Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Морфофункциональная характеристика микрорайона печени 13
1.2. Лимфатическая система печени 16
1.3. Экспериментальная патология печени 22
1.4. Возможности коррекции функциональной активности печени фитопрепаратами 28
1.5. Влияние низкоэнергетического гелий-неонового лазерного излучения на биологические объекты 32
Глава 2. Материалы и методы исследования 39
2.1. Объект исследования 39
2.2. Моделирование хронического токсического гепатита 41
2.3. Методы коррекции хронического токсического гепатита (фитопрепараты и низкоэнергетическое гелий-неоновое лазерное воздействие) 41
2.4. Методы морфофункциональных исследований 43
2.4.1. Морфологические исследования 43
2.4.2. Биоорганические исследования 45
Глава 3. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени в физиологических условиях гемолимфоциркуляции и при хронической интоксикации ССЦ 47
3.1. Морфофункциональное исследование брыжеечного и печеночного лимфатических узлов в физиологических условиях жизнедеятельности 47
3.1.1. Брыжеечный лимфатический узел 47
3.1.2. Печеночный лимфатический узел 48
Резюме 49
3.2. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени при хронической интоксикации ССЦ 50
3.2.1. Брыжеечный лимфатический узел 50
3.2.2. Печеночный лимфатический узел 53
3.2.3. Печень 58
3.2.4. Распределение свободных жирных кислот в центральной лимфе и сыворотке крови 58
Резюме 62
Глава 4. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени в условиях коррекции хронической интоксикации ССЦ низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным излучением 67
4.1. Брыжеечный лимфатический узел 67
4.2. Печеночный лимфатический узел 70
4.3. Печень 73
4.4. Распределение свободных жирных кислот в центральной лимфе и сыворотке крови... 75
Резюме 75
Глава 5. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени в условиях коррекции хронической интоксикации ССЦ фитопрепаратами 82
5.1. Морфофункциональное исследования брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени при хронической интоксикации ССЦ в условиях коррекции фитопрепаратом (БАД к пище) "Лимфосан Г" 82
5.1.1. Брыжеечный лимфатический узел 82
5.1.2. Печеночный лимфатический узел 87
5.1.3 Печень 90
5.1.4. Распределение свободных жирных кислот в центральной лимфе и сыворотке крови 92
Резюме 93
5.2. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени при хронической интоксикации ССЦ в условиях коррекции фитопрепаратом (БАД к пище) "Оберег" 96
5.2.1. Брыжеечный лимфатический узел 96
5.2.2. Печеночный лимфатический узел 99
5.2.3. Печень 102
5.2.4. Распределение свободных жирных кислот в центральной лимфе и сыворотке крови 104
Резюме 105
Глава 6. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени в условиях сочетанной коррекции хронической интоксикации ССІ4 низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным излучением и фитопрепаратами 114
6.1. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени при хронической интоксикации ССЦ в условиях сочетанной коррекции низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным излучением и фитопрепаратом (БАД к пище) "Лимфосан Г" 114
6.1.1. Брыжеечный лимфатический узел 114
6.1.2. Печеночный лимфатический узел 117
6.1.3. Печень 121
Резюме 123
6.2. Морфофункциональное исследование брыжеечного, печеночного лимфатических узлов и печени при хронической интоксикации СС14 в условиях сочетанной коррекции низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным излучением и фитопрепаратом (БАД к пище) "Оберег" 126
6.2.1. Брыжеечный лимфатический узел 126
6.2.2. Печеночный лимфатический узел 129
6.2.3. Печень 132
Резюме 134
Обсуждение результатов 140
Выводы 171
Список литературы 174
Приложения 196
- Морфофункциональная характеристика микрорайона печени
- Методы коррекции хронического токсического гепатита (фитопрепараты и низкоэнергетическое гелий-неоновое лазерное воздействие)
- Распределение свободных жирных кислот в центральной лимфе и сыворотке крови
- Брыжеечный лимфатический узел
Введение к работе
Актуальность исследования.
В современной экологической медицине важная роль отводится экологической лимфологии, в рамках которой проводятся исследования экологически негативных или позитивных влияний на лимфатическую систему, а также изучаются возможности управляемой санации внутренней среды через воздействие на лимфатическую систему (Бородин Ю.И., 1996, 1999). К экологически зависимой патологии в настоящее время относят хронические заболевания печени, обусловленные попаданием в организм токсикантов из окружающей среды, обладающих канцерогенной активностью (Колесников СИ., Мичурина СВ. с соавт., 1995: Ищенко И.Ю., 2003).
Данные исследований ВОЗ позволили отнести тетрахлорметан (четыреххлористый углерод) к наиболее приоритетным экотоксикантам окружающей среды и потенциально канцерогенным для человека веществам. Экспериментально доказано, что гепатит, вызываемый введением тетрахлорметана, по многим показателям сходен с клиническими формами гепатитов, а печень является органом, наиболее подверженным его воздействию (Шкурупий В.А., 1973, 1989; Фактор В.М. с соавт., 1982; Скакун Н.П. с соавт., 1985, 1987, 1992; Султанова Л.И., 1989; Колпаков М.А., 2001 и др.). Исследования регионарных лимфатических узлов печени при хронической интоксикации тетрахлорметаном, проведенные Е. П. Шарайкиной (1976, 1978), свидетельствуют о выраженном угнетении их дренажной и лимфопролиферативной функции.
В соответствии с концепцией Ю. И. Бородина (1989), морфофункциональный статус лимфатических узлов может рассматриваться в качестве маркера средового прессинга на лимфатическую систему. В связи с этим, параллельное исследование брыжеечного и печеночного лимфатических узлов при хронической интоксикации тетрахлорметаном
7 позволит выявить характерные особенности их структурной организации, зависящие от регионарной анатомической локализации. В литературе отсутствуют точные количественные данные о структуре брыжеечных лимфатических узлов, являющихся регионарными к месту всасывания тетрахлорметана, в сочетании со структурным анализом регионарных лимфатических узлов печени.
Высокая токсичность тетрахлорметана объясняется образованием свободных радикалов, повышением активности перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Губский Ю.И., 1989; Осипов А.Н. с соавт., 1990 и др.). Информация о содержании и накоплении таких маркеров ПОЛ в лимфе и крови, как свободные жирные кислоты (СЖК), позволяет судить о глубине и степени выраженности патологического процесса (Бородин Ю.И. с соав. 2000). В литературе отсутствуют сведения о содержании и распределении СЖК в центральной лимфе и периферической крови при хронической интоксикации тетрахлорметаном и в условиях ее коррекции.
Развитием методов дренажа интерстиция явилось создание биологически активных добавок к пище (БАД), соединяющих свойства лимфостимулятора и стимулятора внешнего дренажа (Бородин Ю.И., 2000). БАД к пище, разработанные в НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, содержат растительные биофлавоноиды и сорбционную основу растительного происхождения (пищевые волокна), что позволяет использовать их для коррекции нарушений лимфатической системы (Асташова Т.А., Савицкая И.В., 1999). Вопрос об использовании фитопрепаратов, содержащих растения с антиоксидантным, сорбционным и гепатопротекторным действием (БАД к пище «Лимфосан Г», «Оберег»), для коррекции структуры печени и лимфатических узлов при хронической интоксикации тетрахлорметаном нигде не освещался, хотя известно, что введение антиоксидантов резко уменьшает токсическое действие тетрахлорметана, предотвращается развитие некроза (Зыков А.А. с соавт., 1989;InderR.E.etal.,1999).
Низкоэнергетическое гелий-неоновое лазерное излучение обладает лимфокоррегирующим и лимфостимулирующим действием в условиях развития патологического процесса (Шкурат Г.А., 2000, Казаков О.В., 2001), а чрезкожное низкоэнергетическое лазерное облучение проекции тимуса способствует восстановлению морфофункциональных изменений в лимфатических узлах в условиях циркуляторной гипоксии (Асташов В.В., 1998). Отсутствие научных данных об особенностях структурных преобразований печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, структуре печени, содержании и распределении СЖК в центральной лимфе и периферической крови при хронической интоксикации тетрахлорметаном в условиях сочетанной фито- и лазерной коррекции явилось основанием для выполнения исследования и обусловливает актуальность работы с научной и практической точек зрения.
Цель исследования.
Выявить особенности структурных преобразований в лимфатическом регионе печени и тонкой кишки при хронической интоксикации тетрахлорметаном (CCU) и в условиях коррекции низкоэнергетическим лазерным излучением и фитопрепаратами.
Задачи исследования:
1. Изучить морфофункциональное состояние печеночных, брыжеечных
лимфатических узлов, печень, центральную лимфу при хронической
интоксикации CCU.
2. Исследовать морфофункциональное состояние печеночных,
брыжеечных лимфатических узлов, печень, центральную лимфу при
хронической интоксикации CCU в условиях коррекции фитопрепаратами
(биологически активные добавки к пище (БАД) «Лимфосан Г» и «Оберег»).
3. Изучить морфофункциональное состояние печеночных, брыжеечных
лимфатических узлов, печень, центральную лимфу при хронической
интоксикации ССЦ в условиях чрезкожного воздействия
низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером на проекцию тимуса.
4. Выявить морфофункциональные преобразования в печеночных, брыжеечных лимфатических узлах и печени при хронической интоксикации ССЦ в условиях сочетанной коррекции фитопрепаратами (БАД к пище «Лимфосан Г» и «Оберег») и низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным облучением проекции тимуса.
Научная новизна.
В работе впервые дана характеристика особенностей структурной организации брыжеечных лимфатических узлов при пероральном хроническом введении экотоксиканта тетрахлорметана, а также анализ содержания и распределения свободных жирных кислот (СЖК) в центральной лимфе и периферической крови.
Полученные данные расширяют представление о структурно-клеточной организации печеночных лимфатических узлов при моделировании хронического токсического гепатита (хроническая интоксикация ССЦ в сочетании с алкогольной интоксикацией).
Впервые проведено структурное исследование печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, печени, а также проанализировано содержание и распределение СЖК при хронической интоксикации организма ССЦ в условиях чрезкожного гелий-неонового низкоэнергетического облучения проекции тимуса. Показано лимфостимулирующее действие облучения на структуру лимфатических узлов и нормализация процессов ПОЛ.
Впервые проведено структурное исследование печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, печени, а также проанализировано содержание и распределение СЖК при хронической интоксикации организма ССЦ в условиях применения фитопрепаратов (БАД к пище «Лимфосан Г» и «Оберег»). Показано восстанавливающее действие фитопрепаратов на морфофункциональное состояние исследуемых объектов при моделировании хронического токсического поражения печени.
Впервые показано на морфологическом уровне, что низкоэнергетическое гелий-неоновое лазерное облучение тимуса способствует повышению эффекта действия фитопрепаратов при хроническом токсическом гепатите.
Практическая значимость.
Обнаруженные характерные структурные преобразования в брыжеечных и печеночных лимфатических узлах, особенности содержания и распределения СЖК в лимфе и крови при токсическом поражении печени позволят производить адекватный подбор лекарственных средств для коррекции функций лимфатической системы, восстановления про-антиоксидантного равновесия в тканях.
Полученные структурные данные об активации лимфотока, Т-зависимого звена иммунного ответа в лимфатических узлах и восстановлении распределения СЖК в лимфе и крови при хроническом токсическом гепатите в условиях чрезкожного гелий-неонового лазерного облучения проекции тимуса позволяют сделать заключение о ценности этого способа коррекции для практического здравоохранения и целесообразности его дальнейшего изучения.
Улучшение транспортной функции и стимуляция
лимфопролиферативных процессов в лимфатических узлах, выявленные нами при коррекции токсического гепатита фитопрепаратами (БАД к пище «Лимфосан Г» и «Оберег»), является аргументом для использования этих препаратов в качестве вспомогательных средств при лечении гепатитов. Показано, что применение фитопрепаратов восстанавливает содержание и распределение СЖК в центральной лимфе и периферической крови, что свидетельствует о повышении тканевой устойчивости к свободно-радикальному окислению, которую определяют биофлавоноиды, содержащиеся в лекарственных растениях.
Результаты исследования сочетанного использования фитопрепаратов (БАД к пище «Лимфосан Г» и «Оберег») и низкоэнергетического гелий-
неонового лазерного облучения проекции тимуса для коррекции состояния хронического токсического гепатита показали перспективность применения данного метода в восстановительной медицине и профилактической лимфологии, направленного на улучшение метаболизма клеток печени, восстановление структурно-функциональной организации регионарных лимфатических узлов и усиление дренажно-детоксикационного потенциала в лимфатическом регионе.
Результаты работы позволяют разработать и расширить схемы вспомогательной терапии пациентов, страдающих токсическим гепатитом в условиях реабилитационных отделений стационаров и санаторно-курортных учреждений.
12 Положения, выносимые на защиту:
1. Хроническая интоксикация ССЦ вызывает одновременные
структурные преобразования в печеночном и брыжеечном лимфатических
узлах, выраженность которых зависит от их регионарной локализации и
функциональной специализации, изменяет содержание и распределение
свободных жирных кислот (СЖК) в центральной лимфе и периферической
крови.
Низкоэнергетическое гелий-неоновое лазерное облучение проекции тимуса при хронической интоксикации ССЦ активирует транспортную функцию печеночного лимфатического узла (увеличение площади мозгового вещества), увеличивает размеры Т-зависимой зоны брыжеечного и печеночного лимфатических узлов, способствует восстановлению кровообращения в печени и содержания СЖК в центральной лимфе и периферической крови.
Пероральное введение фитопрепаратов (БАД к пище "Лимфосан Г» и «Оберег») при хронической интоксикации ССЦ активирует транспортную функцию печеночных лимфатических узлов (увеличение размеров мозгового вещества) и лимфопролиферативную функцию брыжеечных лимфатических узлов (увеличение размеров коркового вещества), восстанавливает соотношение СЖК в центральной лимфе и периферической крови, структурные соотношения в печени.
4. Сочетанное применение облучения проекции тимуса и введения
фитопрепаратов (БАД к пище "Лимфосан Г» и «Оберег») при хронической
интоксикации ССЦ способствует более выраженной активации транспортной
функции печеночных лимфатических узлов (увеличение размеров мозговых
синусов), восстановлению структуры печени, активации
лимфопролиферативной функции и восстановлению структурных
соотношений брыжеечных лимфатических узлов в сравнении с
монокоррекцией.
Морфофункциональная характеристика микрорайона печени
Печень, как известно, является органом, выполняющим ряд сложных функций, что находит свое отражение и в ее строении. В паренхиму печени вступают два разных по своему химическому составу тока крови: венозный и артериальный. Главной специализированной единицей печени являются паренхиматозные клетки - гепатоциты, составляющие 60% всех клеточных элементов печени, расположенные, как правило, двумя рядами. Полигональной формы гепатоциты образуют анастомозирующие печеночные балки, имеющие радиальное направление от периферии печеночной дольки к ее центру. Между ними в том же напрвлении прослеживаются внутридольковые кровеносные синусоидные капилляры, отграниченные от паренхиматозных клеток синусоидными клетками.
Паренхиматозные клетки печеночной дольки обладают функциональной гетерогенностью. Так, перипортальные (темные) гепатоциты более активны в плане синтеза секретируемых белков плазмы крови. Процессы внешней секреции и детоксикации более интенсивны в клетках, локализованных вокруг центральной вены (светлые гепатоциты) (Шкурупий В.А., 1973; Секамова СМ., Бекетова Т.П., 1975; Хлыстова З.С., 1987). В гепатоцитах содержится одно, реже - два ядра. Ядра округлой формы, четко структурированы. Известно, что воздействия токсикантами могут приводить к серьезным изменениям ядерного аппарата и нарушению их пролиферации (Мустафин А.Г., 1976) и к предраковым изменениям в печени. Сравнительно недавно обнаружено наличие в ядерных мембранах монооксигеназной системы, активность которой по сравнению с микросомной составляет 15-20% (Ляхович В.А. с соавт., 1981). Изучение механизмов регуляции и функции ядер гепатоцитов показало, что изолированные ядра печени крыс обладают моноаминооксидазной активностью. В гепатоцитах определяется хорошо развитая цитоплазматическая сеть, выявляемая в виде ограниченных мембранами канальцев и везикул. Считается, что свободные рибосомы гепатоцитов синтезируют белки для самой клетки, а рибосомы. Связанные с мембранами, вырабатывают белки плазмы крови, белковую часть липопротеидов (Campbell P.N., 1965). В работах А. А. Покровского, В. А. Тутельяна (1976), Л. Е. Панина, Н. Н. Маянской (1977) показано, что лизосомально-вакуолярный аппарат гепатоцитов осуществляет связь метаболизма ксенобиотиков с внутренней средой. Именно этот механизм запускает процесс реутилизации продуктов обмена в общем метаболическом котле организма. При этом, лизосомы участвуют в процессах трансформации липидов в гликоген в условиях функционального напряжения организма, при патологических и экстремальных состояниях, сопровождающихся мобилизацией энергетических резервов клеток и интенсивной утилизацией гликогена (Лебкова Н.П., 1982). Л. В. Слепневой с соавт. (1976) показано резкое снижение цитохромов в митохондриях печени отравленных животных.
Функциональная морфология гепатоцитов во многом определяется состоянием синусоидов, являющихся структурным компонентом микроциркуляторного русла печени. Стенка синусоидных сосудов сформирована эндотелиоцитами, печеночными макрофагами (клетками Купфера), перисинусоидальными жиросодержащими клетками (клетки Ito) и так называемыми Pit-клетками (Wisse Е., 1972; Шкурупий В.А., Индикова И.Н.1978).
Среди непаренхиматозных клеток печени наибольшее число представляют эндотелиоциты -50, 60%, которые Е. Wisse. (1972) назвал решетчатыми пластинками. Печеночный тип эндотелия характеризуется как большой, пористый, крупноокошечный или синусоидный, для которого характерно наличие межэндотелиальных щелей и внутриклеточных отверстий (поля фенестраций), образованные диафрагмированными фенестрами или открытые крупные фенестраций. Считается, что фенестры 15 динамичные образования, участвующие в регуляции гематотканевого обмена в печени (В.В.Серов, К. Лапиш, 1989).
Звездчатые ретикулоэндотелиоциты или клетки Купфера составляют около 70% всей макрофагальной популяции организма и примерно 40% клеточной популяции стенки синусоида печени (Gans М., 1980). Популяция данных клеток гетерогенна (Wisse Е. 1972). В процессе индивидуального развития наблюдается вариабельность расположения клеток Купфера. Выступая в просвет сосуда они участвуют в регуляции тока крови, выполняя роль синусоидальных сфинктеров (Motta P.M., 1975). Наличие большого количества лизосом, содержащих широкий спектр энзимов, позволяет печеночным макрофагам осуществлять периваривание компонентов самой разной физико-химической природы (Маянский Д.Н., 1981).
Клетки Ito, перициты составляют 1,4-1,9% паренхимы печени. Наличие в отростках хорошо развитых элементов цитоскелета, позволяет им своими сокращениями регулировать микроциркуляцию, участвовать в регуляции кровотока по синусоидам и в поддержании архитектоники печени (Бобрик И.И. с соавт, 1991). Известно, что Ito клетки присутствуют в околосинусоидном пространстве и что они участвуют в метаболизме витамина Айв формировании коллагена (Gallea F., Desmet V., 1985).
Pit-клетки в стенках синусоидных сосудов располагаются единично, главным образом в 1-ой зоне ацинуса или периферических отделах дольки. На их долю приходится около 3%. Наличие псевдоподий является одной из характерных особенностей Pit-клеток, другой - полярное расположение ядра и органелл. Pit-клетки являются естественными киллерами. Предполагают, что pit-клетки происходят из предшественников Т- лимфоцитов, но дифференцируются другим путем, минуя иммунологическую селекцию в тимусе, им приписывается функция иммунобиологического надзора (James S.P., 1988).
Все синусоидальные клетки печени функционируют в тесной связи как с друг с другом, так и с гепатоцитами, образуя клеточную основу тканевого микрорайона печени. Пространство Диссе, внеклеточный матрикс соединительной ткани (Колесников СИ. с соавт., 1995) также входят в структурные компоненты микрорайона печени. Такая сложная организация микрорайона печени обусловлена многообразием и интенсивностью метаболических процессов, протекающих в печени.
Методы коррекции хронического токсического гепатита (фитопрепараты и низкоэнергетическое гелий-неоновое лазерное воздействие)
Для гистологических исследований брали брыжеечный лимфатический узел, образцы печени, ее регионарные лимфатические узлы, располагающиеся в гепато-доуденальной связке. После декапитации животных (под эфирным наркозом) материал фиксировали в растворе по Теллесницкому (100 мл - 70% этилового спирта, 5 мл - концентрированной уксусной кислоты, 5 мл - 40% раствора формальдегида). В фиксаторе забранный материал находился в течение 20 часов, затем его перекладывали в 1-й раствор 70% этилового спирта. Раствор 70% этилового спирта меняли три раза, через сутки. Далее гистологический материал проводили по общепринятой методике. Органы заливали в парафиновые блоки с 5-6% добавлением чистого воска. С помощью ротационного микротома готовили парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм, проведенные через длинную ось лимфатических узлов. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином по Майеру и азурП - эозином по Нохт-Максимову (Ромейс Б., 1954; Волкова О. В., Елецкий Ю. К., 1971). Окрашенные препараты заключали в пихтовый бальзам и накрывали покровным стеклом.
Для проведения морфометрических исследований использовали основной принцип стереологии, математическое обоснование и способы использования в гистологии и патоморфологии, предложенные рядом авторов (Автандилов Г. Г., 1973, 1990; Непомнящих Л. М. с соавт., 1981, 1986; Бородин Ю. И., Григорьев В. Н., 1986).
Были исследованы относительные площади лимфатических узлов, их капсулы, краевого и мозговых синусов, лимфоидных узелков, центров размножения, паракортикальной зоны и мозговых тяжей. Рассчитывали отношение относительной площади коркового вещества к абсолютной площади мозгового вещества (индекс к/м) (Бородин Ю. И., 1969). Изучение клеточного состава различных зон лимфатических узлов проводили с помощью закрытой квадратной тестовой системы, вмонтированной в окуляр микроскопа (Стефанов С. Б., 1985).
В печени при помощи морфометрической сетки определяли удельные площади цитоплазмы и ядер гепатоцитов, синусоидов и синусоидных клеток, подсчитывали число гепатоцитов, количество двуядерных и синусоидных клеток в поле зрения. Из полученных данных вычисляли ядерно-цитоплазматическое отношение в гепатоцитах, коэффициент отношения площади синусоидов к площади гепатоцитов (Vizzotto L., 1989). Основополагающим количественным описанием состава структуры является плотность различных компонентов внутри данной структуры. "Плотность" определяется как "количество в единице объема, единице площади или единице длины" (Weibel E.R., 1979). Объемная плотность (V) - объем компонентов в единице объема структуры; поверхностная плотность (S) -площадь поверхности компонентов в единице объема структуры; численная плотность (N) - число компонентов в единице объема структуры. Согласно принципу М. Delesse, доля площади среза, содержащая изучаемый компонент, равна его доле в объеме исследуемого объекта ( Автандилов Г.Г., 1990)
Выделение структурных компонентов и клеточных элементов лимфоидной паренхимы в лимфатических узлах проводили согласно Международной гистологической номенклатуре под редакцией Ю. И. Афанасьева (1987). При определении класса лимфоцитов пользовались классификацией М. Р. Сапина с соавт. (1988).
Результаты полученных морфометрических исследований обрабатывали приемами вариационной статистики с использованием критерия Фишера -Стьюдента (Плохинский Н.А., 1970; Лакин Г.Ф., 1990), ошибку среднего арифметического находили с учетом изменчивости признака в пределах организма, при сравнении средних величин учитывали вариабельность первично измеряемых объектов и индивидуальную изменчивость (Катинас Т.С. и др., 1969; Потапова И.Г. и др., 1983). Для изучения перекисного окисления липидов проводили изучение содержания и распределения свободных жирных кислот в пробах центральной лимфы и периферической крови. В качестве объектов исследования были определены: центральная лимфа и сыворотка крови. Забор лимфы производили под этаминаловым наркозом (40 мг/кг веса животного). Крысу фиксировали на операционном столике на спине. После этого производили хирургический доступ к брюшной части грудного лимфатического протока (млечной цистерне) с учетом имеющихся рекомендаций (В. В. Асташов, 1992, 1998; А. В. Кузнецов, 1989, 1993). Лимфу собирали кончиком микроканюли непосредственно из отверстия в стенке грудного протока в объеме 0,3-0,5 мл. Для того, чтобы стимулировать лимфоток и сократить время забора необходимого количества лимфы, периодически меняли салфетки, покрывающие внутренности брюшной полости, смачивая их теплым физиологическим раствором. После взятия необходимого количества лимфы исследование прекращали, животное забивали. Всю забранную лимфу собирали в охлажденные жидким азотом конические пробирки емкостью 2-3 мл. Периферическую кровь забирали по известной методике (И. П. Западнюк с соавт., 1983) из хвостовой вены крысы в объеме 2-3 мл. Для этого отрезали кончик хвоста животного под этаминаловым наркозом. Кровь брали перед началом забора лимфы. К пробе крови добавляли 1 каплю 10"5 М раствора ионола (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол) в метаноле для предотвращения процессов аутоокисления. Кровь центрифугировали в течение 20 минут при 1500 об/мин.
Распределение свободных жирных кислот в центральной лимфе и сыворотке крови
. В мозговых тяжах уменьшается количество зрелых форм плазматических клеток и увеличивается - незрелых. В мозговых синусах увеличивается число средних лимфоцитов и плазмобластов, уменьшается — незрелых и зрелых плазматических клеток, макрофагов. В паракортексе увеличивается количество незрелых форм клеток лимфоидного ряда (лимфобластов и средних лимфоцитов) и уменьшается - зрелых. Макрофагальная реакция в структурно-функциональных зонах брыжеечных лимфатических узлов данной экспериментальной группы, как при коррекции лазерным излучением, более выражена по сравнению с группой с токсическим гепатитом без коррекции, но все же снижена, по сравнению с интактной группой животных.
Морфологическое исследование печеночных лимфатических узлов при сочетанной коррекции экспериментального токсического гепатита низкоэнергетическим лазерным излучением и фитопрепаратом "Лимфосан Г" выявило изменение структурно-функциональной специализации с компактного типа - интактных животных (к/м индекс - 1,5) на промежуточный тип (к/м индекс - 1,1). В отличие от экспериментальной группы с коррекцией только лазерным излучением, увеличиваются размеры мозговых и краевого синусов. Причем, размеры мозговых синусов увеличиваются в большей степени. Все это свидетельствует об усилении транспортной функции лимфатического узла. Относительные размеры вторичных лимфоидных узелков, мозговых тяжей не имеют достоверных отличий от значений интактной группы животных.
Как и в экспериментальных группах без коррекции и с коррекцией только лазерным излучением, в цитоархитектонике структурно-функциональных зонах брыжеечного и печеночного лимфатических узлов выявлено усиление процессов пролиферации (увеличивается число незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов) по сравнению с интактной группой животных. В структурно-функциональных зонах кспериментальной группы с сочетаннои коррекцией лазерным излучением и фитопрепаратом "Лимфосан Г", по сравнению с экспериментальными группами с хроническим токсическим гепатитом без и коррекцией только лазерным излучением, увеличивается количество ретикулярных клеток. Известно, что ретикулярные клетки образуют строму лимфатического узла, тесно взаимодействуя с ретикулярными волокнами. Данная сетчатая структура выполняет роль механического фильтра для протекающей через лимфатический узел лимфы (Бородин Ю.И., 1968; Томчик Г.В., 1978; Сапин М.Р. с соавт., 1978). М. Р. Сапин с соавт. (1978) обратил внимание на то, что часть ретикулярных клеток обладает способностью к фагоцитозу. Это свидетельствует о том, что наряду с созданием механического препятствия инородным телам, ретикулярная строма обладает свойствами биологического фильтра. Полагают, что ретикулярная клетка является своеобразной системой, способной воспринимать и передавать антигенную информацию на иммунокомпетентные клетки (Сапин М.Р.. и др., 1978; Бородин Ю.И., 1985; Villina A. et al., 1983).
Таким образом, при сочетаннои коррекции экспериментального токсического гепатита (лазерное излучение + фитопрепарат "Лимфосан Г"), комплекс изменений микроанатомической организации и клеточного состава брыжеечного и печеночного лимфатических узлов свидетельствует: в брыжеечном лимфатическом узле на структурном уровне выявлена активация гуморального звена иммунитета, снижение транспортной функции лимфатического узла; в лимфатическом узле печени - усилении транспортной функции. При этом в структуре обеих групп лимфатических узлов отмечается активация процессов пролиферации.
Применение БАД к пище «Лимфосан-Г» для коррекции хронической интоксикации CCU способствует восстановлению численной плотности клеток в тканевом микрорайоне печени, что подтверждают морфометрические данные исследования печени. Отношение двухядерных гепатоцитов к общему числу гепатоцитов в данной группе достоверно
163 превышает показатель в группе без коррекции, и аналогичные значения в большинстве других экспериментальных групп, что позволяет сделать заключение, что данный фитопрепарат активирует репаративные процессы в печени.
Использование БАД к пище «Лимфосан-Г» в сочетании с низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным излучением при хронической экзогенной интоксикации ССЦ приводит к максимальному увеличению отношения диплокариоцитов к общему числу гепатоцитов, среди всех экспериментальных групп. Это свидельствует о том, что лазерное излучение действует в синергизме с фитопрепаратами, усиливая его репаративное действие. Важным моментом, выявленным нами, что в данной экспериментальной группе одно из самых низких соотношений синусоидальных клеток печени к общему числу гепатоцитов, определяющее степень выраженности воспалительного процесса в органе.
Биологически активная добавка (БАД) к пище «Оберег» рекомендована в качестве вспомогательного и общеукрепляющего средства при заболеваниях печени (гепатитах различной этиологии, заболеваниях связанных с нарушением функции оттока желчи, экскреции билирубина и его конъюгации, циррозах печени). В основе препарата лежит комплекс пищевых волокон (пшеничные отруби) и лечебных трав, дающих выраженный сорбционный, антиоксидантный и гепатопротекторный эффекты, в целом направленные на регуляцию деятельности и нормализацию функций желудочно-кишечного тракта и гепатобилиарной системы (Лопаткин Н.А., Лопухин Ю.М., 1989; Гаммерман А.Ф. с соавт., 1990; Кучин А.В. с соавт., 1997; Асташова Т. А., Савицкая И. В., 1999).
Брыжеечный лимфатический узел
В экспериментальной группе с коррекцией экспериментального хронического токсического гепатита только фитосорбционным комплексом "Оберег" структурно-функциональная специализация регионарного лимфатических узлов печени (у интактных животных компактный тип) изменяется с компактного типа на промежуточный (к/м индекс - 1,08). Относительные размеры паракортикальнои зоны, вторичных лимфоидных узелков уменьшаются, по сравнению с интактной группой животных. Увеличенные размеры мозговых синусов свидетельствуют об усилении транспорта лимфы через лимфатический узел. Морфометрические исследования выявили, что мозговые тяжи, первичные лимфоидные узелки, корковое плато, капсула, трабекулы и краевой синус регионарного лимфатического узла печени не имеют достоверных отличий от интактной группы животных.
В структурно-функциональных зонах брыжеечного и печеночного лимфатических узлов увеличивается число незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов по сравнению с интактной группой, что свидетельствует об активации процессов пролиферации (увеличение числа клеточных форм лимфоидного и плазматического ярдов). Как и в экспериментальной группе, где использовался только гепатопротекторный фитосорбционный комплекс "Лимфосан Г", в экспериментальной группе с спользованием фитосорбционного комплекса "Оберег", по сравнению с группой без коррекции, пролиферативные процессы еще более выражены.
Исследование распределения свободных жирных кислот (СЖК) в пробах центральной лимфы при применении БАД к пище «Оберег» в условиях хронического токсического гепатита в пробах центральной лимфы выявлено увеличение на 3,3% пула СЖК (в группе с хроническим гепатитом без коррекции это составляло 9,7%) по сравнению с интактной группой. Применение БАД к пище «Оберег» вызывает уменьшение пула СЖК, приближая его к значениям интактной группы. При коррекции фитосорбционным комплексом «Оберег» резко уменьшается вклад ненасыщенных и увеличивается насыщенных СЖК. Происходит компенсация насыщенными СЖК, не участвующими в процессах перикисного окисления липидов (ПОЛ). В пробах сыворотки крови отмечено увеличение, но в меньшей степени выраженное, чем в группе с хроническим гепатитом без коррекции, пула СЖК по сравнению с интактной группой. Пул СЖК в центральной лимфе превышает таковой в сыворотке крови. Таким образом, применение фитосорбционного комплекса «Оберег» в условиях токсического гепатита вновь, как и в интактной группе, приводит к увеличению пула СЖК в центральной лимфе, по сравнению с сывороткой крови.
Морфологические исследования брыжеечных лимфатических узлов в экспериментальной группе с сочетанной коррекцией лазерным излучением и фитосорбционным комплексом "Оберег" состояния экспериментального хронического токсического гепатита выявили, что по своей структурно-функциональной специализации брыжеечный лимфатический узел находится на границе между фрагментированным типом (у интактных животных к/м индекс - 0,88) и промежуточным, корково-мозговой индекс равен 1,03. Увеличение относительных размеров вторичных лимфоидных узелков, за счет, как центров размножения, так и мантийной зоны, по сравнению с экспериментальной группой без коррекции и интактной группой животныхожет свидетельствовать об активации иммунного ответа по гуморальному типу (Петров Р.В., 1987). Большинство структурных компонентов (паракортикальная зона, мозговые тяжи и синусы, первичные лимфоидные узелки и капсула.) брыжеечного лимфатического узла не имеют достоверных отличий от интактной группы. Выявленные изменения свидетельствуют, что в условиях коррекции наблюдается тенденция к восстановлению структурных соотношений в лимфатическом узле.
В цитоархитектонике всех структурно-функциональных зон брыжеечных лимфатических узлов (экспериментальная группа фитопрепарат "Оберег" + лазерное излучение), по сравнению с другими экспериментальными группами, выявлено увеличение количества незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов.
При этом, в герминативных центрах (на фоне увеличение их относительных размеров и размеров мантийной зоны по сравнению с интактной группой) уменьшается количество малых лимфоцитов при увеличении числа лимфобластов и средних лимфоцитов. В мозговых тяжах, по сравнению с интактной группой, уменьшается количество зрелых плазматических клеток и увеличивается - незрелых форм клеток. В мозговых синусах увеличивается число средних лимфоцитов и плазмобластов, уменьшается — незрелых и зрелых плазматических клеток, макрофагов. В паракортикальной зоне, по сравнению с вышеуказанными экспериментальными группами, увеличивается число лимфобластов и средних лимфоцитов, при уменьшении числа малых. Макрофагальная реакция в структурно-функциональных зонах брыжеечных лимфатических узлов данной экспериментальной группы более выражена, чем в экспериментальной с токсическим гепатитом без коррекции.
Морфологические исследования структурной организации печеночных лимфатических узлов при сочетанной коррекции экспериментального токсического гепатита низкоэнергетическим гелий-неоновым лазерным излучением и фитосорбционным комплексом "Оберег" выявило изменения структурно-функциональной специализации с компактного типа - интактных животных (к/м индекс - 1,5) на промежуточный тип (к/м индекс — 1,1). В структуре лимфатического узла отмечается увеличение площади мозгового вещества, по сравнению с группой интактных животных и с экспериментальным токсическим гепатитом без коррекции, за счет, как мозговых синусов, так и мозговых тяжей. Увеличение размеров мозговых синусов может свидетельствовать об усилении дренажной функции лимфатического узла печени. Как и в экспериментальной группе с коррекцией только лазерным излучением, по сравнению с группой без коррекции, отмечается активация клеточного звена иммунитета -увеличиваются размеры Т- зависимой зоны. Как и в брыжеечных лимфатических узлах, большинство структурных компонентов (паракортикальная зона, мозговые тяжи, первичные лимфоидные узелки, корковое плато, трабекулы и краевой синус) регионарного лимфатического узла печени не имеют достоверных отличий от интактной группы. Выявленные изменения свидетельствуют, что в условиях коррекции наблюдается тенденция к восстановлению структурных соотношений в лимфатическом узле.
Похожие диссертации на Регионарные лимфатические узлы печени и тонкой кишки при хронической интоксикации тетрахлорметаном и в условиях коррекции лазерным излучением и фитопрепаратами (экспериментальное исследование)
![Лимфатические узлы и лимфа в норме и при наследственном несахарном диабете в условиях фармако- и фитокоррекции (анатомо-экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4443/211145.png "Лимфатические узлы и лимфа в норме и при наследственном несахарном диабете в условиях фармако- и фитокоррекции (анатомо-экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Тыщенко Ольга Геннадьевна")
