Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные взгляды на этиопатогенез, морфологию и методы коррекции амилоидоза 6
1.1.История изучения и современные данные о морфологических и биохимических свойствах амилоида 6
1.2.Клинико-морфологические формы амилоидоза 11
1.3 .Методики воспроизведения амилоидоза в эксперименте 13
1.4. Этиологическая характеристика амилоидоза и методы его коррекции 15
Глава 2. Материалы и методы исследования 30
2.1.Основные серии опытов 30
2.2. Общие методы исследования 34
2.3. Методики определения концентрации исследуемых веществ и функциональных показателей 35
Глава 3. Морфо-функциональная характеристика модели амилоидной нефропатии 37
3.1.Влияние нативной свиной плазмы в дозе 0,025 мл/г на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у золотистых сирийских хомяков 37
3.2. Морфологические изменения в органах опытных животных 42
Глава 4. Анализ протекторного и корригирующего влияния ацизола и янтарной кислоты при амилоидной нефропатии 48
4.1. Влияние введения ацизола в дозе 30 мг/кг массы тела животного
4.2. Влияние введения янтарной кислоты в дозе 1,5 ммоль/кг массы тела животного, на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у золотистых сирийских хомяков 54
4.3. Результаты патоморфологического исследования органов хомяков, подвергнутых воздействию нативнои свиной плазмы и ацизола 61
4.4. Результаты патоморфологичекого исследования органов хомяков, подвергнутых воздействию нативнои свиной плазмы и янтарной кислоты 65
Глава 5. Обсуждение результатов исследования и заключение 74
Общие выводы 79
Список использованной литературы 82
Приложения 82
- Этиологическая характеристика амилоидоза и методы его коррекции
- Методики определения концентрации исследуемых веществ и функциональных показателей
- Морфологические изменения в органах опытных животных
- Влияние введения янтарной кислоты в дозе 1,5 ммоль/кг массы тела животного, на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у золотистых сирийских хомяков
Введение к работе
Актуальность проблемы. Амилоидоз почек является одной из основных причин нефротического синдрома у взрослых (M.A.Gertz et al, 2000), ввиду чего данная проблема вызывает значительный интерес у отечественных и зарубежных исследователей (F.Ferrario, M.Rastaldi, 2006). Этот интерес обусловлен помимо достаточно широкой распространенности тяжестью клинических проявлений со склонностью к развитию почечной недостаточности (R. Rysava, 2007).
Проблема амилоидоза далека от решения, в частности по причине не до конца выясненной этиологии, что и обуславливает ту важную роль, которую отводят экспериментальному моделированию амилоидоза.
Кроме того, обращает внимание недостаточная изученность особенностей патогенеза амилоидоза. В этом плане перспективными могут явиться экспериментальные исследования, направленные на создание моделей амилоидоза при помощи разных патогенных факторов с использованием животных, совмещающих в себе два качества: достаточный размер и доступность.
На сегодняшний день получило положительную оценку моделирование экспериментального амилоидоза почек при помощи инъекций нативного яичного альбумина (Заалишвили Т.В., Брин В.Б., Козырев К.М., 2005). Есть данные о развитии амилоидоза у сирийских хомяков после введения им бычьей плазмы (Гиоева З.В., Брин В.Б., Козырев К.М., 2008). При моделировании амилоидоза таким способом остается открытым вопрос о вовлечении в процесс почек. Не исследованным является вопрос о влиянии состава используемой плазмы крови животных на возможность развития экспериментального амилоидоза, например, не изучена возможность воспроизведения генерализованого амилоидоза введением нативной свиной плазмы, имеющей отличия в белковом составе и степени его дисперсности, от бьшьей плазмы крови.
В литературе имеются сведения об успешном применении для профилактики и лечения амилоидоза препарата «милдронат» (Заалишвили Т.В., Брин В.Б., Козырев К.М., 2005; Гиоева З.В., Брин В.Б., Козырев К.М., 2008). Данный препарат повышая адаптацию органов и тканей к гипоксии оказывал протекторное и корригирующее действие в экспериментах на животных и в клинике. В связи с этим возникает вопрос о возможности применения антигипоксических препаратов для профилактики
развития амилоидоза. К числу таких препаратов относятся ацизол и янтарная кислота, влияние которых на процесс амилоидогенеза и амилоидоклазии ранее не изучалось.
Ацизол представляет собой комплексное цинкорганическое соединение. Он снижает потребность организма в кислороде, оказывает антигипоксическое, иммуномодулирующее, общетонизирующее, адаптогенное, антиоксидантное и регенераторное действие. Обладает гепатопротекторной активностью. Стимулирует процессы регенерации кожи, слизистых оболочек и паренхиматозных органов.
Янтарная кислота используется при состояниях с пониженной иммунологической реактивностью. В основе лечебно-профилактических свойств янтарной кислоты и ее соединений лежит модифицирующее влияние на процессы тканевого метаболизма - клеточное дыхание, ионный транспорт, синтез белков (Хадарцев А.А., 2003,2004; Коваленко А.Л., Петров А.Ю., Романцов М.Г.,2005),
Целью работы явилось создание модели экспериментального нефропатического типа амилоидоза, изучение ее функциональных и патогистоструктурных характеристик, анализ возможности коорригирующего влияния янтарной кислоты и ацизола.
Задачи исследования. Для достижения указанной цели в работе решались следующие задачи:
1. Создать модель экспериментального нефропатического генерализованного
амилоидоза у сирийских хомяков путем введения нативной свиной плазмы. Провести
функциональное и морфологическое ее сопоставление с ранее созданными в
лаборатории моделями амилоидоза.
2. Изучить характер функционально-структурных изменений у животных,
получавших в процессе моделирования амилоидоза ацизол.
3. Изучить характер функционально-структурных изменений у животных,
получавших в процессе моделирования амилоидоза янтарную кислоту.
Научная новизна. Разработан метод моделирования амилоидоза путем длительного (60 дней) подкожного введения золотистым сирийским хомякам нативной свиной плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела, при котором развивается системный амилоидоз с преимущественным поражением почек, сердца, печени, селезенки.
Показаны особенности развития амилоидоза почек, сопровождающегося снижением основных функциональных показателей электролито-водовыделительной системы.
Впервые показано, что применение янтарной кислоты способствует уменьшению выраженности признаков поражения почек, приводя к частичному восстановлению электролито- и водовыделительной функции и снижению уровня протеинурии. Использование янтарной кислоты уменьшает выраженность патогистологических изменений в тканях внутренних органов (почки, сердце, печень, селезенка) при данном виде экспериментального амилоидоза.
Впервые установлено, что применение ацизола уменьшает изменения водовыделительной и ионовыделительной функции почек, значительно снижает степень протеинурии. Показано, что применение ацизола уменьшает выраженность структурных повреждений тканей почек, сердца, печени и селезенки, вызванных введением нативной свиной плазмы.
По теме диссертационной работы, на основании результатов исследования получен патент на изобретение «Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных» Федерального института промышленной собственности от 20 февраля 2009 г, под № 2347279 и два положительных решения о выдаче патентов от 02.11.2009г под № 2008144059/14 (057451), от 5.11.2008г. под №2008144050/13 (057442)
Научно-практическая значимость работы. Исследование носит экспериментальный характер и полученные результаты, демонстрирующие эффекты длительного введения золотистым сирийским хомякам нативной свиной плазмы, сопровождающиеся развитием амилоидоза почек, относятся к области фундаментальных знаний, так как расширяют представления о возможностях моделирования амилоидоза почек, вносят определенный вклад в теорию патогенеза амилоидоза. Выявленные эффекты применения лекарственных препаратов янтарная кислота и ацизол, демонстрируют возможность их лечебного и профилактического применения с целью нормализующего влияния на функциональное состояние почек.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Длительное (60 дней) введение золотистым сирийским хомякам нативной
свиной плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела приводит к развитию системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, сердца, печени, селезенки.
2. Формирование экспериментального амилоидоза сопровождается
протеинурией, нарушением функции почек с изменением показателей электролито- и
водовыделительной функции почек.
-
Применение янтарной кислоты одновременно с нативной свиной плазмой способствует уменьшению выраженности признаков поражения почек, приводя к частичному восстановлению электролито- и водовыделительной функции и снижению уровня протеинурии.
-
Применение ацизола одновременно с нативной свиной плазмой уменьшает изменения водовыделительной и ионовыделительной функции почек, вследствие ослабления выраженности изменений канальцевой реабсорбции воды. Показано, что применение ацизола значительно уменьшает степень протеинурии.
5. Применение янтарной кислоты и ацизола существенно уменьшает формирование гистологических признаков экспериментального генерализованного амилоидоза.
Личный вклад автора. Диссертационное исследование выполнено самостоятельно, личное участие автора выражалось в постановке всех экспериментов, выполнении физиологических и патоморфологических исследований, статистической обработке полученных результатов.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 107 страницах машинописного текста, включая библиографию и приложения. Работа состоит из введения и 5 глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, библиографию и приложения. Библиографический указатель включает 151 источник, в том числе 68 отечественных и 83 иностранных.
Апробация диссертационной работы.
Материалы исследований доложены и обсуждались на конференции молодых ученых СОГМА (Владикавказ, 2008); 10-й Юбилейной научной сессии, посвященной 70-летию СОГМА (Владикавказ, 2009).
Этиологическая характеристика амилоидоза и методы его коррекции
В настоящее время выделяют несколько клинических форм амилоидоза, которые отчасти зависят от структуры волокон. Амилоидоз головного мозга характеризуется отложением амилоида в сенильных бляшках коры , сосудах и оболочках. При кардиопатическом типе амилоидоза, амилоид обнаруживается под эндокардом, в строме и сосудах миокарда, а также в эпикарде по ходу вен. Морфологически сердце становится очень плотным, миокард приобретает сальный вид. В печени амилоид наблюдается между звездчатыми ретикулоэндотелиоцитами синусоидов, по ходу ретикулярной стромы долек, в стенках сосудов, протоков и в соединительной ткани портальных трактов. При поражении амилоидозом селезенки, амилоид откладывается в лимфатических фолликулах или же равномерно по всей пульпе.
Нефропатический тип амилоидоза чаще встречается при вторичном амилоидозе, периодической болезни и болезни Маккла и Уэллса; для вторичного амилоидоза характерны смешанные формы: сочетание поражения почек, печени, надпочечников, желудочно-кишечного тракта. В почках амилоид откладывается в стенке сосудов, в капиллярных петлях и мезангии клубочков, в базальных мембранах канальцев и строме. В эпителии канальцев и строме выявляется много липидов. Цитоплазма эпителия канальцев, в большей степени проксимальных, заполнена белковыми гранулами. Почки становятся плотными, большими и «сальными». По мере нарастания процесса клубочки и пирамиды полностью замещаются амилоидом, разрастается соединительная ткань и развивается амилоидное сморщивание почек. Изменения клубочков состоят в утолщении и двуконтурности мембран и капилляров, просветы которых аневризматически расширены с резко выраженным плазматическим пропитыванием стенок. В связи с нарастающим амилоидозом и склерозом наблюдается гибель большинства нефронов, их атрофия, замещение соединительной тканью.
Согласно данным, которые приводит Л.В. Козловская (1998), поражение почек - основное проявление АА-амилоидоза, но развивается и при AL-амилоидозе, причем не менее часто, чем поражение сердца (это показано на большом материале клиники Мэйо и Бостонского университета). В клубочках почек амилоид откладывается вначале в мезангии, потом вдоль базальной мембраны; причем нет полного параллелизма, как вообще при амилоидозе, между клиническими проявлениями, величиной протеинурии и массивностью отложений амилоида в клубочках. Считается, что белок проникает в те места, где амилоид пенетрирует базальную мембрану и вскрывает подэпителиальное пространство и камеру Боумена-Шумлянского. При этом протеинурия зависит не столько от величины отложений амилоида, сколько от деструкции ножек и самих клеток подоцитов. Отложения амилоида обнаруживаются также в стенках крупных сосудов, строме пирамид, капсуле почки. Амилоидоз почек манифестирует обычно протеинурией, которая при АА-амилоидозе обнаруживается чаще и более выражена, чем при AL-амилоидозе. Так, по данным Н. А. Мухина, частота выявления протеинурии при АА-типе составляет 100%, при этом менее 3,5 г/сут — 24,4%, более 3,5 г/сут — 72,0%, при AL-амилоидозе эти показатели составляют 82, 50 и 32% соответственно.
Особенностью амилоидной нефропатии является сохранение нефротического синдрома и развитие почечной недостаточности. Гематурия встречается редко, могут отмечаться тубулярные дисфункции, артериальная гипертония при прогрессировании почечной недостаточности. При AL-амилоидозе прогрессирующая почечная недостаточность наблюдается реже, чем при АА-амилоидозе, и системная артериальная гипертония, как правило, не развивается даже при значительном повышении уровня креатинина крови. В ряде случаев может отмечаться и выраженная артериальная гипертония с одновременным нарастанием отеков, присоединением медленно прогрессирующей хронической почечной недостаточности (А.Ю. Николаев, 1998).
Патофизиологическим выражением амилоидной нефропатии считают мочевой синдром, характеризующийся протеинурией, цилиндрурией, микрогематурией, лейкоцитурией (Е.М. Тареев, 1983). Помимо мочевого синдрома выявляется изменения фильтрационно-реабсорбционных процессов в почках, нарушается электролитный баланс, возникает гипонатриурия и гипокалиурия, сопровождающиеся задержкой жидкости.
Нефропатический амилоидоз вызывает тяжелые морфо-функциональные нарушения почек (И.А. Шамов, В.В. Серов, 1977; Л.В. Козловская, 1998). В терминальной стадии заболевания наблюдается развернутая клиника уремии, характеризующаяся снижением скорости клубочковой фильтрации, канальцевой реабсорбции воды, канальцевой секреции со снижением объема спонтанного диуреза (А.И. Струков, В.В. Серов, 1995). Также происходит задержка в органкзме электролитов, воды и продуктов азотистого обмена.
Смерть больных при амилоидозе почек наступает обычно вследствие хронической почечной недостаточности и уремии в финальной стадии заболевания.
Экспериментальное моделирование амилоидоза является одним из основных методов его изучения ввиду необходимости аналитического исследования этиологии и патогенеза заболевания.
Существует достаточно большое количество способов экспериментального моделирования амилоидоза. Применяются методы моделирования амилоидоза у трансгенных мышей (Solomon A, Weiss D, Schell М. et al., 1999; Kaplan В, Hrncic R, Murphy CL, 1999). Данный метод является специфичным, поскольку получаемый процесс является больше первичным, в то время как наибольшей актуальностью отличаются исследования по вторичному амилоидозу, ввиду его большей социальной значимости.
Описаны различные способы стимулирования амилоидогенеза с помощью химических веществ, чаще всего с канцерогенными и токсическими свойствами: 3-methylcholanthrene (Y. Akamatsu, R. Ikegami, К. Watanabe et al., 1968), 4-(dimethylamino) azobenzene (Y. Akamatsu, R. Ikegami, 1968), 20-methylcholanthrene (F. Hirao, T. Fujisawa, E. Tsubura et al., 1967), pristane (2, 6, 10, 14 tetramethylpentadecane) (F.C. Ho, K.H. Fu, 1987), nivalenol (K. Ohtsubo, J.C. Ryu, K. Nakamura et al., 1989), N-nitrosobis (2-oxopropyl) amine (P.M. Pour, D.F. Birt, 1986).
Наибольшее количество имеющихся моделей основывается на введении животным биологических или химических агентов раздельно, а также в различных их сочетаниях с целью запуска иммуно-патобиохимических механизмов образования амилоидных фибрилл (Cui D., Kawano Н. et al., 2002; Garcia-Garcia M.et al., 2002).
Методики определения концентрации исследуемых веществ и функциональных показателей
Содержание натрия и калия в биологических жидкостях определяли методом пламенной фотометрии с помощью автоматического пламенного фотометра ФПА-2. 2. Определение кальция. Концентрацию общего кальция в моче и плазме крови определяли спектрофотометрически (СФ-26) с помощью набора «Кальций» ООО «Агат-Мед» (г.Москва, Россия). 3. Определение креатинина. Содержание креатинина в моче и плазме крови определяли спектрофотометрически (Меерзон А.К., Татаренко О.Т., Андреева Е.К., 1990) (СФ - 26) с помощью набора «Креатинин» ООО «Агат-Мед» (г.Москва, Россия). 4. Определение белка. Концентрацию общего белка определяли спектрофотометрически (СФ — 26) с помощью реактива Фоллина. Исследуемые показатели водо- и электролитовыделительной функции почек оценивали по общепринятым формулам (Наточин Ю.В. 1974). Рассчитывали скорость клубочковой фильтрации воды по клиренсу эндогенного креатинина и величину канальцевой реабсорбции воды. Результаты всех серий опытов математически обработаны на ПЭВМ Pentium-3 методом вариационного анализа с применением «t» критерия Стюдента с использованием программы Prizma 2,01.; Prizma 2,04.
Исследования функционального состояния почек в условиях спонтанного диуреза показали, что у животных с моделированием амилоидной нефропатии через 1 месяц подкожных инъекций относительно инактного фона наблюдалось достоверное увеличение диуреза, что было обусловлено снижением канальцевой реабсорбции воды и увеличением скорости клубочковой фильтрации (рис.3.1.). Через 2 месяца подкожного введения нативной свиной- плазмы отмечалось достоверное снижение шестичасового спонтанного диуреза вследствие достоверного снижения скорости клубочковой фильтрации воды, при этом снижалась и каналыцевая реабсорбция воды, относительно фона (рис.3.1.). Изучение ионоуретической функции ночек экспериментальных животных через 1 месяц, выявило статистически достоверное снижение экскреции натрия, по сравнению с данными интактных животных, что было связано с увеличением канальцевой реабсорбции катиона, при этом фильтрационный заряд натрия также увеличивался.
Рост фильтрационного заряда был обусловлен увеличением скорости клубочковой фильтрации воды. Концентрация натрия в плазме крови повышалась (рис.3.2.). Через 2 месяца эксперимента уровень экскреции натрия также достоверно снижался. Уменьшение экскреции катиона с мочой было обусловлено снижением фильтрационного заряда натрия, при этом достоверно уменьшалась и канальцевая реабсорбция катиона. Концентрация натрия в плазме крови статистически достоверно от фона не отличалась (рис.3.2.). Рис.3.2. Влияние нативной свиной плазмы на экскрецию и почечную обработку натрия у хомяков в условиях спонтанного диуреза.
Экскреция калия через 1 месяц эксперимента имела тенденцию к повышению, по сравнению с интактным контролем, что было связано с увеличением его фильтрационного заряда при тенденции к повышению содержания катиона в плазме крови. Рост фильтрационного заряда калия был обусловлен увеличением скорости клубочковой фильтрации воды (рис.3.3.) Через 2 месяца моделирования амилоидной нефропатии экскреция калия была достоверно (р 0,05), выше интактного контроля. Вероятно, экскреция калия увеличивалась вследствие повышения канальцевой секреции катиона в условиях гиперкалиемии, несмотря на то, что одновременно происходило снижение фильтрационного калия, обусловленное уменьшением скорости клубочковой фильтрации воды (рис.3.3.) канальцевой реабсорбции кальция. Одновременно происходило достоверное уменьшение концентрации кальция в плазме крови (рис. ЗА) Через 2 месяца экскреция кальция также была достоверно выше фоновых данных (р 0,001), что было обусловлено более значительным, чем через 1 месяц, снижением канальцевой реабсорбции кальция, несмотря на то, что происходило достоверное снижение фильтрационного заряда катиона. Фильтрационный заряд кальция уменьшался вследствие снижения скорости клубочковой фильтрации воды и уменьшения содержания кальция в плазме крови (рис. 3.4.). Через 1 месяц эксперимента экскреция белка с мочой была достоверно выше фона. Через 2 месяца введения амилоидогена экскреция белка увеличилась по сравнению с интактными животными почти в три раза (рис. 3.5.) Таким образом, подкожное введение нативной свиной плазмы золотистым сирийским хомякам на протяжении 2 месяцев в дозе 0,025 мл/г массы тела вызывает выраженную протеинурию, снижение показателей электролито- и водовы делительной функций почек, развитие нефропатического типа генерализованного амилоидоза.
Морфологические изменения в органах опытных животных
Морфологически при экспериментальном нефропатическом типе генерализованного амилоидоза макроскопически (под лупой) почки были увеличены в объеме, при снятии фиброзной капсулы- с красным крапом на поверхности коркового слоя. На разрезе граница между корковым и мозговым слоями была сглажена, отмечалось выраженное полнокровие обоих слоев.
Микроскопически, в препаратах окрашенных гематоксилином и эозином отмечались изменения в паренхиме и строме органа. Клубочки, преимущественно корковой зоны имели большое количество ядер округлой формы, мезангий местами отличался повышенной эозинофилией. В полюсах большей части клубочков также наблюдалась эозинофилия с гомогенезацией окрашенного вещества. Эпителий канальцев имел четко выраженные признаки вакуолизации цитоплазмы, на фоне которой также отмечалось наличие большого количества оптически более плотных включений. Базальная мембрана канальцев местами была значительно разрыхлена, причем в этих участках она была представлена гомогенной эозиноф.ильной субстанцией. Сходные изменения отмечались в медии сосудов артериального типа, при этом также происходило разрыхление их стенки, периваскулярно отмечались скудные, редко встречающиеся инфильтраты, преимущественно лимфоцитарные с некоторым количеством плазматических клеток (рис.3.6.)
Окрашивание препаратов данной группы животных конго-красным позволило выявить амилоидположительные структуры в стенках приносящих артериол в полюсах клубочков, а также в медии сосудов артериального типа и базальной мембраны канальцевого эпителия. Амилоидный характер гиалиноподобных структур в данном случае подтверждался тем, что при поляризационной микроскопии в данных участках препаратов определялась зеленоватого цвета субстанция с двойным лучепреломлением. Что касается изменений в мезангий, то отсутствие конгофилии и характерной картины при поляризационной микроскопии не дает возможности соотнести их с накоплением амилоида и может являться следствием повышенной проницаемости эндотелия капилляров или его дистрофических изменений. Все описанные изменения соответствовали продолжительности введения амилоидогена (рис.3.6.)
Для заключения того насколько полученная нами картина соответствует таковой при генерализованном амилоидозе, также были изучены микропрепараты миокарда, печени, селезенки и крупных сосудов животных опытных групп.
При изучении миокарда отмечалось накопление конгофильного вещества в небольших количествах в кардиомиоцитах, что сопровождалось исчезновением в них поперечнополосатой исчерченности. В стенках сосудов артериального типа накопление амилоида сопровождалось, как правило, явлениями пан- и периваскулита, очагами дистрофических изменений мукоидного и фибриноидного характера. В некоторых случаях отмечалось поражение сосудов мелкого калибра. Это сопровождалось признаками фибриноидных изменений, вплоть до очагового некроза стромально-сосудистых структур, дистрофией эндотелиоцитов, расширением и отеком тканевых пространств, а также отмечались гиперемия сосудов, причем во всех участках миокарда (рис. 3.8.)
В крупных сосудах отложения амилоида обнаруживались чаще всего в аорте, реже в легочной артерии, при этом поражалась, также как и в сосудах более мелкого калибра, средняя оболочка (рис. 3.9.)
При изучении препаратов печени отмечалось поражение гепатоцитов с накоплением в них конгофильной субстанции, что дополнялось признаками жировой дистрофии. Также отложения амилоида отмечались по ходу синусоидов. Изменения в строме и сосудах были такими же, как и в ранее изученных органах. Из отличительных особенностей следует выделить выраженную инфильтрацию периваскулярных пространств преимущественно макрофагами и плазматическими клетками (рис. 3.10.)
В селезенке опытных животных отмечалась гиперемия, плазматическое пропитывание и отек с элементами ярко выраженного эндотелиоза сосудов системы микроциркуляции. Отложение амилоида вокруг лимфоидных фолликулов стенки сосудов и стромальных перегородках, а также в капсуле селезенки с повышенной конгофилией этих структур. На фоне очаговых реактивных и атрофических процессов в лимфоидной ткани, и стромально сосудистых структурах, выявляются некоторые отложения амилоида в фолликулах, которые носят характер приближенно сагового процесса (саговая селезенка) (рис. 3.11.).
Влияние введения янтарной кислоты в дозе 1,5 ммоль/кг массы тела животного, на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у золотистых сирийских хомяков
Контрольные исследования у животных с изолированным введением янтарной кислоты (2-я контрольная группа, 1-ой послужили интактные хомяки) не выявили достоверного изменения показателей водовыделительной функции почек относительно интактного контроля в условиях спонтанного диуреза. Изучение ионоуретической функции почек выявило лишь тенденцию к снижению экскреции электролитов. На фоне изолированного введения янтарной кислоты концентрация белка незначительно увеличилась по истечении 2 месяцев.
У опытных животных получавших через день в течение 2-х месяцев раствор янтарной кислоты на фоне подкожного введения амилоидогена через 1 месяц выявлялась тенденция к снижению скорости клубочковой фильтрации воды, что вызывало тенденцию к снижению диуреза относительно интактных животных и животных с изолированным введением амилоидогена. Через 2 месяца направленность изменений усилилась. Достоверное снижение диуреза, было обусловлено достоверным (р 0,001) снижением скорости клубочковой фильтрации воды, при этом канальцевая реабсорбция воды тоже снижалась, относительно интактного контроля, но данные были все же выше результатов животных с амилоидной нефропатией (рис. 4.6.)
Изучение электролитовыделительной функции почек выявило через 1 месяц тенденцию к снижению экскреции натрия, вследствие уменьшения фильтрационного заряда катиона. Снижение фильтрационного заряда было обусловлено уменьшением скорости клубочковой фильтрации воды. Реабсорбция натрия и его содержание в плазме крови достоверно не менялось относительно фона. Через 2 месяца экскреция натрия достоверно увеличивалась. Рост экскреции катиона был связан с достоверным снижением канальцевой реабсорбции натрия, при этом фильтрационный заряд катиона по сравнению с фоновыми данными, достоверно снижался вследствие снижения скорости клубочковой фильтрации воды и уменьшения содержания натрия в плазме крови (рис.4.7.)
Экскреция калия через 1 и 2 месяца эксперимента достоверно снижалась, как относительно интактного фона, так и группы животных с амилоидной нефропатией. Снижение экскреции катиона было обусловлено снижением фильтрационного заряда калия, несмотря на увеличение его концентрации в плазме крови. Фильтрационный заряд снижался вследствие уменьшения скорости клубочковой фильтрации воды (рис.4.8.).
Экскреция кальция при единовременном введении амилоидогена и янтарной кислоты через 1 месяц эксперимента, относительно интактных хомяков, имела тенденцию к снижению вследствие уменьшения фильтрационного заряда катиона. Снижение фильтрационного заряда было обусловлено статистически недостоверным уменьшением скорости клубочковой фильтрации воды. Через 2 месяца исследований экскреция с мочой кальция достоверно увеличивалась по сравнению с фоном, но была ниже чем в группе животных с изолированным введением нативной свиной плазмы. Повышение кальция в моче было обусловлено статистически достоверным снижением канальцевой реабсорбции катиона, одновременно снижался и фильтрационный аряд кальция, вследствие снижения скорости клубочковой фильтрации воды (рис.4.9.)
В группе с сочетанным введением амилоидогена и янтарной кислоты экскреция белка, относительно группы животных получавших только амилоидоген, в конце второго месяца снизилась почти в 2 раза, однако оставалась выше данных контрольной группы (рис.4.10).
Таким образом, введение интактным животным янтарной кислоты привело к снижению показателей электролито- и водовыделительной функции почек относительно контрольных данных. При сочетанном введении нативной свиной плазмы и янтарной кислоты происходит неполное восстановление показателей электролито- и водовыделительной функции почек, а также отмечается снижение уровня протеинурии.
Макроскопически фиброзная капсула (под лупой) снималась легко, обнажая ровную гиперемированную поверхность коркового вещества. Граница между корковым и мозговым слоями была выражена на всем протяжении, но отрезками — не четко. Отмечалось полнокровие медуллы.
Микроскопически в корковом и мозговом слоях отмечается снижение гиперемии, отека и плазматического пропитывания стенок кортикальных и медуллярных сосудов. Наблюдались очаговые периваскулярные кровоизлияния, явления эндоваскулита медуллярных сосудов. Контуры клубочков определялись четко, с хорошо выраженными просветами капсул Шумлянского-Боумена. В некоторых клубочках просматривался серозный экссудат с рыхлыми белковыми массами. Капилляры югу бочков несколько гиперемированны, с явлениями фокусного отека. Отмечалась пролиферация эндотелиальных клеток и мезангиоцитов (интеркапиллярных структур, ретикулярных клеток и гистиоцитов). Снижение конгофилии клубочковых капилляров, приносящих и выносящих артериол, а также других сосудов кортикального и медуллярного слоев почки. В просвете отдельных канальцев скопление рыхлого белка, слущенного эпителия. Наблюдалось некоторое снижение признаков конгофилии базальных мембран канальцев, чашечного и лоханочного соединительно-тканного матрикса. Следует подчеркнуть, что в динамике микроскопических исследований, как уже указывалось, у амилоидных животных выявлена ярко выраженная конгофилия фиброзной капсулы почки, тогда как у леченных животных этот феномен был слабо выражен и носил очаговый характер. У леченных животных отмечалась некоторая активность в обоих слоях почек иммунноксмпетентных клеток: лимфоцитов, плазмацитов, гистиоцитов, ретикулярных клеток, единичных нейтрофилов и фибробластов, чаще всего обнаруживаемых периваскулярно в чашечно-лоханочной системе.
Достоверно показано формирование юкстамедуллярных шунтов в леченном эксперименте, тогда как в не леченных группах эти шунты не определялись (рис.4.11.)
Морфометрически у Уз несколько гиперемированных клубочков отмечалась гипертрофия элементов югстагломеруллярного аппарата, тогда как у амилоидных животных это не наблюдалось.
Все это является доказательством положительного влияния ацизола, свидетельством которого является некоторое снижение конгофилии стромально-сосудистых структур гиперемии, отека, а также плазматического пропитывания в сердце, печени, селезенке (рис.4.12, 4.13, 4.14)
