Введение к работе
з
Актуальность проблемы. Постоянство внутренней среды - важнейшее условие жизнедеятельности организма. Одним из главных звеньев системы го-меостаза является цитохром-Р450-зависимая монооксигеназная система (МОС), контролирующая уровень липофильных регуляторов основных физиологических процессов (гормоны, жирные кислоты, витамины A, D, простагландины, лейкотриены, биогенные амины) и обезвреживающая множество экзогенных субстратов (WaxmanD.J., 1999).
В ходе эволюции МОС приобрела способность реагировать на изменения внешней и внутренней среды модуляцией своей активности. Благодаря индуци-бельности и уник&тьному свойству перекрестной субстратной специфичности цитохромов Р450 (Р450) МОС обеспечивает быструю инактивацию агрессивных эндогенных биологически активных веществ, эндотоксинов и ксенобиотиков (Щербаков В.М., Тихонов А.В., 1995).
Однако большинство патологических процессов сопряжено с депрессией Р450 (Watanabe М., 1998; Blounin R.A. et al., 1999; Farrel G., 1999), что имеет следствием снижение резистентности к воздействию экзо- и эндотоксикаптов, дисфункцию гуморальных регуляторных механизмов и, в конечном счете, усугубление патологических нарушений (Грек О.Р. и соавт., 1999; Матюшин Б.Н. и соавт., 1997; Watanabe М., 1998). В подобных ситуациях патогенетически обоснованной является фармакологическая стимуляция МОС (Новожеева Т.П., 1993). Ферментиндуцирующей активностью обладают многие лекарственные препараты, однако в клинической практике реально применяют лишь индукторы фенобарбіггалового типа: фенобарбитал, бензонал и реже кордиамин, который существенно уступает барбитуратам (Наджимутдинов К.Н. и соавт., 1992; Заводних Л.Б. и соавт., 1993; Вушма М.И. и соавт., 1999). Применение индукторов иных типов (глюкокортикоидного, метилхолантренового, пероксисомпро-лифераторного и этанольного) ограничено или невозможно из-за высокой токсичности, сопутствующей нежелательной биологической активности или способности активировать токсикофицируюпще изоформы Р450 (Лукиенко П.И. и соавт., 1995; Denison M.S., Whitlock J.P., 1995).
Ограниченность выбора эффективных модуляторов МОС, с одной стороны, и наличие у них ряда серьезных побочных эффектов, с другой, обосновывает актуальность и важность поиска новых безопасных индукторов Р450.
В результате исследований по синтезу и изучению новых производных
азолов и ксантина в Башкирском государственном медицинском университете разработан новый индуктор МОС дигидрогиазолоксантин, получивший рабочее название гепазан.
Как показано сравнительными исследованиями, по ряду фармакологических характеристик гепазан существенно превосходит применяемый в клинике референтный индуктор бензонал (Алехин Е.К. и соавт., 1999). Выраженная активация Р450, отсутствие бимодальное эффекта в совокупности с высоким терапевтическим индексом позволяют рассматривать гепазан как перспективный оригинальный стимулятор МОС, требующий, однако, углубленного анализа влияния на систему Р450, дальнейшего изучения фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности.
Цель исследования. Охарактеризовать изоферментный профиль МОС-индуцирующего эффекта дигидротиазолоксантина гепазана и экспериментально обосновать его применение в условиях патологии, сопряженной с синдромом снижения детоксицирующей функции печени.
Задачи исследования.
-
Изучить влияние гепазана на содержание цитохромов Р450 и Ь5 в мик-росомальной фракции гепатоцитов.
-
Исследовать эффект индуктора на активность NADPH-цитохром Р450-редуктазы.
-
Определить иммуноспецифичность микросомальных гемопротеидов, индуцируемых гепазаном.
-
Охарактеризовать цитохром Р450-индуцирующий эффект гепазана по влиянию на каталитическую активность основных изоэнзимов.
-
Оценить МОС-корригирующий эффект индуктора при остром токсическом гепатите.
-
Исследовать эффективность гепазана как индуктора МОС при обратимом подпеченочном и внутрипеченочном холестазах.
-
Экспериментально обосновать применение гепазана при гемолитической викасоловой пшербилирубинемии новорожденных крысят.
Научная новизна
Впервые изучено влияние дигадротиазолоксантина гепазана на содержание цитохромов Р450, Ь5 и активность NADPH-цитохром Р450-редуктазы в печени лабораторных животных.
С помощью иммунохимических и биохимических методов исследования
впервые дана характеристика изоферментного профиля Р450-индуцирующего эффекта гепазана. Показано, что он является индуктором фенобарбиталового типа: подобно барбитуратам гепазан выраженно стимулирует каталитическую активность CYP2B1 и CYP3A1, незначительно повышает катализ CYP1А1 и не влияет на активность CYP2E1 и СУР1А2.
Получены данные о высокой МОС-корригирующей активности гепазана при остром тетрахлорметановом токсическом гепатите, обратимом подпече-ночном и внутрипеченочном холестазе. Показана высокая эффективность перинатальной профилактики гепазаном гемолитической гипербилирубинемии новорожденных крысят.
Дана сравнительная; характеристика лечебного и профилактического эффекта гепазана с эталонным индуктором МОС бензоналом.
Научно-практическая значимость работы.
Впервые изучено влияние нового индуктора монооксигеназной системы гепазана на изоформы цитохромов Р450; установлен фенобарбиталовый тип индукции. Характеристика изоферментного профшга действия обеспечивает возможность направленного поиска сфер клинического использования гепазана.
Получены экспериментальные данные о высокой эффективности гепазана как средства активации систем детоксикации на фоне патологии, сопряженной с депрессией МОС. Обоснована перспективность дальнейшего изучения гепазана в этом качестве. Результаты работы являются основой материалов доклинических испытаний потенциального лекарственного средства «гепазан».
Положения, выносимые на защиту.
-
Дигидротиазолоксанпш гепазан - новый оригинальньш индуктор МОС фенобарбиталового типа, отличающийся от эталонного стимулятора фенобарбитала отсутствием активации CYP1А2 и влияния на цешральную нервную систему.
-
При остром токсическом тетрахлорметановом гепатите гепазан сопоставимо с бензоналом увеличивает содержание цитохромов Р450 и Ь5 в микросо-мальной фракции гепатоцитов.
-
Гепазан достоверно повышает содержание и каталитическую активность цитохромов Р450 и Ь5 при синдроме холестаза и отличается от бензонала стабильным защитным эффектом.
-
Перинатальное профилактическое введение гепазана предупреждает развитие викасоловой гипербилирубинемии новорожденных.
Апробация работы.
Основные положения диссертации доложены на 63-й, 65-й и 66-й конференциях молодых ученых БГМУ (Уфа, 1998-2000), V международном Симпозиуме, VI Чуйской научно-практической конференции, посвященных 10-летию НИИКиЭЛ СО РАМН и 65-летию проф. Э.Х.Акрамова «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма» (Чолдан-Ата, 2001); ГХ Всероссийском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002).
Публикации.По теме диссертации опубликовано 9 работ, получены 2 патента на изобретение.
Объем и структура диссертации.
Диссертация объемом 155 страниц иллюстрирована 18 рисунками, содержит 14 таблиц, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 161 отечественных и 209 зарубежных источников литературы.
Похожие диссертации на Изоферментный профиль действия и активность нового индуктора ионоокснгеназнои системы печени гепазана при некоторых патологических состояниях
