Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1.Типы гипоксических состояний 11
1.2. Гемодинамические расстройства при острой кровопотере 13
1.3.Влияние вторичной тканевой гипоксии на функции организма 23
1.3.1.Изменения обмена веществ, вызванные расстройством кровообращения 24
1.3.2.Влияние гипоксии на процессы свободнорад и кального окисления 28
1.4.Современные представления о влиянии острой циркуляторной гипоксии на кровь 40
1.5. Состояние эритроцитов в условиях гипоксии 41
1.6..Антигипоксанты 46
1.7..Влияние аскорбиновой кислоты на функции организма в норме и в условиях гипоксии 50
1.8.Использование направленного транспорта для доставки лекарственных веществ к органам мишеням 57
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 64
2.1. Методика введения аскорбиновой кислоты 67
2.2. Исследование показателей сыворотки крови 67
2.3. Исследование показателей эритроцитов крыс 72
2.4.Исследование показателей гомогената печени 77
2.4. Методика получения эритроцитарных контейнеров с аскорбиновой кислотой 78
ГЛАВА 3. Влияние острой циркуляторной гипоксии на функциональное состояние эритроцитов и печени 80
ГЛАВА 4. Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты после кровопотери на биохимические показатели печени, эритроцитов и сыворотки крови 96
4.1 . Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты в различных дозах после кровопотери на показатели ПОЛ-АОС в печени экспериментальных крыс 96
4.2. Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты в различных дозах после кровопотери на показатели ПОЛ-АОС в эритроцитах экспериментальных крыс 106
4.3.Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты в различных дозах после кровопотери на «антиоксидантную белковую буферную систему» экспериментальных крыс 122
4.4. Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты в различных дозах после кровопотери на биохимические показатели сыворотки крови 148
ГЛАВА 5. Заключение 175
Выводы 183
Список литературы 184
- Гемодинамические расстройства при острой кровопотере
- Состояние эритроцитов в условиях гипоксии
- Исследование показателей сыворотки крови
- Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты в различных дозах после кровопотери на показатели ПОЛ-АОС в печени экспериментальных крыс
Введение к работе
Проблема острой кровопотери весьма актуальна. Потеря крови может быть вызвана различными причинами: ранением кровеносных сосудов, их поражением патологическим процессом (язва желудка, кишечника, атеросклероз, туберкулез, варикозное расширение вен и т.д.), поражением капилляров, нарушением свертывающей системы крови. Особое место занимает кровотечение в акушерской практике, которые могут быть вызваны плохим сокращением матки после родов или резким уменьшением содержания фибриногена в крови (Козинер В.Б., 1973).
Острая кровопотеря и связанная с ней гипоксия вызывают глубокие и часто необратимые нарушения метаболизма в тканях, поскольку в целостном организме метаболические процессы находятся в тесной функциональной связи с уровнем кровоснабжения тканей, состоянием микроциркуляции (Vollmar В. et al., 1993; Маршак ME., 1969; Nakata К., 1967).
Реакция организма на гипоксию проявляется на различных уровнях. Так, возрастает активность ЦНС, симпато-адреналовой и др. систем, запускается каскад биохимических реакций, осуществляющих адаптацию организма к гипоксии (Шик Л.Л., 1968).
Известно, что гипоксическое воздействие связано с изменением процессов ПОЛ (Меерсон Ф.З., 1969). При этом структурно-функциональная целостность клеточных мембран зависит от состояния процесса ПОЛ, интенсивность которого поддерживается на определенном стационарном уровне ферментной и неферментной системами биоантиоксидантов. Наименее изучено переокисление в условиях циркуляторной гипоксии различного генеза. Высокая интенсивность процессов, происходящих в печени, обуславливает ее высокую чувствительность к недостатку кислорода (Би-ленко М.В., 1989). Печень является одним из основных органов, регулирующих обмен липидов. Острая кровопотеря вызывает нарушения различи 1984, Кочетыгов Н.И., 1984). Можно предположить, что в нарушении метаболизма при острой кровопотере важную роль играет активация ПОЛ в печени. В результате чего могут происходить изменения липидного состава мембран и, как следствие, сдвиг функционального состояния печени.
В механизме гипоксии наряду с другими факторами имеют значение структурно-функциональные нарушения организации эритроцитов (Бойт-лер Э., 1981). Важно изучение состояния эритроцитов, поскольку эти форменные элементы крови страдают в первую очередь и несут основную функциональную нагрузку при ОЦГ. Функциональное состояние эритроцитов также во многом определяется состоянием процессов ПОЛ в них. Кроме того, из данных литературы известно, что метаболиты, образующиеся в гепатоцитах, особенно в мембранах их эндоплазматической сети и . поступающие в кровеносное русло, при патологии печени могут индуцировать нарушения целостности мембран и внутриклеточного метаболизма эритроцитов (Бойтлер Э., 1981; Powell L.W. et al., 1976).
Состояние мембран является одним из важнейших факторов поддержания гомеостаза и регуляции биохимических и физиологических процессов в клетках. Технические трудности прижизненного исследования мембран клеток внутренних органов вынуждают искать косвенные показатели для оценки их состояния. В качестве таковых все чаще используется изучение мембран клеток крови. В работах Покровского А.А. и соавт. (1974), Постнова Ю. В. и соавт. (1979) установлена достаточно высокая корреляция между изменениями свойств мембран эритроцитов и внутренних органов. Ранее опубликованные данные (В.И. Лойко и соавт., 1977; В.П. Башмаков и соавт., 1980) показали, что определение проницаемости эритроцитарных мембран также может быть успешно использовано для оценки состояния мембранного аппарата организма. Исследования Колма-кова В.Н. с соавт. (1979), Блюгера А.Ф. (1984) указывают на применимости этого метода в гематологии. В связи с этим представляет интерес изучение урони ей продуктов ПОЛ и состояния ЛОС в эритроцитах, печени и сыворотке кропи, а также активности печеночных ферментов в крови, косвенно указывающей на функцию печени при острой кровопотере.
Из антиоксидантов не ферментной природы важную роль играет ЛК. Она выступает одним из регуляторов процессов ПОЛ (Лопухин Ю.М. с соавт., 1983). Именно она подвергается окислению в тканях организма, находящихся в экстремальных условиях (Соколовский В.В., 1984}. Она участвует в связывании свободных радикалов и разрушении перекисей (Воскресенский О.Н. с соавт., 1982; Lake В. et al., 1981). В этом качестве аскорбиновая кислота, молекула которой содержит и полярные, и неполярные группировки, проявляет тесное функциональное взаимодействие с SII-глутатионом и вместе с тем с липидными антиоксидантами, усиливая действие последних и препятствуя перекисному окислению лигшдов (Gazave J., 1977). Исходя из выше изложенного, можно предположить, что в условиях ОЦГ Л К может предотвратить повреждение гепатоцитов процессами ПОЛ.
Вид лекарственной формы и пути введения в значительной степени влияют на фармакокинетику АК в организме животных и человека. Возможно, это связано с различным распределением АК и организме, так, например, при ректальном введении АК основная часть всосавшегося витамина попадает в большой круг кровообращения, минуя печень (Гладких СП. с соавт., 1974). Работами Zimmerman (1980), Kinosta, Tsong (1978), Генинг Т.П. с соавт. (1985, 1996) показана возможность направленного транспорта лекарственных препаратов (антибиотиков, гормонов) в гомологичных эритроцитах в печень с целью адресной доставки и пролонгирования действия препаратов.
Целью настоящего исследования явилась оценка антиоксидантной системы печени и эритроцитов при вторичной тканевой гипоксии и в условиях коррекции аскорбиновой кислотой. В соответствии с основной целью работы были поставлены следующие задачи:
1. Оценить уровень маркерных гепатоспецифичных ферментов сыворотки крови крыс при острой кровопотере.
2. Изучить уровень вторичного продукта перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) - малонового диальдегида (МДА) в ткани печени и эритроцитах в условиях вторичной тканевой гипоксии.
3. Оценить состояние антиоксидантной белковой буферной системы крови при острой циркуляторной гипоксии.
4. Определить уровень активности антиоксидантных ферментов — глутатионредуктазы и каталазы в эритроцитах в условиях острой циркуляторной гипоксии.
5. Оценить уровень активности антиоксидантного фермента - каталазы в ткани печени при вторичной тканевой гипоксии.
6. Разработать методику получения эритроцитарных контейнеров для направленного транспорта АК в печень.
7. Оценить активность антиоксидантных ферментов эритроцитов при различных способах введения в организм АК после острой кровопотери.
8. Оценить влияние различных способов введения АК после кровопотери на активность каталазы в печени.
9. Определить уровень активности маркерных гепатоспецифичных ферментов сыворотки крови при введении АК после острой кровопотери.
Научная новизна исследования.
В работе впервые проведено комплексное изучение показателей ПОЛ-АОС печени и эритроцитов при вторичной тканевой гипоксии, вызванной острой кровопотерей. Оценен уровень ПОЛ-антиоксидант при патологии и коррекции. В качестве показателей отражающих функциональное состояние печени в условиях вторичной тканевой гипоксии были изучены активность: ACT, АЛТ, ЛДГ, ЩФ, концентрации общего билирубина, общего белка, глюкозы. Впервые оценено влияние АК на функцио 9 нальное состояние печени как интактных животных, так и животных и условиях вторичной тканевой гипоксии при использовании различных способов ее введения. Впервые показана возможность направленного транспорта АК в печень в контейнерах, полученных из гомологичных эритроцитов. Доказана эффективность использования АК для коррекции функций печени в условиях вторичной тканевой гипоксии при введении ее как традиционно внутривенно, так и путем направленного транспорта в печень. Однако влияние АК на печень носит выраженный дозозависимый характер. Основные положения, выносимые на защиту
• вторичная тканевая гипоксия инициирует увеличение ПОЛ и изменение активности ферментов антиоксидантной защиты в системе «печень-сыворотка крови-эритроцит»;
• в условиях вторичной тканевой гипоксии отмечается нарушение функционального состояния печени, о чем свидетельствует изменение активности таких ферментов сыворотки крови как: ACT, АЛТ, ЩФ, ЛДГ, кроме того, изменение содержания общего билирубина, общего белка и глюкозы;
• в условиях вторичной тканевой гипоксии усиливается активность антиоксидантной «белковой буферной системы»;
• изменения в системе ПОЛ-антиоксидант при патологии и коррекции;
• введение АК интактным животным может достоверно изменять или не изменять исследуемые показатели - это зависит от способа и дозы введения АК;
• введение АК на фоне вторичной тканевой гипоксии приводит к нормализации исследуемых показателей функций печени в дозе 25мг/кг как при использовании традиционного внутривенного способа введения, так и путем направленного транспорта в печень;
• введение АК на фоне кровопотери с использованием эритроцитарных носителей в дозе 100мг/кг нормализует показания печени, но инициирует увеличение ПОЛ в эритроцитах. • при введении АК в эритроцитарных контейнерах противогипоксиче-ский и гепатопротекторный эффект более выражен и сохраняется дольше. Теоретическая и практическая значимость
Данные, касающиеся причин и закономерностей усиления процессов ПОЛ при гипоксии могут быть использованы для объяснения механизма действия гипоксии на клетки, органы и ткани.
Полученные данные расширяют и дополняют сведения о роли АК в регуляции функций организма. Результаты исследований могут быть использованы при оценке адаптивных и резервных возможностей организма в условиях острой гипоксии и влияния на них экзогенной АК. Полученные данные могут служить основанием для клинической апробации экзогенной АК с использованием направленного транспорта в качестве гепатопротек-тора в условиях гипоксии.
Апробация работы. Основные положения диссртации доложены и обсуж-. дены на четвертой международной научно-практической конференции (Москва, 2003), региональной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современного здравоохранения и экологии (Ульяновск, 2003), на симпозиуме с международным участием (Ульяновск, 2002).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на2#)страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, двух глав собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего353 источников, в том числе2#отечественных и иностранных. Диссертация иллюстрирована 1 рисунком и 60 таблицами.
Гемодинамические расстройства при острой кровопотере
Исследованию изменений гемодинамики при кровопотере посвящено множество работ (Кочетыгов Н.И., 1984; Лановенко И.И. 1977; Лауэр Н.В., 1969; Мешалкин Е.Н. и др., 1983, Коваленко Н.Я. с соавт, 1982, 1997; Мирзоян Р.С с соавт., 1994; van Bel F. Et. al., 1994; Vollmar В et. al., 1993). Расстройства гемодинамики являются пусковым и ведущим звеном патогенеза кровопотери (Козинер В.Б., 1964,1973; Лебедева Р.Н.и др., 1978; Соловьев Г.М. и др., 1973; Уиггерс К., 1967; Treeman J., 1963). Вопрос о механизмах, обеспечивающих развитие комплекса гемодинамических реакций при дефиците кислорода продолжает оставаться дискуссионным. В существенной мере это касается представлений о механизмах формирования регионарных сосудистых реакций при гипоксиях различной этиологии.
Одна из существующих на этот счет точек зрения базируется на том, что изменения периферического кровообращения являются главным образом отражением иннервационных влияний, управляющих функцией сердечно-сосудистой системы. В таком случае схему регуляции гемодинамики в условиях гипоксических состояний в самой общей форме обычно представляют следующим образом снижение р02 в крови и тканях способ 14 ствует стимуляции хеморецепторов сосудов системы высокого и низкого давления, а также многочисленных тканевых хеморецептивных образований, вследствие чего усиливается возбуждающая афферентная активность. В сочетании с прямым влиянием гипоксии это приводит к активации кар-диоваскулярных структур и центральной нервной системы и реализуется в соответствующих изменениях эфферентной активности. При этом наблюдаемые в условиях дефицита .кислорода разнонаправленные регионарные сосудистые реакции, которые способствуют перераспределению кровотока и избирательному форсированию кровоснабжения, могут быть следствием неоднородных эфферентных посылок к сосудистым эффекторам. Однако экспериментально это положение пока не подтверждено.
В основе другой точки зрения лежат представления о ведущей роли местных механизмов регуляции сосудистого тонуса в условиях дефицита кислорода. Суть концепции метаболического механизма, регуляции периферической гемодинамики сводится, как известно, к двум основным положениям: во-первых, повышение функциональной активности тканей сопровождается усилением потребления необходимых для метаболизма субстратов и накоплением продуктов обмена; во-вторых, с недостатком одних и избытком других продуктов связаны изменения тканевого кровотока в этих условиях. Первое их этих положений бесспорно, а второе - пока экспериментально не обосновано (Гуревич М.И., Берштейн С.А. 1979).
Приводимые Гайтоном (Guyton А.С, 1964) расчеты позволяют прийти к заключению, что если кровоток поддерживается на уровне, соответствующем кислородному запросу тканей, транспорт к тканевым структурам всех других необходимых субстратов метаболизма обеспечивается автоматически. Это положение служит ведущей предпосылкой кислородного варианта метаболического механизма регуляции периферической гемодинамики. Многочисленными исследованиями, проведенными на животных и денервированных органах in toto и при перфузии в условиях их гемодина-мической изоляции, показана четкая корреляция между снижением рОг в перфузате и усилением тканевого кровотока. Их результаты послужили основанием для заключения, что вазоднлятация обусловливается дефицитом кислорода, который реализует свое влияние мести о — путем снижения тонуса сосудистых гладких мышц. Спорным остается вопрос, является ли вазодилататориый эффект дефицита кислорода следствием его прямого влияния на сосудистые гладкие мышцы либо он опосредован действием накапливающихся в этих условиях вазоактивных продуктов метаболизма? Эксперименты, выполненные Гайтоном и сотр. свидетельствуют о том, что вазодилататориый эффект тканевой гипоксии может быть следствием прямого влияния дефицита кислорода на тонус сосудистой стенки (Fairchild Н.М., 1966, Guyton А.С. et al., 1964). Все же окончательное признание такой возможности связано с необходимостью объяснить механизмы, с помощью которых это влияние реализуется.
Снижение р02 в растворе Кребса, которым перфузируется препарат воротной вены крысы, сопровождается угнетением свойственной гладко-мышечным клеткам в естественных условиях биоэлектрической и сократительной активности. Исходя из того, что деполяризация мембраны гладко-мышечных волокон и генерация потенциалов действия служат в частности биоэлектрическим проявлением их возбуждения, а ритмичность и синхронность биоэлектрической и сократительной активности гладких мышц сосудистой стенки является следствием их достаточно высокой возбудимости и функциональной взаимосвязи между гладкомышечными клетками, можно допустить, что дефицит кислорода в перфузате вызывает снижение возбудимости гладкомышечных клеток сосудов. Это предположение находит подтверждение в данных сравнительного исследования реакций гладких мышц различных сосудов на норадреналин, адреналин и ацетилхолин при перфузии растворами Кребса с нормальным и пониженным напряжением кислорода, показавшего, что сократительные реакции в условиях дефицита кислорода оказались существенно менее выраженными (Берштейн С.A., 1973). Данное положение согласуется с результатами ряда исследований (Азии А.Л., 1978; Орлов Р.С., 197S;Namm D.H., 1973).
Пусковой механизм разнообразных изменений в организме при острой кровопотере -уменьшение ОЦК, приводящее к снижению АД и МОК, а также - к регионарным перераспределениям кровотока, в результате чего развивается циркуляторная гипоксия органов и тканей (И.Р.Петров, Г.Ш.Васадзе, 1972; Zwefach B.W., 1962). Первичной реакцией на потерю крови является спазм мелких артерий и артериол (периферическая иазо-констрикция), возникающий рефлекторно в результате раздражения рецеп-торных зон и повышения тонуса симпатической части нервной системы (Джурко Б.И. и соавт., 1982; Messmer К., 1981). В дальнейшем наблюдается перераспределение крови внутри сосудистой системы - централизация кровообращения. В первую очередь уменьшается объемный и линейный кровоток к коже и скелетной мускулатуре. Происходит мобилизация крови из органов брюшной полости (печень, селезенка, кишечник) и почек. Происходит раскрытие артерио-венозных шунтов.
Состояние эритроцитов в условиях гипоксии
Изучение состояния эритроцитов представляет особый интерес, поскольку эти форменные элементы крови страдают в первую очередь и несут основную функциональную нагрузку при острой циркуляторной гипоксии.
Над проблемами, связанными с изучением физиологии и патологии эритроцитов, работает широкий круг исследователей. Это объясняется, с одной стороны, разнообразием и важностью выполняемых эритроцитами функций, с другой - относительной простотой этих клеток, делающих их ценным объектом исследования. Достаточно точно и подробно описаны механизмы нарушения структуры и функции эритроцитов при наследственных гемолитических анемиях (Бойтлер Э., 1981; Идельсон с соавт., 1975). В то же время особенности организации структуры мембран эритроцитов, интрацеллюлярный метаболизм их, связь между структурными перестройками мембран и метаболизмом в эритроцитах при патологических процессах в других органах и тканях, в частности при поражениях печени фактически не изучены. Эта проблема имеет два аспекта.
Во-первых, интенсивность и направленность процессов обмена в печени зависят от сохранности структуры эритроцитов и важнейшей их функции — транспорта кислорода. Ведь известно, что дефицит кислорода представляет собой наиболее общую патогенетическую основу большинства общепатологических процессов (Васильев Т.А. с соавт., 1974). Не вызывают сомнения наличие гипоксии печеночных клеток, развивающейся в большей или меньшей степени при острых и хронических заболеваниях печени (Безуглый Б.П., 1971; Виксна Л.М., 1981), причиной которой может служить либо дефект насыщения эритроцитов кислородом, либо нарушения диссоциации кислорода и оксигемоглобина и передачи (транспорта) кислорода печеночной клетке (Блюгер А.Ф. с соавт., 1978; Виксна Л.М., 1981) , либо, наконец, усиленное потребление кислорода в реакциях окисления, происходящих на мембранах эндоплазмаческой сети гепатодитов. Таким образом, функции печени критически и решающе зависят от подачи ей кислорода эритроцитами.
Во-вторых, метаболиты, образующиеся в гепатоцитах, особенно на мембранах их эндоплазматической сети, и поступающие в русло крови, при патологии печени различных видов могут индуцировать нарушения целостности мембран и внутриклеточного метаболизма эритроцитов. Закономерное присутствие процессов гемолиза при большинстве заболеваний печени независимо от этиологической природы (Бойтлер Э, 1981; Powell L.W. et al., 1976; Subhiyah B.W., Al-Hindawi A.Y., 1967) заставляло предполагать существование между этими процессами и заболеваниями печени определенной связи и, в частности, существования интрацеллю-лярных нарушений метаболизма и нарушений структурной организации мембран эритроцитов. В последние годы появились наблюдения об усиленном перекисном окислении липидов в гепатоцитах при поражениях печени (Арчаков А.И., 1975; Блюгер А.Ф., Майоре А.Я., 1978). В этой связи обосновано было предположить, что пероксидация занимает определенное место и в изменении проницаемости мембран эритроцитов, следовательно, и в нарушении транспорта кислорода к гепатоцитам, в механизмах развития гемолитических процессов при острых и хронических поражениях печени.
Эритроциты как носители кислорода имеют весьма высокий уровень активности антиоксидантиых ферментов (каталаза, СОД, глутатионпероксидаза) и содержат основные звенья антирадикальной цепи. Таким образом, особенностью эритроцитов является большая роль антиперекисных ферментов - каталазы, глутатионпероксидазы, СОД, при врожденных эп-зимопатиях эритроцитов часто наблюдается гемолитическая анемия (Carl-berg L., Monnerrvik В., 1975).
Комплекс ферментов антиокислительной защиты эритроцитов - глутатионпероксидаза, глутатиоиредуктаза, каталаза, СОД предупреждает повреждение фосфолипидов мембран и гемоглобина путем взаимодействия с супероксидными анион радикалами, гидроперикисью, перекисью водорода. СОД и каталаза локализованы в растворимой фазе клетки (Bretton -Gorires J., Guichard J ,1975) , глутатионпероксидаза и глутатиоиредуктаза частично связаны с мембраной эритроцита (Maral J. et ah, 1977). Ферментные антиокислительные системы достаточные в обычных условиях, становятся неэффективными в присутствии прооксидантов (Halliwell В., 1978). Возможность контакта эритроцитов с прооксидантами в настоящее время значительно возросла, так как фотоокисление под влиянием ультрафиолетовых лучей солнечного света, выхлопных газов автомобилей, содержащих диоксид азота и углеводороды, сопровождается образованием озона и других активных прооксидантов (Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., 1990). Оценка окислительного статуса эритроцитов имеет два аспекта. Во-первых, активность глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы эритроцитов в настоящее время рассматривается как показатель неспецифической резистентности всего организма (Гуриева Г.С., Аванян Л.А., 1979). Во-вторых, выявлен ряд генетически обусловленных энзимодифицитных состояний, характеризующихся снижением устойчивости эритроцитов к свободно-радикальному окислению и его токсичным метаболитам. Недостаточность глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы отнесены к тем эн-зимопатиям, которые уменьшают продолжительность жизни эритроцита и его гемолитическую резистентность: акаталаземия не влияет на эти параметры (Бойтлер Э., 1981).
Установлено, что системы антиокисдительных ферментов эритроцитов взаимосвязаны друг с другом и определяют окислительную резистентность клеток красной крови. Регионарные особенности активности глута-тионпереоксидазы, глутатионредуктазы. катал азы и СОД могут быть обусловлены генетическими, алиментарными факторами или регуляторными фермент-субстратными соотношениями. Так, менее резистентные к пере-кисному окислению эритроциты характеризуются высокой активностью глутатионпероксидазы и СОД и низкой каталитической способностью глутатионредуктазы (Верболович В.П. с соавт., 1985). Снижение активности глутатионредуктазы наблюдается при низкой обеспеченности организма рибофлавином, даже если клинические проявления отсутствуют (Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., 1990).
Исследование показателей сыворотки крови
Суммируя вышесказанное, можно отметить, что острая циркулятор-ная гипоксия инициирует увеличение ПОЛ и изменение активности ферментов антноксидантной защиты в эритроцитах крыс. Причин усиления ПОЛ в эритроцитах может быть несколько. Ряд авторов считают, что де-токсикацию перекисных радикалов в эритроцитах обеспечивают, главным образом, липидная антиоксидантная система токоферола и нелепидная -глутатиона (Galli С, Socini А., 1982). При активации ПОЛ происходит расходование токоферола (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972).
Низкая функциональная активность глутатионредуктазной системы является метаболическим фактором риска, вызывающим структурно-функциональные изменения эритроцитов (Grimes A.J., 1980). Кроме того, установлено, что различные виды стресса инициируют ПОЛ. Острая кровопотеря также сопровождается выраженной стрессорной реакцией (Вагнер Е.А. с соавт,, 1986).
В ускорении процессов ПОЛ в эритроцитах при кровопотере, наряду с внутриклеточными механизмами, важная роль принадлежит дополнительным негативным воздействиям на эритроциты гуморальных факторов, содержащихся в плазме. Их природа и механизм действия остаются неясными. Известно, что при кровотечении происходит активация различных ферментных систем, а это приводит к накоплению в крови биогенных аминов и других физиологически активных веществ, обладающих проокси-дантным действием (Бех Н.Д. с соавт., 1989).
Косвенными показателями для оценки функционального состояния печени является активность некоторых индикаторных ферментов печени, уровень концентрации глюкозы и билирубина в крови. Влияние ОЦГна активность трансамнназ сыворотки крови крыс. Полученные нами результаты свидетельствуют об изменении тран-саминазной активности сыворотки крови крыс с моделью острой циркуля-торной гипоксии. Большинство авторов рассматривают развитие гиперферментемии при кровопотере, как результат выхода трансамнназ из клеток органов (особенно печени), вследствие повышения проницаемости мембран (Кулагин В.К. и соавт., 1975). Причем нарастание активности ферментов в крови, как правило, сопровождалось ее снижением в ткани печени. В то же время в ряде случаев увеличение активности трансамнназ крови отсутствовало, несмотря на выраженные морфологические изменения в ткани печени (Мирза-заде А,А., 1974). И, наоборот, гиперферментемия часто обнаруживается при отсутствии деструктивных процессов в печени (Грома-шевская Л.Д-, 1969). Изложенное позволяет предполагать существование определенных механизмов регулирования активности трансамнназ в различных условиях, что может быть связано с изменением скорости синтеза изоферментов, обладающих различной активностью, а также нарушением соотношения окисленных и восстановленных форм НАД и НАДФ (Буланкина Н.И., МовчанН.А., 1977) Как видно из данных таблицы 3.7 у интактных животных отмечалось значительное преобладание в сыворотке крови активности ACT над активностью АЛТ, что согласуется с данными других исследователей (Кудрин В.Н., Куликова Н.А., 1978; Довганский А.П.с соавт., 1989). При изучении нами активности трансаминаз в динамике кровопотери было установлено, что спустя 6ч после кровопотери активность энзимов достоверно снизилась: активность ACT на 11,77% (с 229,33±31,26 ммоль/л до 202,33±20,47 ммоль/л) по сравнению с интактными животными, активность АЛТ достоверно понизилась более существенно — на 31,97% (со 107,42±22,71 моль/л до 73,08±13,39 ммоль/л). Через 24ч наблюдалось существенное достоверное увеличение активности ACT на 17,66% (с 229,33±31,26 ммоль/л до 269,83±44,58 ммоль/л) относительно активности интактных животных, что согласуется с данными других исследователей (Довганский А.П. с соавт., 1989). Активность АЛТ продолжала снижаться и через 24ч после кровопотери снизилась на 39,80% (со 107,42±22,71 ммоль/л до 64,67±9,31 ммоль/л) по сравнению с интактными животными. В регуляции каталитической активности ферментов важная роль отводится конформационным изменениям белковой молекулы. (Моно Ж., Жакоб Ф., 1964). Подобный механизм описан для большинства энзимов, в том числе пиридоксалевых, к которым относятся и трансаминазы (Браун-штейн А.Е., 1969). Показано, что молекула, как ACT, так и АЛТ состоит из двух субъедимиц. При определенных условиях данная молекула способна диссоциировать на субъединицы, что сопровождается изменениями в четвертичной структуре и потерей каталитической активности вследствие отщепления пиридоксальфосфата (Мардашев СР., 1975). Помимо этого установлено, что изменение соотношения аминокислотных остатков молекулы ACT приводит к подавлению активности фермента (Куликова Н.А., 1968). Таким образом, полученные нами данные об угнетении активности траисаминаз в крови, вероятно, можно объяснить изменениями в конфор-мации их молекул, возникшими в результате перестройки метаболизма аминокислот под влиянием кровопотери. Не следует также исключать и роль нейрогенных влияний. При денервации печеночной артерии обнаружено уменьшение активности АЛТ (Гетте З.П., Евтушенко А.В., 1971). Что касается процессов активации и ингибирования энзимов in vivo, то, как отмечают Мосс Д.В. и Баттерворт П.Дж.(1978), в причинах снижения активности ферментов еще много неясного, что, скорее всего, обусловлено трудностями выделения и идентификации ингибиторов. Однако возможность действия неспецифических ингибиторов на трансаминазы не исключается. Хочачка П. и Сомеро Дж. (1977) считают, что реакция угнетения трансаминаз направлена на предотвращение поступления массивного потока аминокислот в лимоннокислый цикл.
Влияние однократного введения аскорбиновой кислоты в различных дозах после кровопотери на показатели ПОЛ-АОС в печени экспериментальных крыс
При введении АК в эритроцитарных контейнерах животным после кровопотери уровень содержания МДА в эритроцитах через 6ч после имел тенденцию к снижению, а через 24ч - наоборот, к повышению по сравнению с его уровнем у интактных животных. По сравнению с крысами с ОЦГ содержание продукта ПОЛ - МДА достоверно снизилось на 14,91% (с 661,17±76,97мкмоль/л до 562,56±53,28мкмоль/л), а через 24ч - лишь имело тенденцию к снижению.
Уровень содержания при введении АК на обоих изученных сроках оставался ниже такового у животных с ОЦГ. Кроме того, при введении АК в эритроцитарных носителях уровень содержания МДА и через 6ч, и через 24ч после кровопотери был существенно (р 0,05) ниже такового при использовании внутривенного введения АК. Таким образом, однократное ведение АК в дозе 25мг/кг после кровопотери при использовании традиционного метода введения на всех изученных сроках после кровопотери сохраняет повышенный уровень содержания МДА в эритроцитах, в то время как направленный транспорт в печень АК в эритроцитарных контейнерах приводит к нормализации уровня содержания МДА у экспериментальных животных, который на всех изученных сроках не достоверно отличается от уровня интактных животных. Влияние однократного введения АК в дозе 50мг/кг после кровопотери па содержание малонового диапьдегида в эритроцитах крыс Внутривенное введение АК интактным животным в дозе 50мг/кг вызывает достоверное увеличение содержания МДА в эритроцитах на 20,07% (с 573,3 5±91,35мкмоль/л до 688,44±125,17мкмоль/л). Введение АК путем направленного транспорта в печень АК в эритроцитарных контейнерах, наоборот, вызывает достоверное снижение содержания МДА на 15,18% с 5 73,35 ±91,3 5 м кмоль/л до 486,3 0±84,41м кмоль/л). При однократном внутривенном введении АК животным после кровопотери содержание МДА через 6ч достоверно увеличивается на 35,52% (с 661,17±76,97мкмоль/л до 896,01 ±110,45мкмоль/л), через 24ч концентрация МДА повышается на 25,42% (с 696,98±176,25мкмоль/л до 874,18±154,8Ыкмоль/л) (p 0,05) по сравнению с животными в ОЦГ. По сравнению с данными ннтактных животных содержание МДЛ через 6ч повышается на 56,28%, а через 24ч на 52,47%. Однократное внутривенное введение АК в эритроцитарных контейнерах животным после кровопотери через 6ч способствовало снижению содержания МДА в эритроцитах крыс с 573,35±91,35мкмоль/л до 4 64,43 ±8 3,2 2м кмо ль/л, что составило 81% по сравнению с интактными животными, а через 24ч его содержание лишь имело тенденцию к снижению по сравнению с таковыми. Относительно данных животных с гипоксией содержание МДА снизилось через 6ч на 29,76% (с 661,17±76,97мкмоль/л до 464,43±83,22мкмоль/л), а через 24ч - на 26,56% (с 696,98±176,25мкмоль/л до 511,24±126,S3 мкмоль/л). Таким образом, уровень содержания МДА и через 6ч, и через 24ч после кровопотери при внутривенном введении АК оставался достоверно выше уровня у интактных животных. При введении АК в эритроцитарных контейнерах его уровень в эритроцитах крыс, наоборот, снизился. Причем при введении АК в эритроцитарных контейнерах содержание МДА на обоих изученных сроках было существенно ниже такового при использовании внутривенного введения. Из приведенного анализа можно заключить, что однократное введение АК в дозе 50мг/кг после кровопотери при использовании традиционного метода введения на всех изученных сроках после кровопотери сохраняет повышенный уровень содержания МДА в эритроцитах крыс, в то время как направленный транспорт в печень АК в эритроцитарных носителях через 6ч сохраняет пониженный уровень МДА, а через 24ч происходит его нормализация. Влияние однократного введения АК в дозе ЮОмг/кг после кровопотери на содержание малоиоеого диальдегида в эритроцитах крыс. Введение АК интактным животным в дозе 100мг/кг путем направленного транспорта в эритроцитарных контейнерах не вызывает достоверного изменения содержания МДА в эритроцитах крыс, но имеет тенденцию к повышению. При введении АК в эритроцитарных контейнерах животным после кровопотери через 6ч содержание МДА достоверно повысилось на 27,81 %, а через 24ч - на 25,81% по сравнению с интактными животными. По сравнению с животными с ОЦГ содержание МДА через 6ч достоверно повысилось на 10,83% (с 6б1Д7±76,93мкмоль/л до 732,78±54,64ммоль/л), а через 24ч лишь имело тенденцию к повышению. Влияние однократного введения АК в дозе 25мг/кг после кровопотери на активность глутатиопредуктазы е эритроцитах крыс. Введение АК в дозе 25мг/кг как традиционно внутривенно, так и после предварительного включения в эритроцитарные носители не вызывает достоверного изменения активности ГР по сравнению с ее уровнем в сыворотке интактных животных. Результаты исследования, представленные в таблице 4.23 показывают, что однократное введение АК как внутривенно, так и в эритроцитарных контейнерах на обоих изученных сроках животным после кровопотери не вызывает достоверного изменения уровня ГР по сравнению с ее уровнем у крыс с ОЦГ. В то же время анализируя данные таблицы можно отметить, что при внутривенном введении
