Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 18
1.1. Общие сведения о генетическом полиморфизме молекул иммунного ответа и гемостаза в Забайкальской популяции 18
1.2. Характеристика значимых при инфекционных заболеваниях генов цитокинов и их полиморфизм 22
1.3. Общие сведения об этиопатогенезе вирусного гепатита С 27
1.4. Общие сведения об этиопатогенезе рожи 37
1.5. Общие сведения об этиопатогенезе гриппа 40
Глава 2. Клиническая характеристика больных, материалы и методы исследований 45
2.1. Общая характеристика обследованных групп 45
2.1.1. Клиническая характеристика пациентов с рожей 46
2.1.2. Клиническая характеристика пациентов с хроническим вирусным гепатитом С 49
2.1.3. Клиническая характеристика пациентов с циррозом печени в исходе ХВГС 51
2.1.4. Клиническая характеристика больных с гриппом А/H1N1 (2009) 52
2.2. Лабораторные методы исследований 53
2.2.1. Методы определения количества иммунокомпетентных клеток 53
2.2.2. Определение субпопуляций лимфоцитов 53
2.2.3. Оценка лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии 54
2.2.4. Определение концентраций иммуноглобулинов 54
2.2.5. Определение концентрации цитокинов 54
2.2.6. Исследование экспрессии тканевого фактора 55
2.2.7. Определение биохимических показателей 56
2.2.8. Определение серологических маркров 66
2.2.9. Вирусологические методы 67
2.2.10. Определение гененетического полиморфизма 69
2.3. Инструментальные методы 71
2.4. Методы статистической обработки полученных результатов 72
Глава 3. Состояние иммунитета и полиморфизм генов IL-2 (T330G), IL-10 (C819T), IL-10 (G1082A) у больных рожей 74
3.1. Состояние клеточного и гуморального иммунитета при роже 74
3.2. Содержание провоспалительных цитокинов при роже 76
3.3. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия при роже 78
3.4. Экспрессия тканевого фактора у больных рожей 83
3.5. Полиморфизм генов цитокинов при роже 3.5.1. Взаимосвязь полиморфизма промотора гена IL-2 (Т330G) и содержания интерлейкина-2 в крови больных рожей 88
3.5.2. Полиморфизм гена IL- 10 (С819Т, G1082A) у больных рожей.. 99
3.5.3. Приложения таблиц корреляционного анализа встречаемости полиморфизмов генов IL-2 и IL-10 при роже 104
3.6. Заключение 107
Глава 4. Полиморфизм генов il-2, il-10, продукция цитокинов и лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных гриппом А/H1N1 (2009) 112
4.1. Полиморфизм генов IL-2 и IL-10 у больных гриппом А/H1N1
(2009) 113
4.2. Содержание IL-2 и IL-10 у больных гриппом А/H1N1 (2009) 119
4.3. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных гриппом А/H1N1 (2009) 121 4.4. Заключение 126
Глава 5. Полиморфизм цитокинов, лимфоцитарно тромбоцитарная адгезия при хроническом вирусном гепатите С 128
5.1. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия при ХВГС 128
5.2. Полиморфизм генов IL-2 и IL-10 у больных хроническим вирусным гепатитом С 130
5.3. Влияние полиморфизмов генов IL-2 и IL-10 на содержание интерлейкинов при ХВГС 146
5.4. Аллельные варианты CRP (C3872T) у больных с разными стадиями фибротических изменений печени 152
5.5. Приложения таблиц корреляционного анализа встречаемости полиморфизма гена CRP (C3872T) у больных с разными стадиями фибротических изменений печени 160
5.6. Заключение 162
Глава 6. Обсуждение полученных результатов
6.1. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и ее диагностическое значение 167
6.2. ЛТА и полиморфизм генов цитокинов при роже 172
6.3. ЛТА и полиморфизм генов цитокинов при гриппе А/H1N1 178
6.4. Полиморфизм генов при хроническом вирусном гепатите С 181
6.5. Заключение 186
Выводы 190
Список литературы
- Общие сведения об этиопатогенезе вирусного гепатита С
- Лабораторные методы исследований
- Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия при роже
- Содержание IL-2 и IL-10 у больных гриппом А/H1N1 (2009)
Общие сведения об этиопатогенезе вирусного гепатита С
Cовременные концепции в медицине направлены на поиск генетических, в том числе иммуногенетических, маркеров предрасположенности к различным заболеваниям [205, 215, 346]. Еще во второй половине прошлого века сформулирована теория, согласно которой подверженность к той или иной болезни обусловлена сочетанием в генотипе индивида определенных аллельных вариантов генов, формирующих неблагоприятный наследственный фон, реализующийся при взаимодействии с факторами среды патологическим фенотипом [388].
В последнее десятилетие особое значение отводится изучению генетического полиморфизма, выполняющему одну из ключевых ролей в определении индивидуальных особенностей ответа на один и тот же этиологичесикий фактор [1, 69]
На сегоднешний день не вызывает сомнений то, что в патогенезе инфекционных заболеваний немаловажную роль занимает состояние иммунологической реактивности больного [117, 167, 171].
Общим признаком инфекционных заболеваний является широкая вариабельность устойчивости к инфекции. Некоторые лица остаются резистентными к вирусным инфекциям, несмотря на частые контакты с ними. В значительной степени эта вариабельность обусловлена полиморфизмом генов, детерминирующих элементы врожденного и адаптивного иммунитета [74, 284].
Известно, что в реализации иммунного ответа, при ряде инфекционных заболеваний, существенную роль играет генетический полиморфизм медиаторов воспаления и паттерн-распознающих рецепторов [68, 97, 103]. Проведенные исследования показали, что спектр генетических полиморфизмов при различной патологии зависит от расовой (этнической) принадлежности – при определенных условиях некоторые генетические полиморфизмы могут предрасполагать, либо препятствовать проявлению различных заболеваний [24, 26, 83, 84, 247].
В Забайкалье исследование генетического полиморфизма молекул иммунного ответа и гемостаза началось с 2002 года под руководством профессора Ю.А. Витковского. В Забайкальской популяции наиболее хорошо изучены протромботические мутации FII, FV и MTHFR. Оценена их распространенность в популяции. Известно, что частота первичных тромбофилий, обусловленных мутациями генов FV (Лейден) и метилентетрагидрофолатредуктазы (С677Т), выше среди больных с хирургическими заболеваниями органов дыхания по сравнению с показателями здоровых резидентов Забайкальской популяции соответствующей возрастной группы [255].
При этом Богдановым А.С. [27] установлено, что мутация FVL выявляется в 2,4 раза чаще у больных с врожденными пороками развития по сравнению со здоровыми детьми в популяции. Частота выявления мутации гена МТГФР С677Т у больных с пороками развития в 1,4 раза выше, чем в популяции. Одновременная мутация генов FVL и МТГФР С677Т осложняет характер множественного порока развития.
В Забайкальской популяции у детей в возрасте до 16 лет частота встречаемости мутаций FVL и С677Т в гене МТГФР зависит от пола и этнической принадлежности. При инфекционной патологии у детей мутации FVL и С677Т в гене МТГФР встречаются с разной частотой (чаше при нейроинфекциях и пневмониях). У обследованных превалирует гетерозиготная форма носительства генов первичной тромбофилии [167]. Е.Е. Гергесова [53] установила, что в Забайкалье здоровые лица обладатели «ненулевых» групп крови характеризуются усилением агрегационного потенциала кровяных пластинок на фоне снижения их способности к формированию гетеротипических межклеточных контактов. Протромботические мутантные варианты генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro), а также их сочетание чаще выявляются у здоровых людей со II (A) группой крови, способствуя усилению агрегационной функции тромбоцитов. Частоты встречаемости полиморфных вариантов генов GpIa (С807) и GpIIIa (Leu33-Pro) у больных гриппом A (H1N1)/2009 не отличаются от группы здоровых лиц. Аномальные генотипы тромбоцитарных рецепторов и их сочетание чаще выявляются у больных со II (A) группой крови. Аномальные варианты генов GpIa (C807) и GpIIIa (Leu33-Pro) и их сочетание у больных гриппом A (H1N1)/2009 обусловливают усиление адгезивности тромбоцитов на лимфоцитах, что приводит к уменьшению процента лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов в циркуляции и способствует ослаблению агрегации пластинок in vitro [53, 75, 76]. Работы по изучению генетического полиморфизма, проводимые на базе ГБОУ ВПО ЧГМА, подтверждают взаимосвязь между сочетанием в генотипе индивида определенных аллельных вариантов генов с предрасположенностью и подверженностью к различным заболеваниям [22, 71, 72, 108, 199, 208].
Так, Батаевой Е.П. [22] выявлено, что среди здоровых детей, проживающих в Забайкалье, вариант С589Т полиморфизма гена IL-4 выявляется чаще, чем вариант G308А гена TNFa тогда, как при первичном пиелонефрите и при остром постстрептококковом гломерулонефрите их встречаемость выше. Полиморфизм С589Т гена IL-4 (генотипы С/Т и Т/Т) способствует высокому риску возникновения осложнений при ОПГН. Присутствие мутации G308А гена TNFa (генотип G/A) предрасполагает к развитию нефросклероза при обструктивном пиелонефрите у детей. Присутствие аллельного варианта С589Т IL-4 у пациентов с пиелонефритом сопровождается более низкими значениями концентрации IL-8 в начале заболевания [22, 23].
Установлено, что распределение частот проапоптотических аллельных вариантов р53(С72G), р21(С31А) и TNF (G308A) у резидентов Забайкальского края, не страдающих острыми или обострением хронических заболеваний глаз, имеет половые и этнические особенности. Частота встречаемости р53(С72G), р21(С31А) и TNF (G308A) относительно выше среди лиц бурятской национальности, как в группе больных ПОУГ, так и здоровых лиц. В обеих этнических группах генетические аномалии в гетерозиготном и гомозиготном состоянии чаще выявляются среди мужчин, за исключением проапоптотических гомозигот р53(С72G), которые среди русского населения встречаются преимущественно у женщин. При этом, сочетанные формы проапоптотических полимоморфизмов генов р53, р21 и TNF являются более прогностически неблагоприятными для риска развития глаукомы среди русского и бурятского населения Забайкальского края [24-26, 202].
Лабораторные методы исследований
Определение РНК ВГС с высокой чувствительностью Выделение РНК ВГС из сывороток крови пациентов проводили с помощью набора реагентов для выделения РНК ВГС «РеалБест РНК ВГС (качественный вариант)» (ЗАО «Вектор-Бест», РФ) по приведенной ниже схеме.
К 1 мл сыворотки крови пациентов добавляли 1 мл 64 концентрирующего раствора, центрифугировали 5 мин при 3000 об/мин и удаляли надосадочную жидкость. Далее к осадкам добавляли 700 мкл лизирующего раствора, содержащий сорбент с парамагнитными частицами и выдерживали на термошейкере при 56 С в течение 10 мин с частотой вращения 1300 об/мин. После этого в каждую пробирку добавляли по 750 мкл осадителя нуклеиновых кислот, перемешивали на вортексе и центрифугировали при 13000 об/мин 5 мин. Пробирки устанавливали в магнитный штатив и удаляли надосадочную жидкость. Затем производили двухстадийную отмывку осадка, и центрифугирование при 13000 об/мин. Осадки высушивали при комнатной температуре в течение 2-3 мин. К подсушенным осадкам добавляли 200 мкл элюирующего раствора, тщательно ресуспендировали на вортексе, и инкубировали в термошейкере при 56 С в течение 10 мин с частотой вращения 1300 об/мин, получая на выходе пробы, содержащие РНК ВГС, и готовые к постановке ОТ-ПЦР. ОТ-ПЦР в режиме реального времени проводили на регистрирующем амплификаторе Rotor-Gene 6000 фирмы Corbett Research, Inc. (Австралия). Амплификация проводилась по следующей схеме: 1 стадия: 45 С – 30 мин; 2 стадия: 94 С – 1 мин; 3 стадия 50 циклов (94 С – 10 сек, 60 С – 20 сек). Измерение флуоресценции проводили при 60С по каналам FAM и ROX для ДНК и двух внутренних контрольных образцов и кДНК ВГС.65 Количественный анализ РНК ВГС
Вирусную нагрузку определяли с помощью коммерческой тест системы «ОТ-гепатоген-С-количественный» («ДНК-технология», Россия) с чувствительностью 300 МЕ/мл. Анализ состоял из следующих этапов: выделение РНК (пробоподготовка), реакция обратной транскрипции, ПЦР амплификация кДНК ВГС в режиме реального времени. На стадии выделения РНК в реакционную смесь добавляют внутренний контрольный образец, предназначенный для оценки эффективности всех этапов исследования. ДНК-зонды, использующиеся для детекции продуктов амплификации искомой ДНК и внутренних контрольных образцов, помечены флуоресцентными метками FAM и HEX соответственно, что позволяет раздельно регистрировать результаты амплификации искомой ДНК и внутренних контрольных образцов. Для проведения количественной оценки РНК HCV набор реагентов ОТ-ГЕПАТОГЕН-С количественный включает калибровочные образцы ВГС-РНК в различной концентрации. Для анализа продуктов используют детектирующий амплификатор Rotor-Gene-3000 фирмы Corbett Research (Австралия). Для повышения чувствительности и специфичности реакции применяли «горячий» старт, который обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоев, разделенной прослойкой из парафина. Смешение слоев и превращение их в амплификационную смесь происходит после плавлении парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки. Схема ПЦР:
Определение полиморфизма генов (IL-2, IL-10, СRP) осуществлялось методом ПЦР с использованием праймеров ООО «Литех» (г.Москва). Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови или буккального эпителия с помощью реагента «ДНК-экспресс-кровь», затем проводилась реакция амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров.
Затем содержимое пробирки размораживалось при комнатной температуре и добавлялся реактив «ДНК-экспресс-кровь» равный по объему количеству форменных элементов в пробирке. Содержимое пробирки тщательно перемешивалось в течение 10 сек. и пробирка устанавливалась в предварительно прогретый до 98С термостат на 10 мин. Затем центрифугировалась со скоростью 8000 70
Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия при роже
В нашем исследовании мы сосредоточили свое внимание на некоторых иммуногенетических аспектах патогенеза трех заболеваний, входящих в четверку лидирующих инфекционных патологий. Среди них – рожа, грипп А/Н1N1 (2009), хронический вирусный гепатит С. Выбор заболеваний был связан не только с высокой частотой встречаемости заболеваний, но и характером их течения. Рожа является бактериальным заболеванием с частым рецидивированием после лечения, грипп – остро развивающееся вирусное заболевание, а хронический вирусный гепатит С – пример медленно развивающегося патологического процесса.
Известно, что инфекционные заболевания являются мультифакториальной патологией [141, 142, 215] и помимо факторов внешней среды и свойств возбудителя, большую роль в их развитии играют особенности генома человека.
Известно, что наследственная подверженность к инфекционным агентам связана с двумя факторами: относительно редкие генетические дефекты, приводящие к иммунодефицитам, а также сочетание (более распространенный вариант) у индивида «нормальных» аллелей и генов, по отдельности имеющих слабый эффект, но совокупность, которых приводит к формированию особенностей иммунитета, предрасполагающих к развитию инфекционного заболевания [215, 317].
Благодаря достижениям программы «Геном человека» идентифицированы гены, мутации которых приводят к наследственным болезням или увеличивают риск многофакторных заболеваний.
Согласно данным последних лет, различия в генах, контролирующих защитные реакции организма, могут влиять на уровень продукции кодируемых белков и, тем самым, на характер протекания иммунного ответа [79]. Наиболее частым изменением структуры генов является полиморфизм единичных нуклеотидов (англ. single-nucleotide polymorphism, SNP). Именно SNP особенно важен для молекулярной диагностики болезней. Генетически каждый человек обладает уникальной последовательностью нуклеотидов, которых около 3 миллиардов пар в хромосомах. Считают, что геном каждого человека содержит порядка 25 000 генов. Мутации или изменения в любом из этих генов могут привести к болезни, инвалидности или сократить срок жизни. Эти мутации могут передаваться от одного поколения другому так же, как унаследованные рыжие волосы матери или карие глаза отца. Мутации в некоторых случаях могут произойти спонтанно, в результате отрицательного воздействия физических (например, различные виды излучения, радиация, и т.п.), химических (канцерогены, окислительный стресс и т.п.) или биологических (вирусы) факторов окружающей среды. Эти генетические различия вносят важный вклад в индивидуальные особенности развития защитных реакций и предрасположенность к целому ряду заболеваний. Особенности спектров генетических полиморфизмов в зависимости от географических условий, диеты, расовой (этнической) принадлежности указывают на действие естественного отбора. При определенных условиях некоторые генетические полиморфизмы могут либо предрасполагать, либо препятствовать проявлению различных заболеваний. Гены, аллельные варианты которых при наличии определенных условий предрасполагают к определенным заболеваниям, получили название генов предрасположенности [233, 235, 236]. Благодаря достижениям современной генетики человека, познание наследственной основы подверженности к инфекционным болезням человека идет нарастающими темпами. Картированы многие локусы, в которых расположены гены подверженности к инфекционным заболеваниям, изучен полиморфизм и особенности экспрессии многих генов-кандидатов, разработаны модельные объекты [74].
При инфекционной патологии в реализации иммунного ответа существенную роль играет генетический полиморфизм цитокинов [53, 70, 71, 97, 104, 209, 211]. Функционирование цитокиновой сети при инфекционных заболеваниях зависит от многих причин, в число которых входят индивидуальные различия в продукции цитокинов, обусловленные рядом генетических особенностей [70,71,209,211].
Кроме того, в настоящий момент объектом прицельного изучения является роль генетического полиморфизма генов цитокинов как предикторного фактора эффективности терапии инфекционных заболеваний [232, 235, 302, 329, 331, 332, 334].
Известно, что нормальное функционирование иммунной системы возможно лишь путем поддержания определенного баланса продукции и акцепции цитокинов, чрезвычайно важным является определение всех факторов влияющих на изменение гомеостаза цитокиновой системы [143]. Полиморфизм генов цитокинов, вероятно, является существенным фактором предрасположенности (резистентности) к инфицированию [122], развитию заболевания и длительному течению с осложнениями. В тоже время пока не ясно, какие мутации и каких генов имеют решающее значение. По-видимому, большую роль играют не только отдельные аллели генов, сколько их сочетание [122]. Например, аллель А SNP гена TNFa (G308А) аллель Т SNP гена IL-4 (С589Т) ответственны за повышенную транскрипцию генов, в результате чего увеличивается продукция цитокина TNFa и IL-4. Значительный подъем концентрации данных цитокинов способствует быстрому прогрессированию заболевания и более тяжелому течению. При этом аллель А SNP гена IL-10 (С592А) и SNP гена IL-10 (G1082А) способствует сниженной продукции IL-10.
Известно, что различные полиморфные варианты генов цитокинов могут сказываться на их продукции. Это в свою очередь влияет на направленность иммунного ответа, своевременность и эффективность межклеточной сигнализации [79]. Полиморфизм генов цитокинов является существенным фактором предрасположенности/резистентности к инфицированию [16, 33, 35, 38, 60, 70-72, 74, 83, 84, 105, 122, 123, 125, 126, 305, 313, 330], развитию заболевания и длительному течению с осложнениями. Большую роль в этом играют не только отдельные аллели генов, но и их сочетание [16, 33, 35, 38, 60, 70, 71, 72, 74, 83, 84, 105, 122, 123, 125, 126, 305, 313, 330]. Например, аллель А SNP гена TNF (G308А) и аллель Т SNP гена IL-4 (С589Т) ответственны за повышенную транскрипцию, в результате чего увеличивается продукция TNF и IL-4. Значительное повышение концентрации данных цитокинов способствует быстрому прогрессированию гепатита С и более тяжелому его течению. При этом аллель А полиморфизма гена IL-10 (С592A) и аллель А полиморфизма гена IL-10 (G1082А) обуславливает сниженную продукцию IL-10.
Известно, что IL-10 – это противовоспалительный цитокин, оказывающий тормозящее действие на Т хелперы 1-го клона, снижая, таким образом, синтез провоспалительных цитокинов [39, 45]. В случае низкого уровня IL-10 поддерживается высокая концентрация провоспалительных цитокинов, что также проводит к неблагоприятному течению заболевания. Так ранее показано, что наличие аллели А полиморфизмов гена IL-10 (С592A) и IL-10 (G1082А) гена у больных коклюшем способствуют сниженной продукции IL-10 и развитию осложнений заболевания [107, 108]. У детей с генотипом Т/Т SNP гена IL-4 (С589Т) продукция IL-4, IgМ и IgA более высокая, в сравнении с носителями нормальных гомозигот и гетерозигот. Для обладателей полиморфных маркеров гена IL-10 (G1082A), в случае неосложненного течения, также характерна гиперпродукция противовоспалительных цитокинов. Носители генотипа А/А полиморфизма гена IL-10 (С592А) отличаются гипопродукцией IL-10, IL-4, IgM. Наличие полиморфных маркеров в участке G1082A гена IL10 ассоциировано со сниженным образованием лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов, а, следовательно, и с миграцией иммунокомпетентных клеток в очаг повреждения [107, 108].
Содержание IL-2 и IL-10 у больных гриппом А/H1N1 (2009)
У больных рожей независимо от ее формы и течения снижается способность лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты. При эритематозной форме рожи показатель лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии уменьшается в 4 раза, а при эритематозно-буллезной – в 7 раз. При буллезно-геморрагической форме рожи средней тяжести показатель ЛТА снижается в 15 раз, а при тяжелой – в 20 раз по сравнению со здоровыми. При этом степень адгезии становится меньше в 2,5 раза. При роже увеличивается экспрессия тканевого фактора моноцитами периферической крови пропорционально тяжести заболевания.
Среди пациентов с гриппом А/H1N1 (2009) чаще встречались носители генотипа Т/T полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) - в 48% случаев, тогда как среди здоровых – только у 3% резидентов. Обладатели гетерозиготного генотипа T/G среди больных выявлялись в 40% случаев, тогда как в контрольной группе – в подавляющем большинстве наблюдений – 94%. Аллельный вариант Т встречался с наибольшей частотой – 0,91 у заболевших гриппом А/H1N1 (2009). У здоровых лиц чаще выявляется гомозиготоное носительство С/С полиморфизма IL-10 (C819T) – в 70%. Среди пациентов больных гриппом А/Н1N1 (2009), по сравнению с контрольной группой, гетерозиготы C/T преобладали и составляли 50%. Лица, несущие гомозиготы T/T полиморфизма IL-10 (C819T), в 7 раз больше обнаруживались среди больных по сравнению с контролем. При этом аллель Т наблюдалась с частотой 0,40, тогда как среди здоровых –0,02.
При гриппе А/H1N1 (2009), у пациентов с генотипом Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) в крови выявляется максимальное содержание IL-2. У больных гриппом А/H1N1 (2009), носителей генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (C819T), определялась минимальная, а у носителей генотипа T/T – максимальная концентрация IL-10.
У пациентов с гриппом А/H1N1 (2009) на 3-й день заболевания на фоне повышенного абсолютного числа лимфоцитов увеличивается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. У носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) при гриппе показатель ЛТА в 4 раза, а степень адгезии – в 1,5 раза превышали значения у обладателей генотипа Т/G и G/G и группе контроля. У больных гриппом А/H1N1 (2009), с генотипом С/С полиморфизма гена IL-10, способность лимфоцитов контактировать с тромбоцитами выявлялась наибольшей: показатель и степень ЛТА превышали контрольне значения и аналогичные параметры у носителей генотипа T/T.
У лиц, заболевших ХВГС, гомозиготный вариант Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (Т330G) встречался в 11 раз чаще, чем в контроле. У больных с циррозом печени частота аллели Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) в 1,5 выше, а аллели G – ниже, чем в группе больных без признаков цирроза. В группе больных с циррозом в исходе ХВГС генотип Т/Т полиморфизма гена IL-2 (T330G) выявляется в 1,5 раза чаще, чем в группе больных с ХВГС с I-III стадиями фибротических изменений и почти в 15 раз по сравнению с группой контроля. У больных ХВГС преобладали гомозиготные варианты С/С гена IL-10 (С819Т) и A/A IL-10 (G1082A). У больных ХВГС и с переходом процесса в цирроз частота аллели Т полиморфизма гена IL10 (C819T) в 15 раз выше, а аллели С – в 1,5 ниже, чем в контрольной группе. Среди пациентов с ХВГС частота выявления аллели А полиморфизма гена IL-10 (G1082A) в 8 раз, а с исходом болезни в цирроз – в 3 раза выше, чем в группе здоровых. Напротив, частота аллели G у больных ХВГС в 2,5 раза, а при циррозе печени – в 1,3 раза ниже контрольных значений.
Генотип С/C полиморфизма С3872Т гена CRP встречается в подавляющем числе случаев развития фиброза печени: при I-й стадии – в 82,5%, а при III-ей – в 100% наблюдений, тогда как в контроле – у 80% обследованных. Гетерозиготы C/T и гомозиготы Т/Т встречались гораздо реже и только при фибротическом процессе 1 стадии. В терминальной стадии развития фиброза обнаруживается только носительство генотипа С/С. У больных с циррозом печени аллель Т не выявляется.
У больных с ХВГС максимальное содержание IL-2 обнаруживалось у носителей генотипа T/T, а минимальное – у гомозиготых носителей G/G полиморфизмов промотора гена IL-2 (Т330G) в период биохимической активности. В период биохимической ремиссии концентрация IL-2 у пациентов снижалась, однако ее значения не зависели от носительства генотипа полиморфизма промотора гена IL-2 (Т330G). В период биохимической активности ХВГС концентрация IL-10 достигает максимально высоких значений у больных-носителей генотипа C/C полиморфизма гена IL-10 (С819Т). Максимальная концентрация IL-10 в период биохимической активности обнаруживается у носителей генотипа G/G полиморфизма гена IL-10 (G1082А). В период биохимической ремиссии наибольшее содержание IL-10 обнаруживалось у носителей генотипа G/G. На протяжении всего периода биохимической активности и ремиссии у больных ХВГС снижена адгезия кровяных пластинок и лимфоцитов.
