Содержание к диссертации
Введение
1. Сведения литературы о патогенезе хронического простатита, его фармакотерапии и профилактике 8
1.1. Краткая характеристика патогенеза хронического простатита 8
1.2. Принципы лечения и средства фармакотерапии хронического простатита 11
1.3. Сведения литературы о горце птичьем 15
2. Материалы и методы исследования 19
3. Изучение специфической фармакологической активности экстракта горца птичьего 27
3.1. Противовоспалительная активность экстракта горца птичьего 29
3.1.1. Влияние на процессы экссудации при асептическом воспалении 29
3.1.1.1. Антиэкссудативная активность при формалиновом отеке 30
3.1.1.2. Антиэкссудативная активность при декстрановом отеке 31
3.1.2. Влияние на процессы альтерации и регенерации в очаге воспаления 32
3.1.3. Влияние на пролиферативные процессы при воспалении 34
3.2. Противовоспалительная активность экстракта горца птичьего при остром перитоните 35
3.3. Влияние экстракта горца птичьего на проницаемость сосудов 36
3.4. Анальгезирующая активность экстракта горца птичьего 38
3.5. Антибактериальная активность экстракта горца птичьего 39
3.6. Влияние экстракта горца птичьего на функциональную активность почек 41
3.7. Спазмолитическая активность экстракта горца птичьего 43
3.8. Мембраностабилизирующая активность экстракта горца птичьего 44
3.9. Влияние экстракта горца птичьего на кинетику Fe 2+ -индуцированной хемилюминесценции 46
4. Исследование фармакотерапевтическои эффективности экстракта горца птичьего 49
4.1. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта горца птичьего при ортоксилоловом простатите 49
4.2. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта горца птичьего при экспериментальном простатите, индуцированном димексидно-параксилоловой смесью 64
5. Обсуждение результатов исследования 67
Заключение 73
Выводы 75
- Принципы лечения и средства фармакотерапии хронического простатита
- Противовоспалительная активность экстракта горца птичьего при остром перитоните
- Влияние экстракта горца птичьего на кинетику Fe 2+ -индуцированной хемилюминесценции
- Фармакотерапевтическая эффективность экстракта горца птичьего при экспериментальном простатите, индуцированном димексидно-параксилоловой смесью
Введение к работе
Актуальность темы. Важнейшей проблемой медицинской науки и практического здравоохранения является профилактика и лечение хронического простатита (ХП), занимающего большой удельный вес в структуре урологических заболеваний. По статистическим данным в России простатитом страдают до 35 % мужчин в возрасте от 20 до 60 лет (Лопаткин, 2001). При этом имеются сведения, что количество стертых и скрыто протекающих форм данного заболевания значительно превышает число клинически выраженных форм. Так, по данным Y.C. Nicel (1999) проявления простатита отмечаются у 9 % мужской популяции, из них лишь около двух третей обращаются за медицинской помощью. Подтверждением этому служат сведения патоморфологических исследований 150 мужчин (умерших в репродуктивном возрасте и не предъявлявших при жизни характерных жалоб), показавших у 73 % из них наличие воспалительных изменений в предстательной железе (Bennet et al., 1990). Социальная значимость данной патологии, помимо широкой распространенности, определяется тем, что хроническим простатитом страдают преимущественно мужчины молодого и среднего возраста, у которых существенно снижается качество жизни вследствие нарушений копулятивнои и генеративной функции.
Несмотря на значительные успехи современной медицинской науки, хронический простатит до настоящего времени остается недостаточно изученным и плохо поддающимся лечению заболеванием. Этиологию хронического простатита связывают с двумя основными факторами: застойным, приводящим к развитию морфофункциональных изменений в предстательной железе, и инфекционным (Михайличенко, 1996; Аль-Шукри и соавт., 2002). К числу факторов, способствующих развитию простатита, относится активация процессов перекисного окисления липидов, являющаяся причиной мембранодестабилизирующих процессов, усиления альтеративных тканевых изменений и микробной контаминации предстательной железы (Арнольди, 1999; Тарасов и соавт., 2003). В настоящее время выбор препаратов, используемых для лечения простатита, ограничен. Полиэтиологический характер и сложность патогенеза неспецифического хронического простатита объясняют недостаточную эффективность традиционно используемых при этом заболевании фармакологических средств. В этой связи актуальной проблемой остается поиск новых эффективных и безопасных средств, предназначенных для лечения и профилактики хронического простатита.
Одним из путей решения этой задачи является исследование лекарственных растений. Терапия препаратами растительного происхождения более предпочтительна по сравнению с синтетическими, в случаях не требующих экстренного вмешательства, а также в стадии ремиссии заболевания (Арнольди, 1999; Корсун и соавт., 2001). К преимуществам растительных средств относится низкая токсичность, большая широта терапевтического действия, отсутствие негативных побочных эффектов при длительном приеме, что особенно важно при такой хронической патологии, как простатит. Таким образом, проблема профилактики и терапии хронического простатита является актуальной, что обусловливает необходимость дальнейшего поиска и изучения новых эффективных средств, полученных из растительного сырья.
Широкое применение растительных средств ограничивается несовершенством их лекарственных форм, представленных преимущественно галеновыми препаратами. Поэтому перевод лекарственного растительного сырья в экстракционные препараты, представляющие собой сумму биологически активных веществ в концентрированном виде и сохраняющие весь спектр фармакологических свойств исходного растения представляется перспективным направлением для разработки новых препаратов растительного происхождения. В связи с вышесказанным, с использованием ресурсосберегающей и щадящей технологии, обеспечивающей максимальное извлечение биологически активных веществ из растительного сырья, получен сухой экстракт из травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.).
Целью исследования явилось определение основных фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта горца птичьего при экспериментальном простатите, а также выявление возможных механизмов его простатопротекторного действия.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
- определить основные фармакологические свойства экстракта горца птичьего;
- оценить фармакотерапевтическую эффективность экстракта горца птичьего при экспериментальном простатите;
- выявить особенности механизма простатозащитного действия экстракта горца птичьего.
Научная новизна. Работа представляет собой экспериментальное исследование фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности экстракта горца птичьего (ЭГП) при экспериментальном простатите. Установлено, что испытуемый экстракт обладает широким спектром фармакологической активности: противовоспалительной, спазмолитической, анальгезирующей, диуретической, антибактериальной, мембраностабилизирующей; стимулирует процессы регенерации; оказывает антирадикальное действие, повышает активность антиоксидантнои защиты организма. Показано, что курсовое введение ЭГП в экспериментально-терапевтической дозе (200 мг/кг) белым крысам на фоне экспериментального простатита оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние, способствуя нормализации морфофункционального состояния предстательной железы животных на более ранних сроках патологического процесса. Установлено, что одним из основных аспектов в механизме простатозащитного действия испытуемого фитосредства является наличие мембраностабилизирующего действия, обусловленного наличием комплекса фенольных соединений, обладающих прямым антиоксидантным действием и, связанное с этим, ослабление альтеративных тканевых изменений, ведущих к уменьшению возможности микробной контаминации предстательной железы при увеличивающемся резерве антиоксидантной защиты организма.
Практическое значение. Материалы диссертационной работы включены в Отчет по доклиническим испытаниям сухого экстракта горца птичьего, направленного в ФК МЗ РФ. Результаты исследований также использованы при подготовке нормативной документации (ТИ, ТУ) на биологически активную добавку к пище (№ 77.99.20.919. Б.000677.05.04 от 13.05.2004 г). Данное средство производится и применяется в Центре восточной медицины Министерства здравоохранения Республики Бурятия в качестве вспомогательного средства при лечении и профилактике хронического простатита.
Кроме того, результаты диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета МО и науки РФ (акт внедрения от 26.04.2006).
Апробация материалов диссертации. Основные положения и результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на:
- XI Всероссийском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004);
- научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии (Улан-Удэ, 2003);
- научно-практической конференции: "Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине" (Улан-Удэ, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Байкальские чтения - 1. Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина» (Улан-Удэ, 2003);
научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004);
III межрегиональной научно-практической конференции "Медицина завтрашнего дня" (Чита, 2004);
ежегодных научно-практических конференциях преподавателей медицинского факультета Бурятского государственного университета (Улан-Удэ, 2003, 2004).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ.
Работа выполнена на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии Бурятского государственного университета Министерства образования и науки РФ в соответствии с программой «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов» (№ государственной регистрации 01.9.400031.83, утвержденной 06.12.95 г.).
Принципы лечения и средства фармакотерапии хронического простатита
Течение хронического простатита отличается стойкостью к лечению, предусматривающему воздействие на все звенья патогенеза данного заболевания. Существует множество схем и методов терапии больных ХП, а на возможность излечения высказываются различные мнения. Некоторые авторы считают ХП неизлечимой болезнью (Blumensaat 1961; Takacs 1968). По мнению И.Ф. Юнда (1984), все методы лечения больных ХП объединяются в следующие группы: 1) общие организационные и лечебные мероприятия; 2) этиотропная терапия; 3) патогенетические лечебные мероприятия; 4) физиотерапевтическое и санаторно-курортное лечение; 5) лечебные мероприятия по устранению осложнений и общих болезненных состояний. С точки зрения Д.В. Кана и соавт. (1980) общая схема средств и методов лечения больных ХП должна включать: 1) соблюдение общего режима, диеты, гигиены половой жизни; 2) антибактериальная терапия; 3) стимуляцию неспецифической реактивности организма; 4) назначение общеукрепляющих средств, ферментов и витаминов; 5) гормонотерапию; 6) назначение спазмолитических средств; 7) анальгезирующие средства; 8) противовоспалительные средства; 9) прием транквилизирующих и седа-тивных препаратов; 10) воздействие на нейротрофические расстройства местноанальгезирующими средствами; 11) массаж предстательной железы; 12) физиотерапевтические процедуры; 13) санаторно-курортное лечение; 14) психотерапию. Вышеуказанные схемы и методы лечения далеко не всегда дают положительный результат. Невысокая эффективность терапии антибиотиками объясняется тем, что диффузия многих антибактериальных веществ из крови в простатическую жидкость сильно затруднена даже при высокой концентрации в крови. Это объясняется наличием гематопростатического барьера, препятствующего поступлению лекарственных веществ, которые циркулируют в крови и жидкостях организма (Дроговоз 1995; Карпухин 1999; Кульчавеня 2000; Машковский 1988; Стрельников 2001; Трапезникова 1995; 239; 262). Всё это, а также анатомо-физиологические особенности строения предстательной железы и своеобразная патоморфологиче-ская картина ХП, затрудняющие поступление в простату, лекарственных веществ, привели к выводу о целесообразности местного их применения.
Одним из таких методов лечения является локальный трансректальный фонофорез и электрофорез лекарственных препаратов (Хайрлиев и соавт., 1992). Комбинация трансректального фонофореза антибиотиков и электрофореза анальгезирующих препаратов синусоидальными модулированными токами с рациональной электростимуляцией предстательной железы позволяет улучшить непосредственные и отдаленные результаты лечения больных ХП. Однако и при этом виде лечения отмечаются рецидивы заболевания, что требует повторных курсов лечения. Также получить лечебный эффект пытались введением в парапростатическую клетчатку 0,5% раствора новокаина, стремясь вызвать как обезболивающий эффект так и оказать благоприятное трофическое действие на ПЖ (Сагалов 2003; Тиктинский и соавт., 1987). Наиболее важным является патогенетическое лечение, направленное на ликвидацию первичного источника заболевания, улучшение трофики железы, устранение застоя в ней, рассасывание инфильтративных процессов (Глузмин 1991; Гундорова 2004; Дорофеев и соавт., 2004; Колхир и соавт., 2001; Кузник и соавт., 2001; Рязанцев и соавт., 2000; Савицкая и соавт., 1999; Страчунский и соавт., 2002; Страчун-ский 1999; Шварев и соавт., 2000; Bischoff 1982; Johansen 1998). Одно из ведущих мест в проведении патогенетической терапии имеет физиотерапевтическое лечение, включающее в себя ректальную диатермию, токи Бернара, ионофорез, индуктотермию, диадинамические токи, локальную трансуретральную гипертермию, лимфотропный способ введения антибиотиков; интерференционные токи; грязевые тампоны, ректальные трусы и более эффективный метод лечения ХП - местное воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на ПЖ, которое отвечает многим требованиям лечения, направленного на основные общие и местные патогенетические факторы заболевания: застой в ПЖ, нарушение в ней микроциркуляции и проницаемости тканей, препятствующих антибактериальной терапии (Агаджанян и соавт., 1998; Александров и соавт., 1998; Алексеева и соавт., 1995; Аляев и соавт., 2001; Аполихин и соавт., 1995; Богомольный 1996; Гуськов и соавт., 1998; Гуськов и соавт., 1997; Гуськов и соавт., 1998; Датуашвили и соавт., 1994; Зуб и соавт., 1997; Казеко и соавт., 2002; Калинина и соавт., 1997; Лоран и соавт., 2002; Лоран и соавт., 2003; Мазо и соавт., 2001; Мохорт и соавт., 1998; Набер 1999; Неймарк и соавт., 1997; Серегин и соавт., 2001; Соколов 2003; Тиктинский и соавт., 1997). Важное место в лечении хронического простатита занимает также терапия проста-тиленом на фоне комплексного лечения, о чем говорят неплохие результаты (Аль-Шукри и соавт., 1996; Аль-Шукри и соавт., 2003; Галиахметов и соавт., 2000; Галиахметов и соавт., 1999). На современном этапе большое внимание уделяется фитотерапии хронического простатита (Дармограй и соавт., 1997; Кругляк 1996; Мам-чур и соавт., 1992; Неймарк 1992; Соколов и соавт., 1998; Суворов и соавт., 1994; Кукес 1999; Чиков 2002; Hegnauer 1978; Ressigl et all 2003).
Препараты растительного происхождения характеризуются, как правило, большой широтой терапевтического действия, низкой токсичностью и, связанной с этим возможностью длительного применения. При этом практически исключается возможность развития нежелательных реакций (Виноградов и соавт., 1996; Ефремов 1999; Ефремов и соавт., 1996; Колхир и соавт., 2001; Колхир и соавт., 1999; Колхир и соавт., 1998; Корсун и соавт., 1999; Крылов и соавт., 2000; Кукес и соавт., 1999; Лагерь 1992; Мазо и соавт., 2001; Максютина 1985; Малюков 1997; Мантатов 1999; Остапчук 1991; Пастушенков и соавт., 1995; Передрий 1995; Николаев и соавт., 1994; Рязанцев и соавт., 2001; Сегал и соавт., 2000). Поэтому насущной проблемой является поиск и изучение новых эффективных средств, полученных из растительного сырья, предназначенных для профилактики и лечения хронического простатита Лечение хронического простатита должно быть комплексным, воздействующим на разные звенья патологического процесса. Комбинация растений в сборах и продолжительность курса лечения подбираются строго индивидуально. Курс обычно продолжается 2-3 мес, обязательно в период острых проявлений болезни и повторяется через 1,5-2 месяца на протяжении первого года лечения. Как правило, курсовая фитотерапия эффективна в течение многих лет (Ситдыкова и соавт., 2002; Суриков и соавт., 2000; Фарнсворт и соавт., 1985; Урюпов 1996; Якубович и соавт., 2004). Среди препаратов одновременно оказывающих антикоагулянтное, венотонизирующее, противовоспалительное действие, можно выделить ряд лекарств из плодов и околоплодника каштана конского - эскузан, эс-флазид, эссавен (Юнда 1987). А.Л. Песин, Н.И. Иванаев (1985) в течение 10 лет пролечили 326 больных хроническим простатитом. Из них 215 на фоне комплексного лечения получали по 1 чайной ложке меда 2 раза в день, а также в качестве тонизирующего средства - медовый настой из корней родиолы розовой. Кроме того, больным на ночь вводили 40-50 мл 30% раствора меда в виде микроклизм. Курс лечения составлял 10-12 процедур. В процессе лечения уменьшался воспалительный процесс в ПЖ и болевой синдром; был выражен рассасывающий эффект, повысилась сопротивляемость организма к инфекциям, отмечалась нормализация функции ПЖ. Для уменьшения болевых ощущений и в целях профилактики невротической фиксации на неприятных ощущениях в области пораженного органа, а также для снятия рефлекторного спазма сосудов и протоков простаты рекомендуют принимать настой мяты, мелиссы, пустырника и др.
Противовоспалительная активность экстракта горца птичьего при остром перитоните
Опыты проведены на белых крысах-самцах линии Wistar массой 160-180 г. Острый воспалительный процесс воспроизводили путем внут-рибрюшинного введения 1 мл 0,2 % водного раствора серебра нитрата (Александров и соавт., 1986). Животным опытной группы внутрижелу-дочно вводили раствор ЭГП в дозе 200 мг/кг в объеме 10 мл/кг за 30 мин и через 1 час после инъекции серебра нитрата. Животным контрольной группы вводили эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. Через 3 часа после введения серебра нитрата животных декапитировали под легким эфирным наркозом. Брыжейку фиксировали раствором Карнуа и окрашивали 0,05 % раствором толуидинового синего. Критерием развития и выраженности острого воспалительного процесса являлись объем экссудата в брюшной полости и процент дегра-нулированных тучных клеток. Полученные данные представлены в таблице 3.2.1. Установлено, что внутрибрюшинная инъекция раствора серебра нитрата сопровождается развитием острого асептического воспаления, о чем свидетельствует выраженная экссудация в брюшную полость живот- ных контрольной группы большого количества жидкости красновато-бурого цвета, обусловленного присутствием в ней значительного количества эритроцитов (табл. 3.2.1.). Курсовое введение ЭГП в указанной дозе оказывало выраженное противовоспалительное действие, на что указывает уменьшение объема внутрибрюшной жидкости у крыс опытной группы на 16,6 % по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом внутрибрюшинная жидкость у животных, получавших испытуемое средство, имела светло-желтый цвет с опалесцирующим оттенком, свидетельствующим о практически полном отсутствии в ней эритроцитов. Наряду с этим установлено, что введение флогогенного агента сопровождается тотальной дегрануляцией тканевых макрофагов, которая у животных контрольной группы составила в среднем 80 %. У крыс, профилактически получавших ЭГП в дозе 200 мг/кг этот показатель был в 2,7 раза меньше, чем в контроле. Полученные данные свидетельствуют, что один из механизмов противовоспалительного действия экстракта связан с повышением устойчивости клеточных мембран и уменьшением выброса медиаторов воспаления. 3.3. Влияние на проницаемость сосудов Эксперименты проведены на крысах обоего пола линии Wistar с массой 160-180 г. Оценку влияния фитоуросепта на сосудистую проницаемость проводили на модели 24-х часового иммобилизационного стресса с использованием метода меченных сосудов (Горизонтова и со-авт., 1975).
Животным опытной группы внутрижелудочно вводили раствор эГП в дозе 200 мг/кг однократно за 1 час до исследования. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Для оценки нарушения сосудистой проницаемости животным внутривенно вводили по 2 мл/кг очищенной черной туши. Через 30 минут после этого животных умерщвляли путем внутрибрюшинного введения 15 мл раствора Карнуа. Из фиксированной in situ брыжейки толстого отдела кишечника готовили просветленные препараты. Нарушения сосудистой проницаемости оценивали по числу «меченных сосудов» в каждом из 10 просмотренных окон брыжейки, а также по интенсивности метки. Полученные данные представлены в таблице 3.3.1. Как следует из данных, приведенных в таблице З.З.1., введение испытуемого экстракта на фоне иммобилизационного стресса оказывает достаточно выраженное сосудоукрепляющее действие. Так, у животных, получавших ЭГП в указанной дозе, количество брыжеечных окон без метки увеличивается почти в 2 раза по сравнению с контролем, а также отмечается существенное уменьшение количества окон с более 10 мечеными сосудами и некоторое увеличение количества брыжеечных окон с 1-10 мечеными сосудами. При исследовании проницаемости сосудов по интенсивности метки количество животных с самыми интенсивными метками, соответствующими 3 и 4 степеням проницаемости, у крыс опытной группы уменьшалось соответственно на 20 и 100 % по сравнению с контролем. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что экстракт горца птичьего в экспериментально-терапевтической дозе 200 мг/кг обладает выраженной антиэкссудативной активностью, о чем свидетельствует уменьшение степени экссудации при воспалении, вызванном флого-генными агентами с разным механизмом провоспалительного действия. Установлено, что исследуемое средство оказывает антиальтеративное действие, препятствуя развитию кожно-мышечного дефекта при химическом ожоге, а также стимулирующее действие на регенерацию тканей при воспалительном процессе. Кроме того, ЭГП обладает выраженной сосудоукрепляющей активностью, повышая резистентность сосудистой стенки, а также способствует блокаде высвобождения провоспалитель-ных агентов (гистамина и др.) из тучных клеток при действии различных повреждающих факторов. Эксперименты проведены на белых крысах - самцах массой 180 - 200 г. Изучение влияния экстракта горца птичьего на болевую чувствительность проводили с помощью метода "горячих пластинок" (Woolfe, McDonald, 1944). Для этого белых крыс помещали на пластинку ультратермостата с t 58 С. Животным опытной группы внутрижелудочно однократно вводили экстракт горца птичьего в экспериментально-терапевтической дозе 200 мг/кг. Животные контрольной группы получали в эквиобъемном количестве дистиллированную воду.В качестве препарата сравнения использовали "бруснивер" в объёме 10 мл/кг. Через 1 час после введения лекарственных растительных средств проводили оценку болевой реакции на температурный раздражитель: с момента опускания животных на пластинку до первого отдергивания и облизывания задних лапок.
Полученные данные представлены в таблице 3.4.1. Как следует из данных, приведенных в указанной таблице, при однократном введении испытуемого средства в экспериментально - терапевтической дозе 200 мг/кг порог болевой чувствительности у животных опытной группы повышался на 48 % по сравнению с данными крыс контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют о наличии у испытуемого фитоэкстракта выраженной анальгезирующей активности. При этом, анальгезирующая активность ЭГП несколько превышала таковую у препарата сравнения. 3.5. Антибактериальная активность экстракта горца птичьего Оценку антимикробной активности ЭГП проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой среде (Перший, 1971). Испытуемый фитоэкстракт исследовали в концентрациях от 25 до 0,78 мг/мл. В качестве тест-объектов использовали следующие виды микроорганизмов: Staphylococcus aureus 209 р, Proteus vulgaris H5D, Escherichia coli - 408, Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa. Микробная нагрузка со- ставляла 250 тыс. клеток в 1 мл. Полученные результаты приведены в таблице 3.5.1. Как следует из данных, приведенных в таблице 3.5.1., ЭГП в высоких концентрациях обладает выраженной антибактериальной активностью по отношению ко всем исследованным штаммам бактерий, наиболее часто вызывающих инфицированнние предстательной железы. При этом, наиболее выраженное антибактериальное действие испытуемый фитоэкстракт оказывает по отношению к штаммам Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Streptococcus faecalis. Так, по отношению к указанным штаммам фитоуросепт в концентрации 1,25 мг/мл проявляет бактерицидное действие, а в более низких концентрациях - бактериостатическое. Несколько менее выраженное антибактериальное действие фитоэкстракт оказывает по отношению к Pseudomonas aerugenosae и Proteus vulgaris: бактерицидное действие по отношению к Pseudomonas aerugenosae начинает проявлять в концентрации 2,5 мг/мл, а по отношению к Proteus vulgaris - в концентрации 5,0 мг/кг. Эксперименты проведены на белых крысах - самцах массой 180 -220 г. Оценку диуретической активности испытуемого фитоэкстракта проводили с использованием общепринятого метода с 2,5 % водной нагрузкой (Берхин, Иванов, 1972). За 30 минут до водной нагрузки животным опытной группы внутрижелудочно однократно вводили водный раствор экстракта горца птичьего в дозах 100, 200 и 300 мг/кг в объеме 10 мл/кг.
Влияние экстракта горца птичьего на кинетику Fe 2+ -индуцированной хемилюминесценции
Исследование проведено с использованием 1 % суспензии липосом яичного желтка, получаемой по методу (Владимиров и соавт., 1991). Опре-деление уровня Fe - индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) проводили на приборе «Хемилюминометр PXL - 01» (Россия) по общепринятому методу (Клебанов и соавт., 1988; Сергеев и соавт., 1991). Среда инкубации содержала 1 мл фосфатного буфера; 0,5 суспензии липосом; 0,5 мл раствора эозина; экстракт горца птичьего в ячейку добавляли в концентрациях 0,03; 0,1; 0,2 и 0,3 мг/мл. После 2-минутной инкубации при постоянном перемешивании в темной камере в систему добавляли 0,2 мл индуктора - FeSC 4 х 7НгО (38,5 мМ) и регистрировали спонтанный уровень свечения в течение 30 сек. Затем регистрировали свечение контрольной пробы, не содержащей экстракт. Для оценки влияния испытуемого фитоэкстракта на кинетику Fe2+ - индуцированной хемилюминесценци (ХЛ) определяли: интенсивность быстрой вспышки (1бв), скорость ХЛ на начальной экспоненциальной стадии медленной вспышки, коэффициент антиоксидантной активности (Клебанов и соавт., 1988). Полученные данные приведены в таблице 3.9.1. Как следует из данных, приведенных в таблице 3.9.1., экстракт горца птичьего в исследованных концентрациях оказывает ингибирующее влияние на кинетику Fe2+ - индуцированной хемилюминесценции липосом, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды «быстрой вспышки» и снижение скорости ХЛ. При этом выявлен дозозависимый эффект. Наиболее выраженной антиоксидантный эффект обнаружен при использовании ЭГП в концентрации 0,20 мг/кг, обусловливающей ументшение амплитуды «быстрой вспышки» на 22 % по сравнению с контролем. Наряду с этим, установлено, более выраженное ингибирующее действие ЭГП оказывает по отношению к скорости ХЛ на начальной экспоненциальной стадии медленной вспышки. Так введение в инкубационную среду испытуемого средства во всех исследованных концентрациях сопровождалось достоверным снижением указанного параметра ХЛ. При определении антиоксидантной активности ЭГП по данному тесту установлено, что его антиоксидантная активность составляет 6,3 (г/л) . Полученные данные свидетельствуют, что испытуемый фитоэкстракт обладает умеренной антиоксидантной активностью. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что сухой экстракт горца птичьего обладает широким спектром фармакологической активности.
В частности, испытуемое средство в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 200 мг/кг, оказывает выраженное противовоспалительное, сосудоукрепляющее, антибактериальное, спазмолитическое, анальгезирующее, мочегонное, мембраностабилизирующее и антиоксидантное действие. Для оценки фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта горца птичьего были использованы модели простатита, индуцированные ортоксилолом и димексидно - параксилоловой смесью. Выбор моделей простатита был обусловлен тем, что введение указанных химических веществ сопровождается развитием гемодинамических нарушений в предстательной железе, играющих ведущую роль в этиологии хронического простатита. 4.1. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта горца птичьего при ортоксилоловом простатите Исследование проведено на половозрелых белых крысах - самцах, массой 200 - 240 г. Экспериментальный простатит воспроизводили путем аппликации ортоксилола на заднюю поверхность предстательной железы предварительно кастрированных половозрелых белых крыс-самцов (Бад-рутдинов и соавт., 1985). Операцию проводили под барбамиловым наркозом (60 мг/кг, внутрибрюшинно), по завершению которой рану ушивали наглухо послойно в асептических условиях. На следующие сутки после инициации экспериментального простатита, животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор экстракта горца птичьего в экспериментально - терапевтической дозе 200 мг/кг 1 раз в день в течение 21 суток. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали «Бруснивер» в объеме 10 мл/кг в аналогичном режиме. На 7, 14 и 21 сутки после начала введения лекарственных средств проводили оценку показателей воспалительной реакции и пере-кисного окисления липидов (ПОЛ). Для этого определяли содержание лейкоцитов (L) в крови и в секрете предстательной железы, скорость оседания эритроцитов в крови (СОЭ) с использованием общепринятых методов. Концентрацию конечного продукта перекисного окисления липидов -малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови определяли спектро-фотометрически при 523 нм по степени образования окрашенного комплекса с тиобарбитуровой кислотой в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981), активность каталазы крови оценикали по методу Коро-люк (1988). Полученные данные приведены в таблице 4.1.1. Установлено, что временная аппликация ортоксилола на заднюю поверхность предстательной железы сопровождалась развитием острого воспалительного процесса, клиническая картина которого соответствовала простатиту. Данные, приведенные в таблице 4.1.1., свидетельствуют, что курсовое введение экстракта горца птичьего в экспериментально-терапевтической дозе на фоне экспериментального простатита оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние, характеризующееся нормализацией морфофункционального состояния предстательной железы.
Так, под влиянием испытуемого фитосредства уже на 7-е сутки исследования у крыс, получавших испытуемый фитоэкстракт, наблюдается уменьшение выраженности воспалительной реакции: количество лейкоцитов в крови и СОЭ снижалось соответственно на 20 и 48 % по сравнению с данными животных контрольной группы. Также у крыс опытной группы отмечается тенденция к уменьшению содержания лейкоцитов в секрете предстательной железы. Установлено, что под влиянием испытуемого экстракта снижаясь интенсивность процессов ПОЛ, о чем свидетельствует достоверное уменьшение концентрации МДА в сыворотке крови, а также повышение активности каталазы крови в среднем на 40 % по сравнению с аналогичными данными в контроле. На 14-е сутки исследования наблюдалась аналогичная картина: СОЭ крови снижалась на 45 %, количество лейкоцитов в крови и в секрете предстательной железы, соответственно, на 23 и 27 %, концентрация МДА в сыворотке крови - на 21 %; активность каталазы крови повышалась на 48 % по сравнению с данными в контроле. Более выраженный фармакотерапевтический эффект отмечался на 21 сутки эксперимента. Так, СОЭ уменьшалась на 34 %, количество лейкоцитов в крови и в секрете предстательной железы соответственно на 21 и 37 %, концентрация МДА в сыворотке крови - на 18 %, а активность каталазы крови повышалась на 17%. Установлено, что фарма-котерапевтическая эффективность экстракта горца птичьего при ортокси-лоловом простатите превосходила таковую у препарата сравнения «Брус-нивера». Результаты патоморфологического исследования показали, что на фоне введения ортоксилола у белых крыс развивается типичная картина острого воспалительного процесса в предстательной железе. При морфологическом исследовании ткани предстательной железы у крыс контрольной группы на 7 сутки эксперимента обнаружены следующие признаки воспалительного процесса: отечность стромы, расширение концевых отделов желез за счет избыточного скопления секрета, альтерация железистого эпителия. В частности, наблюдали расслоение мышечных волокон и разрыхление соединительной ткани за счет интерстициального отека.
Фармакотерапевтическая эффективность экстракта горца птичьего при экспериментальном простатите, индуцированном димексидно-параксилоловой смесью
Эксперименты проведены на половозрелых белых крысах-самцах массой 220 - 240 г. Экспериментальный простатит вызывали введением в прямую кишку крыс смеси димексида и параксилола в соотношении 4:1 (Аль-Шукри и соавт., 1997). На 30-й день после инициации воспаления животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор экстракта горца птичьего в экспериментально-терапевтической дозе 200 мг/кг в объеме 10 мл/кг 1 раз в день в течение 7 суток. Крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. В качестве препарата сравнения использовали «бруснивер» в форме отвара в объеме 10 мл/кг, который вводили по аналогичной схеме. Через 7 суток после начала введения лекарственных растительных средств животных забивали мгновенной декапитацией под легким эфирным наркозом и проводили исследование показателей функционального состояния предстательной железы, а также интенсивности процессов ПОЛ. Для этого определяли массу семенных пузырьков и тестикул; содержание фоллику-лостимулирующего гормона (ФСГ) в сыворотке крови (Кан, Сегал, 1980). Концентрацию МДА в гомогенате предстательной железы определяли спектрофотометрически при 523 нм по степени образования окрашенного комплекса с тиобарбитуровой кислотой в сыворотке крови (Стальная, Га-ришвили, 1977); активность каталазы крови оценикали по методу Коро-люк (1988). Полученные данные приведены в таблице 4.2.1. Как следует из данных, приведенных в указанной таблице, курсовое введение ЭГП в дозе 200 мг/кг на фоне экспериментального простатита сопровождается нормализацией функционального состояния предстательной железы белых крыс. В частности, масса семенных пузырьков у крыс, получавших испытуемое фитосредство была на 78 % больше, чем в контроле, таюке у крыс этой группы отмечается тенденция к увеличению массы тестикул, что косвенно свидетельствуют о нормализации гормонального фона, в частности, о повышении уровня тестостерона. Подтверждением этому служат полученные нами данные о снижении концентрации фолликулостимулирующего гормона в крови животных опытной группы на 36 % по сравнению с таковой у крыс контрольной группы.
Наряду с этим показано, что на фоне курсового введения ЭГП у животных отмечается уменьшение выраженности воспалительной реакции, о чем свидетельствует снижение количества лейкоцитов в секрете простаты и СОЭ соответственно на 40 и 45 % по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. Установлено, что развитие воспалительного процесса в предстательной железе сопровождается значительной активацией процессов перекис-ного окисления липидов, о чем свидетельствует увеличение концентрации продуктов ПОЛ и снижение активности ферментов антиокислительной защиты. Как следует из данных, приведенных в таблице 4, на фоне введения ЭГП в дозе 200 мг/кг отмечалось уменьшение содержания МДА в гомогенате предстательной железы животных опытной группы на 34 % по сравнению с контролем. Наряду с этим, активность каталазы крови у животных этой группы повышалась на 40 % по сравнению с контролем, что свидетельствует о повышении активности антиоксидантной защиты организма под влиянием испытуемого средства. При этом фармакотерапевти-ческая эффективность ЭГП по ряду показателей превосходит таковую у препарата сравнения «Бруснивера». Полученные данные свидетельствуют, что сухой экстракт горца птичьего обладает широким спектром фармакологической активности: противовоспалительной, спазмолитической, мочегонной, антибактериальной, анальгезирующей, мембраностабилизирующей и антиоксидант-ной, обеспечивающих его выраженное простатозащитное действие. Наиболее важным свойством испытуемого экстракта, обеспечивающим его фармакотерапевтическую эффективность при простатите, следует считать выраженное влияние на все стадии воспалительлного процесса. В частности, введение экстракта горца птичьего в экспериментально-терапевтической дозе 200 мг/кг на фоне острого асептического воспаления, вызванного флогогенными агентами с разными механизмами провос-палительного действия, сопровождается уменьшением выраженности альтерации и экссудации, а также оказывает стимулирующее действие на регенерацию тканей при воспалительном процессе. Особо важно последнее свойство фитоэкстракта, поскольку в условиях альтерации ткани предстательной железы, оно способствовует ускорению репарации ее поврежденных структур и тем самым ускоряет восстановление их функциональной состоятельности. Учитывая полученные нами данные о существенном уменьшении степени дегрануляции тучных клеток под влиянием экстракта горца птичьего, один из аспектов его противовоспалительной активности может быть связан со способностью блокировать высвобождение гистамина и других провоспалительных агентов из базофилов и тучных клеток. Наряду с этим установлено, что противовоспалительное действие фитоэкстракта обусловлено также его способностью регулировать микроциркуляторные процессы.
На это указывают полученные нами данные о снижении сосудистой проницаемости под влиянием экстракта горца птичьего, свидетельствующие о капилляроукрепляющем его действии. Очевидно, что реализация этой активности фитоэкстракта обеспечивается содержащимися в нем флавоноидными соединениями, обладающих Р-витаминными эффектами (Барабой, 1993). Известно, что механизм сосудоукрепляющего действия фенольных соединений горца птичьего (рутина, кверцетина и др.) заключается в его способности ингибировать гиалуронидазу - фермент, осуществляющий гидролиз гиалуроновои кислоты и нарушающий связь этого полисахарида с белками и тем самым повышающим проницаемость сосудов (Chen Lhi-Wu et al., 1995). Показано, что механизм противовоспалительного действия испытуемого фитоэкстракта связан со стабилизацией мембранных структур клеток под его влиянием, на что указывают полученные нами данные о снижении степени гемолиза эритроцитов, а также дегрануляции тканевых макрофагов. С использованием модельных систем установлено, что базисные молекулярно-клеточные механизмы мембраностабилизирующего действия экстракта горца птичьего заключаются в его способности ингибировать процессы свободнорадикального окисления, повышать активность антиоксидантной системы и тем самым стабилизировать мембранные структуры клеток с восстановлением их функциональной активности. Об универсальности указанного механизма свидетельствуют данные об инги-бировании процессов ПОЛ при экспериментальном простатите, показавшие снижение концентрации продуктов процесса переоксидации липидов и повышение активности каталазы - одного из ферментов антиоксидантной защиты организма. Подтверждением наличия антиоксидантной активности служат полученные нами данные о способности испытуемого средства существенно снижать интенсивность индуцированной хемилюминесценции, свидетельствующие о его ингибирующем влиянии на процессы свободнорадикального окисления. В частности, под его влиянием уменьшалась амплитуда «быстрой вспышки» и скорость процесса на начальной стадии «медленной вспышки». Поскольку, установленное нами снижение амплитуды «быстрой вспышки» Fe2+ - хемилюминесценции суспензии липосом, являющейся интегральным параметром свободнорадикального окисления (Фархутди-нов, 1984; Владимиров и соавт., 1991), отражает процессы, связанные с генерацией активных форм кислорода, можно полагать, что снижение указанного индекса свидетельствует о способности биологически активных веществ экстракта горца птичьего перехватывать образующиеся в системе свободные радикалы кислорода.
