Содержание к диссертации
Введение
1. Современные биологически активные вещества, применяемые при воспалительных заболеваниях кожи 9
1.1. Средства местной терапии воспалительных заболеваний кожи 9
1.2. Природные компоненты в лечении воспалительных заболеваний кожи 18
1.3. Бишофит, как основа для создания препаратов с противовоспалительной активностью 23
2. Выбор состава и технологии оптимальных мазевых композиций на основе минерала бишофит 30
2.1. Материалы и методы 30
2.2. Изучение биологической доступности магния из мазевых композиций 37
2.3. Изучение реологических свойств мазевых композиций 40
2.4. Изучение осмотической активности мазевых композиций 48
2.5. Исследование противовоспалительной активности мазевых композиций 56
3. Фармакологические свойства мази минерала бишофит 63
3.1. Изучение противовоспалительной активности мази бишофита 63
3.1.1. Материалы и методы исследования 64
3.1.2. Эффективность мази бишофита при отеке лапки крыс, вызванного каррагенином 66
3.1.3. Эффективность мази бишофита при отеке лапки крыс, вызванного гистамином 68
3.1.4. Эффективность мази бишофита при отеке лапки крыс, вызванного серотонином 69
3.1.5. Эффективность мази бишофита при экспериментальном адъювантном артрите у крыс 70
3.1.6. Заключение 72
3.2. Влияние мази минерала бишофит на регенерацию кожи 73
3.2.1. Материалы и методы 74
3.2.2. Влияние мази бишофита на течение ожоговой раны у крыс, вызванной ультрафиолетовым облучением 78
3.2.3. Влияние мази бишофита на течение криотравмы у крыс, вызванной жидким азотом 84
3.2.4. Влияние мази бишофита на заживление инфицированной раны кожи крыс 91
3.2.5. Влияние мази бишофита на формирование рубца инфицированной раны кожи крыс 94
3.2.6. Влияние мази бишофита на формирование рубца неинфициро-ванной раны кожи крыс 97'
3.2.7. Заключение 99
3.3. Влияние мази бишофита на течение контактного аллергического дерматита, вызванного 2,4-динитрохлорбензолом 100
3.3.1. Материалы и методы исследования 100
3.3.2. Изучение влияния мази бишофита на течение контактного аллергического дерматита 101
3.3.3. Заключение 105
3.4. Влияние мази бишофита на бактерицидность кожи крыс 105
3.4.1. Материалы и методы исследования 106
3.4.2. Влияние мази бишофита на бактерицидность нормальной кожи крыс 108
3.4.3. Влияние мази бишофита на бактерицидность кожи крыс с гипо-магнеземией 109
3.4.5. Заключение 112
4. Токсикологические исследования мази минерала бишофит 113
4.1. Материалы и методы 113
4.2. Острая токсичность 117
4.3. Хроническая токсичность 117
4.4. Местно-раздражающее действие 134'
4.5. Заключение 137
5. Обсуждение результатов 139
Выводы 155
- Природные компоненты в лечении воспалительных заболеваний кожи
- Изучение осмотической активности мазевых композиций
- Влияние мази минерала бишофит на регенерацию кожи
- Влияние мази бишофита на течение контактного аллергического дерматита, вызванного 2,4-динитрохлорбензолом
Введение к работе
В настоящее время в мире отмечается неуклонный рост частоты и распространенности воспалительных заболеваний кожи (А.П. Суворов и соавт., 1999; А.А. Кубанова и соавт., 2000; В.Н. Романенко и соавт., 2001). Для лечения данной патологии кожи применяются наружные нестероидные противовоспалительные средства (НГТВС) и корти костероиды (КС), но использование НПВС и КС приводит к развитию тех или иных нежелательных реакций. Местные побочные эффекты могут включать усиление дерматофитной инфекции, присоединение (или усиление уже существующей) вторичной инфекции, атрофию эпидермиса и кожи, атрофические стрии или телеангиэктазии, контактный дерматит, акнеформную сыпь, фолликулит, угри, гипопигментацию, гипертрихоз, замедление заживления эрозий и ран, вследствие замедления процессов регенерации, снижение синтеза коллагена, пурпуру, стрии. Кроме того, возможно развитие и системных побочных эффектов. Риск усиливается при их использовании в педиатрической или гериатрической практике (И.Я. Шахмейстер и соавт., 1998; В.И. Кулагин и соавт., 2000; Н.Г. Короткий, 2001). В связи с этим одной из актуальных проблем современной фармакологии является создание мазей для более совершенных методов лечения больных воспалительными заболеваниями кожи (В.В. Кулага и соавт., 1996; Петрова Г.А., 2000) и разработка новых лекарственных препаратов, в том числе природного происхождения. Известно, что лекарственные препараты, на основе магнийсодержащих минералов, широко используют в качестве противовоспалительных средств в бальнеологии и косметологии (А.А. Спасов, 2003; J. Shani et al., 1995; Y. Yoshizawa et al., 2001; E. Proksch et al., 2005). Особое внимание среди магнийсодержащих минералов привлекает бишофит, т.к. содержит максимальное количество магния хлорида (до 95-96% в сухом остатке). Исследования, проведенные А.Б. Зборовским и соавт. (1993); А.А. Спасовым и соавт. (1993; 1998) и другими авторами, показали наличие у минерала бишофит выраженных противовоспалительных свойств. Лекарственный препарат «Поликатан» (стандартизированный раствор рассола бишофита) используется для местной терапии воспалительных заболеваний слизистой оболочки (риниты, синуситы, тонзиллиты, стоматиты, гингивиты и др.) (Э.С. Темкин, А.А. Спасов, Н.К. Санжаровская и др., 1997). В , зарубежной практике используют лекарственные препараты подобные минералу бишофит - лекарственные средства на основе поморийской рапы — «Поли-минерол» и «Вулнузан» (Болгария). Данные лекарственные препараты оказывают местное противовоспалительное действие, уменьшают проницаемость кровеносных сосудов, стимулируют фагоцитоз, улучшают регенерацию тканей, оказывают незначительное местное анальгезирующее действие. Применяются при воспалительных заболеваниях, как слизистой полости рта, так и кожи (А.А. Спасов, 2000; М.Д. Машковский, 2002). В Израиле и Иордании весьма успешно для лечения воспалительных заболеваний кожи используют мази на основе со- . лей Мертвого моря (А.А. Спасов, 2000).
На ранних этапах разработки бальнеологических средств, содержащих минерал бишофит (80-е годы прошлого столетия), в литературе отсутствовали сведения об их биофармацевтических исследованиях. При создании мазевых композиций появилась необходимость в научно-обоснованных данных о выборе мазевых основ и влияния магния хлорида на их стабильность и реологические свойства.
В 2000 году на кафедре фармакологии и НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета (ВолГМУ) была разрабо- • тана инициативная комплексная программа "Российский магний". Координатором данного проекта является академик РАМН, проф. В.И. Петров, который объединяет усилия ВолГМУ, НИИ фармакологии ВолГМУ, Волгоградского технического университета, Пятигорской государственной фармацевтической академии, ЗАО "БИОАМИД" (г. Саратов), ГП «Фармацевтическая фабрика» (г. Волгоград) и некоторых других учреждений.
В соответствие с данной программой в ВолГМУ проведено комплексное изучение фармакологических свойств минерала бишофит и продуктов его переработки с целью научного обоснования направленного создания магнийсо-держащих препаратов для местного воздействия и приема внутрь. В Пятигорской государственной фармацевтической академии проведена сравнительная оценка и обоснование выбора мазевых основ, а так же разработка и стандартизация мази бишофита (Д.А. Стрельцов, Е.В. Компанцева, 2002).
Основываясь на вышеизложенных данных можно считать весьма перспективным продолжение исследований фармакологических свойств минерала бишофит.
Цель исследования. Экспериментальное изучение фармакологических свойств наиболее оптимальной по биофармацевтическим параметрам мазевой композиции, содержащей минерал бишофит.
Задачи исследования.
1. Исследовать противовоспалительное действие мази бишофита, в сравнении с лекарственным препаратом «Вулнузан», на моделях отека, вызываемых введением каррагенина, гистамина, серотонина и на адъювантной модели ревматоидного артрита.
2. Исследовать острую и хроническую токсичность, аллергизирующее. и местно-раздражающее действие мази бишофита.
3. Исследовать действие мази бишофита и мази «Вулнузан» на течение контактного аллергического дерматита.
4. Изучить эффективность мази минерала бишофит и препарата сравнения «Вулнузан» при неинфицированных кожных дерматитах.
5. Оценить эффективность мази минерала бишофит и препарата сравнения «Вулнузан» при инфицированных кожных дерматитах, изучив воздействие на эпителизацию гнойной раны кожи и скорость ее очищения от бактериальной обсемененности.
6. Исследовать влияние на формирование рубцовой ткани инфицированной и неинфицированной раны кожи.
7. Изучить влияние мази минерала бишофита на бактерицидную активность кожи в норме и при патологии (алиментарный дефицит магния).
8. Обосновать выбор оптимальной мазевой композиции для минерала бишофит на основании биофармацевтических исследований. Научная новизна. Впервые показано повышение скорости репаративных процессов и накопления коллагена под влиянием мази бишофита при инфицированных и неинфицированных дерматитах. Впервые продемонстрировано уменьшение тяжести течения аллергического контактного дерматита при применении мази минерала бишофит. Впервые определено, что под влиянием мази бишофита, повышаются бактерицидные свойства кожи в норме и при развитии дефицита магния, стабилизируется ее бактерицидность. Показано, что мазь минерала бишофит оказывает выраженное противовоспалительное действие на модели отека, вызванного каррагенином, гистамином и серотонином, а так же на модели ревматоидного артрита, превосходя по активности препарат сравнения «Вулнузан». Определено, что оптимальной мазевой основой для минерала бишофит является комбинация из полиэтиленгликолей с М.м. 400 и 1500. Установлено, что мазь, содержащая минерал бишофит, относится к разряду мало токсичных веществ и нулевому классу выраженности раздражающих свойств. Показана целесообразность применения мази минерала бишофит в качестве местного противовоспалительного средства.
Научно-практическая значимость работы. Установлено, что мазь минерала бишофит влияет на морфологические изменения в коже и на процессы , регенерации при инфицированных и неинфицированных дерматитах. Показана эффективность мази бишофита при контактном аллергическом дерматите. Продемонстрировано влияние мази минерала бишофита на бактерицидную активность кожи в норме и при патологии (дефицит магния). Изучено противовоспалительное действие мази минерала бишофит на модели отека, вызванного каррагенином, гистамином и серотонином, а так же на модели ревматоидного артрита. Исследована острая и хроническая токсичность, аллергизирующее и ме-стно-раздражающее действие мази бишофита. Проведены биофармацевтические исследования по выбору мазевой композиции для минерала бишофит.
Реализация результатов исследования. Материалы работы применяются в НИИ Фармакологии ВолГМУ и Волгоградского научного центра РАМН при проведении научных экспериментов и в учебно-производственной аптеке ВолГМУ. Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, слушателей фа 8 культета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, общей химии, биофармации ФУ В.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Мазь минерала бишофит, на основе полиэтиленгликолей с М.м. 400 и 1500, является оптимальной по биофармацевтическим параметрам.
2. Изученная мазь оказывает антифлогистическое действие на различных моделях воспаления, вызванных каррагенином, серотонином, гиста-мином, в том числе на модели адъювантного ревматоидного артрита.
3. Мазь бишофита ускоряет процессы регенерации при различных повреждениях кожи (ультрафиолетовое облучение, криотравма), ускоряет заживление и очищение от бактериальной обсемененности инфицированной раны, стабилизирует формирование рубцовой ткани инфицированной и неинфицированной раны.
4. Под влиянием мази минерала бишофит положительно изменяется течение аллергического контактного дерматита.
5. Мазь минерала бишофит повышает бактерицидные свойства кожи в норме и при системном дефиците магния.
6. Изученная мазь не оказывает аллергизирующего и местно-раздражающего действия, отсутствует анафилактическая реакция при нанесении в терапевтической дозе.
Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на 61-й, 62-й и 63-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных ВолГМУ, Волгоград, 2003-2005 гг.; VIII-X Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград 2003-2005 гг.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 46 таблиц, 57 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", и 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 164 источника, в том числе 7 і иностранных.
Природные компоненты в лечении воспалительных заболеваний кожи
Несмотря на использование стероидных и нестероидных противовоспалительных средств, в лечении воспалительных заболеваний, в настоящее время не потеряли свою актуальность методы бальнеотерапии и грязелечения. Надо отметить, что природные препараты, как правило, уступают по активности синтетическим средствам, но с другой стороны, они обладают намного меньшим спектром побочных эффектов и лучшей переносимостью, что привлекает большое количество пациентов посещать бальнеологические курорты. Бальнеотерапия как метод лечения появилась вновь в 1800х, сначала в Европе и России, а затем в Соединенных штатах. Бальнеотерапия включает погружение пациентов в ванны или бассейны с минеральной водой. Бальнеотера-певтические процедуры во многих случаях воздействуют, прежде всего, на кожу, которая располагает многочисленными структурами, реагирующими на это воздействие. Бальнеотерапия является многосторонним методом воздействия факторов, периодическое раздражение которыми организма при патологических его состояниях ведет к возникновению регуляторных эффектов. Такая реактивная настройка в итоге ведет к процессу выздоровления как следствие стабилизации гомеостаза (Х.Г. Пратцель, К. Артман, 1992). В настоящее время данная терапия практикуется во многих странах. Примерами уникальных и специальных мест для бальнеотерапии являются Мертвое море в Израиле, Кан-гал в Турции, Голубая лагуна в Исландии, Поморийское озеро в Болгарии. В Российской Федерации лечение минеральными водами проводят на курортах Кавказских минеральных вод, Сочи, Талги в Дагестане, Усть-Качка в Пермской области, Сергиевских минеральных вод в Самарской области, Ейске в Краснодарском крае и др. Помимо минеральных вод широко используют лечебные грязи. Они содержат те же минеральные вещества, что и морская вода, а вдобавок к ним - биологически активные органические соединения. Грязи находят применение при заболеваниях опорно-двигательного аппарата; нервной системы; кожных болезнях - псориаз, нейродермит, экзема, рубцы после ожогов и травм, трофические язвы; сердечно-сосудистых расстройствах; болезнях органов дыхания; почечных поражениях; эндокринных нарушениях и некоторых других патологиях (В.Т. Олефиренко, 1986). Прием ванн и грязей с высоким содержанием солей является эффективным и безопасным для лечения. При таком подходе отпадает необходимость в синтетических препаратах. Риск развития серьезных побочные эффектов во время и после терапии очень мал. Минеральные соли и грязи часто используются при различных дерматологических заболеваниях.
Очень широко применяется бальнеотерапия в лечении различных воспалительных заболеваний кожи (Е. Hodak et al., 2003). Возможно, эти эффекты включают химическое, термическое, механическое, иммуномодулирующее воздействия. Вероятно, наибольшее значение бальнеотерапии лежит в индивидуальном и комплексном ее применении после стандартной медицинской терапии, не принесшей улучшения данному пациенту (Н. Matz, Е. Orion, 2003). Препараты, на основе магниевых минералов, широко используют в качестве противовоспалительных средств в бальнеологии и косметологии. Давно признанно, что купание в океане хорошо переноситься больными с воспалительными заболеваниями кожи, вследствие высокого содержания ионов магния, около 4% (А.И. Перльман, 1989; Y. Yoshizawa et al., 2001). В исследованиях проведенных Y. Yoshizawa (2001) и J. Hercogova (2002) было установлено, что аппликации морской воды и Леополидинской минеральной воды, ингибируют развитие контактного дерматита, вызываемого открытым нанесением натрия лаурилсульфата. Эффект морской воды может быть связан с сохранением барьерной функции кожи, входящими в нее солями. Y. Yoshizawa (2003) предложил использование морской воды в качестве средств в комплексной терапии хронических дерматозов. Положительные результаты были получены в исследованиях по изучению влияния магния хлорида на воспаление при аллергическом контактном дерматите, вызванного 2,4-динитрохлорбензолом (ДНХБ) у мышей, также позитивные результаты получены при исследовании данной соли у людей с контактным дерматитом (J. Greiner et al., 1990). В клиническую практику внедрен препарат «Физиомер» фирмы PharmaMed Naturals, основой которого является изотоническая стерильная природная морская вода, применяемый как противовоспалительное, очищающее, стимулирующее и восстановительное средство при воспалительно-инфекционных заболеваниях слизистой носа (М.Д. Машковский, 2002). Область Мертвого моря широко известна как место лечения пациентов больных псориазом, атопическим дерматитом, витилиго, ревматоидным артритом и другими кожными и ревматическими заболеваниями (A. Dostrovsky, F. Sagher, 1959; W.W. Avrach, A.M. Niordsen, 1974). Соли магния (карналлит -KCl«MgC12«6H20 и бишофит MgC12»6H20, преобладающие в составе соли Мертвого моря, известны тем, что проявляют выраженный эффект при воспалительных заболеваниях, улучшают барьерную функцию кожного покрова, влияют на пролиферацию и дифференциацию эпидермиса, обладают увлажняющим эффектом, уменьшают шероховатость кожи (Е. Proksch et al., 2005). Исследования, проведенные J. Greiner et al. (1990), показали, что вода Мертвого моря, содержащая высокую концентрацию солей магния, оказывала положительный эффект на течение воспалительных заболеваний кожи. Химические эффекты терапии солями Мертвого моря при псориазе были продемонстрированы Shani et al. (1995) в исследованиях in vitro и in vivo, включавшие животных и людей. Более того, было показано, что соли магния и калия, входящие в состав соли Мертвого моря, специфично ингибировали бесконтрольную пролиферацию эпидермиса при псориазе.
Судя по этим данным, терапевтический эффект, наблюдаемый у больных псориазом лечащихся на Мертвом море, может быть, по крайней мере, частично связан с минералами Мертвого моря, участвующими в пролиферации и дифференциации (М. Petrini, 1986). По мнению K.R. Feingold (2000) различные виды дерматозов, такие как атопический дерматит, псориаз и контактный дерматит, возможно, ассоциированы с дисфункцией кожного барьера. Этот слой способен к самовосстановлению после повреждения, но при старении или физиологическом стрессе, восстановление замедляется (М. Denda, 2002). Данным автором установлено, что соли магния при местной аппликации ускоряют скорость процесса восстановления кожного покрова и могли бы служить для улучшение барьерной функции предотвращения кожных проблемы у людей в настоящее время. В качестве средств профилактического ухода у лиц, страдающих воспалительными заболеваниями кожи, в последнее время рекомендованы новые поколения нестероидных средств для постоянного применения. К таким средствам относятся, в частности, разные препараты на основе минеральных вод. Эти воды используются в наружных препаратах и средствах по уходу за кожей нескольких дерматокосметологических линий, выпускаемых за рубежом. Как правило, в качестве эффекта указывают на успокаивающее действие, снимающее раздражение кожи, а также на укрепление (за счет увлажнения и смягчения) эпидермальной барьерной функции, что повышает устойчивость ее к повреждению. Данные средства, на основе минеральных вод, могут применяться для постоянного ухода за воспаленной кожей и профилактики рецидивов вое- паления без применения местных кортикостероидов. Новые местные препараты для регулярного ухода за сухой и склонной к раздражению кожей могут занять одно из ведущих мест в концепции "контролируемого самолечения", больных с воспалительной патологией кожи, предусматривающей самостоятельную эффективную борьбу с рецидивами на стадии доклинических проявлений обострения, выявляемых непосредственно пациентом (А.Ю. Сергеев и др., 2003). В последние годы появилось направление, связанное с использованием бальнеопроцедур в домашних условиях и условиях поликлиник. Такой подход стимулировал создание бальнеологических препаратов, которые относительно дешевы и при грамотном использовании дают хороший эффект.
Изучение осмотической активности мазевых композиций
Известно, что гидрофильные, обладающие осмотической активностью мази применяют для лечения различных гнойных процессов любой локализации и генеза с обильным раневым отделяемым (Ю.К Абаев и др., 1996; А.И. Лемешевский и др., 2001; В.Ю. Богачев, 2005), так как они способны не только дренировать рану, но и оказывать терапевтическое действие на различные стороны воспалительного процесса (В.Г. Гунько и др., 1982; И.М. Перцев и др., 1983; Д.И. Дмитриевский 1984). Поэтому представляется целесообразным проведение данной серии исследований с целью определения осмотической активности самих мазевых основ, и каким образом влияет внесение минерала бишофит на показатель осмотической активности мазевых композиций. Данные, полученные в результате проведенного исследования, представлены на рис. 7-8 (для 20% образцов) и на рис. 9-10 (для 50% образцов). Для образцов мазей на аквасорбе и редкосшитом геле ПЭГ-1500 с добавкой аэросила (№1) обнаружено значительное и равномерное в течение времени увеличение осмотической активности (рис. 7). При оценке данных осмотической активности образцов мазей на редкосшитом геле ПЭГ-1500 с добавкой аэросила (№2) и МЦ с добавкой глицерина (№3) таюке выявлена более высокая осмотическая активность мазей по сравнению с контролем (рис. 7). При анализе данных, полученных при исследовании эмульсионной основы (№7), установлено, что бишофит значительно изменил осмотическую активность основы (рис.8). Основа на ПЭГ-400:ПЭГ-1500 (№4) показала равномерное увеличение осмотической активности при добавлении бишофита (рис. 7). У мази на основе Na-КМЦ (№5) обнаружено значительное различие осмотической активности: добавление бишофита к основе № 5 равномерно увеличило осмотическую активность мази (рис. 8). Осмотическая активность образца мази на основе ПЭГ-400 (№6) возрастала равномерно с течением времени и добавление бишофита к основе привело к увеличению осмотической активности (рис. 8). При анализе результатов проведенного исследования осмотической активности мазей, содержащих 50% бишофита, установлено, что с повышением концентрации бишофита в мазях происходит прямо-пропорциональное увеличение их осмотической активности.
Мазь на основе аквасорба (№1) показала значительный прирост осмотической активности по сравнению с контролем (в 2 раза) (рис.9). Осмотическая активность образца на основе редкосшитого геля ПЭГ-1500 с добавкой аэросила (№2) сумме не много превосходила значения контроля, но время осмотического действия было более длительно (рис. 9). Образцы на основе МЦ с глицерином (№3) показали значительный прирост осмотической активности по сравнению с основами (рис. 9). Влияние электролита на образцы мазей на основе ПЭГ-400:ПЭГ-1500 (№4) и Na-КМЦ (№5) выразилось в том, что мази стали более активны в первые 30 мин, а затем прирост не значительно отличался от показаний основы (рис. 10). Для мази на основе ПЭГ-400 (№6) с добавкой аэросила наблюдалась тенденция увеличения прироста не в первые 30 мин, где прирост по сравнению с показаниями контроля был незначителен, а через 180 мин эксперимента. В этом случае, ионы магния увеличили время осмотического действия мази (рис. 10). При анализе данных эмульсионной основы (№ 7) установлено, что такие основы при прибавлении к ним 50% бишофита изменяют свою осмотическую активность, при чем прирост активности различается со значениями основы более выражено на 120 и 180 мин, чем на 30 мин (рис. 10). В результате проведенных исследований установлено, что наибольшей осмотической активностью обладает мазь на основе ПЭГ, содержащая 50% минерала бишофит, и в тоже время мазевая основа проявляет самостоятельную высокую осмотическую активность. В случае использования минерала бишофит в 20% концентрации отмечено, что мази на основе ПЭГ также показали высокую осмотическую активность аналогичную осмотической активности при включении 50% минерала бишофит, после 60 минут эксперимента. Исследования по разработке методики скрининга на основе балльной оценки различных показателей С целью скрининга исследуемых моделей нами была предложена балльная оценка выбранных следующих критериев: степени высвобождения действующих веществ, осмотическая активность, структурно-механические свойства. Для этого нами были выбраны следующие виды балльной оценки (с целью объективной оценки были выбраны значения, полученные на 60 мин. эксперимента). В соответствии с предложенной системой оценки по этой шкале верхний оценочный предел составляет 23 балла. Общая оценка производится по сумме баллов, полученных по 3-м критериям. В анализе принимают участие средние значения полученных результатов. Баллы по каждому показателю суммируются, и выводится общий средний балл. Анализ данных таблицы 6 показывает, что предложенные критерии оценки позволяют провести корреляцию между исследуемыми значениями с целью выбора наиболее перспективного для дальнейшего изучения. Таким образом, предложенная нами методика скрининга позволяет объективно оценить различные показатели и провести выбор наиболее перспективных моделей для дальнейших исследований in vivo, а также может быть рекомендована для оценки лекарственных форм как в процессе их разработки, так и в аналитических исследованиях.
Противовоспалительная активность мазевых композиций была изучена на модели отека лапки крыс, вызванного флогогенным агентом каррагенином. На модели каррагенинового воспаления наблюдается три фазы выделения медиаторов: в первую фазу высвобождается гистамин и серотонин, во вторую -кинины. Простагландины являются посредником поздней фазы воспаления, развивающегося при каррагениновом отеке через 3 часа, максимум концентрации ПГЕ2 - через 12-24 часа. Активация этой третьей фазы воспаления зависит от включения в процесс системы комплемента (A.M. Чернух, 1979). Известно, что соли магния влияют на выработку простагландинов в очаге воспаления (S. Nigam et al., 1986). Рассол минерала бишофит уменьшал воспа- ление, вызванное гистамином и серотонином (А.А. Спасов 2003). Исходя из этих данных, представляется актуальным изучить влияние разработанных мазевых композиций на противовоспалительную активность. Проведенные исследования показали, что мазевые композиции, содержащие минерал бишофит, оказывают влияние на экссудативную фазу воспаления и понижают развитие отека. После введения каррагенина у животных контрольной группы развивался выраженный отек лапки, отечность лапки нарастает постепенно и максимум наблюдается к 4-5-му часу. Отмечается цианоз, болезненность конечности, животные избегают наступать на данную лапку. В группах животных, получавших аппликации мазевых композиций, содержащих минерал бишофит, цианоз и болезненность были менее выражены. Установлено, что у всех изучаемых мазевых композиций наблюдалась противовоспалительная активность. В том числе, слабая противовоспалительная активность обнаружена и у мазевых основ входящих в состав мазевых композиций, но достоверных значений уменьшения отека в данном случае получено не было. Данные по уменьшению отека, относительно контрольной группы, при применении мазевых композиций с 20%о концентрацией минерала бишофит представлены в таблице 7 и рисунках 11, 12. Так, уменьшение отека, относительно контрольной группы, при применении мазевых композиций с 20% концентрацией минерала бишофит, составило: мазевая композиция №1 - через 3 часа наблюдения 8,5%, через 5 часов - 17,4%; мазевая композиция №2 - через 3 часа - 11,0%, через 5 часов - 20,6% ; мазевая композиция №3 - через 3 часа -11,8%, через 5 часов - 18,1%; мазевая композиция №4 - через 3 часа - 13,7%, через 5 часов - 24,0%; мазевая композиция №5 - через 3 часа - 8,8%, через 5 чаг сов - 16,9%; мазевая композиция №6 - через 3 часа - 10,8%, через 5 часов -19,0%.
Влияние мази минерала бишофит на регенерацию кожи
Большое значение в настоящее время в дерматологии имеет поиск препаратов обладающих репаративным эффектом и повышающих процессы заживления ран после травматического воздействия или воздействия неблагоприятных внешних факторов. Основываясь на данных о том, что минерал бишофит ускорял заживление различных повреждений кожного покрова (Спасов А., 2003), было предложено проверить влияние на процессы регенерации мази минерал бишофит. В первой модели повреждения кожного покрова был применен метод, используемый для изучения влияния веществ на возникновение эритемы. С той лишь разницей, что, увеличивая время облучения возможно получение ультрафиолетового ожога. Данный метод заключался в следующем: животным за сутки до опыта тщательно выстригался участок кожи в верхней части туловища. Перед началом облучения животные наркотизировались внутрибрюшинным введение эта-минала-натрия в дозе 50 мг/кг, фиксировались. Для ограничения площади ожога на опытный участок кожи накладывался лист фольги с 4-мя отверстиями одинакового размера (1x1 см). Затем производили облучение данного участка кожи с помощью ртутно-кварцевой ультрафиолетовой лампы. Расстояние между лампой и телом животного составляло 10 см. Время облучения 5 минут. Таким образом достигались ожоги одинакового размера и степени тяжести. Данная серия исследований проводилась на 36 беспородных белых крысах обоего пола массой 180-200 г. Животные были разделены на 3 группы: 1 -я группа - контроль (естественное заживление); 2-я группа - животные, получавшие аппликации мази минерала бишофит; 3-я группа - животные, получавшие аппликации мази «Вулнузан», в качестве препарата сравнения. Аппликации начинали со следующего дня после травмы и проводили ежедневно, 2 раза в день, в течение 18 дней. Экспериментальная терапия тканевого дефекта кожи крыс, вызванного жидким азотом (А.В. Улесов и др., 2002), проводилась на 36 крысах обоего пола массой 180-200 г. За сутки до опыта животным тщательно выстригался участок кожи в верхней части туловища. Перед началом опыта животные наркотизировались внутрибрюшинным введение этаминала-натрия в дозе 50 мг/кг и фиксировались.
Далее к депилированному участку кожи прикладывался металлический штопфер диаметром 20 мм, предварительно штопфер погружал- , ся в жидкий азот на 15-20 секунд. Время контакта металлической поверхности штопфера и кожи составляло 60 секунд, таким образом, достигалась одинаковая степень повреждения. Животные были подразделены в пределах серии на 3 группы: 1-я группа - контроль (естественное заживление); 2-я группа - животные, получавшие аппликации мази минерала бишофит; 3-я группы - животные, получавшие аппликации мази «Вулнузан», в качестве препарата сравнения. Аппликации начинали со следующего дня после травмы и проводили ежедневно, 2 раза в день, в течение 22 дней. Критерием развития патологического процесса и проявления репаратив-ных свойств исследуемых мазевых композиций служили следующие показатели: общее состояние животных, визуальная оценка состояния самого дефекта и окружающих тканей, площадь раны, динамика репаративного процесса, время отторжения струпа, результаты гистологического исследования раны. Для патоморфологического исследования брали образцы пораженных участков кожи, фиксировали в 10% нейтрализованном растворе формалина для получения в последующем парафиновых срезов. Срезы окрашивали гематокси- лин-эозином, по Ван Гизону, заключали в пихтовый бальзам под покровные стекла и готовили для визуального просмотра постоянные микропрепараты. Результаты проведенных исследований подвергнуты статистической обработке, достоверность различий оценивали с помощью критерия Стыодента (Microsoft Excel). Эффективность мази минерала бишофит на заживление гнойной раны изучали на 36 белых беспородных крысах обоего пола по методике В.Б. Ско-пинцева (В.Б. Скопинцев, 1992). В раны вносили 1 х 109 микробных тел бактериальной суспензии, содержащей культуру Staphylococcus aureus 209Р АТСС 6538Р. По морфологическим и биохимическим свойствам штамм типичен. Планиметрию раны проводили по методу К.М. Фенчина (К.М. Фенчин, 1979). При бактериальном контроле - количественно определяли микробные тела в 1 г ткани на 2, 4, 7, 9, 11 сутки после начала лечения по методике М.И. Кузина (М.И. Кузин, 1980). Критерием очищения раны от бактериальной обсеменённости было количество микробных тел менее 10э на 1г ткани. Планиметрию раны проводили по методу К.М.. Фенчина Мазь наносили на раны открытым способом 1 раз в сутки. Животные были поделены на 3 группы: 1-я группа - контроль; 2-я группа - животные, получавшие аппликации мази минерала бишофит; 3-я группа - животные, получавшие аппликации мази «Вулнузан», в качестве препарата сравнения; Лечение ран животных проводилось открытым способом без применения тампонов и повязок, 1 раз в сутки. Динамику раневого процесса оценивали по следующим клиническим показателям: сроки появления грануляций, краевая эпителизация, очищение ран от гнойно-некротических тканей, полная эпители-зация; количественный состав внутритканевой микрофлоры в биоптате края раны. Изучение влияния мази минерала бишофит на формирование рубца инфицированной раны кожи крыс проводилось на 36 белых беспородных крысах самцах массой 180-220 г. - работа проводилась совместно с центром санэпиднадзора Ворошилов-. ского р-на г. Волгограда.
Животные были поделены на 3 группы: N 1 -я группа - контрольная; 2-я группа - животные, получавшие аппликации мази минерала бишофит; 3-я группа - животные, получавшие аппликации мази «Вулнузан» в качестве препарата сравнения; Модель инфицированной раны создавали по методу A. Moller и В. Rytberg, 1982. Крыс анестезировали тиопенталом натрия из расчета 60 мг/кг массы на внутрибрюшное введение и фиксировали на операционном столе. Животным наносились резанные линейные кожные раны скальпелем в области спины, после предварительной обработки операционного поля 5% раствором йода. Разрез выполнялся вдоль оси тела длиной 5 см на глубину до фасции. В образовавшуюся рану вносили 0,2 мл взвеси госпитального штамма St. aureus, содержащей 2x109 микробных тел. Через 30 минут раны ушивали шелковыми узловыми швами, наложенными на расстоянии 1см друг от друга. Исследуемые мази наносили открытым способом, 1 раз в день ежедневно, со следующего дня после нанесения раны. О прочности сформировавшегося кожного рубца судили на основании показаний ранотензиометрии. Для оценки прочности рубца на разрыв был использован следующий метод: у выведенного из опыта животного с полностью зажившей раной на 7 и 14 сутки выделялся квадратный кожный лоскут со спины шириной 5 мм, длинной 20 мм, в центре которого располагался рубец. Кожный лоскут фиксировался за параллельные края специальными зажимами, один из которых крепился неподвижно, к другому (подвижный) была прикреплена чашечка для помещения в нее груза. Груз добавлялся постепенно, до разрыва рубца. Изучение влияния мази минерала бишофит на формирование рубца не инфицированной раны кожи крыс проводилось на 36 белых беспородных крысах самцах массой 180-220 г по методике описанной выше. Отличие со- стояло в том, что не вносилась инфекция. Рана сразу ушивалась для предотвращения ее инфицирования. Материалы для гистологических исследований, как в первой, так и во второй серии опытов, брали на 7 и 14 сутки, фиксировали в 10% нейтрализованном растворе формалина для получения в последующем парафиновых срезов. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван Гизону, заключали в пихтовый бальзам под покровные стекла и готовили для визуального просмотра постоянные микропрепараты. Результаты проведенных исследований подвергнуты статистической обработке, достоверность различий оценивали с помощью критерия Стьюдёнта (Microsoft Excel).
Влияние мази бишофита на течение контактного аллергического дерматита, вызванного 2,4-динитрохлорбензолом
Дерматиты являются наиболее распространенными и часто встречаемыми формами воспалительных и аллергических заболеваний кожи. В связи с этим фармакотерапия заболеваний кожи продолжает оставаться актуальной проблемой современной фармакологии. Экспериментальный аллергический контактный дерматит является моделью для изучения гиперчувствительности замедленного типа, различные проявления которой играют большую роль в развитии аллергических дерматозов (П.М. Залкан, Е.А. Иевлева, 1965). Опираясь на данные о том, что бальнеологические процедуры приводят к улучшению состояния больных с кожными поражениями (Z. Even-Paz, 1998), было решено проверить влияние мази минерала бишофит на течение контактного аллергического дерматита. В эксперименте использовали 30 морских свинок массой тела 300-350 г. Для воспроизведения экспериментального аллергического контактного дерматита — реакции замедленного типа, животных сенсибилизировали по методу П.М. Залкан, Е.А. Иевлева (1965). В качестве аллергена использовали 2,4-динитрохлорбензол (ДНХБ) («Бератон» ОАО, Россия), который применяли в виде 5% спиртово-ацетонового раствора. Очаг сенсибилизации создавали на участке спины площадью 9 см", с которого предварительно удаляли шерстный покров. ДНХБ втирали в кожу спины 1 раз в сутки в течение 3 дней. Животные были поделены на 3 группы: 1 -я группа - контроль; 2-я группа - животные, получавшие аппликации мази минерала бишофит; 3-я группа - животные, получавшие аппликации мази «Вулнузан», в качестве препарата сравнения; Мази наносили ежедневно 1 раз в сутки начиная с момента воспроизведе ния контактного дерматита. Реакцию изменения кожного покрова фиксировали на 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 сутки. Критериями эффективности мази минерала бишофит служили клинические признаки заболевания: динамика течения, ше лушения, отторжение некротизированных очажков и гистоморфологические данные. Кожу у животных иссекали на 2 и 7 сутки от начала нанесения ДНХБ. Кусочки кожи фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, срезы окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону. ;;, Через сутки после однократной накожной аппликации раствора ДНХБ у всех животных появилась умеренная гиперемия и отек тканей, свидетельствующие о развитии контактного дерматита.
После второй аппликации раствора ДНХБ кожа была гиперемирована, отечна, местами наблюдались массивные серозно-гнойные корки. После третьего нанесения ДНХБ тяжесть местных проявлений еще более усугубилась. Микроскопически были выявлены резко выраженные деструктивные изменения эпидермиса вплоть до некроза. Между эпидермисом и собственно кожей имела место лимфо-лейкоцитарная инфильтрация, отек дермы, в собственно коже — многочисленные кровеносные сосуды с обильной периваскулярной лимфо-лейкоцитарной инфильтрацией, макрофагами (рис. 51). отхождение некротизированных корочек, превосходя по эффективности препарат сравнения «Вулнузан». Полная эпителизация кожного дефекта при применении мази минерала бишофит наступила быстрее, чем в группе контроля на 4 суток, и на 2 суток, чем в группе животных, получавших мазь «Вулнузан». Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод, что под влиянием мази минерала бишофит течение контактного аллергического дерматита проходило в менее выраженной форме, чем у животных контрольной группы и животных, получавших мазь «Вулнузан». В том числе, эпителизация, под влиянием мази минерал бишофит, наступала раньше, чем в двух других группах животных. Бактерицидная активность кожи (БАК) является одним из показателей естественных защитных сил организма. Она снижается при ухудшении общего физиологического состояния организма, вызванного нарушением питания, инфекционным заболеванием, лучевой болезнью, поражением нервной системы; и, наоборот, при условии повышения биологической сопротивляемости организма бактерицидные свойства кожи усиливаются (К. Лебедева, 1990). Опираясь на данные о том, что бишофит стимулирует фагоцитоз, оказы-. вает иммунотропное действие, находит применение при гнойничковых заболеваниях кожи (А. Спасов, 2003), было решено изучить его влияние на такой естественный защитный фактор, как БАК. Известно, что при ухудшении общего физиологического состояния организма, бактерицидная активность кожи снижается. Получив положительные ре- зультаты о благоприятном влиянии мази минерала бишофит на бактерицид-ность нормальной кожи, была предпринята попытка проверить, как измениться бактерицидность кожи при дефиците магния. Влияния мази минерала бишофит на бактерицидные свойства кожи крыс изучено по методу Н.Н. Клемпарской (1966). Метод заключается в нанесении на исследуемый участок кожи мазка суточной культуры кишечной палочки (штамм М-17), а затем снятия отпечатков на пластинки со средой Эндо. После суточной инкубации последних при 37 градусах учитывается количество выросших колоний и рассчитывается индекс бактерицидности кожи (ИБК). Эксперимент проводили на 20 беспородных белых крысах самцах массой 200-250 г. Животные были поделены на 2 группы: 1 -я группа - контроль; 2-я группа - животные, получавшие аппликации мази минерала бишофит; Исследуемую мазь наносили ежедневно в течение 7 дней на хорошо выстриженную боковую поверхность туловища животных.
На предметные стекла размером 2,5x2,5 наносили расплавленную среду Эндо толщиной в 1-2 мм и хранили их в стерильных чашках Петри в холодильнике не более 3 суток. На участки кожи ватным тампоном наносили тест-микроб (кишечная палочка) в разведении 1:100000. Сразу после нанесения тест-микроба, а также через 15 и 30 минут делали отпечатки опытного участка кожи на пластинки со средой Эндо, слегка прижимая их. Для предотвращения гибели тест-микроба от высыхания и прямого света, опыт-, ные участки кожи накрывались темной, непрозрачной пленкой. Пластинки с отпечатками помещали в чашки Петри агаровым слоем вверх и выдержи ва- ли при 37 С в течение 18-24 часов. Для увлажнения внутрь камеры клали влажную вату или фильтровальную бумагу. Для оценки БАК подсчитывали все окрашенные колонии на каждой пластинке и вычисляли индекс бактерицидности кожи (ИБК), т.е. процент микробных клеток (предполагается, что одна клетка образует одну колонию), погибших через 15 и 30 минут после нанесения взвеси тест-микроба. Расчет ИБК проводиться по формуле: ИБК = (1-K2/Ki)xl00, где ИБК - индекс бактерицидности кожи, Кг число колоний кишечной палочки на пластинке сразу после нанесения взвеси на кожу; К2-чило колоний через 15 или 30 минут. Изучение влияния мази минерала бишофит на бактерицидность кожи крыс с гипомагнеземией проводилось на 30 белых беспородных крысах самцах массой 200-250 г. Для моделирования гипомагнезиемии, животные получали специальную магнийдефицитную диету фирмы ICN Biomedicals Inc. (Aurora, Ohio, США) с 3,5% содержанием полиминеральной смеси AIN-76, из которой был полностью исключен Mg. Контрольные (интактные) животные получали полноценную диету, содержащую 0,84 г MgO, что соответствовало 0,5 г элементарного Mg на кг диеты. Скорость и глубину развития гипомагнезиемии контролировали, определяя концентрацию Mg в плазме и эритроцитах крови спектрофотометрическим методом по цветной реакции с титановым желтым (Меньшиков В.В., 1987). При снижении концентрации Mg ниже 1,4 ммоль/л в эритроцитах и ниже 0,7 ммоль/л в плазме считалось, что у животных развилась гипомагнезиемия средней тяжести. Животные были поделены на 3 группы: 1 -я группа - контроль; 2-я группа - животные с гипомагнеземией; 3-я группа - животные с гипомагнеземией, получавшие аппликации мази минерала бишофит. Исследуемая мазь наносилась ежедневно в течение 7 дней. Результаты проведенных исследований подвергнуты статистической обработке, достоверность различий оценивали с помощью критерия Стью-дента (Microsoft Excel).
Похожие диссертации на Экспериментальное исследование фармакологических свойств гидрофильных мазей минерала бишофит
![Экспериментальное исследование нефропротекторных свойств глицина [Электронный ресурс]](/i/i/4506/184806.png "Экспериментальное исследование нефропротекторных свойств глицина [Электронный ресурс] Селиванова Ольга Сергеевна")
