Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 9
Глава 2 Материалы и методы исследования 33
Глава 3 Функциональное состояние и липидныи метаболизм эритроцитов при эндотоксикозе перитонеального генеза 41
3.1 Показатели эндогенной интоксикации при остром перитоните .41
3.2. Функциональное состояние эритроцитов при эндогенной интоксикации перитонеального генеза 44
3.3. Особенности перекисного окисления липидов и ферментативных систем эритроцитов при эндотоксикозе 45
3.4. Модификация липидного состава эритроцитов на фоне эндогенной интоксикации 48
Глава 4 Влияние аплегина на функциональное состояние и липидныи метаболизм эритроцитов при эндотоксикозе перитонеального генеза 54
4.1. Показатели эндогенной интоксикации при остром перитоните на фоне аплегинотерапии 54
4.2. Влияние аплегина на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при остром перитоните 57
4.3. Влияние аплегина на интенсивность процессов ПОЛ и активность ферментов в эритроцитах на фоне эндотоксикоза 58
4.4. Влияние аплегина на состав липидов эритроцитов на фоне эндотоксикоза 61
Глава 5 Влияние эмоксипина на функциональное состояние и липидныи метаболизм эритроцитов при эндотоксикозе перитонеального генеза 65
5.1. Эффективность эмоксипина в коррекции эндотоксикоза 65
5.2. Влияние эмоксипина на некоторые показатели функционального состояния биомембран эритроцитов при остром перитоните 68
5.3. Влияние эмоксипина на перекисное окисление липидов и активность фосфолипазы Аг при эндогенной интоксикации 69
5.4. Влияние эмоксипина на липидный спектр эритроцитов при эндогенной интоксикации 72
Глава 6 Влияние реамберина на функциональное состояние и липидный метаболизм эритроцитов при эндотоксикозе перитонеального генеза 76
6.1. Эффективность реамберина в коррекции эндогенной интоксикации 76
6.2. Влияние реамберина на некоторые показатели функционального состояния биомембран эритроцитов при остром перитоните 79
6.3. Влияние реамберина на перекисное окисление липидов и активность фосфолипазы А2 при остром перитоните 80
6.4. Влияние реамберина на липидный спектр эритроцитов при эндоток сикозе перитонеального генеза 83
Обсуждение 87
Выводы 99
Практические рекомендации 100
Список литературы 101
- Обзор литературы
- Особенности перекисного окисления липидов и ферментативных систем эритроцитов при эндотоксикозе
- Влияние аплегина на состав липидов эритроцитов на фоне эндотоксикоза
- Влияние реамберина на липидный спектр эритроцитов при эндоток сикозе перитонеального генеза
Обзор литературы
Проблема эндогенной интоксикации в медицине остается актуальной на протяжении уже нескольких десятилетий, что вполне закономерно, так как она лежит в основе тяжелых системных нарушений при различных патологических процессах и заболеваниях (Шанина А.Н. и др., 1996; Матвеев СБ. и др., 2003). Эндогенная интоксикация затрудняет лечение заболеваний, способствует развитию осложнений и возникновению сопутствующих заболеваний, создается ситуация, когда традиционная терапия не дает эффекта.
Синдром эндогенной интоксикации представляет собой многокомпонентный патологический процесс, обусловленный накоплением во внутренней среде организма эндотоксинов, развивающийся от начальной токсемии из первичного очага до эндотоксикоза различной степени выраженности, обусловленного степенью повреждения биологических мембран, протекающий на фоне синдрома полиорганной недостаточности (Чаленко В.В., Куту-шев Ф.Х.,1990; Михайлович В.А. и др., 1993; Уткин М.М., 1996; Федоровский Н.М. и др., 1997).
Пусковые моменты возникновения эндотоксикоза различны (Васильев И.Т., 1995), однако патогенетические звенья его носят универсальный характер (Буянов В.М. и др., 1998) и включают в себя мембранодеструктивные процессы, рецепторные нарушения, изменения внутриклеточной деятельности и даже генома (Лужников Е.А. и др., 1993; Кузнецов Н.Н. и др., 1996; Bonne R.C., 1992).
Одной из распространены причин возникновения синдрома эндогенной интоксикации является острый перитонит. При данной грозной хирургической патологии эндотоксикоз отличается значительной выраженностью.
На рубеже веков и тысячелетий перитонит продолжает оставаться одной из самых сложных и многогранных проблем современной абдоминальной хирургии. Встречаясь достаточно часто, гнойное воспаление брюшины является главенствующим осложнением, что объясняется высокой летальностью, достигающей в терминальной стадии данной патологии 50-70 % (Завада Н.В.,2001).
На протяжении всего XX века неоднократно утверждалось, что перитонит практически побежден, и вопросы его лечения не вызывают серьезного опасения как в плане выработки лечебной программы, так и в плане прогноза. Однако периоды оптимизма и радужные настроения сменялись полосой пессимистического отношения к этой проблеме. По-прежнему в абсолютном большинстве публикаций о перитоните говорится как об одном из самых серьезных заболеваний человека, сопровождающихся высокой смертностью (Саенко В.Ф., 1997; Гельфанд Б.Р. и др., 1997).
Следует отметить, что тяжесть состояния больных и летальный исход при перитоните во многом обусловлены выраженностью синдрома эндогенной интоксикации. По степени выраженности эндотоксикоза можно прогнозировать течение и исход заболевания, определять эффективность проводимой терапии (Чаленко В.В., Кутушев Ф.Х., 1990; Уткин М.М., 1996; Парфенов А.Л. и др., 1997). В настоящее время не существует универсального способа для определения глубины эндогенной интоксикации, лишь комплексная оценка показателей гомеостаза позволяет говорить о степени выраженности этого патологического состояния (Владыка B.C. и др., 1986; Кузнецов Н.Н. и др., 1996).
В формировании эндогенной интоксикации при перитоните ведущую роль занимают бактериальные и экзогенные токсины, которые являются пусковыми в цепных реакциях образования в высоких концентрациях эндогенных медиаторов, вызывающих системные патологические реакции (Глумов В.Я. и др., 1994; Васильев И.Т., 1995; Федоровский Н.М. и др., 1997; Плоткин Л.Л. и др., 2000; Hakkiluoto A., Hannukainen J., 1992). Под действием экзотоксинов происходит активация протеолитических ферментов, вызывающих альтерацию тканей и накопление продуктов аутолиза, что приводит к накоплению избыточного количества конечных и промежуточных продуктов об мена веществ (Дорохин К.М., Спас В.В., 1994; Васильев И.Т., 1995; Федоровский Н.М. и др., 1997; Hakkiluoto A., Hannukainen J., 1992). Образующиеся метаболиты взаимодействуют с биологически активными веществами, белками, ферментами крови и межтканевой жидкостью, что вначале ведет к изменению физико-химических, энергетических состояний, биологических субстратов, а далее нарушается клеточно-тканевой обмен веществ и синтетические функции клеток. Растущая концентрация эндотоксинов липидной и белковой природы - главная причина блока тканевого дыхания и обмена в воспаленных тканях — большинством исследователей определяются как основной механизм патогенеза острого перитонита и развития синдрома полиорганной недостаточности (Бардахчьян Э.А. и др., 1999; Deventer S. J. et al.,1998; Cuzzocrea S.et al.,1999).
Происходящие деструктивные процессы в органах и тканях сопровождаются выраженной активацией ДНКаз и РНКаз, высвобождением катепси-нов, увеличением количества фосфатаз, ведущих к ускорению лизиса белков, повышению содержания лизосомальных протеаз, вызывающих нарушение мембран субклеточных образований, в том числе митохондрий и лизосом (Конюхова С.Г. и др., 1993). Протеолитические ферменты вызывают распад сывороточных белков и образование промежуточных продуктов белкового обмена, в результате чего образуются высокотоксичные вещества, объединенные под общим названием "молекулы средней массы" или "средние молекулы", биологические свойства которых разнообразны (Спас В.В., 1994; Уткин М.М., 1996; Буянов В.М. и др., 1998; Ташев Х.Р., Благов И.Н., 1999; Чернов В.Н., Белик Б.М., 1999; Billing A. et al., 1992). Средние молекулы нарушают функциональное состояние митохондрий (Зильбер А.П., Шифман Е.М., 1997), повреждают гепатоциты (Дорохин К.М., Спас В.В., 1994), ингибируют фагоцитарную активность лейкоцитов, приводя к снижению иммунитета, участвуют в развитии анемии, нарушая кроветворение (Уткин М.М., 1996), оказывают нейротоксическое действие (Парфенов А.Л. и др., 1997), нарушают синтез и утилизацию глюкозы тканями (Глумов В.Я. и др., 1994). Избы 12 точному накоплению среднемолекулярных пептидов в плазме крови способствует так же усиленное всасывание продуктов распада из просвета кишечника (Буянов В.М. и др., 1998).
Избыточное накопление МСМ в крови вызывает высвобождение биологически активных веществ, в результате возникают вазоконстрикция, повышение проницаемости мембран клеток, эндотелия капилляров, интерсти-циальный отек, нарушения микроциркуляции, тканевая гипоксия (Федоровский Н. М. и др., 1997).
Циркулирующие в крови токсические продукты метаболизма находятся в связанном состоянии с альбумином, что снижает их токсичность (Гаври-лов В.Б. и др., 1992; Петросян Э.А. и др., 1998). Исследованиями установлено, что при эндогенной интоксикации изменяется структурно-функциональное состояние молекулы альбумина, что приводит к снижению ее способности связывать токсины и выявлена прямо пропорциональная зависимость связывающей способности альбумина и выраженностью эндоток-сикоза (Родоман Г.В. и др., 1999; Ivleva V. V. et al., 1995; Pacelli F. et al., 1996; Li W. et al., 1997; Guler O. et al., 1999). При этом освобождаются сосудисто-активные вещества, повышающие проницаемость клеточных и сосудистых стенок (Плоткин Л.Л. и др., 2000; Poret Н.А. et al., 1991), что приводит к развитию гипопротеинемии и, следовательно, к снижению общей концентрации альбумина и еще большему усугублению патологического процесса (Федоровский Н.М. и др., 1998; Edwards M.S. et al., 1991).
Развившаяся гипопротеинемия ведет к изменению коллоидно-осмотического давления с последующим перемещением воды в межклеточное пространство, что нарушает нормальные процессы жизнедеятельности клетки (Дорохин К.М., Спас В.В., 1994; Paakkonen М. et al., 1991). По данным Г.Л. Ратнера (1995) изменение коллоидно-осмотического давления крови также способствует выработке в избыточном количестве серотонина, гиста-мина, кининов и простагландинов, катализирующих в последующем каскад реакций, ведущих к усилению синдрома эндогенной интоксикации, так как высвободившиеся биологически активные вещества приводят к вазоконст-рикции, повышению проницаемости клеточных мембран, эндотелия капилляров, интерстициальному отеку, системным нарушениям микроциркуляции, тканевой гипоксии, гипотензии (Федоровский Н.М. и др., 1997).
В свою очередь нарушение микроциркуляции, наличие артериальной гипоксемии и клеточной дисфункции способствует развитию тканевой гипоксии с метаболическими нарушениями на молекулярном и клеточном уровнях, накоплению продуктов незавершенного метаболизма и развитию ацидоза (Малышев В.Д. и др., 1997).
В дальнейшем развивается целый каскад патогенетических процессов: энергетическая недостаточность приводит к нарушению всех видов биологического окисления (Ленинджер А.Л., 1976; Ефуни С.Н., Шпектор В.А., 1991), происходит активация реакций анаэробного гликолиза, что еще больше усиливает ацидоз, разобщение окислительно-восстановительных реакций блокирует в конечном итоге процессы тканевого дыхания и обмена (Исмайлов И.С. и др., 1997; Dhar A., Shucla S., 1993).
Особенности перекисного окисления липидов и ферментативных систем эритроцитов при эндотоксикозе
На фоне выраженной эндогенной интоксикации при остром перитоните отмечалась существенная интенсификация мембранодеструктивных процес 46 сов, что было выявлено при исследовании интенсивности ПОЛ и активности фосфолипазы А2 (табл.3.3).
Исследования показали, что уже через сутки после моделирования патологического процесса показатели диеновых конъюгатов, малонового диальдегида и индуцированного малонового диальдегида превосходили норму на 11,3, 119,6 и 34,5 % (р 0,05). Уровень фосфолипазы А2 был выше исхода на 322,7 % (р 0,05). При исследовании уровня активности каталазы последний был выше нормы на 20,1% (р 0,05).
Установлено, что через сутки после развития патологического процесса количество первичных и вторичных продуктов ПОЛ в эритроцитах заметно возрастало. Содержание диеновых, триеновых конъюгатов, малонового диальдегида и индуцированного МДА на данном этапе эксперимента превышало норму на 16,3, 17,7, 158,2 и 64,7 % (р 0,05) соответственно. Активность фосфолипазы А2 возрастала на 450,0% (р 0,05) относительно исхода. Также отмечалась интенсификация активности и эритроцитарной каталазы, которая превышала нормальный уровень на 36,1 % (р 0,05). На третьи сутки после санации брюшной полости прогрессирование патологического процесса несколько замедлилось, и было выявлено незначительное улучшение некоторых показателей. Так, уровни диеновых и триено-вых конъюгатоврезко снижались и были ниже нормы на 12,5% (р 0,05) и 6,5 % соответственно. Показатели малонового диальдегида и индуцированного МДА продолжали превосходить первоначальные данные на 83,2 и 34,8 % (р 0,05) соответственно. Активность фосфолипазы А2 по-прежнему была значительно выше нормальной на 406,8 % (р 0,05). Активность каталазы на данном этапе динамического наблюдения достоверных отличий от нормы не имела (рис. 3.5).
На конечном этапе динамического наблюдения отмечалось выраженное снижение показателей первичных продуктов ПОЛ. Содержание диеновых и триеновых конъюгатов было ниже нормы на 40,0 и 35,5 % (р 0,05) соответственно. Уровень вторичных продуктов также снижался, но содержание малонового диальдегида продолжало превосходить таковое в исходе на 75,7 % (р 0,05). Количество индуцированного МДА превышало норму на 26,3 % (р 0,05). Фосфолипазная активность превышала норму на 288,6 % (р 0,05). На данном этапе эксперимента показатель активности каталазы статистически значимых отличий от нормы не имел (рис. 3.6).
Таким образом, развитие эндогенной интоксикации при моделировании у подопытных животных острого перитонита сопровождалось активизацией процессов свободнорадикального окисления и повышением ферментативной активности фосфолипазы А2, а также депрессией собственной анти-оксидантной системы эритроцитов.
Влияние аплегина на состав липидов эритроцитов на фоне эндотоксикоза
Изучение влияния аплегинотерапии на липидный состав эритроцитов на фоне эндогенной интоксикации выявило следующие модификации последнего (табл. 4.4).
На втором этапе динамического наблюдения была отмечена тенденция к нормализации молекулярных нарушений липидного состава эритроцитов, которая проявилась в более быстром снижении уровней триацилглицеролов и фосфатидилсерина, которые были меньше контроля на 12,8 и 15,4 % (р 0,05) соответственно, хотя все еще превышали норму на 30,2 и 36,9 % (р 0,05) соответственно. Удельный вес фосфатидилэтаноламина напротив возрастал, превышая контроль на 18,9 % (р 0,05), но оставаясь ниже нормы на 9,7 % (р 0,05). Динамика остальных показателей была аналогична таковой в контроле (рис 4.7).
Так, количество эфиров холестерола, свободных жирных кислот, сфигномие-лина и лизофосфолипидов превышало первоначальные данные на 25,9, 77,0, 23,9 и 214,5 % (р 0,05) соответственно. Содержание холестерола, суммарных фосфолипидов и фосфатидилинозита было ниже исхода на 10,7, 12,4 и 25,2 % (р 0,05) соответственно. Количество фосфатидилхолина на данном этапе динамического наблюдения статистически значимых отличий о нормы не име ло.
На пятые сутки эксперимента уровни свободных жирных кислот, фос-фатидилсерина и лизофосфолипидов были достоверно ниже контроля на 21,7, 18,8 и 14,1 % (р 0,05) соответственно, хотя содержание лизофосфолипидов продолжало превышать норму на 76,9 % (р 0,05) соответственно, а количество свободных жирных кислот и фосфатидилсерина было сопоставимо с первоначальным. Содержание эфиров холестерола снижалось, по-прежнему превышая исход на 15,7 % (р 0,05) Количество холестерола и фосфатидилинозита было ниже исхода на 7,9 и 10,1 % (р 0,05) соответственно и на данном этапе эксперимента. Содержание суммарных фосфолипидов, фосфатидилсерина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина, сфигно-миелина и триацилглицеролов на конечном сроке динамического наблюдения статистически значимо от нормы не отличалось (рис.4.8).
Таким образом, применение аплегина в коррекции липидных дестабилизации при эндотоксикозе перитонеального генеза способствовало снижению прогрессирования патологического процесса, что проявилось в уменьшении выраженности эндогенной интоксикации путем замедления интенсификации ПОЛ и активации фосфолипазы А2 и более быстрой нормализацией показателей липидного состава эритроцитов. Кроме того, одним из механиз 64 мов реализации положительного эффекта можно считать выраженною активацию собственного антиоксидантного энзимного потенциала красных кровяных клеток. Эффективность при использовании апробируемого препарата проявлялась с третьих суток терапии.
Влияние реамберина на липидный спектр эритроцитов при эндоток сикозе перитонеального генеза
Антиоксидант реамберин показал свою высокую эффективность в коррекции нарушений липидного состава эритроцитов на фоне эндогенной интоксикации при остром перитоните (табл.6.4).
На первые сутки эксперимента отмечалось снижение удельного веса эфиров холестерола, свободных жирных кислот, фосфатидилсерина и лизо-фосфолипидов относительно контроля на 9,9, 12,9, 22,2 и 23,5 % (р 0,05) соответственно, превышая исход на 29,6, 31,1, 17,7 и 92,3 % (р 0,05) соответственно. Остальные показатели статистически значимых отличий от контроля не имели (рис.6.7).
После третьей инъекции апробируемого препарата содержание эфиров холестерола, триацилглицеролов, свободных жирных кислот, фосфатидилсе-рина, лизофосфолипидов и сфигномиелина было ниже контроля на 11,1, 17,1, 10,6, 23,8, 22,6 и 14,4 % (р 0,05) соответственно, несмотря на то, что уровни эфиров холестерола, триацилглицеролов, свободных жирных кислот, фосфа-тидилсерина, лизофосфолипидов оставались выше нормы на 11,3, 23,8, 66,4, 23,5, 148,7% (р 0,05) соответственно, в то время как показатель сфигномие-лина на данном этапе наблюдения был сопоставимы с первоначальным. Удельный вес суммарных фосфолипидов, фосфатидилинозита и фосфатиди-лэтаноламина были выше контрольных данных на 13,2, 19,5 и 17,8 % (р 0,05) соответственно, и уровень суммарных фосфолипидов статистически значимых отличий от исхода не имел. Количество холестеролаи фосфатидилхоли-на на третьи сутки терапии реамберином было сопоставимо с контрольными данными.
На пятые сутки после моделирования патологического процесса и включения в терапию апробируемого препарата все исследуемые показатели за исключением лизофосфолипидов были сопоставимы с первоначальными данными. Так, уровни эфиров холестерола, свободных жирных кислот и фос-фатидилсерина снижались относительно контроля на 12,4, 21,9 и 18,9 % (р 0,05) соответственно. Удельный вес лизофосфолипидов был ниже контрольных данных на 36,9 % (р 0,05), продолжая превосходить исход на 29,9 % (р 0,05) соответственно. Содержание холестерола достоверно превышало контрольные данные на 16,6 %. Остальные показатели на данном этапе динамического наблюдения были сопоставимы с контролем (рис.6.8).
Таким образом, включение реамберина в традиционную терапию острого перитонита показало значительную эффективность данного препарата, которая проявилась в более быстром восстановлении качественного и количественного состава как нейтральных липидов, так и фосфолипидов. возможным механизмом проявления липидстабилизирующего эффекта реамбе-рина является его способность корригировать интенсивность мембранодест-руктивных процессов, что также способствует снижению выраженности эндогенной интоксикации. Положительный эффект препарата начинал проявлять уже с первых суток его применения и достигал максимума после третьей инъекции реамберина.
![Фармакологическая коррекция нарушений энергетического обмена в печени при экспериментальной патологии [B]-окисления жирных кислот](/i/i/4397/408076.png "Фармакологическая коррекция нарушений энергетического обмена в печени при экспериментальной патологии [B]-окисления жирных кислот Тимофеев Максим Сергеевич")
![Иммунометаболическая активность регуляторов энергетического обмена при алиментарных нарушениях [Электронный ресурс]](/i/i/4372/207855.png "Иммунометаболическая активность регуляторов энергетического обмена при алиментарных нарушениях [Электронный ресурс] Денисюк Татьяна Алексеевна")
