Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Биологическая активность производных изохинолина, фенэтиламидов и изменение биологической активности конъюгатов с аминокислотами 9
1.1. Биологическая активность изохинолинов и фенэтиламидов 9
1.2. Изменение биологической активности соединений при химической модификации их природными аминокислотами .. 18
Глава 2. Характеристика объектов иметодов исследования 30
2.1. Характеристика объектов 30
2.2. Методы исследования 46
Глава 3. Противовоспалительная, анальгетическая активность и острая токсичность продуктов реакции Риттера - замещенных фенэтиламидов и изохинолинов 53
3.1. Противовоспалительная активность замещенных фенэтиламидов и изохинолинов 53
3.2. Анальгетическая активность замещенных фенэтиламидов и изохинолинов 62
Глава 4. Исследование потенциального анальгетика — г4-(3,3-диметил-3}4- дигидроизохинолил-1)-6'-аминокапроновой кислоты (соединения Г-104) 74
4.1. Определение ED50 соединения Г-104 на моделях «горячая пластинка», «уксусные корчи» и «каолиновые корчи» 74
4.2. Оценка опосредованности анальгетического действия соединения Г-104 через опиоидную и серотонинэргическую систему 78
4.3. Оценка психотропных свойств соединения Г-104 на модели «открытое поле» и в тесте «принудительное плавание» 79
4.4. Влияние на свертываемость крови и жаропонижающее действие соединения Г-104 81
Глава 5. Исследование терапевтического противовоспалительного действия, гастротоксичности и влияния на показатели общего и бихимического анализа крови соединений Г-104, Г-174 и АО-83 ...83
5.1. Терапевтическое действие соединений Г-104, Г-174 и АО-83 на фоне формалинового воспаления 83
5.2. Изучение гастротоксичности соединений Г-104, Г-174 и АО-83 85
5.3. Влияние соединений Г-104, Г-174 и АО-83 на показатели общего и биохимического анализа крови 88
Обсуждение результатов исследования 92
Выводы 101
Литература 102
- Изменение биологической активности соединений при химической модификации их природными аминокислотами
- Анальгетическая активность замещенных фенэтиламидов и изохинолинов
- Оценка психотропных свойств соединения Г-104 на модели «открытое поле» и в тесте «принудительное плавание»
- Влияние соединений Г-104, Г-174 и АО-83 на показатели общего и биохимического анализа крови
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Воспаление как типовой патологический процесс лежит в основе большинства соматических заболеваний человека, таких как коллагенозы, инфекционные болезни, бронхиальная астма, атеросклероз, при которых
*Р наблюдаются такие проявления воспалительного процесса как отек,
деструкция тканей. Особое место при воспалении занимает болевая реакция.
* Этими проявлениями воспалительной реакции обусловлено одно из
основных направлений патогенетической и симптоматической терапии -
широкое применение противовоспалительных и анальгетических препаратов.
Медицина и фармакология, в частности, в настоящее время располагает
широким спектром препаратов данного типа. Однако они наделены целым
рядом побочных эффектов, существенно ограничивающих их длительное
применение. Такими побочными действиями выступают
антипролиферативное, тератогенное, ульцерогенное, гепатотоксическое, нейро- и нефротоксическое и т.д. (Хомулло Г.В., 1972; Сюбаев и др., 1985; Дроговоз СМ., 1989; Климнюк Е.В., 1989; Насонов Е.Л., 1996). В основном,
f эти неприятные последствия применения нестероидных
противовоспалительных средств (НПВС) связывают с угнетением ими
„ активности циклооксогеназы-1 (ЦОГ-1) (Vane J.R. et al., 1998). Одним из
способов решения этой проблемы является поиск веществ, устраняющих воспаление, не влияя на ЦОГ-1. Такими соединениями можно считать селективные ингибиторы ЦОГ-2, однако и они вызывают нежелательные последствия, хотя и иного характера. Таким образом, остается актуальной задача поиска веществ, оказывающих противовоспалительное действие с минимумом негативных последствий, реализующееся через ингибирование ЦОГ-2 или через некий иной механизм, не связанный с изменением активности циклооксигеназ.
В отношении анальгетических препаратов максимально надежно и
продолжительно снимают боль любой этиологии наркотические анальгетики
растительной и синтетической природы. Однако их механизм действия -
активация опиоидной системы и, как следствие, наркогенный потенциал —
является непреодолимым барьером для их широкого применения. Более
безопасный препарат трамадол сочетает два механизма действия —
Г активацию опиоидной системы и ингибирование обратного захвата
У моноаминов, но при длительном применении он также может вызывать
* зависимость. Группа ненаркотических анальгетиков имеет свои недостатки.
Так, новый сильнодействующий препарат кеторолак не оправдал
возлагавшихся на него надежд, так как обладает высокой
нефротоксичностью и в ряде стран (Германия, Дания) уже запрещен к
применению. Анальгин при длительном применении может угнетать
кроветворение вплоть до полного агранулоцитоза и также в большинстве
стран мира запрещен к безрецептурному отпуску. Парацетамол наиболее
часто используется для снятия тривиальных болей и входит в большинство
комбинированных болеутоляющих средств, но он эффективен только при
слабых болевых синдромах и не может применяться больными с
' заболеваниями печени в анамнезе. Аспирин и другие нестероидные
* противовоспалительные препараты малоактивны и обладают большинством
1 побочных эффектов противовоспалительных препаратов. Поэтому создание
новых ненаркотических анальгетиков и противовоспалительных препаратов с
высокой активностью и минимумом побочных эффектов является весьма
актуальной проблемой.
В последние годы появляются данные о реализации противовоспалительного действия химическими агентами, минуя непосредственное влияние на ключевые ферменты синтеза простагландинов. Так, за последние годы появился ряд работ о возможности влияния на процесс воспаления через аденозиновые рецепторы. Показано, что различные воздействия на аденозиновые рецепторы приводят к угнетению
6 дегрануляции нейтрофилов, снижению активности моноцитов-макрофагов, ингибированию продукции таких провоспалительных медиаторов, как фактор некроза опухолей-а, МІР-1а, интерлейкин-12, интерферон-у и оксид азота (Sajjadi F.G. et al., 1996; Bouma G.M. et al., 1997; Hasko G. et al., 1998; Szabd et al., 1998; Broussas M. et al., 1999), Появляются также данные об анальгетическом действии серотонинпозитивных антидепрессантов, реализуемом через серотонинергическую систему (Аринова А.А. с соавт., 1994; Korzeniewska-Rubica I., Plaznik А., 1999).
Производные изохинолина проявляют высокую активность в отношении аденозин-, серотонин-, дофамин- и адренергических систем (Gao Y. et al., 1988; Glusa E. et al., 1990; Baraldi P.G. et al. 2001). Известно также наличие у них анальгетических и противовоспалительных свойств (Braye Е. etal.,1974).
В лаборатории синтеза активных реагентов Института технической химии УрО РАН (г.Пермь) синтезированы производные изохинолина и замещенные фенэтиламиды, которые в связи с изложенным выше привлекли наше внимание с точки зрения поиска среди них высокоэффективных потенциальных анальгетических и противовоспалительных препаратов.
Работа выполнена в рамках плановых исследований Института технической химии УрО РАН, проведенных в соответствии с темой «Тандемная и каскадные гетероциклизации ароматических соединений» (№ гос.регистрации 01.2.00 314772) и «Синтез, поиск и доклиническое исследование перспективных лекарственных препаратов. Исследование биологической активности продуктов синтеза» (№ гос.регистрации 01.20.03.01055), а также при поддержке Гранта РФФИ № 01-03-96473а урал, Гранта РФФИ № 04-03-96045 а урал, Гранта Президента РФ для поддержки ведущих научных школ № НШ-2020.2003, Программы Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине» (Гос. контракта № 04/21 «N-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)-6'-аминокапроновая кислота - новый ненаркотический анальгетик», 2004), Программы Президиума РАН
7 «Направленный синтез веществ с заданными свойствами и создание функциональных материалов на их основе» 2003-2004 годы, Программы сотрудничества между учеными СО РАН и УрО РАН «Синтез биологически активных соединений на основе трансформации аминокислот, высших терпеноидов и азотсодержащих гетероциклов» - 2003-2004 годы.
Цель и задачи исследования
Цель: поиск среди производных изохинолина и замещенных фенэтиламидов соединений, обладающих противовоспалительным и анальгетическим действием, сочетающимся с минимумом побочных эффектов.
Задачи исследования:
исследовать противовоспалительную и анальгетическую активности и острую токсичность замещенных фенэтиламидов, 3,4-дигидроизохинолонов и изохинолиламинокислот;
выявить потенциальные противовоспалительные средства и анальгетики и оценить спектр их фармакологического действия;
оценить степень безопасности активных соединений, наличие возможных побочных действий, влияние на функции печени и гемопоэз.
Научная новизна.
Впервые исследована противовоспалительная, анальгетическая активности и острая токсичность новых производных 3,4-дигидроизохинолина и замещенных фенэтиламидов. Установлено, что одиннадцать соединений имеют противовоспалительное действие, сопоставимое с известными НПВС. У трех наиболее активных соединений исследована гастротоксичность, гепатотоксичность и влияние на кроветворение. Выявлен потенциальный анальгетик, превосходящий по силе
8 действия аналоги, что позволило получить Патент РФ №2223764 от 20.02.2004 «Анальгезирующее средство».
Практическая ценность работы
Соединение Г-104, превосходящее современные ненаркотические
анальгетики по анальгетической активности и безопасности применения,
может быть рекомендовано для дальнейшего исследования как
^ анальгетический препарат.
Положения, выносимые на защиту
Исследованные производные 3,4-дигидроизохинолина и замещенные фенэтиламиды малотоксичны и обладают противовоспалительной и анальгетической активностью.
Соединения, обладающие наиболее выраженным противовоспалительным действием, не проявляют характерных для традиционных нестероидных противовоспалительных препаратов токсических эффектов: гастротоксичности, гепатотоксичности и
+ угнетения кроветворения.
' 3. Соединение Г-104 (1Ч-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолші-1)-є-
4 аминокапроновая кислота) обладает высокой анальгетической
активностью, низкой токсичностью, большой широтой
фармакологического действия, отсутствием ульцерогенного действия.
Изменение биологической активности соединений при химической модификации их природными аминокислотами
В последнее время получила распространение химическая модификация известных лекарственных препаратов и вновь синтезируемых соединений природными аминокислотами. Этим в ряде случаев достигается избирательность действия, увеличение биологического эффекта и снижение токсичности исходных соединений. Также модифицируются сами аминокислоты с целью придания им более выраженного действия на различные системы организма.
Так, в конце 60-х годов было получено несколько патентов на различные соли аргинина. Фосфат аргинина был предложен для лечения нарушений обмена веществ различной тяжести, связанных с заболеваниями печени, в частности при различных формах недостаточности печени, гипераммониемии, метаболических поражениях мозга, операционном шоке (Abbou R., 1965). Пантотенат аргинина был предложен при недостаточности печени как средство, усиливающее детоксикацию при азотемии и аммониемии, а также при инфекционных заболеваниях (Vermieren F., Le Bras Y.M., 1966). Оротат аргинина показал себя эффективным при заболеваниях печени и нарушениях роста (Megrevergne G., 1966). Аргинат гемина вызывает нормализацию синтеза гема при экспериментальной порфирии и может быть использован как корректор порфиринового обмена (Смирнов И.В. с соавт., 2000).
На глутамат аденина был выдан патент как на лекарственное средство, эффективное при нарушениях картины крови (Cuvelier R., Lemoine J.-P., 1966). Известные алкилирующие цитостатики хлорбутин, сарколизин и лофенал содержат в своей структуре 0,Ь-фенилаланин. Предполагалось, что наличие аминокислот в структуре соединений обеспечит цитостатикам направленный транспорт к опухолям-мишеням (Ларионов Л.Ф., 1966), поэтому присоединение аминокислотных остатков к потенциальным противовопухолевым агентам широко распространено. Так, хлорфенилаланин является антагонистом фенилаланина и тирозина и ингибитором триптофангидроксилазы. Некоторые N-ацильные производные D,L-«-хлорфенилаланина увеличивают противоопухолевую активность хлорфенилаланина против карциносаркомы Уокера и саркомы 45 (Страускас И., Кершулис А., 1974). Были синтезированы N-окиси N-феназиноилпроизводных глицина, валина и пролина, из них производные валина были проверены на противоопухолевой действие при лимфолейкозах, но оказались неактивными (Батулина Р.Х. с соавт., 1970). Производные 7-аминоглицино- и 7-фенилаланино- 2,4-диметилбензодиазепина-1,5 показали некоторую противоопухолевую активность на саркоме 45, саркоме Иенсена и саркоме 18 при относительно низкой токсичности (более 100 мг/кг, Левшина К.В. с соавт., 1971). р-(9-Метилгипоксантинил-2)-а-аланин показал умеренное торможение роста перевиваемых опухолей у крыс при саркоме 45 и у мышей при саркоме 180 и АК, карциноме НК (Овчарова И.М., Головчинская Е.С., 1974). Некоторые ацильные производные эритро- и трео-В,Ь-фенилсеринов показали умеренную и слабую противоопухолевую активность на карциносаркоме Уокера и саркоме 45 у крыс при малой токсичности (Дирвянските Н. с соавт., 1976). Противоопухолевую активность этилового эфира 4-[ди-[2 -хлорэтил]амино]-Ь-пролина связывают с его ингибированием синтеза нуклеиновых кислот, однако по силе действия он уступает сарколизину (Кокшарова Т.Г. с соавт., 1982). При изучении противоопухолевой активности алкилнитрозомочевинных производных L-фенилаланина было установлено, что они малоактивны на аденокарциноме молочной железы АК-755, меланоме В-16, саркомах С-37 и С-180 (Скрябина СВ. с соавт., 1984). Выраженное противоопухолевое действие на лимфосаркоме 45, лимфосаркоме Глисса, саркоме 180 показали N-2,4-диметилоксазоло[5,4-ё]пиримидил-7-аминокислоты с глицином, D-лейцином, L-лейцином, D-аланином, L-аланином, DL-валином, у-аминомасляной кислотой, DL-фенилаланином и L-пролином. Соединения показали малую токсичность: наиболее токсичны соединения с ГАМК, L-пролином, L-лейцином, наименее - с глицином (Мелик-Оганджанян Р.Г. с соавт., 1985). Цитостатическую активность на саркоме 37, NK/Ly и опухоли Эрлиха показал этиловый эфир Ы-[хлорэтиламиноэтил]-4-хлор-Ь-пролина (Хворова Н.М. с соавт., 1986).
Введение L-глутаминовой кислоты в молекулу сарколизина снизило токсичность последнего с 20 мг/кг до 300-1300 мг/кг. Амид с D-глутаматом токсичнее L-изомера (Ватуллина Г.Г. с соавт., 1997).
При исследовании некоторых аминокислотных производных аминогликопентиловой кислоты было установлено, что изолейцин, лейцин и валин более заметно, чем другие аминокислоты усиливают антибактериальное действие соединений. Однако, при увеличении концентрации этих аминокислот возрастает также и токсичность (Abshire C.J., 1968).
Г.А.Давыдовой с сотр. (1971) был осуществлен синтез №-бис-(2-хлорэтил)-ОЬ-лизина. При экспериментальном исследовании этого соединения было установлено, что оно оказывает значительное тормозящее влияние на дезаминирование а-аминогруппы лизина окисленной тираминоксидазой и может использоваться как ингибитор дезаминирования є-аминогруппьі лизина при некоторых патологических состояниях.
При исследовании ряда производных глутаминовой кислоты с целью изыскания среди них радиопротекторов Г.Г.Ватуллиной с соавт. (1986) было установлено, что глутаминовая кислота повышает биодоступность синтезированных соединений и уменьшает их токсичность.
Т.Г.Толстикова (1986) изучала противоязвенное действие натриевой соли М-(4-сульфоланол-3-ил)метионина как при профилактическом, так и при лечебном применении при язвах, вызванных ацетилсалициловой кислотой, циннофеном, индометацином, резерпином, бутадионом. Соединение показало противовоспалительную активность выше, чем у витамина .
Анальгетическая активность замещенных фенэтиламидов и изохинолинов
Острую токсичность соединений с вычислением ЛДзо определяли на беспородных белых мышах обоего пола массой 16-20 г по экспресс-методике В.Б.Прозоровского (1978) при внутрибрюшинном способе введения. Полученные результаты сравнивали с ЛД50 препарата сравнения. Характеристику токсичности соединений проводилась в соответствии с классификацией К.К.Сидорова (1973). 3. Анальгетическую активность соединений на модели «горячей пластинки» изучали на беспородных белых мышах обоего пола массой 16-18 г. Мышей помещали на нагретую до 55С поверхность и измеряли время наступления оборонительного рефлекса (облизывание задней лапки) (Eddi N.B., Leimbach D., 1953). Затем внутрибрюшинно вводили исследуемые соединения в 2% крахмальной слизи в дозе 50 мг/кг и повторяли измерение времени наступления оборонительного рефлекса через 30, 60, 120 минут. Препаратом сравнения служил анальгин, который также вводили в 2% крахмальной слизи в дозе 93 мг/кг, соответствующей EDJO по тесту «горячая пластинка» (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985). Результаты оценивали по увеличению время наступления оборонительного рефлекса. Полученные результаты сравнивали с анальгетической активностью препарата сравнения. На втором этапе исследований изучали анальгетическую, противовоспалительную активность, гастротоксичность, и влияние на показатели общего и биохимического анализа крови наиболее активных соединений и сопоставляли с активностью препаратов сравнения. Дополнительно анальгетически активное соединение было исследовано в тестах «открытое поле» и «принудительное плавание» и оценено его жаропонижающее действие и влияние на свертываемость крови.
Анальгетическую активность активных соединений изучали на модели «уксусных корчей» на беспородных белых мышах обоего пола массой 16-18 г. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75% водный раствор уксусной кислоты из расчета 0,25 мл на 10 г массы животного (Koster R. et al., 1959) и подсчитывали количество корчей в течение 10 минут. Исследуемые вещества вводили перорально в 2% крахмальной слизи в дозе 50 мг/кг за 1 час до введения уксусной кислоты. Препарат сравнения анальгин также вводили в 2% крахмальной слизи в дозе 55 мг/кг, соответствующей ED50 по тесту «уксусные корчи» (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985). Результаты оценивали по способности тормозить количество корчей (в %) по сравнению с контрольной группой животных, получавшей крахмальную слизь. Полученные результаты сравнивали с анальгетической активностью препарата сравнения.
Определение ED5o соединений Г-174, АО-83 на каррагениновой модели воспаления при внутрибрьошинном способе введения и определение ED5o соединения Г-104 на модели «уксусных корчей» при пероральном способе введения проводили по методу Литчфилда и Уилкоксона (Беленький М.Л., 1963).
Изучение гастротоксичности соединений АО-83, Г-104 и Г-174 проводили при пероральном и внутрибрюшинном способах введения.
Определение гастротоксичности при пероральном способе введения проводили согласно Методическим рекомендациям по изучению нестероидных противовоспалительных веществ (1982). Исследуемые соединения АО-83, Г-104 и Г-174 вводили в дозе 100 мг/кг в виде суспензии в 0,1% растворе карбоксиметилцеллюлозы посредством зонда в желудок беспородным белым крысам обоего пола массой 160-180 г. в течение 4 дней один раз в сутки. Препарат сравнения — индометацин - вводили в дозе 10 мг/кг (1/5 ЛД50 индометацина на крысах), контролем служил 0,1% раствор карбоксиметилцеллюлозы. Животных забивали через 24 часа после последнего введения. После вскрытия у всех животных проводили макроскопическое исследование слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки на наличие изъязвлений. Оценивали общее количество язв в группе, процент животных с язвами, степень изъязвления (число язв, приходящееся на одно животное в группе) и индекс Паулса (степень изъязвления, умноженная на процент животных с язвами, результат поделен на сто).
Гастротоксичность соединений АО-83, Г-104 и Г-174 при внутрибрюшинном способе введения определяли с целью исключить прямое раздражающее действие на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Таким образом, была сделана попытка оценить влияние исследуемых соединений на циклооксигеназу-1. Исследуемые соединения вводились внутрибрюшинно в виде суспензии в 2% крахмальной слизи в дозах, близких ED5Q на модели каррагенинового отека: АО-83 и Г-174 50 мг/кг. Исключение составляло соединение Г-104, вводимое в дозе ED5o на модели «уксусных корчей» 7мг/кг. Параллельно оценивалась гастротоксичность индометацина, селективного ингибитора ЦОГ-1, в дозе 10 мг/кг, составляющей ED50 на модели каррагенинового отека (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985), Контрольная группа животных получала 2% крахмальную слизь. Схема введения соединений аналогична указанной выше.
Параллельно с оценкой гастротоксичности при забое у животных снимались показатели общего и биохимического анализа крови общепринятыми методами (Лабораторные методы..., 1987). Анализ крови проводился с целью оценить степень гепатотоксичности соединений и влияние их на кроветворения.
При помощи модели воспаления, вызванной формалином, проводилось исследование терапевтического действия соединений АО-83, Г-174 и Г-104 на развившееся воспаление в динамике. Исследование проводилось на беспородных белых крысах обоего пола массой 160-200 г. Исследуемые соединения вводили внутрибрюшинно в виде суспензии в 2% крахмальной слизи. В данном эксперименте воспаление вызывалось субплантарным введением в заднюю лапу крысы 2% водного раствора формальдегида. Отек, вызванный таким способом, держится несколько суток, что позволяет вводить исследуемые соединения многократно.
Оценка психотропных свойств соединения Г-104 на модели «открытое поле» и в тесте «принудительное плавание»
В связи с тем, что одним из наиболее распространенных побочных эффектов не стероидных противовоспалитеных препаратов является их ульцерогенное действие, необходимо оценивать гастротоксичность новых соединений данной группы. С этой целью нами проводилось исследование гастротоксичности соединений АО-83, Г-174, Г-104 при пероральном и внутрибрюшинном способах введения в сравнении с индометацином.
Исследовалась гастротоксичность указанных выше соединений при пероральном способе введения по схеме, рекомендуемой Фармакологическим комитетом. Препараты вводились в дозе, равной 1/5 ЛД50, но не больше 100 мг/кг (Методические рекомендации..., 1982). В качестве источника значения ЛД50 индометацина на крысах использовались литературные данные (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985). Результаты исследований представлены в таблице 22.
Как можно заметить из представленной таблицы 22, соединения АО-83 и Г-174 не приводили к язвообразованию на пятый день их перорального введения. Общее количество язв у группы животных, четыре дня получавших соединение Г-104, в шесть раз меньше чем у группы животных, получавшей индометацин. По сравнению с индометацином, Г-104 также имел ниже процент животных с обнаруженными язвами, степень изъязвления и индекс Паулса. Степень изъязвления у группы животных, получавших соединение Г-104, достоверно отличима от степени изъязвления у группы животных, получавших индометацин, и неотличима от контрольной группы.
Исследование гастротоксичности соединений АО-83, Г-174 и Г-104 при внутрибрюшинном способе введения использовалось в качестве своеобразной модели, позволяющей оценить влияние данных соединений на ЦОГ-1. Такая постановка эксперимента связана с тем, что она позволяет исключить непосредственное раздражающее влияние соединений на слизистую желудка, и поэтому можно судить о влиянии исследуемых соединений на активность ЦОГ-1. Положительная корреляция низкого ульцерогенного действия, высокой противовоспалительной активности и селективности к ЦОГ-2, а не к ЦОГ-1 известна на примере селективных ингибиторов ЦОГ-2, которые были предложены как нестероидные противовоспалительные препараты с низкой гастротоксичностью (Vane J.R. et al., 1998). В данном случае соединения АО-83, Г-174 вводились в противовоспалительной дозе 50 мг/кг, индометацин - в дозе 10 мг/кг, а соединение Г-104, проявившее наибольший анальгетический эффект, вводилось в дозе близкой к ED5o для модели «уксусные корчи». Соединения вводились в суспензии 2% крахмальной слизи внутрибрюшинно. В остальном схема опыта сходна с предыдущей.
Из таблицы 23 видно, что внутрибрюшинное введение соединения АО-83 вызвало появление только одной язвы у одной крысы из шести. Однако отличие степени изъязвления у группы животных, получавших соединение АО-83 внутрибрюшинно, и группы животных, получавших его перорально, недостоверно. Внутрибрюшинное введение соединений Г-174 и Г-104 не приводило к язвообразованию, что характерно для соединения Г-174 и при пероральном пути введении. Внутрибрюшинное введение индометацина, имеющего селективность к ЦОГ-1, приводило к язвообразованию у ста процентов животных в группе и степени изъязвления 6,13. 5.3 Влияние соединений Г-104, Г-174 и АО-83 на показатели общего и биохимического анализа крови.
Ввиду обычно продолжительного применения анальгетиков и противовоспалительных препаратов, в медицинской практике важно знать о их влиянии на длительно формирующиеся параметры, такие, как показатели общего и биохимического анализа крови. По этой причине было исследовано влияние внутрибрюшинного введения соединений Г-104, Г-174 и АО-83 (в дозах 7, 50 и 50 мг/кг соответственно) в течение четырех дней на показатели общего и биохимического анализа крови. Данные исследования проводились в тех же группах животных, которые использовались для исследования гастротоксичности при внутрибрюшинном введении. Результаты исследования представлены в таблицах 24 и 25.
Общий и биохимический анализ крови показал, что введение Г-104, АО-83 и Г-174 в течение четырех дней не приводит к изменению активности аминотрансфераз и концентрации общего белка, что указывает на отсутствие токсического действия на печень. Не обнаружено также изменения других параметров. Исключение составляет снижение количества эритроцитов, сопровождающееся тенденцией к снижению концентрации гемоглобина, под действием соединения АО-83. В случае АО-83 также наблюдается уменьшение в 2 раза абсолютного и относительного количества моноцитов. Данные по соединениям Г-174 и Г-104 выгодно отличаются от препарата сравнения — индометацина. Влияние четырехдневного введения индометацина на показатели общего и биохимического анализа крови заключалось в снижении концентрации общего белка и концентрации гемоглобина. Снижение концентрации гемоглобина с тенденцией к снижению количества эритроцитов и лейкоцитов в этом случае можно объяснить вызванной язвами кровопотерей.
Влияние соединений Г-104, Г-174 и АО-83 на показатели общего и биохимического анализа крови
При введение в структуру изохинолина аминокислоты, в целом, нами установлено снижение токсичности соединений по отношению к исходным изохинолоновым фрагментам, что согласуется как с исследованиями, ранее проведенными в нашей лаборатории (Аникина Л.В., 2003), так и с исследованиями, проводимыми во всем мире. Однако стабильное снижение токсичности обнаружено только в отношении глицина. В остальных случаях изменение токсичности было несколько хаотично. Снижение токсичности восьми из двенадцити изохинолиламинокислот, у которых было определено ЛД50, нельзя объяснить снижением биодоступности, так как не происходило снижение активности этих соединений. Введение глицина в молекулу одного из изохинолонов вызвало увеличение противовоспалительной активности в два раза (соединение Г-174). Анальгетический эффект изохинолонов при присоединении к ним аминокислот как достоверно повышался (соединение Г-104), так и снижался.
В группе замещенных фенэтиламидов наблюдалась зависимость проявления противовоспалительных и анальгетических свойств от одного единственного атома. Эта зависимость проявилась в соединениях АО-47, АО-83, АО-115, которые отличаются друг от друга атомом галогена в пара-положении фенильного радикала. В случае АО-47 — это фтор, АО-83 - хлор, АО-115 - бром. Активностью обладал только АО-83.
Для того, чтобы выбранные для дальнейшего изучения соединения АО-83, Г-174 Г-104 можно было сравнивать по активности и безопасности с известными препаратами, необходимо было установить их ED5o на моделях, отражающих их свойства. Для соединений АО-83 и Г-174 этой моделью служил каррагениновый тест, а для соединения Г-104 «уксусные корчи». Однако установить ED50 для соединений АО-83 и Г-174 не было возможности, так как их эффект оказался не дозозависим, а по анальгезии они уступают соединению Г-104. Поэтому основное наше внимание было уделено соединению Г-104. ED5o соединения Г-104 на «уксусных корчах» составляет 7 мг/кг, что значительно ниже чем EDSo анальгина на этой модели, которое составляет 55 мг/кг (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985).
Анальгетическое действие, как известно, может быть обусловлено влиянием на локальные механизмы развития боли или изменением афферентной иннервации на уровне центральной нервной системы. Для того чтобы оценить по какому пути реализуется анальгетическое действие соединения Г-104, было установлено его ED50 на модели «горячая пластинка», отражающей преимущественно центральное действие, и на модели «каолиновых корчей», которые, как считается, обусловлены активацией калликреин-кининовой системы (Fujiyoshi Т. et al., 1989). На «горячей пластинке» ED50 установлена при пероральном и, так как данная модель это позволяет, при внутрибрюшинном пути введения, и составляет 135 и 13,5 мг/кг соответственно. Таким образом, соединение Г-104 не уступает анальгину и на этой модели, т.к. ED5o анальгина составляет 93 мг/кг (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985). Высокая активность Г-104 на «горячей пластинке» указывает на центральный характер его действия. Однако соединение Г-104 проявляет высокую активность и на модели «каолиновых корчей», его EDso составляет 14 мг/кг, что указывает на влияние соединения Г-104 и на локальные реакции, обусловливающие болевую чувствительность.
Большое количество исследований, посвященных изучению болевой чувствительности, указывают на развитие анальгезии при раздражении серотониновых и опиоидных рецепторов (Брагин Е.О., 1991). В последние годы появились исследования, демонстрирующие реализацию анальгетического действия химических препаратов через серотонинергическую и опиоидную системы (Аринова А.А. с соавт., 1994; Korzeniewska-Rubica I. et al., 1999). В связи с этим, а также учитывая, что высокая активность Г-104 на «горячей пластинке» обнаружила задействованость в реализации его анальгетического эффекта центральных механизмов, мы попытались оценить значение состояния опиоидной и серотонинергической систем на выраженность действия данного препарата. Использованный с этой целью опыт с нагрузкой в виде предварительного введения ципрогептадина и налоксона обнаружил исчезновение анальгетического эффекта Г-104 при блокаде серотонинэргической системы. Это означает, что анальгетическое действие Г-104 обусловлено влиянием на серотонинергическую систему. Блокада опиоидных рецепторов налоксоном приводила также к значительному снижению активности Г-104. Это указывает на задействованость также и опиоидных рецепторов в реализации анальгетическго эффекта Г-104. В связи с тем, что проведенные исследования указывают на участие опиоидной системы в реализации анальгетического эффекта Г-104, мы оценили влияние Г-104 на психоэмоциональное состояние животных, так как известно, что наркотические анальгетики существенно изменяют поведение животных, в частности снижают двигательную и, особенно, исследовательскую активность мышей (Барков Н.К., Закусов В.В., 1973). Установлено, что Г-104 не влияет на исследовательскую активность животных и повышает двигательную активность на уровне психостимулятора кофеин-бензоата натрия. Таким образом, у Г-104 отсутствует характерное для наркотических анальгетиков угнетающее влияние на поведение животных.
Полученные по Г-104 данные: отсутствие противовоспалительного действия и наличие анальгетического, зависимость анальгетической активности от серотонинэргической и опиоидной систем, — указывают на сходство Г-104 с серотонинпозитивньши антидепрессантами, которые обладают теми же свойствами (Аринова А.А. с соавт., 1994; Korzeniewska-Rubica I., Plaznik A., 1999), однако исследование антидепрессантных свойств Г-104 на модели «принудительного плавания» показало полное отсутствие активности Г-104 на использованной модели.
