Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор 11
1.1. Современные представления о структурной организации щитовидной железы 11
1.2. Макро- и микроскопическая анатомия щитовидной железы 12
1.3. Биосинтез и метаболизм тиреоидных гормонов 13
1.4. Причины заболеваний щитовидной железы 16
1.5. Патогенез заболеваний щитовидной железы 18
1.6. Современные подходы к лечению заболеваний щитовидной железы 21
1.7. Фитотерапия заболеваний щитовидной железы 26
1.8. Экспериментальное моделирование патологии щитовидной железы у животных 33
Заключение по литературному обзору 39
Глава 2. Материалы и методы исследования 40
2.1. Материалы 40
2.2. Объекты исследования. 40
2.3. Описание методики, использованной для определения токсичности зюзника европейского травы экстракта и сока 41
2.4. Модели тиреоидной патологии 41
2.5. Дозы вводимых экстракта и сока травы зюзника европейского и сроки лечения 42
2.6. Описание методики, использованной для определения интегрированного действия лекарственной комбинации зюзника европейского травы экстракта сухого и тиреостатика мерказолила 43
2.7. Описание методоки, используемой для определения состояния центральной нервной системы крыс в условиях экспериментального тиреотоксикоза и введения зюзника европейского травы экстракта сухого 44
2.8. Описание методики, используемой для определения тиреоидного статуса организма экспериментальных животных 45
2.9. Описание методики морфологического анализа тканей щитовидной железы 45
2.10. Статистический анализ 47
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 48
3.1. моделирование экспериментальной патологии щитовидной железы 48
3.1.1. Модель экспериментального гипертиреоза 48
3.1.2. Модель экспериментального гипотиреоза 49
3.1.3. Разработка экспериментальной модели тиреотоксикоза и коллоидного зоба у крыс 50'
3.2. Изучение влияния экстракта и сока травы зюзника европейского на функциональную активность щитовидной железы на моделях гипо -гипертиреоза и тиреотоксикоза у крыс 58
3.2.1. Изучение влияния зюзника европейского травы сока на функциональную активность щитовидной железы в условиях гипо- гипер- и эутиреоза у крыс 58
3.2.2. Изучение дозозависимого влияния зюзника европейского травы экстракта сухого на функциональную активность щитовидной железы на разработанной модели экспериментального тиреотоксикоза у крыс 63
3.3. Изучение влияния зюзника европейского травы экстракта сухого на процессы восстановления функциональной активности щитовидной железы крыс с экспериментальным коллоидным зобом 67
3.3.1.Определение влияния зюзника европейского травы экстракта сухого в дозе 50 мг/кг на морфо-функциональное состояние 4 щитовидной железы крыс в условиях экспериментального коллоидного зоба 67
3.3.2. Определение влияния зюзника европейского травы экстракта сухого в дозе 250 мг/кг на морфо-функциональное состояние щитовидной железы крыс в условиях экспериментального коллоидного зоба 71
3.4. Исследование влияния разных доз зюзника европейского травы экстракта сухого на поведение крыс с экспериментальным тиреотоксикозом в тесте «открытое поле» 76
3.4.1. Особенности поведенческих реакций крыс в условиях модели экспериментального тиреотоксикоза 76
3.4.2. Влияние сухого экстракта травы зюзника европейского на поведение крыс в тесте «открытое поле» 78
3.5. Изучение тиреотропного эффекта зюзника европейского травы экстракта сухого в условиях сочетанного применения с тирестатиком мерказолилом...81
3.5.1. Влияние мерказолила на функциональную активность и структуру щитовидной железы в условиях экспериментального тиреотоксикоза у крыс 81
3.5.2. Изучение тиреотропного эффекта зюзника европейского травы экстракта сухого и мерказолила при их сочетанном введении крысам 88
Заключение 93
Выводы 95
Список литературы 96
- Макро- и микроскопическая анатомия щитовидной железы
- Описание методики, использованной для определения токсичности зюзника европейского травы экстракта и сока
- Описание методики, используемой для определения тиреоидного статуса организма экспериментальных животных
- Изучение влияния экстракта и сока травы зюзника европейского на функциональную активность щитовидной железы на моделях гипо -гипертиреоза и тиреотоксикоза у крыс
Введение к работе
Актуальность работы
Лечение и профилактика заболеваний щитовидной железы являются важными медико-социальными проблемами здравоохранения. Несмотря на значительные достижения в области тиреоидологии, численность пациентов с заболеваниями щитовидной железы ежегодно увеличивается. На сегодняшний день эта эндокринная патология признана самой распространенной в мире (Е.Н Hoogendoorn et al, 2006).
Дисфункция щитовидной железы приводит к тяжелым патологическим нарушениям работы других органов и систем человеческого организма. Наиболее частыми осложнениями тиреоидной патологии являются заболевания сердечно-сосудистой и нервной систем, а также изменения структуры щитовидной железы, ведущие к образованию различных форм зоба (В.В.Фадеев и др., 2005; R.F.Duyff et al, 2000; R. W. V. Flynn et al, 2005; С W.Siu et al, 2007; B.O.Asvold et al, 2007; S. Ovadia et al, 2007).
Все осложнения тиреоидной патологии приводят к снижению качества жизни пациентов и, как правило, требуют длительного и комплексного лечения. Основным и единственным существующим методом лечения гипотиреоза является пожизненная заместительная терапия тиреоидными гормонами. При гипертиреозе используют наряду с консервативной тиреостатической-терапией, хирургическое лечение и терапию радиоактивным йодом. Современные методы лечения заболеваний щитовидной железы не являются универсальными, поскольку наряду с достоинствами, имеют ряд недостатков, таких как частые рецидивы и риск осложнений гормональной и антитиреоидной терапии (J.Tajiri, 2004; D.S.Cooper, 2005; R.D. Chivu, 2006).
Поэтому, поиск новых эффективных и безопасных лекарственных средств для лечения заболеваний щитовидной железы является актуальной задачей современной фармакологии.
Лекарственные растения являются, на наш взгляд, наиболее перспективным источником биологически активных веществ тиреотропного действия. Целесообразность изучения в этом направлении лекарственных растений определяется широким спектром их фармакологической активности и, как правило, относительной безопасностью при длительном применении: Сочетанное применение лекарственных растений с гормонами и тиреостатиками дает возможность снизить их побочные эффекты, а также проводить коррекцию различных симптомов заболевания щитовидной железы.
В настоящее время фитотерапия в тиреоидологии ограничивается применением, главным образом, седативных растений (валериана, пустырник, мелисса и др.), которые в комплексной терапии способны устранять нарушения со стороны нервной системы. Использование йодсодержащих растений (ламинария, фукус и др.) необходимо только при недостатке йода в» организме больного. В тоже время, наибольший интерес для исследования представляют растения, способные, в первую очередь, оказывать влияние на функциональную активность и структуру щитовидной железы.
К таким растениям относится зюзник европейский Lycopus europaeus L., (семейство Губоцветные - Lamiaceae), вытяжки из которого проявляют выраженный тиреостатический эффект, сочетающийся со способностью снижать повышенное артериальное давление и устранять тахикардию (M.Aufmkolk et al, 1985; H.Winterhoff et al, 1994; C.Vonhoff et al, 2006). Анализ современного состояния вопроса показал отсутствие в литературе сведений об эффектах этого растения в< условиях гипотиреоза, о действии на структуру щитовидной железы при зобной патологии и на центральную нервную систему. В- связи с этим дальнейшее изучение специфической' тиреотропной активности зюзника европейского представляет теоретический и практический интерес для разработки нового лекарственного средства.
8 Цель и задачи исследования
Целью работы является изучение тиреотропных свойств экстрактов из зюзника европейского для разработки на их основе лекарственного препарата для лечения заболеваний щитовидной железы.
Для достижения поставленной цели в процессе исследования решали следующие задачи:
Разработать эффективную модель функциональной и структурной патологии щитовидной железы у крыс.
Изучить влияние зюзника европейского травы экстракта сухого и сока на уровень тиреоидных гормонов в условиях гипо- и гипертиреоза.
Изучить влияние зюзника европейского травы экстракта сухого на процессы восстановления функциональной активности щитовидной железы с экспериментальным коллоидным зобом.
Изучить поведение животных в тесте «открытое поле» в условиях экспериментального тиреотоксикоза и на фоне длительного введения зюзника европейского травы экстракта сухого.
Оценить тиреотропный эффект зюзника европейского травы экстракта сухого в условиях сочетанного применения с тиреостатиком мерказолилом.
Научная новизна исследования
Впервые установлено тиреотропное действие зюзника европейского травы сока и экстракта сухого на животных в условиях эутиреоза, экспериментального гипотиреоза, гипертиреоза и зобной патологии.
Выявлено влияние зюзника европейского травы экстракта сухого на состояние центральной нервной системы крыс в условиях экспериментального тиреотоксикоза.
Установлено потенцирующее действие зюзника европейского травы экстракта сухого на тиреостатический эффект мерказолила при их сочетанном применении.
Разработана модель экспериментального тиреотоксикоза на белых крысах, которая позволяет оценить влияние изучаемого лекарственного средства на функциональную активность щитовидной железы при избытке тиреоидных гормонов в крови, а также- на процессы восстановления структуры щитовидной железы при экспериментальном коллоидном зобе.
Теоретическая и практическая значимость работы
Настоящая работа является фрагментом комплексных исследований, проводимых в отделе экспериментальной и клинической фармакологии (руководитель - д.м.н. В.К.Колхир) Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН) (директор - академик РАМН и РАСХН В.А.Быков) по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2006-2010 гг.», задание 04.13. Разработка технологии производства высокоэффективных лечебных и профилактических препаратов из растительного сырья.
Результаты проведенных нами экспериментов по изучению тиреотропной активности зюзника европейского показали перспективность его использования с целью разработки лекарственного средства для лечения заболеваний щитовидной железы.
Результаты диссертационной работы вошли в основную часть материалов доклинического фармакологического досье для предоставления в Россздравнадзор РФ с целью регистрации препарата из зюзника европейского
травы экстракта сухого в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний щитовидной железы.
В Российское агентство по патентам и товарным знакам подана заявка №2007143562 от 27.11.2007 на изобретение «Способ моделирования тиреотоксикоза и коллоидного зоба». Разработанную экспериментальную модель тиреотоксикоза можно рекомендовать для использования в экспериментальной фармакологии с целью изучения тиреотропного действия лекарственных средств.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на расширенных заседаниях отдела экспериментальной и клинической фармакологии и заседании секции ученого совета ВИЛАР (Москва, 2006, 2007), Международном конгрессе «Традиционная медицина 2007» (Москва, 2007) и «Всероссийской научной конференции молодых эндокринологов» (Москва, 2007).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 5 работ.
Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, литературного обзора, материалов и методов исследования, собственных исследований, выводов и списка используемой литературы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц, 27 рисунков, 228 литературных ссылок, из которых 112 иностранных.
Макро- и микроскопическая анатомия щитовидной железы
Щитовидная железа снаружи покрыта фиброзной капсулой, от которой внутрь отходят тонкие прослойки, разделяющие железу на дольки. Архитектура щитовидной железы представлена фолликулами, которые считаются функциональной и анатомической единицей щитовидной железы. В последнее время появилось мнение о том, что элементарной анатомической структурой щитовидной железы следует считать не одиночный фолликул, а так называемую, сосудисто-функциональную единицу, состоящую из группы фолликулов, называемую тиреоном {О.К.Хмельницкий, 2002).
Диаметр фолликулов колеблется от 15 до 500 мкм и в литературе есть указания на то, что вариабельность размеров фолликулов, в определенной степени, связана с их функциональной активностью, и зависит от интенсивности кровоснабжения. Так, фолликулы центральной зоны каждой доли железы обильнее снабжаются кровью и более функционально активны, чем на периферии. Этот феномен описан как явление стратификации щитовидной железы (//.77. Федченко, 1986).
Стенки фолликулов состоят из одного слоя эпителиальных клеток (тироцитов), апикальная часть которых обращена в просвет фолликула, заполненного коллоидом. Тироциты считаются высокоспециализированными клетками, продуцирующими тиреоидные гормоны и эксперссирующими несколько генов, ответственных за синтез белков, необходимых для гормоногенеза (А. С. Gerard, 2002).
По наблюдениям специалистов, форма тироцитов зависит от их функциональной активности. Выделяют 3 типа клеток фолликулярного эпителия: уплощенный, кубический, призматический или цилиндрический. Уплощенные клетки относительно малоактивны и встречаются при патологиях связанных с пониженной функцией щитовидной железы. Тироциты кубической формы, характеризуют тиреоидную нормофункцию. В то время как преобразование кубического эпителия в цилиндрический является ведущим признаком тиреотоксикоза (П.Д. Дейвис, 2001).
Помимо фолликулярных клеток, щитовидная железа содержит С-клетки, или, как их иначе называют, - К-клетки или парафолликулярные клетки. С-клетки отличаются от фолликулярных клеток, как по эмбриогенезу, так и по выполняемой ими функции, которая заключается в выработке кальцитонина- основного гормонального фактора регуляции обмена кальция и фосфора в организме (Л.И. Браверманн, 2000).
В паренхиме щитовидной железы могут присутствовать также В-клетки, известные также как клетки Гюртле-Ашкенази, Ашкенази, оксифильные клетки или онкоциты, продуцирующие биогенные моноамины (серотонин). Присутствие их в ткани щитовидной железы многие исследователи расценивают как компенсаторное приспособление на клеточном уровне. В-клетки редко встречаются в нормальной ткани щитовидной железы и характерны для аутоиммунного тиреоидита, диффузного токсического зоба и доброкачественных и злокачественных опухолей (R.Zbucki et al, 2007).
Основной функцией клеток щитовидной железы является биосинтез и секреция тиреоидных гормонов. Это многоступенчатый процесс, который стимулируется, главным образом, ТТГ посредством ц-АМФ при участии инсулина (или ИФР-1) и системы, генерирующей перекись водорода. Как показывают исследования последних лет, участие в этом процессе принимает также иммунная система, обеспечивающая достаточную и соответствующую экспрессию генов, ответственных за синтез практически всех белков, участвующих в механизмах образования тиреоидных гормонов. {N.Caraccio et al, 2005).
Процесс биосинтеза тиреоидных гормонов складывается из четырех, относительно автономных, стадий: 1. Включение йода в щитовидную железу 2. Органификация йода и йодирование тирозина в тиреоглобулине 3. Процесс конденсации тирозиновых молекул 4. Высвобождение гормонов щитовидной железы Необходимым компонентом для синтеза тиреоидных гормонов является йод, который поступает в организм в виде органических и неорганических соединений с пищей и питьевой водой. По данным ВОЗ (2005), оптимальная суточная потребность человека в йоде составляет 150 мг, при поступлении йода ниже 100 мг/сутки развивается вначале гиперплазия, а затем нетоксический зоб щитовидной железы. В биосинтезе тиреоидных гормонов участвуют транспортные белки: Ка+Г-контранспортер обеспечивает поступление йода в клетку; пендрин, ответственный за переход йода из клетки в коллоид, а также натрий-йодный симпортер (НЙС) и апикальный йодный транспортер человека QiAIT), осуществляющие попадание йода в тироцит {A.M.Rodrigues et al, 2002).
Субстратом для синтеза гормонов является тиреоглобулин - крупный димерный белок, который участвует в синтезе тиреоидных гормонов, он состоит из 5498 аминокислот, 132 из которых представляют собой остатки тирозина. Исследования с использованием авторадиографии или электронной микроскопии позволили доказать, что йодирование тирозина осуществляется на границе между апикальной частью тироцита и коллоидом, содержащимся в просвете фолликула {А.Н. Смирнов, 2006).
Конечным продуктом йодирования тирозина является, образование монойодтиронина (МИТ) и дийодтиронина (ДИТ) вследствие присоединения окисленного под действием ТПО йодида к остатку тирозина.
В заключительной стадии биосинтеза тиреоидных гормонов образовавшиеся в процессе органификации йода МИТ и ДИТ под влиянием окислительных ферментов конденсируются с образованием биологически активных гормонов щитовидной железы: трийодтиронина - Т3 и тироксина- Т4. Тиреоидные гормоны представляют собой производные аминокислоты тирозина, для которых характерно наличие двух связанных простой эфирной связью фенольных колец и замещение в 3,5,3 (5 ) положениях йодом. При конденсации двух молекул ДИТ образуется Т4; если происходит конденсирование между молекулами МИТ и ДИТ - образуется Т3 (В. И. Кандрор, 1999; А.О.Поздняя, 2002).
Таким образом, по мере того, как на молекуле тиреоглобулина все остатки тирозина йодируются с последующим образованием тирозинов и тиронинов, она перемещается в просвет фолликула, где и происходит накопление «про запас». Большая часть фолликулов щитовидной железы предназначена для хранения тиреоглобулина, и количество в нем тиреоидных гормонов таково, что если полностью блокировать биосинтез тиреоидных гормонов, то запасов Т3 и Т4 будет вполне достаточно для поддержания эутироидного состояния более месяца. По этой причине, многими авторами щитовидная железа названа железой запаса (И.И. Дедов и др., 2000).
Биологическое действие тиреоидных гормонов более чем на 90% осуществляется за счет Т3, который в 4-5 раз активнее Т4. Применение радиоиммунологического метода позволило установить,, что около 80% циркулирующего в сыворотке крови Т3 является производным от Т4 вследствие его периферического монодейодировния, и только 20% Т3 сыворотки непосредственно образуются в щитовидной железе.
Описание методики, использованной для определения токсичности зюзника европейского травы экстракта и сока
Тиреотропный эффект сока изучали на моделях гипо- и гиперфункции щитовидной железы. Экспериментальный гипотиреоз воспроизводили путем ежедневного перорального введения мерказолила (Акрихин, Россия) в дозе 10 мг/кг (Л.Г. Чугунова и др., 2001). Для моделирования гипертиреоза экспериментальным животным ежедневно вводили per os препарат трийодтиронин (Берин-Хеми, Германия) в дозе 10 мг/кг (D.K. Sahoo et al, 2005). Моделирование обеих патологий проводили в течение 6 недель. После чего у животных определяли содержание тироидных гормонов в сыворотке крови, взятой из хвостовой вены. Эти показатели служили исходным фоном патологии. Действие зюзника экстракта на функциональную активность щитовидной железы изучали в условиях разработанной нами модели тиреотоксикоза, которую воспроизводили путем модификации описанных в литературе способов моделирования гипертиреоза с применением препаратов тиреоидных гормонов. Для этой цели использовали препарат тиреотом (Берин Хеми, Германия), содержащий комбинацию обоих тиреоидных гормонов: 40 мг левотироксина (Т4) и 10 мг лиотиронина (Т3). Тиреотом вводили экспериментальным животным ежедневного per os в еженедельно возрастающей дозе 25, 50, 100, 150, 200 мкг/кг. Препарат вводили крысам перорально в виде водной взвеси в течение 6 недель. После чего, с целью подтверждения патологии тиреотоксикоза, 10 крыс были забиты декапитацией, с взятием крови и выделением щитовидных желез. Контролем нормофункции щитовидной железы служили 10 интактных крыс, которые получали дистиллированную воду. У животных определяли содержание общих тиреоидных гормонов в сыворотке крови и проводили морфологический анализ щитовидной железы.
Сок вводили экспериментальным животным с гипо- и гипертиреозом перорально в дозе 5 мл/кг в течение 6 недель. Экстракт вводили крысам с экспериментальным тиреотоксикозом перорально в дозах 50 и 250 мг/кг в течение 4 недель. Соотношение доз экстракта и сока проводили по сухому остатку. При этом максимальная суточная доза экстракта, используемая в эксперименте (250 мг/кг), соответствовала вводимой крысам суточной дозе сока (5 мл/кг).
Для определения эффективности сочетанного применения зюзника экстракта с известным антитиреоидным препаратом группе из 10-ти экспериментальных животных вводили одновременно мерказолил (3 мг/кг) и экстракт в дозе 100 мг/кг. Контролем монотерапии мерказолилом служили 10 крыс, получавших тиреостатик в суточной терапевтической дозе, в пересчете для крыс, 3 мг/кг. Дозу мерказолила подбирали с учетом известных сведений о механизме действия и побочных эффектах этого лекарственного препарата (М.Д. Машковский, 2003). Использование такой дозы позволяет полностью воспроизвести характерные нарушения в тиреоидной системе (блокирование синтеза тиреоидных гормонов и гиперплазию щитовидной железы), и в тоже время, исключить вероятность развития собственных органотоксических эффектов мерказолила, развивающихся при использовании его в дозе превышающей 5 мг/кг (Л.Г. Чугунова и др., 2001).
Эксперимент продолжался в течение 4 недель. Контролем нормофункции щитовидной железы служили 10 интактных крыс, которые получали дистиллированную воду. У животных определяли содержание тиреоидных гормонов в сыворотке крови и проводили морфологический анализ тканей щитовидной железы.
Состояние центральной нервной системы крыс оценивали по поведенческим реакциям животных в «открытом поле». Для этой цели использовали модель открытого поля норкового типа, представляющего собой открытую площадку 60x60 см с 16 равномерно сделанными отверстиями диаметром 4 см и высотой 20 см {Е.С.Балынина, И.В.Березовская, 1976). Тестирование проводили в утреннее время, в промежутке между 10 и 12 часами. В работе использовали животных группами по 10 особей. Тест проводили дважды: по истечении 6 недель развития тиреотоксикоза и после четырехнедельного лечения экстрактом в дозах 50 и 250 мг/кг. Препарат тиреоидных гормонов и зюзника экстракт вводили экспериментальным, животным в день эксперимента за час до его начала.
В ходе эксперимента были использованы следующие поведенческие показатели: число пересеченных квадратиков (горизонтальная активность), стойки при опоре на 3-4 лапы (вертикальная активность) и число обследованных отверстий- «норок» (исследовательская активность). Квадратик считался пересеченным, если животное пересекало своим туловищем какую-либо из его границ. Под обследованием «норки» подразумевалось опускание какой-либо части мордочки животного в отверстие в полу камеры. Отдельно регистрировали также неспецифическое поведение животных - число болюсов дефекации, частоту актов груминга, напряжений хвоста и число проявлений стереотипии.
Наблюдение поведенческих реакций животных проводили в течение 3 минут. Для оценки функционального состояния щитовидной железы крыс использовали метод радиоиммунологического анализа (РИА), являющийся наиболее точным и специфичным. Для достоверной оценки тиреоидного статуса белых нелинейных крыс использовали методику, предложеную К.А. Прядко (2000).
Содержание общих тиреоидных гормонов (трийодтиронина - Т3 и тироксина -Т4) в сыворотке крови экспериментальных животных определяли с использованием наборов Total Т4 RIA KIT и Total Т3 RIA KIT фирмы Immunotech, Вектап (Чехия). Во флаконы с контрольными сыворотками последовательно вносили 20 мл калибровочных проб, контрольных и анализируемых образцов и 500 мкл метки для оценки общей активности " I. Реагенты инкубировали в течение 1 часа при 18-25 С и постоянном встряхивании ( 280 осц./мин.), после чего удаляли содержимое всех пробирок и измеряли общую активность I. Концентрацию гормонов рассчитывали методом интерполяции автоматически по калибровочной кривой на у-счетчике фирмы LKB (Швеция). Эксперимент проводили в испытательном лабораторном центре Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина {заведующий лабораторией - д.б.н., профессор, Н.П. Лысенко).
Описание методики, используемой для определения тиреоидного статуса организма экспериментальных животных
Для гистологического анализа обе доли щитовидной железы крыс сразу после отделения взвешивали на торсионных весах с определением абсолютной массы (в мг) с точностью до 0,01 г. и фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Гистологическую обработку проводили общепринятыми методами (Г.А. Меркулов, 1969). Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм готовили на микротоме Reichert (Австрия). Окраску образцов проводили по традиционной методике гемотоксилин-эозином (О.В. Волкова, Ю.К.Елецкий, 1971).
Для объективной оценки морфо-функционального состояния щитовидной железы использовали количественные методы анализа тканевых компонентов, в том числе разработанные для эндокринных органов (О.К.Хмельницкий, 1976, 2002; В.Л.Быков, 1975, 1979; К.Ташкэ, 1980; Г.Г. Автандшов, 1990).
Стереоскопическим методом точечного счета (Г.Г. Автандшов, 1990) с помощью компьютерной программы (Диаморф, Россия) на гистологических срезах определяли относительный объем тканевых компонентов щитовидной железы: фолликулярного эпителия, коллоида, интерфолликулярных островков, . десквамированных тироцитов, соединительной ткани, лейкоцитов и сосудистого русла.
С помошью окуляр-микрометра определяли параметры фолликулов щитовидной железы: высоту фолликулярного эпителия, площадь ядер тироцитов, диаметр фолликулов. Произведен подсчет доли (%) фолликулов разных размеров в общей выборке. В вариационном ряду диаметров принимали за мелкие - фолликулы до 50 мкм, средние - до 100 мкм и крупные - свыше 100 мкм. В 50 полях зрения проводили не менее 100 измерений в 40 фолликулах каждого образца, всего проводили не менее 400 измерений каждого показателя. Гистологические препараты анализировали под микроскопом Carl zeiss (Германия) при общем увеличении 12,5x10, площадь ядер тироцитов измерялась , при увеличении 25x10. Микрофотографии щитовидной железы получали с помощью компьютерной системы состоящей из светового микроскопа Carl zeiss (Германия), цветной видеокамеры Mintron (Тайвань) и компьютера. Гистологический анализ ткани щитовидной железы проводили на базе кафедры гистологии ММА им. Сеченова (заведующий кафедрой - д.м.н., профессор С. Л. Кузнецов).
Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ статистического анализа Statistica 6,0 (StatSoft, США). Использовались критерий Манна-Уитни для сравнения независимых выборок, тест Вилкоксона для сравнения связанных выборок. Для оценки значимости отличий между выборками с распределением, приближающимся к нормальному, использовался t-критерий Стьюдента. Группой сравнения являлись интактные животные. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05.
Данные в тексте и таблицах представлены в виде Me [25;75] (где Ме-медиана; 25 и 75 - 1-й и 3-й квартили) или M±SD (где М- средняя арифметическая, a SD — среднеквадратическое отклонение). обозначаются статистически значимые отличия групп (сравнение проводили со значением показателей у интактных животных), «модель» — обозначается разработанная модель тиреотоксикоза и коллоидного зоба.
С целью изучения тиреотропного действия зюзника сока в условиях повышенной функции щитовидной железы нами была воспроизведена модель экспериментального гипертиреоза у крыс. Для этого подопытным животным ежедневно вводили синтетический препарат трийодтиронина в суточной дозе 10 мг/кг. Согласно результатам радиоиммунологического анализа при данном способе моделирования тиреоидной гиперфункции уровень Т4 в сыворотке крови экспериментальных животных повысился и составил 69,08 [46,46; 90,01] нмоль/л (у интактных - 49,88 [26,46; 55,63] нмоль/л), в то время как содержание Т3 было приближено к норме (таб. 2).
Отмечена также значительная потеря массы тела у крыс этой группы, о чем свидетельствует также статистическая значимость отличий этого показателя у крыс с тиреотоксикозом от интактных животных (р 0,05) .
Таким образом, воспроизведена экспериментальная модель тиреоидной гиперфункции, характеризующаяся повышением уровня тироксина в сыворотке крови и значительной потерей массы тела крыс. 3.1.2. Модель экспериментального гипотиреоза
С целью изучения влияния зюзника сока на функциональную активность щитовидной железы в условиях недостатка в крови тиреоидных гормонов нами была воспроизведена модель экспериментального гипотиреоза. Как показывают результаты радиоиммунологического анализа, шестинедельное введение крысам мерказолила в дозе 10 мг/кг приводило к снижению содержания обоих тиреоидных гормонов в сыворотке крови крыс. При этом уровень Т4 достигал 19,89 [18,72;23,26] нмоль/л (в норме - 49,88 [26,46; 55,63] нмоль/л), а концентрация Т3 - 0,53[0,41 ;0,55] нмоль/л (в норме -0,75 [0,57; 0,85] нмоль/л), различия с группой интактных животных было статистически значимым на уровне значимости р 0,05. При этом значительного изменения массы тела крыс при введении мерказолила не отмечено (таб.2). Таким образом, воспроизведена экспериментальная модель гипофункции щитовидной железы, о чем свидетельствует значительное понижение в сыворотке крови крыс обоих тиреоидных гормонов.
Изучение влияния экстракта и сока травы зюзника европейского на функциональную активность щитовидной железы на моделях гипо -гипертиреоза и тиреотоксикоза у крыс
С целью определения характера влияния сока на функциональную активность щитовидной железы в условиях избытка тиреоидных гормонов в сыворотке крови крыс нами был изучен тиреоидный статус экспериментальных животных с моделированным гипертиреозом. Как показали результаты проведенного исследования, сок оказывал действие на процесс восстановления функциональной активности щитовидной железы крыс, ранее подвергшихся влиянию избытка трийодтиронина. Как известно, Т4 производится только щитовидной железой и значение этого показателя достоверно характеризует тиреоидную гормон-продуцирующую функцию. В тоже время Т3 на 80% образуется в результате дейодирования в периферических органах и в большей степени подвержен влиянию нетиреоидных факторов {М.И.Балаболкин и др., 2007).
Следует отметить, что у крыс, получавших зюзника сок, значение индекса дейодирования было значительно ниже нормы (0,012±0,00730 против 0,019±0,0109 у интактных животных), что указывает на снижение конверсии Т4 в Т3.
Поскольку в данном случае терапевтическое действие сока оценивалось после длительного введения трийодтиронина, можно предположить, что повышение уровня Т4 и снижение Т3 в сыворотке крови экспериментальных животных связано с подавление процесса периферического дейодирования тиреоидных гормонов и является реакцией на интоксикацию организма избытком Тз. Известно, что превращение (конверсия) Т4 в Т3 катализируется различными дейодиназами, обладающими как субстратной, так и тканевой специфичностью, однако особенно активно этот процесс происходит в гипоталамусе, гипофизе и печени. В настоящее время дейодирование считается важным механизмом, посредством которого организм регулирует количество активного гормона, поскольку Т3 гораздо активнее Т4 {A. L.Maia et al, 2005). Таким образом, установлено, что в условиях экспериментального гипертиреоза зюзника европейского травы сок восстанавливает тиреоидный статус организма за счет угнетения периферической конверсии тиреоидных гормонов. С целью определения тиреотропной активности экстрактов зюзника европейского в условиях недостатка в крови тиреоидных гормонов нами был изучен тиреоидный статус крыс с экспериментальным гипотиреозом.
Согласно результатам радиоиммунологическо анализа шестинедельное введение крысам сока в условиях недостатка тиреоидных гормонов в сыворотке крови, приводило к повышению тиреоидного статуса организма. Так, уровень Т4 составлял 52,20 [42,94; 84,30] нмоль/л (в норме 49,88 [26,46; 55,63] нмоль/л), а Т3 1,25[1,03;1,50] нмоль/л (0,75 [0,57; 0,85] нмоль/л) (р 0,05). Индекс дейодирования в этом случае соответствовал норме (таб. 5). Такая клиническая картина достоверно характеризует повышение функциональной активности щитовидной железы у крыс этой группы. Таким образом, зюзника травы сок повышает функциональную активность щитовидной железы крыс в условиях экспериментального гипотиреоза. С целью определения характера тиреотропного действия экстрактов зюзника европейского при эутиреозе нами было изучено влияние сока на тиреоидную гормонпродуцирующую функцию крыс при отсутствии функциональной патологии щитовидной железы.
Анализ результатов радиоиммунологического анализа показал тенденцию к повышению функциональной активности щитовидной железы здоровых крыс, получавших зюзника сок. Так, содержание Т4 составляло 56,76 [35,75; 80,85] нмоль/л, а Т3 1,01 [0,91; 1,35] нмоль/л, что выше уровня этих гормонов в сыворотке крови интактных животных. При этом значение индекса дейодирования у животных этой группы было несколько выше нормы (таб.5).
Таким образом, зюзника европейского травы сок повышает функциональную активность щитовидной железы эутиреоидных крыс. Следует отметить, что согласно литературным данным извлечения из травы зюзника европейского снижают уровень тиреоидных гормонов в крови при гипертиреозе (M.Aufmkolk et al, 1985; H. Winterhoff et al, 1994). Однако данные о терапевтической эффективности экстрактов этого растения в условиях гипофункции щитовидной железы в литературе не описаны. В тоже время известно, что патологическое состояние организма, в силу своей природы, вносит существенные количественные и качественные изменения в фармакологический эффект вводимого лекарственного средства (В.Петков, 1974). Экспериментальная и клиническая фармакология могут предоставить множество фактов, указывающих на то, что изменение реакции организма в условиях патологии вполне закономерно, также как и изменение характера фармакологического действия лекарственного средства в условиях той или иной патологии. Так, еще в исследованиях Н.З. Изгина (1968) и Й. Иларионова (1967) было установлено, что экспериментально вызванные изменения в функциональном состоянии щитовидной железы оказывают существенное, влияние на эффект некоторых испытуемых гипо- и гипертензивных лекарственных препаратов. Авторы показали, что в условиях функционального гипертиреоза у кошек растительный гипотензивный препарат гермелон проявлял гипертензивный эффект почти в половине проведенных опытов. При этом авторы отмечают отсутствие подобной реакции в контроле. А при изучении эффектов гексаметония у крыс с экспериментальным гипертиреозом наблюдалось уменьшение гипотензивного эффекта препарата.
В таком случае, очевидно, что если организм способен к саморегуляции в широко варьирующих условиях, то характер тиреотропного действия зюзника европейского травы экстрактов может быть обусловлен изменением реактивности организма после экспериментального стимулирования или подавления функции щитовидной железы.
