостаз в условиях физиологической нормы, повышает толерантность животных к тромбинемии экзогенного и эндогенного происхождения.
Впервые выявлено, что защитное действие медвежьего жира, проявляющееся ослаблением гемостатических сдвигов при тромбинемии, реализуется за счет изменения функционального состояния тромбоцитов, сосудистой стенки, коагуляционного и противосвертывающего потенциалов, а также ингибирования свободнорадикальных процессов в клетках крови.
Доказано, что введение медвежьего жира в условиях ускорения непрерывно протекающего свертывания крови ограничивает поступление в кровоток циркулирующих надмолекулярных фрагментов и развитие гиперкатехо л аминемии.
Теоретическая и практическая значимость работы:
Полученные данные расширяют фундаментальные представления о биологических эффектах медвежьего жира, в частности - его влиянии на различные компоненты гемостаза в условиях физиологической нормы и при запредельной активации свертывания крови.
Результаты исследования используются для подготовки студентов по специальности «Лечебное дело» в рамках дисциплин «Физиология», «Фармакология» на кафедрах нормальной и патологической физиологии, фармакологии, клинической фармакологии с курсом иммунологии и аллергологии Ханты-Мансийской Государственной Медицинской академии.
Материалы работы могут быть использованы научно-исследовательскими учреждениями гемостазиологического профиля, занимающимися поиском новых средств направленного воздействия на компоненты системы регуляции агрегатного состояния крови.
Работа выполнена на базе кафедры медицинской и биологической химии Ханты-Мансийской Государственной Медицинской академии в рамках научной программы «Механизмы адаптации и гомеостаза у человека в норме и при патологии в условиях северных территорий» (регистрационный номер 01.2.00708367).
Положения, выносимые на защиту:
1. Медвежий жир, предварительно вводимый животным в дозах, адекватных рекомендуемым для человека, ослабляет последствия экзогенной тромбинемии, вызываемой введением в кровоток сериновой протеазы -тромбина, а также эндогенной тромбинемии, вызываемой комбинированным стрессом и необратимой окклюзией магистрального сосуда. Это проявляется снижением степени потребления тромбоцитов, факторов свертывания и антикоагулянтов, а также ускорением нормализации параметров тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза в динамике.
2. Ограничение интенсивности тромбиногенеза при введении медвежьего
жира проявляется увеличением антиагрегационной активности сосудистой
стенки и изменением ее противосвертывающего потенциала в условиях
экспериментальной ишемии.
3. Протективный эффект медвежьего жира при различных видах
тромбинемии, проявляющийся повышением толерантности животных к
тромбину, связан с ослаблением процессов липопероксидации в клетках крови,
уменьшением фоновой суммарной тромбопластической активности
циркулирующих в плазме надмолекулярных фрагментов, прироста содержания
тромбопластических субстанций в кровотоке в условиях активации гемостаза и
лимитированием гиперкатехоламинемии.
Апробация и публикации:
Основные положения диссертационной работы доложены на XIV международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (г. Москва, 2009), российской конференции, посвященной 80-летию со дня рождения Р.И.Лифшица «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (г. Челябинск, 2009), XIV Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (с международным участием) «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (г. Санкт-Петербург, 2011), на VI-ой Всероссийской конференции по клинической гемостазиологии и гемореологии в сердечно-сосудистой хирургии (г. Москва, 2013). Результаты исследований опубликованы в материалах перечисленных научных форумов, в медико-биологических журналах (всего 13 публикаций). По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем диссертации: Диссертация изложена на 119 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, а также списка использованных источников литературы (216 отечественных и 96 иностранных).
