Введение к работе
Актуальность исследования. Несмотря на успехи в изучении амилоидоза, эта проблема по-прежнему заслуживает определения, данного ей на I международном симпозиуме, посвященном амилоидозу (Гронинген, Нидерланды, 1967 г.). Тогда проблему амилоидоза сравнили со «сфинксом, о котором известно давно, но его сущность неизвестна человеку» (В.В. Рамеев и др., 2009 г.). Амилоидоз указывается в качестве одной из основных проблем здравоохранения западных стран (Fatma Briki, 2011), что обусловлено тяжестью клинических проявлений и склонностью к развитию почечной недостаточности (R. Rysava, 2007). Исходя из этого, создание новых моделей экспериментального амилоидоза у животных является перспективным, поскольку в настоящее время, несмотря на прогресс в изучении амилоидоза, нет эффективных средств, профилактики и лечения. В связи с этим поиск новых средств, обладающих высокой эффективностью и минимальным количеством побочных действий, является достаточно актуальным.
Механизм терапевтического действия галавита (МНН-аминодигидрофталазина дион натрия), модулятора функции макрофагов, обусловлен способностью препарата уменьшать синтез и секрецию провоспалительных цитокинов (TNF-фактора, ИЛ-1 и др.) гиперактивированными макрофагами, что достигается путем ингибирования в макрофагах синтеза РНК, ДНК и предотвращает развитие патологического процесса. Галавит ингибирует в легкой обратимой форме гиперактивность макрофагов лишь на время его применения (М.Т. Абидов и др., 1996). Учитывая концепцию патогенеза приобретенного амилоидоза, заключающуюся в том, что постоянно повышенное образование провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-6 и фактора некроза опухоли TNF-a) вызывает значительное увеличение синтеза острофазного белка-предшественника, сывороточного А-амилоида (SAA), концентрация которого может повышаться в 100-1000 раз (H.J. Lachmann, H.J. Goodman, J.A. Gilbertson, J.R. Gallimore, C.A. Sabin, J.D. Gillmore, et al., 2007, T. Nakamura et al., 2006), обоснованным является выбор для профилактики развития амилоидоза препарата галавит. Как уже отмечалось, его основные фармакологические эффекты обусловлены способностью оказывать влияние на функционально-метаболическую активность макрофагов. Отечественными исследователями также подтверждено основное действие препарата – обратимое ингибирование на 4—6 ч избыточного синтеза гиперактивными макрофагами фактора некроза опухоли, интерлейкина (ИЛ) -1, других провоспалительных цитокинов и активных форм кислорода (В.Н. Петров, А.Ф. Цыб, М.А. Каплан и соавт., 2001, А.А. Подколзин, В.И. Донцов, О.М. Бабижаева, 2001, M.V. Nelyubov, 2002). Эти данные позволяют предположить, что галавит может оказывать тормозящее действие на процессы синтеза и отложения амилоида.
Таким образом, учитывая вышеизложенное, можно считать целесообразным изучение возможности применения галавита как перспективного средства для профилактики и коррекции нарушений при нефропатическом типе системного экспериментального амилоидоза.
Целью настоящего исследования было создание моделей экспериментального системного амилоидоза нефропатического типа, изучение функциональных, морфологических характеристик их патогенеза и анализ возможности корригирующего влияния галавита.
Задачи исследования. Для того чтобы достичь указанной цели, в работе решались следующие задачи:
-
Создание модели экспериментального системного нефропатического амилоидоза у хомяков методом длительного введения нативной человеческой плазмы.
-
Создание модели экспериментального системного нефропатического амилоидоза у хомяков методом однократного введения равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы и адъюванта Фрейнда.
-
Проведение функционального и морфологического сопоставления 2-х моделей амилоидоза.
-
Изучение характера функционально-морфологических изменений у хомяков, получавших в процессе моделирования амилоидоза галавит.
Новизна научной работы. Впервые разработаны методы моделирования амилоидоза путем длительного (60 дней) подкожного введения хомякам нативной человеческой плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела и однократного подкожного введения хомякам равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы в сочетании с адъювантом Фрейнда (из расчета по 0,1 мл в пять точек инъекций). Модели сопровождались развитием системного экспериментального амилоидоза с преимущественным поражением почек, а также печени и селезенки. Определены особенности развития амилоидной нефропатии, сопровождающейся оксидативным стрессом, протеинурией, снижением основных функциональных показателей почек: водо- и электролитовыделительной функций.
Установлено, что применение галавита значительно ослабляет степень протеинурии, изменений основных функциональных показателей почек (водо- и электролитовыделительной функции), а также выраженности оксидативного стресса, развившегося в ходе моделирования экспериментального амилоидоза. Уменьшается выраженность отложения фибриллярных белков амилоида в стромально-сосудистых структурах, преимущественно в почках, а также в селезенке и печени.
Новизна работы подтверждена тремя патентами (патент №2446482, №2473133, №2473134).
Научно-практическая значимость работы. Данное исследование носит экспериментальный характер. Результаты относятся к области фундаментальных знаний, поскольку дают возможность раскрыть патогенетические механизмы развития наиболее часто встречающейся формы амилоидоза (вторичного АА-амилоидоза) и вести поиск новых эффективных фармакологических средств, обладающих профилактическим и лечебным действием. Полученные результаты исследования свидетельствуют о положительном предупреждающем влиянии галавита на формирование экспериментального нефропатического амилоидоза, что расширяет представления о возможностях моделирования амилоидоза и способствует более глубокому изучению и пониманию этиологии и патогенеза.
Таким образом, полученные результаты могут стать основополагающими для разработки способов профилактики и лечения амилоидоза не только в эксперименте, но и у человека путем последующих исследований. Полученные результаты могут быть использованы при преподавании патофизиологических и гистоструктурных основ стромально-сосудистых диспротеинозов на кафедрах патологии и нефрологии медицинских вузов.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Длительное (60 дней) подкожное введение хомякам нативной человеческой плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела животного через день сопровождается развитием системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, а также селезенки и печени.
-
Однократное введение хомякам равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы в сочетании с адъювантом Фрейнда также сопровождается развитием системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, а также селезенки и печени. Развитие экспериментального системного амилоидоза приводит к оксидативному стрессу, протеинурии, нарушению водо- и электролитовыделительной функций почек.
-
Использование галавита одновременно с длительным введением нативной человеческой плазмы, а также однократным равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы и адъюванта Фрейнда способствует уменьшению выраженности гистоструктурных признаков поражения почек, селезенки и печени.
-
Применение галавита способствует частичному восстановлению основных функциональных показателей почек (водо- и электролитовыделительной функций), уменьшению степени протеинурии, а также снижению интенсивности процесса ПОЛ. Эффективность применения галавита при обеих моделях экспериментального амилоидоза примерно одинакова.
Личный вклад автора. Автором самостоятельно выполнена работа по получению экспериментальных данных, изложенных в диссертации. Проведена математическая и статистическая обработка результатов исследования. Проанализированы и обобщены полученные результаты.
Публикации и апробация диссертационной работы. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ, из которых 4 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования России.
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на II международной конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2011), X Конференции молодых ученых ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (Владикавказ, 2011).
Структура диссертации работы. Диссертация изложена на 123 страницах, иллюстрирована 41 рисунками и 12 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав, содержащих результаты собственных исследований, заключения, общих выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 202 источников, из них 166 - зарубежных авторов.
