Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Биологическая активность феруловой кислоты 9
1.2 Потенциальные механизмы кардиопротекторного действия феруловой кислоты 17
Глава 2. Материалы и методы исследований 27
Глава 3. Кардиопротекторное действие феруловой кислоты при ишемическом повреждении миокарда 38
3.1 Влияние феруловой кислоты, эмоксипина и обзидана на функциональное состояние очага ишемии в миокарде при 30-ти минутной окклюзии и 10-ти минутной реперфузии нисходящей ветви левой коронарной артерии 38
3.2 Влияние феруловой кислоты и обзидана на размер зоны ишемии и зоны некроза при окклюзии НВЛКА в течение 1, 2 и 4 часов 49
3.3 Влияние феруловой кислоты и эмоксипина на функциональные резервы сердца в условиях ишемии участка миокарда 55
Глава 4. Кардиопротекторное действие феруловой кислоты при аритмогенных поражениях сердца 66
4.1 Противоаритмическое действие феруловой кислоты на модели повреждения изолированного сердца пероксидом водорода 66
4.2 Противоаритмическое действие феруловой кислоты и обзидана при ишемии и реперфузии миокарда 72
4.3 Изучение антиаритмических свойств феруловой кислоты на аконитиновой модели нарушений сердечного ритма 77
4.4 Изучение противоаритмического действия феруловой кислоты на хлоркальциевой модели нарушений сердечного ритма 80
Глава 5. Кардиопротекторное действие феруловой кислоты при стрессорном повреждении миокарда 84
5.1 Оценка общего антистрессорного действия феруловой кислоты на модели 10-ти часовой иммобилизации 84
5.1.1 Влияние феруловой кислоты и фенибута на стрессорное поражение слизистой оболочки желудка, тимуса и надпочечников 86
5.1.2 Влияние феруловой кислоты и фенибута на спонтанную двигательную активность в постстрессорный период 89
5.2 Кардиопроткторное действие феруловой кислоты при стрессорном повреждении миокарда 91
5.2.1 Влияние феруловой кислоты и фенибута на функциональные резервы сердца при стрессорном повреждении миокарда 91
5.2.2 Оценка стресс протекторного действия феруловой кислоты и фенибута по активности сывороточных ферментов МБ-изоферментакреатинфосфокиназы и лактатдегидрогеназы 101
5.2.3 Влияние феруловой кислоты и фенибута на перекисное окисление липидов в мембранах кардиомиоцитов при стрессорном повреждении сердца 103
Обсуждение результатов 107
Выводы 120
Литература 122
- Потенциальные механизмы кардиопротекторного действия феруловой кислоты
- Влияние феруловой кислоты и эмоксипина на функциональные резервы сердца в условиях ишемии участка миокарда
- Изучение противоаритмического действия феруловой кислоты на хлоркальциевой модели нарушений сердечного ритма
- Влияние феруловой кислоты и фенибута на перекисное окисление липидов в мембранах кардиомиоцитов при стрессорном повреждении сердца
Потенциальные механизмы кардиопротекторного действия феруловой кислоты
Первые прямые данные о роли ПОЛ в патогенезе инфаркта миокарда были получены А.Х. Коганом, А.Н. Кудриным, СМ. Николаевым (1976). Они показали увеличение хемолюминисценции, обусловленное активацией свободно-радикальных процессов в зоне ишемии, при инфаркте миокарда.
В дальнейшем появилось большое количество исследований, посвященных изучению роли свободнорадикальных процессов в патогенезе различных заболеваний сердца и возможности использования антиоксидантов как кардиопротекторов [14, 40, 41, 87, 122]. Активация ПОЛ под действием ишемии определяется функционированием нескольких механизмов генерации свободных радикалов.
1. Механизм активации ПОЛ электронно-транспортными перенос чиками. В основе этого механизма лежит то, что при движении электронов по дыхательной цепи могут реализоваться две возможности: либо электроны доходят до конца цепи и под действием концевого фермента цитохромокси дазы переносятся на кислород с образованием воды, либо они переносятся на кислород непосредственно с переносчиков цепи с образованием 0{. Нера дикалогенное функционирование дыхательной цепи, когда восстановление кислорода происходит при участии цитохромоксидазы, возможно только в условиях нормального напряжения кислорода. Поэтому в условиях гипокси ческой ишемии в дыхательной цепи происходит «утечка» электронов с обра зованием свободных радикалов, которые, в свою очередь, подвергают атаке фосфолипиды мембран. Такой процесс инициации свободнорадикального повреждения мембран кардиомиоцитов показан в ряде работ. [31, 109, 148, 149].
2. Активация свободнорадикальных процессов в миокарде фер ментативной системой ксантиноксидазы. В норме фермент ксантиндегид рогеназа превращает гипоксантин, образующийся из АМФ, в мочевую кисло ту, в этой реакции участвует так же НАД в качестве акцептора электронов [84]. Установлено, что даже короткий период ишемии переводит ксантинде гидрогеназу в ксантиноксидазу, которая активно генерирует 02\ используя в данном случае 02 в качестве акцептора электронов [98, 135]. Повреждение мембран кардиомиоцитов при процессах гипероксидации приводит к увели 9-І чение вхождения ионов Са в клетку при ишемии. Это, в свою очередь, ак Пі тивирует Са -зависимую протеинкиназу (РКС), которая участвует в конвертации фермента ксантидегидрогеназы в ксантиноксидазу [122, 133].
3. Ацидоззависимая активация ПОЛ. Одним из ранних проявлений ишемии является внутриклеточный ацидоз, развивающийся в кардиомиоцитах [101]. Ацидоз способен прямо активировать свободнорадикальное повреждение мембранных структур клеток [117]. При гипоксии и ишемии первым и основным продуктом в большинстве случаев является радикал супероксида ( 02 ). Этот радикал малоактивен и не способен непосредственно инициировать реакции ПОЛ [43]. Однако снижение рН в кардиомиоцитах, наблюдаемое при ишемии, приводит к образованию гораздо более активных радикалов #ОН и Н02 [ПО].
4. Лейкоцитарный механизм активации ПОЛ. Нейтрофильные и другие лейкоциты обладают способностью активно продуцировать свободные радикалы, которые играют значительную роль в процессах фагоцитоза, приводя к разрушению мембран чужеродных микроорганизмов, а так же участвуют в процессах воспаления [106]. Инфильтрация ишемизированного миокарда лейкоцитами отмечается через 24 часа после начала ишемии. Сопутствующая этому процессу лейкоцитарная деструкция поврежденных ишемией кардиомиоцитов, опосредованная активными формами кислорода, приводит к интенсификации ПОЛ в миокарде [138].
5. Антиоксидантная недостаточность миокарда, наблюдаемая при ишемии. В зоне ишемии активность основных антиоксидантных ферментов СОД и каталазы снижается в 1,6 раза в течении первых 15 минут после создания инфаркта миокарда [76]. Выраженное снижение активности СОД, каталазы и глутатионпероксидазы наблюдается так же и в неишемизированной зоне через 1-3 ч после перевязки коронарной артерии [20]. Кроме того, нарушения наблюдаются и среди неферментативных антиоксидантов. Ишемия приводит к быстрому снижению в миокарде концентрации растворимого ан-тиоксиданта восстановленного глутатиона [121]. В ранний период ишемиче-ского воздействия резко снижается активность «структурного антиоксидан-та», т.е. мембранных липидов [8].
Антиоксидантная недостаточность миокарда возникает из-за потери антиоксидантных ферментов и растворимых антиоксидантов, выходящих через поврежденную сарколемму. Кроме того антиоксиданты расходуются вследствии активации ПОЛ.
Таким образом, наличие локальной антиоксидантной недостаточности является одним из важных аргументов для применения антиоксидантов с целью защиты от ишемического повреждения.
Основой всех модифицирующих эффектов ПОЛ в мембране является реакция ненасыщенных жирнокислотных остатков фосфолипидов липидного бислоя с активными формами кислорода. В результате данной реакции в молекулах фосфолипидов, содержащих во втором положении ненасыщенную жирную кислоту, появляется полярная гидроперекисная группировка.
Образующиеся гидроперекиси фосфолипидов неустойчивы, поэтому их появление в билипидном слое мембраны приводит к цепи дальнейших превращений и к реализации нескольких важных модифицирующих и повреждающих эффектов:
1. Первый эффект состоит в накоплении в билипидном слое мембраны гидроперекисей липидов и уменьшении количества ненасыщенных липидов. А это приводит к изменению функционального состояния интегральных бел-ков мембраны. Так для Са -АТФазы мембран саркоплазматического ретику-лума было показано двухфазное изменение активности в следствии усиления ПОЛ [7]. При умеренной активации ПОЛ, когда модификации подвергается не более 2-5 % фосфолипидов, появление в микроокружении интегральных белков гидроперекисей сопровождается увеличением их активности. При выраженном усилении ПОЛ модифицируется значительное количество фосфолипидов. Это приводит к изменению жидкостных свойств мембраны, она становится более ригидной. В этом случае липидное микроокружение ограничивает конформационную подвижность полипептидной цепи, необходи-мую для нормального функционирования Са -АТФазы. Таким образом значительное усиление ПОЛ вызывает ингибирование этого важного ионного 7-І насоса, что приводит к накоплению ионов Са в саркоплазме. Подобное развитие процесса доказано так же для Na+/K+-АТФазы из сарколеммы кардио-миоцитов [62]. Кроме того, имеются данные об изменении селективности некоторых ионных каналов в результате активности ПОЛ. Например, так называемые неселективные катионные каналы проницаемые в нормальных условиях в основном только для одновалентных катионов (Na+, К+, Li+, Cs+), ста 9-1 новятся проницаемыми и для ионов Са [116, 128].
2. Второй модифицирующий эффект состоит в образовании так назы ваемых перекисных кластеров в составе билипидного слоя мембраны. Окис ленные фосфолипиды, появляющиеся в билипидном слое вследствии атаки активных форм кислорода, за счет латеральной диффузии объединяются в упорядоченные группы, которые фиксируются гидрофильным взаимодейст вием фосфолипидов друг с другом и с молекулами воды [10]. Таким образом в мембране образуются неуправляемые гидрофильные поры, проницаемые в 7-І частности для ионов Са [30].
Формирование таких кластеров при активации ПОЛ, вызванной ишемией, наряду с вышеописанными инактивацией Са +-АТФазы, Na+/K+-АТФазы и изменением проницаемости некоторых ионных каналов, может играть важную роль в возникновении избытка Са"+ в кардиомиоцитах и реализации его повреждающего действия.
Дальнейшее увеличение количества перекисных кластеров может привести к фрагментации и разрушению мембран сарколеммы и саркоплазмати-ческого ретикулума [40].
3. Третий повреждающий эффект ПОЛ состоит в том, что в результате распада гидроперекисей фосфолипидов образуются диальдегиды (малоно вый, глутаровый и др.). Эти продукты распада гидроперекисей могут взаимо действовать со свободными аминогруппами мембранных белков, образуя межмолекулярные ковалентные связи, которые способствуют инактивации этих белков [54].
Влияние феруловой кислоты и эмоксипина на функциональные резервы сердца в условиях ишемии участка миокарда
О кардиопротекторном действии ФК при острой ишемии можно судить не только по изменению функционального состояния очага ишемии и размерам зоны некроза, но и по изменению ино- и хронотропных резервов сердца.
Для оценки функциональных резервов сердца в условиях острой ишемии участка миокарда использовали пробы: нагрузка объемом, имитирующая увеличение преднагрузки; пережатие восходящей части аорты, в максимальной степени воспроизводящее усиление постнагрузки; нагрузка адреналином, позволяющая оценить влияние катехоламинов и симпатической нервной системы на работу сердца и степень мобилизации ино- и хронотропных резервов.
В экспериментах использовали 18 кошек обоего пола массой 2,7-4,0 кг, наркотизированных этаминалом натрия 40 мг/кг. Животные были распределены на 3 группы по 6 котов в группе. Животные 1 группы использовались в качестве контрольных. Коты из 2 группы получали феруловую кислоту внутривенно (в наружную яремную вену) в дозе 30 мг/кг за 30 минут до перевязки НВЛКА. Животным 3 группы вводили эмоксипин внутривенно в дозе 26 мг/кг за 30 минут до окклюзии коронарной артерии. Котам контрольной группы вводили изотонический раствор хлорида натрия в эквивалентных количествах.
Наркотизированных животных подключали к аппарату искусственной вентиляции легких, катетеризировали левую наружную яремную вену и правую общую сонную артерию. Для доступа к сердцу широко рассекали грудную клетку, затем через прокол в верхушке сердца вводили катетер в левый желудочек. Острую ишемию миокарда вызывали перевязкой нисходящей ветви левой коронарной артерии как это описано в главе 2.
Функциональные пробы проводили в условиях ишемии участка миокарда, через 15 мин после окклюзии коронарной артерии. Вначале давали нагрузку объемом, через 10 мин - адреналином, еще через 5 мин производили пережатие восходящей части дуги аорты на 20 сек. В качестве нагрузки объемом животным в наружную яремную вену быстро (в течении 1 сек) вводили физиологический раствор из расчета 3 мл/кг. Адреналин вводили в наружную яремную вену в количестве 0,1 мл/1 кг массы тела животного в разведении 10"7 г/мл (Косвенным доказательством, по которому контролировалось действие адреналина в различных экспериментах, является подъем АД на 20-25 мм рт. ст.).
Давление в левом желудочке сердца и системное артериальное давление измеряли электроманометрическим способом. Первые производные давления в левом желудочке (dP/dtmax и dP/dtmjn) получали при помощи электронного дифференцатора.
Результаты экспериментов представлены на рисунках 7, 8, 9 и в таблицах 3.3.1(a) и 3.3.1(6).
До перевязки коронарной артерии у животных контрольной группы основные показатели сократимости миокарда были следующими: максимальное развиваемое давление в левом желудочке(ЬУРтах) - 133±13 мм рт. ст.; максимальные скорости нарастания и снижения давления в левом желудочке (dP/dtmax и dP/dtmin) - 4968±248 и 3914±168 мм рт. ст. сек"1, соответственно; частота сердечных сокращений (ЧСС) - 197±10 уд/мин; систолическое артериальное давление (Ps) и диастолическое артериальное (Pd) - 126±8 и 82±7 мм рт. ст. У котов, получавших ФК, эти показатели сократимости миокарда были незначительно выше в сравнении с контрольными животными и составляли, соответственно, 143±13 мм рт. ст. (LVPmax), 5277±384 и 4230±359 мм рт. ст. сек"1 (dP/dtmax и dP/dtmin), 180±6 уд/мин (ЧСС), 133±6 и 90±5 мм рт. ст. (Ps и Pd). У животных, получавших эмоксипин наблюдалась та же тенденция, что и в группе с ФК, где показатели сократимости миокарда были незначительно выше чем в контрольной группе. Эти показатели в группе с эмок-сипином равнялись 146±9 мм рт. ст. (LVPmax), 5341±296 и 4007±427 мм рт. ст. сек"1 (dP/dtmax и dP/dtmin), 173±9 уд/мин (ЧСС), 139±11 и 96± 10 мм рт. ст. (Ps иРД
После перевязки нисходящей ветви левой коронарной артерии в сердце кошек происходило снижение всех регистрируемых показателей сократимости миокарда во всех экспериментальных группах, но не в равной мере (Таблица 3.3.1(a)). Так у животных контрольной группы снижение индексов сократимости относительно показателей, зарегистрированных до окклюзии НВЛКА, выраженное в процентах, через 15 мин после перевязки коронарной артерии составило: 16,7±2,7(LVPmax), 20,7±4,1 и 19,2±3,0 (dP/dtmax и dP/dtmin), 7,Ш,1 (ЧСС), 18,6±3,1 и 17,3±1,9 (Ps и Pd). В группе животных, которым вводили ФК, после окклюзии коронарной артерии так же наблюдались отрицательные ино- и хронотропные эффекты, но при этом снижение показателей сократимости миокарда было значительно меньшим в сравнении с контролем и составляло (%): 6,2±1,2 (LVPmax), 9,6±1,7 и 8,4±2,6 (dP/dtmax и dP/dtmin), 0,4±2,1 (ЧСС), 8,6±2,1 и 8,0±2,4 (Ps и Pd) (р 0,05 для всех показателей). У котов группы сравнения снижение показателей сократимости при ишемии участка миокарда было немного большим в сравнение с группой феруловой кислоты, но значительно меньшим в сравнении с контролем (%): 7,9±2,0 (LVPmax), 12,2±1,0 и 10,8±2,2 (dP/dtmax и dP/dtmin), 1,5±3,4 (ЧСС), 9,7±2,7 и 9,5±2,7 (Ps и Pd) (таблица 3.3.1(a)). Быстрое увеличение преднагрузки на сердце (нагрузка объемом — введение физиологического раствора в течение 1 сек) у животных всех экспериментальных групп приводило к отрицательному хронотропному и положительному инотропному эффектам (Таблица 3.3.1(6)). В контрольной группе при нагрузке объемом не отмечалось выраженных изменений частоты сердечных сокращений по отношению к исходному уровню. В этой группе увеличение индексов сократимости относительно исходных показателей, выраженное в процентах, через 30 сек от начала пробы объемом равнялось: 11,9±1,9 (LVPmax), 17,6±6,8 и 19,9±6,4 (dP/dtmax и dP/dtmin), 8,7±2,5 и 8,3±2,9 (Ps и Pd). В группе животных, получавших ФК, нагрузка объемом приводила к значительно более выраженному, в сравнении с контролем, положительному инотропному эффекту, который выражался в увеличении соответствующих индексов сократимости миокарда в сравнении с исходными показателями. В этой группе рост показателей сократимости миокарда относительно исходных данных, выраженный в процентах, через 30 сек от начала пробы объемом составил: 20,8±3,4 (р 0,05) (LVPmax), 51,2±8,4 и 37,4±6,0 (р 0,05) (dP/dtmax и dP/dtmin), 12,5±3,3 и 11,3±5,4 (Ps и Pd). У животных, получавших эмоксипин, нагрузка объемом, приводила более выраженному, в сравнении с контролем, положительному инотропному эффекту. Данный эффект выражался в увеличении соответствующих индексов сократимости миокарда относительно исходных показателей, которое через 30 сек после начала этой функциональной пробы равнялось (в %): 16,8±2,4 (LVPmax), 38,3±7,3 и 31,0±6,2 (dP/dtmax и dP/dtmin), 10,2±2,2 и 9,8±3,8 (Ps и Pd).
У животных всех трех групп, нагрузка адреналином в первые 120 сек вызвала увеличение силы и частоты сердечных сокращений. Но выраженность этих положительных ино- и хронотропных эффектов в разных группах была неодинаковая. Так в контрольной группе через 30 сек от начала данной функциональной пробы увеличение индексов сократимости миокарда составило (%): 38,7±3,7 (LVPmax), 87,6±7,5 и 37,9±7,1 (dP/dtmax и dP/dtmin), 29,3±4,5 и 23,2±2,9 (Ps и Pd).y животных, получавших ФК, в ответ на введение адреналина в сравнении с контрольной группой отмечались большее увеличение ЧСС и значительно более выраженный положительный инотропный эффект. В этой группе увеличение индексов сократимости по отношению к исходным показателям через 30 сек от начала данной пробы равнялось (%): 65,8±9,4 (р 0,05) (LVPmax), 126,0±7,9 (р 0,02) и 88,7±8,2 (р 0,01) (dP/dtmax и dP/dt ), 12,2±4,3 (ЧСС), 53,3±8,3 и 48,6±9,7 (р 0,05) (Ps и Pd). В группе животных, получавших эмоксипин, при введении адреналина увеличение частоты и силы сердечных сокращений, так же как и в группе с ФК, было более выраженным в сравнении с показателями контрольной группе животных. В этой группе увеличение индексов сократимости миокарда после 30 сек от начала функциональной нагрузки адреналином равнялось (%): 48,4±2,5 (LVPmax), 112,0±3,7 и 68,1±7,6 (р 0,05) (dP/dtmax и dP/dtmin), 18,7±10,7 (ЧСС), 30,7±3,2 и 26,0±3,9 (Ps и Pd).
Изучение противоаритмического действия феруловой кислоты на хлоркальциевой модели нарушений сердечного ритма
В данной серии наблюдений использовали 40 беспородных белых крыс массой 200-220 г, наркотизированных этаминалом натрия 40 (мг/кг). Животные были распределены на 5 групп по 8 крыс в группе. Первая группа контрольная, животным этой группы вводили внутривенно (в латеральную вену хвоста) изотонический раствор хлорида натрия в эквивалентных количествах за 30 мин до инфузии СаС12. Крысам 2, 3 и 4 групп вводили ФК внутривенно в дозах 10, 30 и 60 мг/кг, соответственно, за 30 мин до инфузии хлористого кальция. В качестве препарата положительного контроля использовали верапамил, который вводили животным 5 группы внутривенно за 30 мин до инфузии хлористого кальция.
В этой серии экспериментов аритмию вызывали быстрым, в течение 1-2 сек, внутривенным (в латеральную вену хвоста) введением СаСЬ 10% раствора по 0,2 мл на 0,1 кг массы тела животного [12].
В результате инфузии хлористого кальция аритмии во всех группах развивались примерно в одно и то же время на 5-8 секунде с момента введения СаС12. При этом в контрольной группе аритмия чаще всего начиналась с возникновения желудочковых экстрасистол, затем регистрировались пароксизмальная желудочковая тахикардия и желудочковая фибрилляция (Таблица 4.4.1). У 4 крыс данной группы зарегистрированы случаи атриовентрикулярной блокады. Внутривенное введение хлористого кальция у 5 крыс контрольной группы из 8 вызвало необратимую остановку сердца. Изменения сердечного ритма в ответ на введение СаСЬ у животных во всех опытных группах было схожим с таковым у крыс контрольной группы (Таблица 4.4.1). При этом не зарегистрировано достоверных отличий ни по количеству аритмий, ни по тяжести аритмогенного повреждения у крыс, получавших ФК в дозах 10, 30 и 60 мг/кг в сравнении с животными, которым вводили изотонический раствор хлорида натрия. Феруловая кислота не предотвращала так же и смертность в результате введения СаСЬ-Этот показатель во 2, 3 и 4 группе составил 50, 62,5 и 75%, соответственно, а у контрольных крыс 62,5%. Нарушения сердечного ритма в ответ на введение хлорида кальция у крыс, получавших верапамил, существенно отличались от нарушений как в контрольной, так и в опытных группах. Так у 3 животных этой группы не было зарегистрировано никаких аритмий после инфузии СаСЬ- У двух других крыс, получавших верапамил, регистрировались желудочковые экстрасистолы и отдельные короткие пароксизмы желудочковой тахикардии (2 крысы) и атриовентрикулярная блокада наблюдалась у 5 животных из 8. При этом у животных данной группы не было зарегистрировано ни одного случая желудочковой фибрилляции, а так же смерти в ответ на введение хлорида кальция.
Не смотря на то, что ФК не обладала прямым антиаритмическим действием на данной модели аритмогенного повреждения сердца, некоторый кардио-протекторный эффект у нее все же отмечался. В частности, ФК во всех трех дозах, использовавшихся в данной серии экспериментов, увеличивала время до полной остановки сердца у погибших крыс (Рис. 15 А) и уменьшала время восстановления синусового ритма у выживших животных в сравнении с контрольными крысами (Рис. 15 Б).
Таким образом, феруловая кислота в дозах 10, 30 и 60 мг/кг практически не влияла на течении аритмий, вызванных внутривенной инфузией хлористого кальция у крыс.
В доступной литературе мы не нашли сведений об антистрессорном действии ФК. Поэтому, первоначально, было проведено исследование анти-стрессорного действия ФК по общепринятой методике - оценка «триады» стрессорного воздействия (степени поражения слизистой оболочки желудка, массы тимуса и надпочечников) и в дополнение к этому определение пост-стрессорой депрессии по тесту анализа спонтанной двигательной активности в первые 2 мин после окончания стрессирования. Постстрессорная депрессия позволяет судить о степени истощающего стрессорного действия на центральную нервную систему.
Во второй части этой серии экспериментов изучалось кардиопротек-торное действие ФК при стрессорном повреждении миокарда. При этом оценивали влияние ФК на изменение функциональных резервов сердца после стрессорного повреждения миокарда и активность ферментов лактат дегид-рогеназы (ЛДГ) и МВ-изофермента креатинфосфокиназы в сыворотке крови животных, подвергнутых стрессированию. В конце каждого опыта оценивали состояние ПОЛ в сердце, определяя концентрацию 2-ТБК-активных продуктов и активность каталазы в гомогенате миокарда.
Влияние феруловой кислоты и фенибута на перекисное окисление липидов в мембранах кардиомиоцитов при стрессорном повреждении сердца
Соединения, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой, в частности малоновый диальдегид (МДА), являются конечными продуктами липоперок-сидации. Каталаза представляет собой конечное звено эндогенной антиокси-дантной ферментативной системы кардиомиоцитов и клеток других тканей организма. Поэтому, для оценки влияния ФК на уровень перекисного окисления липидов в сердцах крыс, подвергнутых стрессорному воздействию, определяли концентрацию 2-ТБК-реагирующих соединений и активность ка-талазы в гомогенате миокарда, с использованием методов, описанных в главе 2. Для увеличения сопоставимости результатов разных опытов концентрацию 2-ТБК-активных продуктов и активность каталазы соотносили с содержанием белка в гомогенате данной пробы. Содержание белка в гомогенате миокарда определяли по методу Лоури, так же описанному в главе "Материалы и методы".
Количество животных, использованных в этой серии опытов и их распределение по группам было таким же как это описано в разделе 5.1.2, а дозы и режим введения веществ как в разделе 5.1.
Данные измерений концентрации 2-ТБК-реагирующих соединений и активности конечного фермента антиоксидантной системы кардиомиоцитов каталазы в гомогенате миокарда сердец животных всех 4 групп представлены нарис. 17.
В результате стрессорного воздействия в сердцах животных контрольной группы по сравнению с животными, не подвергавшимися стрессирова-нию, содержание 2-ТБК-активных продуктов увеличилось с 3,51 ±0,20 (кон-троль-интакт) до 7,08±0,66 нмол/мг белка (контроль-стресс) (р 0,01). В группе животных, получавших ФК, увеличение концентрации продуктов липопе-роксидации в сердце в результате стрессирования было значительно меньшим, чем у контрольных крыс. В этой группе содержание 2-ТБК-активных продуктов в гомогенате миокарда равнялось 4,98±0,46 нмоль/мг белка (р 0,05). Применение фенибута так же приводило к тому, что увеличение концентрации 2-ТБК-активных соединений в сердцах крыс, подвергнутых стрессорному воздействию было значительно меньшим в сравнении с контрольными животными. В этой группе содержание 2-ТБК-активных продуктов равнялось 5,20±0,44 нмоль/мг белка (р 0,05).
Отмечалось уменьшение активности каталазы в гомогенате миокарда крыс, подвергнутых стрессированию, в сравнении с интактными животными. В группе интактных крыс активность каталазы составила 286,7±22,1 мкат/г белка/мин, в контрольной группе - 133,7±13,2 мкат/г белка/мин (р 0,01). Не смотря на стрессорное воздействие, в сердцах крыс, получавших ФК, отмечалось некоторое увеличение активности каталазы в сравнении с интактными животными. В этой группе активность каталазы равнялась 308,8±30,2 мкат/г белка/мин (р 0,01 в сравнении с контрольными животными). После стрессирования у животных, получавших фенибут, хоть и наблюдалось снижение активности каталазы в сердце в сравнении с животными, не подвергавшимися стрессорному воздействию, но все же активность этого антиоксидантного фермента была значительно выше, чем у контрольных животных и составляла 213,5±15,4 мкат/г белка/мин (р 0,02).
Анализ состояния ПОЛ в сердцах крыс, после 10-ти часового иммоби-лизационно-болевого стрессорного воздействия показал, что ФК обладает выраженным антиоксидантным действием, подавляя образование конечных продуктов липопероксидации 2-ТБК-реагирующих соединений и предотвращая уменьшение активности одного из ферментов эндогенной антиоксида-ной системы кардиомиоцитов каталазы.
Похожие диссертации на Кардиопротекторные свойства феруловой кислоты
