Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Гепатопротекторы и их характеристика 12
1.2. Биологически активные вещества березы белоствольной 27
1.3. Фармакологическая характеристика тритерпеноидов лупановой группы 31
Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1. Описание исследуемых соединений 38
2.2. Методы исследований 40
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
3.1. Острая токсичность производных тритерпеноидов лупановой группы и их связь с химическим строением 51
3.2. Желчегонная активность тритерпеноидов лупановой группы у крыс 52
3.3. Гепатопротекторная активность 3,28-ди-О-никотината и 3,28 ди-О-гемифталата бетулина при поражении печени различной этиологии у крыс
3.3.1. Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на функциональное состояние печени крыс при токсическом гепатите, вызванном тетрахлометаном 57
3.3.2. Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на функциональное состояние печени крыс при поражении печени парацетамолом 62
3.3.3. Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на функциональное состояние печени крыс при остром поражении печени этанолом 66
3.4. Антиоксидантные свойства 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди- О-гемифталата бетулина при патологии печени крыс различной этиологии 72
3.5. Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на уровень адениловых нуклеотидов в печени крыс при тетрахлорметановом гепатите 75
3.6. Фармакологические свойства 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина
3.6.1. Противоязвенная активность тритерпеноидов лупановой группы у крыс при профилактическом и лечебном введении 83
3.6.2. Противовоспалительная активность тритерпеноидов лупановой группы 88
3.6.3. Действие 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на репаративную регенерацию кожи у крыс 92
3.6.4. Иммуномодулирующее действие 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина 95
3.6.5. Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на фагоцитирующую способность лимфоцитов у крыс 98
3.6.6. Влияние 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на продолжительность жизни животных при облучении 100
3.6.7. Субхроническая токсичность 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди- О-гемифталата бетулина на крысах 103
Глава 4. Заключение 114
Выводы 122
Список литературы 125
Приложение 149
- Гепатопротекторы и их характеристика
- Желчегонная активность тритерпеноидов лупановой группы у крыс
- Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на уровень адениловых нуклеотидов в печени крыс при тетрахлорметановом гепатите
- Субхроническая токсичность 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди- О-гемифталата бетулина на крысах
Введение к работе
Актуальность проблемы. Высокий уровень заболеваемости населения вирусными гепатитами, многообразие токсических, лекарственных и аллергических поражений, органов гепатобилиарной системы требует эффективной медикаментозной терапии. В терапии заболеваний печени для фармакологической коррекции используют значительное количество лекарственньж средств, влияющих на процессы тканевого обмена, повышающих дезинтоксикационную функцию печени, а также желчегонные средства, противовирусные и антимикробные препараты, иммуномодуляторы, ингибиторы и индукторы микросомальных систем, гепатопротекторы и антиоксиданты (Подымова С.Д., 1984; Машковский М.Д., 1987; Машковский М.Д., 2000).
Поступление в организм ксенобиотиков различной природы усиливает свободнорадикальные процессы и обусловленное ими перекисное окисление липидов. Усиление перекисного окисления липидов сопровождается нарушением структуры мембран гепатоцитов и угнетением функционального состояния печени (Венгеровский А.И., 1996). Развитие повреждений гепатобилиарной системы приводит к расстройствам микроциркуляции, иммунных механизмов и аллергических состояний (Николаев СМ., 1992; Сибиряк СВ., 2003), поэтому необходимость изучения фармакологических средств, эффективно корригирующих биохимические функции печени и иммунологическую реактивность организма, нарушенные экотоксикантами, остается актуальной проблемой (Алексеева И.Н. и др., 1991). В настоящее время известно достаточно много препаратов, которые, обладая определенным положительным воздействием, тем не менее, проявляют серьезные побочные эффекты. К тому же, большинство применяемых в России лекарственных средств дорогостоящие. Достаточно новой областью исследований является поиск высокоэффективных гепатопротекторов среди тритерпеновьж соединений, в частности, группы лупана, основным источником которых служит кора белоствольных берез. Препараты из березы издавна применяли в народной медицине при лечении воспалений, дерматитов, желудочно-кишечных заболеваний, как мочегонные и желчегонные средства (Пастушенков Л.В., 1990; Соколов СЯ., 1991). В последние годы у лупановых
рос национальная!
| БИБЛИОТЕКА 3
I СПетер6»рг /-//»
тритерпеноидов обнаружены ранозаживляющая, противовоспалительная, антибактериальная, гиполипидемическая и другие виды активности. Бетулиновая кислота обладает способностью селективно ингибировать рост опухолевых клеток путем индукции апоптоза и проходит предклинические испытания в США для лечения и профилактики меланомы. 3-0-(3',3,-Диметилсукцинил)-бетулиновая кислота, запатентованная фирмой Panacos Pharmaceuticals, находится на стадии предклинических исследований в качестве противовирусного средства. Однако практически неизученными аспектами оставались биохимические механизмы гепатопротекторной активности, иммуностимулирующие и антиоксидантные свойства тритерпеновых соединений группы лупана.
Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Института органической химии УНЦ РАН по темам: "Синтез биологически активных веществ на основе растительных терпеноидов" (№ гос. регистрации 01.99.00 11836) и "Изучение биологической активности природных соединений" (№ гос. регистрации 01.20.00 13591).
Целью работы является изучение биохимических механизмов гепатопротекторного действия тритерпеноидов лупановой группы и исследование ряда их фармакологических свойств.
Задачи исследования
1. Изучить биохимические механизмы гепатопротекторного действия
производных тритерпеновых соединений лупановой группы при поражениях
печени крыс различной этиологии в сравнении с официнальными препаратами.
2. Оценить состояние системы адениловых нуклеотидов в печени крыс при
тетрахлорметановой интоксикации на фоне введения исследуемых соединений.
3. Изучить влияние тритерпеновых соединений лупановой группы на содержание
окисленных и восстановленных форм никотинамидадениндинуклеотидов.
4. Исследовать фармакологические свойства производных бетулина:
антиоксидантные, противоязвенные, противовоспалительные, ранозаживляющие и
радиопротекторные. Изучить иммуномодулирующее действие тритерпеноидов
лупановой группы и влияние на фагоцитарную активность лимфоцитов у крыс.
5. Определить острую и субхроническую токсичности тритерпеновых соединений лупановой группы на крысах.
Научная новизна и практическая значимость. Впервые исследованы
биохимические механизмы гепатопротекторной активности при
экспериментальных поражениях печени крыс у 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина, наиболее перспективных, соединений, отобранных в результате биоскрининга 20 новых производных лупановых тритерпеноидов. Изучено влияние данных соединений на состояние, систем адениловых нуклеотидов и никотинамидных коферментов. Обнаружены антиоксидантные, противовоспалительные,, гастрозащитные, ранозаживляющие, радиопротекторные свойства. Впервые показано иммуностимулирующее действие тритерпеноидов группы лупана, а также, их влияние на фагоцитирующую способность лимфоцитов. Установлена низкая токсичность эфиров бетулина.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на V
Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 1998);
Международной научной конференции «Органический синтез и комбинаторная химия» (Москва-Звенигород, 1999); Всероссийской Научной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (С-Пб., 1999); Международной конференции «Поиск, разработка и внедрение новых лекарственнх средств и организационных форм фармацевтической деятельности» (Томск, 2000); Информационном бюллетене «Экспериментальная и клиническая фармакология» (Пермь, 2000); VI Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2002); II Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Казань, 2002).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 статей в центральной печати, 7 тезисов, получен 1 патент.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, в которой приводятся методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, заключение, выводы, а также списка литературы, включающего 212 источников, из них 115 отечественных и 97 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 152 страницах с использованием
Гепатопротекторы и их характеристика
В последние годы выяснена роль отрицательного действия на печень ряда лекарственных средств и других экотоксикантов, гепатотоксичность которых резко возрастает в процессе биотрансформации в связи с образованием весьма активных метаболитов. Установлено, что отравление ксенобиотиками и накапливаемыми в организме метаболитами гормонов, белков вызывает интоксикацию и способствует увеличению интенсивности ПОЛ [102]. Токсические вещества в процессе метаболизма проходят несколько этапов. При участии различных подтипов цитохрома Р-450, входящих в состав микросомальных окислительных ферментов, происходит биотрансформация липофильных ксенобиотиков; конъюгация метаболитов и гидрофильных соединений, осуществляемая с помощью глюкуронил- и глутатион-Э-трансфераз; антиоксидантная защита, объединяющая антирадикальные механизмы [66, 102]. Результатом ферментной активности цитохромоксидаз с образованием токсичных метаболитов является конъюгация трансфераз с участием восстановленного глутатиона через систему элементов НАДФ-Н. Глутатион, компонент антиоксидантной защиты, предупреждает избыточное образование перекисей липидов при индукции экотоксикантами цитохром Р-450-зависимых оксидаз. Интоксикация приводит к усилению процессов пероксидации, нарушению структуры и функции белков, липидов, ДНК, повреждению биомембран, цитотоксическому эффекту и отравлению организма [107].
Цитохромоксидазы восстанавливают кислород с образованием воды, тогда как оксигеназный путь использования кислорода приводит к возникновению активных форм кислорода: 02, Н202, НО. Образование свободного кислорода происходит вследствие различных патологических процессов при нарушении функций антиоксидантной системы [102, 107]. Кислородные радикалы вступают в реакции с ненасыщенными жирно-кислотными остатками фосфолипидов мембран, активизируя процессы ПОЛ с образованием жирно-кислотных радикалов, приводящие к встраиванию кислорода в молекулы липидов и возникновению гидроперекисей.
Накопление гидроперекисей фосфолипидов характеризуется следующими процессами [107]:
1. Умеренная активация ПОЛ, вовлекающая до 5% мембранных фосфолипидов, приводит лишь к росту подвижности полипептидной цепи и ферментной активности. При усилении пероксидации количество непредельных фосфолипидов уменьшается, что ограничивает функционирование энзимов, рецепторов и пептидов, в результате чего их активность ингибируется.
2. Накопление окисленных фосфолипидов образует перекисные кластеры, вследствие чего возникают каналы проницаемости для ионов, в частности, Са . Дальнейшее усиление ПОЛ ведет к фрагментации мембран.
3. Происходит инактивация белков из-за образования межмолекулярных связей между №Ї2-группами белков мембраны и продуктами распада гидроперекисей фосфолипидов.
4. Активация ПОЛ неизбежно ведет к окислению SH-групп белков мембран.
К крайним проявлениям избыточного переокисления относят нарушения окислительного фосфорилирования в митохондриях и реакции гидроксилирования в мембранах эндоплазматического ретикулума. Это, несомненно, приводит к гибели клеток [41].
Исследованиями Ленинджера показано, что изменения проницаемости мембран митохондрий для внемитохондриальных метаболитов и внутримитохондриального АТФ зависит от соотношения АТФ/АДФ. При высоком отношении АТФ/АДФ митохондрии находятся в сокращенном состоянии, характеризующимся плохой проницаемостью; при снижении концентрации внешней АТФ происходит выход его из митохондрий и проницаемость для субстратов возрастает, что ведет к стимуляции окислительных процессов и образованию АТФ [55]. Эти представления позволяют рассматривать механизмы токсичности ксенобиотиков по их способности влиять на образование свободных радикалов и интенсивность перекисного окисления липидов в патогенезе различных отравлений.
Одним из наиболее изученных гепатотропных ядов считается тетрахлорметан. Отравление ССЦ является эталоном экспериментального поражения печени, модулирующего острый инфекционный и токсический гепатиты [54]. Введение даже малых доз этого яда вызывает значительные морфологические изменения в клетках печени в виде ее некроза и жировой дистрофии [183], что ведет к снижению функций эндоплазматического ретикулума, белоксинтезирующих систем и накоплению триглециридов [50, 181]. В основе представлений о механизме действия тетрахлорметана лежит реакция распада по схеме: ССІ ССІз + СІ . По-видимому, растворяясь в эндоплазматической сети, тетрахлорметан связывается с цитохромом Р-450, гемовое железо которого является источником для гомолитического распада ССІ4. Образование радикала СС13 служит пусковым механизмом гепатотоксичности [5]. Имеет место и процесс ковалентного связывания свободных радикалов тетрахлорметана с различными макромолекулами гепатоцитов, что ведет к нарушению структуры и функции мембран клеток [6].
Способностью проникать через клеточную мембрану и изменять функции липидных компонентов и белков, которые контролируют уровень и активность внутриклеточных вторичных посредников (аденилатциклазы, фосфолипазы С, ионов кальция), обладает этиловый спирт. Элиминация этанола протекает в печени и включает три этапа: 1 — окисление в цитозоле гепатоцитов с помощью специфического фермента алкогольдегидрогеназы (АДГ) в присутствии НАД до ацетальдегида; 2 - окисление с помощью неспецифической микросомальной этанолокисляющей системы печени с участием цитохрома Р-450; 3 - окисление с помощью каталазы, оксидаз и пероксидаз тканей. Завершающим этапом биотрансформации ацетальдегида является его превращение под влиянием ацетальдегиддегидрогеназы в ацетат, который при участии ацетил-КоА окисляется до углекислого газа и воды [ИЗ]. Накопление ацетальдегида неизбежно приводит к ингибированию глюконеогенеза и гликолиза, следствием чего является гипогликемия. В этих условиях истощаются углеводные запасы, нарушаются энергетические процессы, понижая содержание АТФ и несколько повышая при этом уровень АМФ и цАМФ. Снижение уровня АТФ, в свою очередь, способствует снижению активности гексокиназы и глюкогеназы, при котором наблюдается торможение цикла Кребса [76].
Биотрансформацию ксенобиотиков с образованием высокореактивных метаболитов и свободных радикалов в печени, можно считать общим для всех экотоксикантов, хотя необходимо учитывать специфичность каждого реагента.
Гепатотоксическим эффектом обладают многие лекарственные препараты: антибиотики, парацетамол, противотуберкулезные средства, цитостатики. Парацетамол (ацетаминофен) является распространенным в медицине анальгетиком. Несмотря на то, что он считается одним из безопасных препаратов, при передозировке парацетамола могут возникнуть серьезные поражения печени [82, 120, 174]. Большая часть ацетаминофена конъюгируется в печени в нетоксичные глюкурониды, сульфаты и другие метаболиты, которые выделяются с желчью и почками [143, 207]. Установлено, что небольшое количество парацетамола связывается с цитохромом Р-450 с последующим гидроксилированием и образованием химически активных метаболитов [170, 179]. При передозировке парацетамола образование токсических метаболитов усиливается, что ведет к истощению запасов восстановленного глутатиона [199, 203]. Основной продукт распада препарата - N-оксипарацетамол и N-ацетил-п-бензохинонимин обладают цитотоксическими свойствами, что проявляется в повышении проницаемости мембран гепатоцитов [44, 146], нарушении синтеза ДНК [137], увеличении освобождения лактатдегидрогеназы [118, 187]. Эти изменения в печени связаны со способностью метаболитов парацетамола активизировать перекисное окисление липидов в гепатоцитах.
При повреждении гепатобилиарной системы большое значение отводится расстройствам микроциркуляции, иммунным механизмам и аллергическим состояниям [70, 90]. Любая патология является причиной или следствием иммунологических нарушений, которые способствуют ухудшению основного заболевания и его осложнениям [2]. Структурно-функциональные нарушения в иммунной системе, которые проявляются в виде дисбаланса между Т- и В-системами иммунитета и образованием аутоантител против клеток печени, характерны для хронических вирусных гепатитов В и С [1]. Наряду с этим, поражение печени, индуцированное вирусом или токсическими факторами, сопровождается развитием цитолитических, холестатических и гепатодепрессивных биохимических синдромов, а также нарушением депонирования и метаболизма [49].
Желчегонная активность тритерпеноидов лупановой группы у крыс
Нами осуществлен биоскрининг 14 соединений, тритерпеноидов лупановои группы, который позволил выявить и предложить для полного и целенаправленного изучения фармакологических свойств несколько новых эффективных средств, которые могут быть рекомендованы для лечения заболеваний гепатобилиарной системы и желчевыводящих путей - 3,28-ди-О-никотинат бетулина 6 и 3,28-ди-О-гемифталат бетулина 8.
Результатами исследований показано, что бетулин технический и его ди-ацетаты обладают желчегонной активностью, которое выражается в увеличении секреции и выделении желчи гепатоцитами. З-О-Ацетат бетулина 3 по сравнению с бетулином техническим 1 оказывает в 1.7 раз большее желчесекретирующее действие. Если сравнить количество секретируемой желчи ацетата 3 с исходным чистым бетулином 2, то бетулин технический 1 намного активнее чистого 2. Следует отметить, что моноацетаты 3, 4 имеют высокую скорость секреции желчи. Среди эфиров, имеющих ароматические заместители, достоверные результаты наблюдаются у соединений 6, 8.
Показано, что 3,28-ди-Огемифталат бетулина 8 в 1.7 раза эффективнее силибора влияет на желчевыделительную функцию печени, что в 2.6 раза больше, чем показатели секретируемой желчи у интактных животных. Введение 3,28-ди-(9-никотината бетулина 6 также активизирует функциональное состояние гепатоцитов по сравнению с исходным бетулином 2. Данное вещество увеличивает интенсивность секреции желчи в 2 раза, чем бетулин 2 (Р 0.001).
Достоверные результаты по сравнению с силибором имеют соединения 3, 6, 7, 8, 9, 10. Практически все исследуемые соединения в дозе 50 мг/кг (1/100 от ЛД50) оказывают эффективное желчегонное действие, превосходящее показатели интактных животных (Таблица 2).
Показано, что 3,28-ди-О-гемифталат бетулина 8 статистически значимо по сравнению с карсилом увеличивает дебит желчи при токсическом, лекарственном и алкогольном поражении печени. У крыс, подвергнутых длительному воздействию тетрахлорметана, парацетамола, этанола отмечается значительное снижение скорости секреции желчи и падение общего количества, что свидетельствует о развитии активности холестатического синдрома.
3,28-Ди-О-гемифталат бетулина 8 существенно увеличивает выраженность желчевыделения и скорость секреции. Эфир бетулина 8 оказывает гепатозащитное действие при гепатитах различного генеза, превосходящее эффект известного препарата карсила. Опыты, проведенные с целью характеристики желчегонной активности 3,28-ди-О-гемифталата бетулина 8, свидетельствуют о наличии у него холеретической активности (Рис. 1, 2, 3, 4). При длительном воздействии алкоголя данное соединение в дозе 20 мг/кг обладает выраженной гепатозащитной активностью. Выживаемость животных в группе, леченых 3,28-ди-О-гемифталатом бетулина составляет 83%, в группе животных, получавших карсил - 66%, в контрольной группе - 50% (Рис. 5).
Таким образом, на примере воздействия 3,28-ди-О-гемифталата бетулина 8 на интенсивность выделения желчи гепатоцитами можно сделать заключение, что производные тритерпеновых соединений лупановои группы обладают желчегонной активностью, превосходящей действие известных препаратов карсила и силибора при повреждениях печени крыс различной этиологии.
Влияние 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на уровень адениловых нуклеотидов в печени крыс при тетрахлорметановом гепатите
Одной из существенных причин повреждения и гибели клеток при воздействии токсикантов является развивающаяся недостаточность энергообеспечения, связанная как с повышенным расходом энергии (работа систем детоксикации, активация транспортных АТФаз), так и с недостаточным синтезом макроэргов (повреждение митохондриальных мембран и др.) [175]. Со снижением энергообеспечения гепатоцитов связывается развитие патологии печени при интоксикации. Поэтому для характеристики энергетического состояния клеток при поражении печени ксенобиотиками необходимо определить содержание адениловых нуклеотидов. О влиянии тритерпеновых соединений лупановой группы на состояние энергетического статуса клеток судили по повышению уровня адениловых нуклеотидов. Определяли количественное содержание АТФ, АДФ, АМФ; рассчитывали величину энергетического заряда, отношение АТФ/АДФ, сумму нуклеотидов.
Экспериментальные данные свидетельствуют об изменении концентрации продуктов метаболизма адениловых нуклеотидов в печени крыс. Содержание АТФ при поражении печени тетрахлорметаном снижается почти в 2 раза (59.8% по отношению к биоконтролю), уровень АДФ и АМФ увеличивается и по сравнению с биоконтролем достигает 169.3% и 199.4%) соответственно. Обнаруженные сдвиги могут свидетельствовать как о торможении ресинтеза, так и об ускорении использования макроэргов в условиях интоксикации. Токсический гепатит, вызванный тетрахлорметаном, сопровождается незначительными изменениями суммарного содержания адениловых нуклеотидов, что позволяет судить об отсутствии существенного влияния на их метаболизм. В целом же проявляется некоторая тенденция к его снижению (Таблица 10).
Исследуемые соединения 6 и 8 способствуют восстановлению уровня адениловых нуклеотидов в условиях токсического поражения печени: синтез АТФ увеличивается в 1.4 и 1.3 раза по сравнению с контролем (гепатит), содержание АДФ и АМФ нормализуется. Это говорит о благоприятном влиянии тритерпеновых соединений лупановои группы на синтез макроэргов в клетке, обеспечение энергетического баланса, восстановление митохондриальных мембран.
О более существенных сдвигах аденилнуклеотидной системы можно говорить при детальном анализе отдельных компонентов.
Важным показателем взаимоотношения нуклеотидов является энергетический заряд, который рассчитывали по формуле:
ЭЗ=(2АТФ+АДФ)/(АТФ+АДФ+АМФ)х 1/2
Существенное снижение величины ЭЗ при поступлении токсиканта является результатом падения содержания АТФ и параллельного прироста продуктов ее распада.
Одним из высокоинформативных показателей энергетического потенциала является отношение АТФ/АДФ. Воздействие четыреххлористого углерода приводит к резкому падению коэффициента до 35.3% по отношению к показателям интактных крыс. Тритерпеновые соединения лупановой группы активируют работу систем энергетического метаболизма в клетке, предотвращают уменьшение ЭЗ, тем самым способствуют сохранению энергетического статуса клетки.
Одной из основных координирующих систем клетки в норме и патологии является состояние никотинамидных коферментов [22]. Основная биологическая функция НАД-зависимых дегидрогеназ заключается в переносе электронов и протонов от окисляемых субстратов к флавиновым ферментам в цепи тканевого дыхания или от органического субстрата к кислороду [97]. В отличие от НАДФ, основная биологическая роль которого связана с процессами биосинтеза веществ и микросомального окисления, а также функций детоксикационных систем, НАД участвует в процессах регенерации макроэргических фосфатов [98, 152]. В соответствии с этим кофермент НАД локализуется в митохондриях, а большая часть НАДФ находится в цитоплазме (цитозоле) клетки.
Регуляция синтеза НАД осуществляется при участии АТФ. При применении никотинамида наблюдается тенденция к увеличению содержания АТФ [7]. Учитывая наличие взаимовлияния адениловых и никотинамидных нуклеотидов, возникла необходимость охарактеризовать состояние системы НАД(Н) и оценить влияние тритерпеновых соединений лупановой группы в восстановлении метаболических процессов, нарушенных при экспериментальной интоксикации тетрахлорметаном.
Данные наших исследований свидетельствуют об уменьшении суммарного содержания в печени окисленных и восстановленных форм НАД при отравлении четыреххлористым углеродом. При поражении печени ТХМ преимущественно нарушается синтез пиридиновых коферментов, что может быть связано со снижением энергообеспечения клеток.
Введение токсиканта ССІ4 приводит к достоверному снижению количества НАД1" по отношению к показателям интактных животных, и, напротив, при поражении печени тетрахлорметаном содержание НАДН увеличивается.
Соединения 6 и 8 регулируют уровень окисленной формы НАД , достоверно значимо препятствуют падению количества НАД по отношению к биоконтролю. Введение соединения 8 тормозит увеличение НАДН, наблюдавшееся при поражении печени тетрахлорметаном. Преобладание восстановленных форм пиридиновых нуклеотидов при интоксикации ксенобиотиками связано частичной блокадой цепи тканевого дыхания, соответствующее снижению метаболических процессов цикла трикарбоновых кислот и пируватдегидрогеназного комплекса.
Субхроническая токсичность 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди- О-гемифталата бетулина на крысах
Изучение субхронической токсичности 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина проводили на следующих тестах: влияние на центральную нервную систему; влияние на функциональное состояние печени и почек у крыс; местно-раздражающее действие; аллергизирующее свойство соединений; изменение биохимических показателей крови крыс под влиянием данных веществ.
Влияние 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на центральную нервную систему животных
Исследуемые соединения 6 и 8 в антитоксических дозах, вычисленных при экспериментальном СС14-гепатите, не изменяют функциональное состояние центральной нервной системы. У крыс, получавших 3,28-ди-О-никотинат бетулина и 3,28-ди-О-гемифталат бетулина на протяжении 30 суток, не меняются двигательная активность и исследовательские рефлексы (Таблица 27).
Продолжительность хлоралгидратового сна в опытных группах была выше, чем в контрольной группе. Длительность сна, вызванного тиопенталом натрия, во П-ой группе была даже меньше контрольной группы (Р 0.05).
Продолжительность гексеналового сна в группах животных, получавших 3,28-ди-О-никотинат бетулина 6 и 3,28-ди-Огемифталат бетулина 8, незначительно больше контрольной группы.
Тритерпеновые соединения лупановой группы 3,28-ди- 9-никотинат бетулина и 3,28-ди-(9-гемифталат бетулина при введении в течение 1 месяца не угнетают жизненно важные центры продолговатого мозга центральной нервной системы, не усиливают токсическое действие неингаляционных препаратов для наркоза (Таблица 28).
Влияние 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина на функциональное состояние печени и почек крыс
По продолжительности гексеналового сна можно судить о функциональном состоянии печени, учитывая, что метаболизм данного барбитурата короткого действия происходит в микросомальном аппарате печени. Введение соединения 6 в дозе 650.0 мг/кг и соединения 8 в дозе 550.0 мг/кг, равной 1/10 ЛД5о, в течение 30 суток не увеличивает длительность сна, вызванного гексеналом. При введении гексенала животным не отмечаются возбуждение и проявления интоксикации (Таблица 29).
Введение изучаемых соединений 6 и 8 в течение 30 суток в дозе 12 мг/кг и 20 мг/кг не влияет на диурез крыс при водной нагрузке. Количество выделенной мочи у опытных животных в разные сроки было не одинаковым. Аналогичные колебания наблюдаются у контрольных крыс. Исследования общего анализа мочи у опытных и контрольных животных при 30-дневном введении соединений существенно не отличаются от исходных данных (Таблица 30).
При исследовании общего анализа в моче крыс не обнаружено белка и глюкозы, лейкоциты единичные в поле зрения. При введении внутрь на протяжении 30 суток результаты не отличаются от исходных показателей и данных контрольной группы (Таблица 31).
Вышеизложенное позволяет сделать заключение, что 30 дневное введение 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина не изменяет функциональное состояние почек.
Изучение местно-раздражающего действия и аллергизирующего свойства 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина
Нами показано, что при 30 дневном введении соединений 6 и 8 слизистая оболочка желудка бледно-розовая, гладкая, без видимых изменений, кровоизлияний, эрозий и язв не отмечается. При нанесении 10% мази изучаемых препаратов в конъюнктивы глаз крысам не отмечены слезотечение, гиперемия и отечность. При смазывании кожи крыс и морских свинок 10% мазью 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-О-гемифталата в течение 20 дней раздражающего действия не наблюдается: кожа эластичная, гладкая, без шелушения и покраснения.
Нанесение накожных аппликаций морским свинкам в виде 10% мази препаратов в течение 20 дней не вызывает видимых изменений. После смазывания боковой поверхности животных на участках тела с белой шерстью разрешающей дозой соединений не отмечаются зуд, раздражение, гиперемия и отечность. Результаты исследований отрицают также резорбтивное действие: соединения 6 и 8 не всасываются через кожные покровы, следовательно, безопасны при попадании на поверхность кожи (Таблица 32).
По исследованным тестам можно заключить, что 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина не обладают раздражающим, аллергизирующим, резорбтивным действием.
Результаты исследования биохимических показателей крови крыс при введении 3,28-ди-О-никотината бетулина и 3,28-ди-О-гемифталата бетулина в течение 30 дней
Исследованиями показано, что при введении 3,28-ди-О-никотината и 3,28-ди-Огемифталата бетулина в дозе 12 и 20 мг/кг, соответственно, на протяжении 30 суток, не отмечаются существенные изменения в биохимических и морфологических показателях периферической крови, колебания количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ опытных крыс не отличаются от контрольных животных. Изменений в лейкоцитарной формуле не наблюдается, колебания количества эозинофилов и сегментоядерных нейтрофилов в крови опытных групп аналогичны изменениям показателей контрольных животных. Весовые коэффициенты внутренних органов опытных групп соответствуют таковым контрольной группы.
Похожие диссертации на Биохимические механизмы гепатопротекторного действия тритерпеноидов группы лупана и их фармакологическая активность
