Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Перекисное окисление липидов при токсическом поражении печени 11
1.2. Системы антиоксидантной защиты 17
1.3. Изыскание фармакологических препаратов, обладающих антиоксидантным эффектом при поражении печени 22
Глава 2. Объекты и методы исследования 40
Глава 3. Экспериментальная часть 49
3.1. Изучение перекисного окисления липидов и активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в тканях печени интактных половозрелых крыс и половозрелых крыс с токсическим гепатитом 49
3.2. Влияние фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки, препарата «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки на перекисное окисление липидов, активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом 63
3.3. Влияние фитопрепаратов родиолы экстракта сухого, родиолы розовой настойки, розавина, родиолы экстракта жидкого на перекисное окисление липидов, ферменты супероксиддисмутазу, каталазу и глутатионпероксидазу в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом 94
3.4. Влияние фитопрепаратов, изготовленных на основе лимонника, на перекисное окисление липидов, ферменты супероксиддисмутазу, каталазу и глутатионпероксидазу в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом
Глава 4. Обсуждение результатов 1
Выводы 1
Список используемой литературы 1
- Системы антиоксидантной защиты
- Изучение перекисного окисления липидов и активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в тканях печени интактных половозрелых крыс и половозрелых крыс с токсическим гепатитом
- Влияние фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки, препарата «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки на перекисное окисление липидов, активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом
- Влияние фитопрепаратов, изготовленных на основе лимонника, на перекисное окисление липидов, ферменты супероксиддисмутазу, каталазу и глутатионпероксидазу в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом
Введение к работе
Актуальность темы
Ответной реакцией организма на стремительно меняющиеся условия жизни является состояние, получившее название окислительный стресс. Концепция стресса, основоположником которой является канадский ученый -профессор Ганс Селье (1907 - 1982г.г.), развита в многочисленных работах отечественных и зарубежных ученых (Okuda Т et. al., 1989 - 1993; Чучалин А.Г., - 2000). Под окислительным стрессом понимается индуцируемое вредными факторами окружающей среды усиление окислительных реакций в органах и тканях, сопровождающееся увеличением концентрации свободнорадикальных форм метаболитов, нарушающих сложившиеся в процессе эволюции синхронные процессы обмена веществ и энергии. (Ярмоненко СП., 1997). Воздействие экологических факторов на здоровье человека в последние десятилетия все больше привлекает внимание ученых самых разных специальностей. Этому способствует распространение эндемических заболеваний, так называемых «урбанатов», которые провоцируются техногенным загрязнением биосферы большим количеством химических соединений, поступающих с промышленными отходами, выхлопными газами автотранспорта, бытовым мусором, ядохимикатами и др. (Родкина Р.А., Давидян Л.Ю., Целкович Л.С., 2001). В связи с вышесказанным становится понятной актуальность выявления биологически активных соединений, позволяющих минимизировать воздействия вредных факторов окружающей среды на организм человека, тем самым предохраняя его от развития целого ряда заболеваний.
Наиболее остро в настоящее время встал вопрос о заболеваниях органов пищеварения, в особенности, - печени. В общей сложности 15-30% населения страдает заболеваниями печени и нуждается в медицинской помощи (Л.Р. Королева, 1995 г.). Широкая распространенность острых и хронических заболеваний печени, ранняя инвалидизация лиц трудоспособного возраста ставят поражения печени на одно из первых мест среди заболеваний желудочно-кишечного тракта. Печень - один из главных органов с более чем 70-ю функциями, при этом выполняемые печенью функции барьера между кишечником и кровотоком делают ее особенно чувствительной к токсическим повреждениям. Ксенобиотики могут оказывать на печень токсическое воздействие, приводящее к гепатиту, фиброзу и циррозу. Как чужеродные, токсическое действие на печень оказывают и некоторые лекарственные препараты. Отмечено, что доля гепатотоксических реакций, вызванных лекарствами, в общем числе составляет 15% (Rosso М., Galan Ко J., Shrestha R. et. al., 2004).
В патогенезе нарушений функций печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ). В условиях нормы в крови и тканях определяется низкий уровень ПОЛ. Повышение уровня ПОЛ, а так же содержания высокоактивных форм молекулы кислорода приводит к оксидативному стрессу, при котором нарушаются» клеточные мембраны и патологически изменяются функции клеток, в том числе и гепатоцитов. (Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И., 1985; Барабой В.А. и др., 1992; Козлов Ю.П., 1973; Signal Р.К. et al., 1988). Однако уровень-ПОЛ зависит не только от уровня свободных радикалов, но и от функции противоперекисной защиты. Во многих исследованиях установлено, что такими антиоксидантными системами в организме являются ферменты супероксиддисмутаза глутатионпероксидаза, каталаза (Буртенян Н.Д., Герасимова О.А. и др. 1997; Виноградова Л.Ф. 1997; Куркин В.А. 2006; Лебедев А.А. 1995 и др.). Возможность лечения поражений печени антиоксидантными средствами в настоящее время широко исследуется, причем особое внимание ученых привлекают фенольные соединения (Куркин В.А., Евстратова Р.И., Запесочная Г.Г., 1991), среди которых наиболее активно изучаются фенилпропаноиды и флавоноиды.
Патологические изменения печени отражаются на всех органах и системах органов, провоцируя возникновение заболеваний различной нозологии (Полякова С.Д. и Машкова Т.А., 1997). В связи с этим важную роль играет поиск лекарственных веществ с гепатопротекторными свойствами.
Перспективным источником биологически активных соединений с антиоксидантными свойствами считаются лекарственные растения. Синтетические и природные антиоксиданты, относясь к различным классам химических соединений, тем не менее, обладают одним общим свойством -способностью тормозить реакции окисления. Но в плане характера воздействия на организм, лекарственные средства растительного происхождения имеют ряд преимуществ перед синтетическими аналогами. Мягкий и, в ряде случаев, выраженный терапевтический эффект фитопрепаратов объясняется тем, что в них, наряду с основными биологически активными соединениями, содержатся сопутствующие вещества, которые могут обогащать, усиливать или пролонгировать фармакологическое действие и в дополнение к этому понижать токсичность используемых лекарственных препаратов (Авдеева Е.В., 2006). В химическом отношении структура препаратов природного происхождения крайне близка к структуре метаболитов, вырабатываемых организмом человека, что обусловлено его эволюционной адаптацией и, соответственно, широко доступна воздействию его ферментативных систем. В результате организм способен не только перерабатывать и усваивать биогенные природные соединения, но при необходимости эффективно их обезвреживать (Moatti R., Fauron R. 1993). Это делает лекарственные препараты на основе растительного сырья не только эффективными, но и достаточно безопасными.
Фенилпропаноиды широко встречаются, в растительном мире, но лишь в последнее время они стали предметом пристального внимания исследователей. Многие растения, содержащие фенилпропаноиды, недостаточно изучены и могут оказаться в будущем прекрасным растительным сырьем для фармакологической промышленности. Те же препараты на основе растительного сырья, содержащего фенилпропаноиды, которые давно и успешно применяются в медицинской практике, требуют дополнительного изучения в плане расширения спектра их применения. Таким образом, актуальность данной работы обусловлена необходимостью выявления растений, содержащих биологически активные соединения с антиоксидантными и гепатопротекторными свойствами, в частности, фенилпропаноиды, и глубокого изучения механизмов действия препаратов, созданных на их основе, что позволило бы внедрить в медицинскую практику эффективные лекарственные средства, не оказывающие на организм человека токсического действия, которое характерно для лекарств, созданных на основе синтетического сырья.
Цель работы - изучение влияния фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, на уровень перекисного окисления липидов и функции антиоксидантных систем при токсическом поражении печени.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
1. Изучить интенсивность перекисного окисления липидов, активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в гомогенате печени при токсическом поражении четыреххлористым углеродом в дозе 2,0 г/кг и при токсическом поражении четыреххлористым углеродом и одновременном введении этилового спирта в дозе 0,2 мл/кг.
2. Изучить влияние на эти процессы препаратов эхиноцеи пурпурной настойки, настойки «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки, и выяснить возможность снижения уровня перекисного окисления липидов в ткани печени крыс при ее токсическом поражении.
3. Изучить и сравнить влияние препаратов, созданных на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы экстракт жидкий, родиолы розовой настойка, розавин на функцию антиоксидантных систем в гомогенате печени крыс на фоне токсического гепатита и определить возможные точки приложения гепатозащитного действия этих препаратов.
4. Изучить и сравнить влияние фитопрепаратов, созданных на основе лимонника китайского: лимонника настойка 70%, лимонника настойка 40% ССЬ экстракт лимонника, сок лимонника на уровень малонового диальдегида и активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в гомогенате печени крыс.
5. Оценить воздействие перечисленных фитопрепаратов на отдельные звенья антиоксидантной защиты для выявления возможности дифференцированного влияния на активность супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в ткани печени на фоне токсического гепатита.
6. Оценить эффективность изучаемых фитопрепаратов путем сравнения с препаратом карсил.
Научная новизна исследования.
Впервые установлено, что при применении препаратов родиолы экстракта сухого, родиолы розовой настойки и розавина достоверно снижается уровень малонового диальдегида, и то, что наряду со снижением перекисного окисления липидов, родиолы розовой настойка достаточно эффективно повышает активность супероксиддисмутазы, а розавин -каталазы и супероксиддисмутазы.
Впервые выявлено увеличение активности фермента глутатионпероксидазы печени под влиянием препаратов, созданных на основе эхинацеи пурпурной: настойки эхинацеи пурпурной, и настойки «Эхинацея ГаленоФарм», что является одним из механизмов гепатопротекторного действия этих препаратов.
Впервые показано снижение малонового диальдегида при t токсическом поражении печени под действием настойки мелиссы лекарственной, что говорит об антиоксидантных свойствах данного фитопрепарата.
Впервые изучены в сравнении антиоксидантные и гепатопротекторные свойства препаратов, изготовленных на основе лимонника китайского: лимонника настойки 40%, лимонника настойки 70%, СОг экстракта лимонника и сока лимонника и выявлено дифференцированное влияние данных препаратов на уровень активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы.
Впервые проведено сравнение наиболее эффективных фитопрепаратов с карей лом. Установлено, что при применении розавина и сока лимонника активность одного из основных ферментов противоперекисной защиты - каталазы - повышается больше, чем при применении карсила.
Практическая значимость работы.
Создана основа для последующей разработки новых лекарственных средств с антиоксидантной активностью на основе сырья эхинацеи пурпурной, лимонника китайского и родиолы розовой. Рекомендовано расширить показания к применению препарата настойки «Эхинацея ГаленоФарм» при гепатитах в качестве гепатопротекторного средства. Результаты работы внедрены в учебный и научный процессы и используются на кафедре фармакологии и кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета. Положения, выносимые на защиту:
1. Результаты изучения гепатопротекторной активности фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки, настойки «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки, и выяснения возможности снижения уровня перекисного окисления липидов в ткани печени при ее токсическом поражении.
2. Результаты изучения антиоксидантной активности препаратов, созданных на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы розовой настойка, розавин, родиолы экстракт жидкий.
3. Результаты исследования гепатопротекторной активности препаратов, созданных на основе лимонника китайского: лимонника настойка 40%, лимонника настойка 70%, СОг экстракт лимонника, сок лимонника.
4. Результаты сравнения эхинацеи пурпурной настойки, «Эхинацеи ГаленоФарм», розавина, родиолы розовой настойки, СОг экстракта лимонника и сока лимонника с препаратом карсил.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно — исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет и Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Государственная регистрация № 012001053332) и Республиканской программы «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно -профессиональных учреждений в рыночных условиях» по теме «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).
Системы антиоксидантной защиты
В настоящее время установлено, что в организмах человека и животных существуют антиоксидантные системы, препятствующие перекисному окислению липидов. Согласно данным G. Levin и соавторов (1994), Е.А.Лебедевой (1997) и др. антиоксидантную систему организма можно представить себе как ферментную и неферментную защиту, направленную на связывание свободных радикалов, обладающих прооксидантным потенциалом и препятствующую окислению липидов. По данным Е. Loch (1995), химические реакции с кислородом в организме, особенно со свободными радикалами кислорода, могут нарушить функцию ферментов, клеточную защиту от инфекций, структуру липопротеидов и др. Следовательно, антиоксидантные системы играют большую роль в поддержании баланса между антиоксидантами и прооксидантами.
К антиоксидантной защите неферментного типа относят целый ряд органических веществ. Это - таурин, значительно увеличивающий активность ферментов, фуросемид и селенсодержащие вещества, способные снижать перекисное окисление липидов (Кулагин О.Л. 2000). К ним относят также аскорбиновую кислоту и токоферол (Матвеев С. Б. и соавторы, 1992; Соловьева А.Г. и соавторы, 1993). Токоферол активно ингибирует перекисное окисление липидов в гидрофобном слое мембран клеток. К антиоксидантам неферментной структуры относятся также и мочевая кислота (Е.А. Лебедева, 1997). По данным Ломоносовой Е.Е. и ее соавторов (1993, 1997) антиоксидантными свойствами обладает ряд аминокислот.
К ферментным средствам антиоксидантной защиты относят такие ферменты, как супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза и глутатионредуктаза. Ряд исследований посвящен роли супероксиддисмутазы как защитного фактора при оксидативном стрессе и других реакциях, сопровождающихся образованием свободных радикалов.
Гаверова Ю.Г., Осокин И.Г. и др. (2006) показали, что инъекции милдроната существенно снижают активность ферментов антиоксидантной защиты супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы печени. Активность супероксиддисмутазы снижается более, чем в 7 раз, а активность глутатионпероксидазы - более, чем в 2 раза под действием ингибитора р-окисления жирных кислот милдроната.
По данным Л. Г. Нагл ера и соавторов (1991) при 2-х часовой ишемии печени активность супероксиддисмутазы падает в три раза, а после реперфузии вновь увеличивается. Авторы предполагают, что нарушение свойств супероксиддисмутазы связано с модификацией ее структурой и деградацией этого модифицированного фермента. Б.Н. Матюшин и соавторы (1992, 1997) изучили активность супероксиддисмутазы при хроническом поражении печени. Авторы показали, что при острой жировой дистрофии печени активность супероксиддисмутазы и каталазы оказывается повышенной, а при развитии хронического гепатита снижается. В других исследованиях (Б. Н. Матюшин, Логинов А.С. и Ткачев В.Д., 1991, 1998) отмечено, что при хроническом поражении печени происходит нарушение процесса энзимной инактивации супероксидных радикалов, и при этом угнетается активность антиокислительных ферментов и разобщается их взаимодействие как систем утилизации активных форм кислорода. Серьезность этих изменений зависит от выраженности патологического процесса. Авторы предлагают вариант определения активности супероксиддисмутазы в материале пункционной биопсии печени, который может быть использован для оценки антиоксидантной защиты печени при ее хроническом поражении. СМ. Куфтерин, В.И. Удовиченко (1990) изучили перекисное окисление липидов и фосфолипидный состав плазматических мембран печени кроликов при травматическом шоке и их фармакологическую коррекцию. Результаты исследований подтверждают важную роль перекисного окисления липидов в развитии травматического шока. О тяжести патологических изменений в составе плазматических мембран гепатоцитов можно судить по содержанию малонового диальдегида. При введении супероксиддисмутазы свободнорадикальный процесс нормализуется. Огромную роль играет и определение активности супероксиддисмутазы в опухолях печени, так как ее активность непосредственно в гепатомах была в 2 - 2,5 раза меньше, чем в непораженной ткани печени опухоленосителя. Активность супероксиддисмутазы значительно снижается в опухолях по сравнению с нормальной тканью, при этом в ткани печени, имеющей гепатому, активность супероксиддисмутазы гораздо выше, чем в ткани здоровой печени (без опухоли) (Волк С.Е., 1991). Целый ряд исследований посвящен изучению роли ферментов каталазы, глутатионпероксидазы, супероксиддисмутазы при токсическом поражении печени. В.В. Брейдо и соавторы (1991) показали, что при поражении печени, вызванным алкоголем, наблюдается снижение активности супероксиддисмутазы. В. В. Антоненков и соавторы (1990) изучили влияние совместного применения этанола и ингибитора каталазы 3-амино-1,2,4-триазола на перекисное окисление липидов в субклеточных фракциях печени крыс. При совместном введении этих двух веществ в гомогенате печени наблюдалось существенное снижение активности ключевых ферментов антиоксидантной защиты - супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы. В своей работе авторы также отмечают, что в печени определяется белковый фактор антиоксидантной защиты, который способен нивелировать прооксидантные эффекты этанола.
Введение бензидина в условиях in vivo также сопровождается снижением эффективности защитного действия антиоксидантной системы, при этом уменьшается активность супероксиддисмутазы и каталазы (Е.Е. Ломоносова и соавторы, 1993). Биогенез, физиологическая роль и свойства каталазы описаны О.С. Мирошниченко (1992). Наличие у каталазы способности разрушать перекись водорода, которая образуется при трансформации активных форм кислорода и сама может стимулировать окисление липидов, имеет большое значение. Изменение активности каталазы в основном в сторону ее снижения при патологии печени отметили Е.В. Ломоносова и соавторы (1992, 1993), Сазонтова и соавторы (1995), СЕ. Волк (1991), Ф.С. Марченков и соавторы (1991), В.Е. Мержинский, В.Д. Конвай (1991). Б. Н. Матюшин и соавторы (1992) нашли, что внутриклеточный контроль над содержанием свободных радикалов обеспечивается энзимной системой, которую составляют каталаза, глутатионпероксидаза, супероксиддисмутаза и другие ферменты, активность которых значительно снижается при хронических заболеваниях печени.
Изучение перекисного окисления липидов и активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в тканях печени интактных половозрелых крыс и половозрелых крыс с токсическим гепатитом
Прежде, чем приступить к исследованию гепатопротекторных свойств фитопрепаратов, мы изучили перекисное окисление липидов на примере малонового альдегида и активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы у интактных половозрелых крыс, и крыс с токсическим гепатитом, вызванным отравлением четыреххлористым углеродом. Исследовались три группы животных. Первая группа: интактные крысы - здоровые половозрелые животные обоего пола, весом не менее 200 граммов, не подвергавшиеся токсическому воздействию. Вторая группа -половозрелые животные обоего пола, весом не менее 200 граммов с токсическим гепатитом. Гепатит индуцировался четыреххлористым углеродом, который вводился внутримышечно в дозе 2,0 г/кг веса животного в виде 50% масляного раствора в течение шести дней. Третьей группе животных наряду с четыреххлористым углеродом вводился 40% этиловый спирт в дозе 0,2 мл/кг внутрижелудочно для обеспечения достоверности опыта при сравнении с фитопрепаратами, содержащими спирт.
На седьмые сутки животные забивались, и их печень извлекалась для анализа. В таблице 1 приведены результаты определения уровня перекисного окисления липидов (малонового альдегида) в ткани печени крыс на 7-й день после шестидневного внутримышечного введения четыреххлористого углерода в дозе 2,0 г/кг массы тела животного в 50% масляном растворе и в ткани печени интактных крыс. Как видно из таблицы, у интактных крыс уровень малонового диальдегида в ткани печени составил 11,28 ± 2,03 нМоль/мг белка печени. Четыреххлористый углерод вводимый в мышцу в дозе 2,0 г/кг вызывает повышение содержания конечного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида в гомогенате более чем в 2 раза до уровня 25,11 ± 1,96 нМоль/мг белка (р 0,05). Таким образом, интоксикация четыреххлористым углеродом значительно повышает перекисное окисление липидов, что является причиной повреждения ткани печени. В таблице 2 показано влияние четыреххлористого углерода в дозе 2,0 г /кг массы тела крысы и 40% этилового спирта в дозе 0,2 мл/кг массы тела животного, одновременно вводимых крысам ежедневно в течение 6 дней, на уровень перекисного окисления липидов, в частности, на содержание малонового диальдегида.
Малоновый диальдегид печени интактных крыс и печени крыс в контроле после шестидневного введения четыреххлористого углерода и спирта (нМоль МДА/мг белка печени). Из таблицы видно, что введение четыреххлористого углерода и 40% этилового спирта крысам приводит к увеличению содержания малонового диальдегида в гомогенате с 11,28 ± 2,03 нМоль/мг белка печени до 25,27 ± 2,06 нМоль/мг белка печени. В относительных значениях это составляет 2,2 раза. Как видно из таблицы, у интактных крыс активность супероксиддисмутазы была на уровне 1,205 ±0,186 АЕД/мг белка печени, а у контрольных, отравленных четыреххлористым углеродом, - 0,705 ± 0,105 АЕД/мг белка печени (р 0,05). Интоксикация четыреххлористым углеродом в 1,6 раза понижает активность супероксиддисмутазы, наиболее значимого фактора ферментной защиты гепатоцитов от перекисного окисления липидов. Как можно видеть из таблицы, при одновременном введении четыреххлористого углерода и этилового спирта происходит снижение содержания супероксиддисмутазы с 1,205 ± 0,186 АЕД/мг белка печени до 0,795 ± 0,171 АЕД/мг белка печени. Разница статистически достоверна (р 0,05) и составляет 1,5 раза.
Влияние фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки, препарата «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки на перекисное окисление липидов, активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом
Мы изучили влияние фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки в дозе 150 мкл/кг, аптечного препарата «Эхинацея ГаленоФарм» в дозе 150 мкл/кг, элеутерококка экстракта жидкого в дозе 150 мкл/кг, сирени настойки в дозе 150 мкл/кг и мелиссы настойки в дозе 150 мкл/кг на перекисное окисление липидов и активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы. В качестве препарата сравнения нами бым выбран карсил, который вводился крысам в желудок через зонд в дозе 25 мг/кг. Подопытным животным для моделирования токсического гепатита вводился четыреххлористый углерод в течение 6 дней. Наряду с четыреххлористым углеродом эти животные получали один из фитопрепаратов. Все фитопрепараты представляли собой настойки, содержащие спирт, поэтому контрольной группе на фоне четыреххлористого углерода вводился спирт в дозе 0,2 мл/кг. Настойка сирени выпаривалась под вакуумом и не содержала этилового спирта, поэтому в контроле использовались животные, получавшие только четыреххлористый углерод. Как видно из таблицы, настойка эхинацеи пурпурной в дозе 150 мкл/кг снижает содержание малонового диальдегида в печени в 1,4 раза на фоне четыреххлористого углерода и 40% этилового спирта (р 0,01). Содержание малонового диальдегида в контроле составило 25,27 ± 2,06 нМоль/мг белка, а в опыте 18,51 ± 2,87 нМоль/мг белка. Как видно из таблицы, элеутерококка экстракт жидкий практически не снижает показатели малонового диальдегида на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом по сравнению с применением четыреххлористого углерода и 40% спирта. Показатели меняются с 24,74 ± 2,06 в контроле до 23,54 ± 1,79 в опыте. Как видно из таблицы, при введении одновременно с четыреххлористым углеродом настойки сирени в дозе 150 мкл/кг уровень малонового диальдегида снижается с 25,11 ± 1,96 нМоль/мг белка печеночной ткани до 20,54 ± 3,65 нМоль/мг белка печени. Разность в 1,2 раза статистически не достоверна. Мы можем говорить о тенденции к снижению показателей содержания малонового диальдегида. Из диаграммы №5 видно, что наибольший эффект оказывает мелиссы настойка, снижая уровень малонового диальдегида в 1,5 раза по сравнению с контролем. Эхинацеи настойка также активно снижает уровень малонового диальдегида в 1,4 раза. Менее активны препараты «Эхинацея ГаленоФарм» (1,2 раза), сирени настойка (1,2 раза). Карсил снижает уровень малонового диальдегида в 1,4 раза. Элеутерококка экстракт жидкий не изменяет уровень малонового диальдегида.
Влияние фитопрепаратов на уровень малонового диальдегида свидетельствует об их эффективности в качестве гепатопротекторов, что проявляется в понижении процессов перекисного окисления липидов, повышенного в результате токсического влияния четыреххлористого углерода на клеточные структуры гепатоцитов. Механизм действия фитопрепаратов, помимо антиоксидантного действия, может заключаться в изменении активности ферментов - факторов противоперекисной зашиты гепатоцитов. Следующий блок таблиц описывает влияние фитопрепаратов на активность фермента супероксиддисмутазы. Как видно из таблицы, настойка эхинацеи пурпурной практически не влияет на активность супероксиддисмутазы. Увеличение активности фермента с 0,795 ±0,171 АЕД/мг белка печени до 0,854 ± 0,292 АЕД/мг белка печени в 1,1 раза статистически недостоверно. В таблице 16 показано влияние настойки «Эхинацея ГаленоФарм» на активность супероксиддисмутазы на фоне токсического гепатита. Как видно из таблицы, настойка «Эхинацея ГаленоФарм» практически не влияет на активность супероксиддисмутазы. Увеличение активности фермента с 0,810± 0,147 АЕД/мг белка печени до 0,843 ± 0,367 АЕД/мг белка печени статистически недостоверно. Как видно из таблицы, элеутерококка экстракт жидкий не влияет на активность супероксиддисмутазы. Увеличение активности фермента с 0,810± 0,146 АЕД/мг белка печени до 0,876 ± 0,282 АЕД/мг белка печени статистически недостоверно. Как видно из таблицы, настойка сирени мало изменяет активность супероксиддисмутазы. Отмечается увеличение активности фермента с 0,750± 0,105 АЕД/мг белка печени до 0,821 ± 0,224 АЕД/мг белка печени. Разница статистически недостоверна. Как видно из таблицы, настойка мелиссы проявляет тенденцию к повышению активности супероксиддисмутазы на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом в 1,2 раза со значения 0,795 ± 0,171 АЕД/мг белка до 0,972 ±0,180 АЕД/мг белка. Как видно из таблицы, активность каталазы крыс опытной группы составляет 0,066 ± 0,017 нМоль/с Н202/мг белка печени и практически не отличается от показателей активности каталазы печени крыс группы контроля - 0,063 ± 0,011 нМоль/с Н202/мг белка печени. Разность активности статистически не достоверна. Как видно из таблицы, экстракт элеутерококка жидкий достоверно не изменяет активность каталазы. Значение в контроле 0,058 ± 0,014 нМоль/с Н202/мг белка печени в 1,1 раза меньше значения в опыте 0,064 ± 0,023 нМоль/с НгОг/мг белка печени. Как видно из таблицы, активность каталазы крыс опытной группы составляет 0,063 ±0,010 нМоль/с Н2Ог/мг белка печени, активность каталазы печени крыс группы контроля - 0,063 ± 0,011 нМоль/с Н2Ог/мг белка печени. Разность активности фермента статистически не достоверна. Как показывает диаграмма №8, при токсическом воздействии активность фермента глутатионпероксидазы снижается. Настойка эхинацеи и «Эхинацея ГаленоФарм» повышают активность фермента глутатионпероксидазы в 1,4 и 1,5 раза соответственно. Фитопрепараты экстракт элеутерококка жидкий, настойки сирени и мелиссы статистически достоверно не изменяют активность фермента, но проявляют тенденцию к повышению его активности. Карсил статистически достоверно не изменяет активность глутатионпероксидазы.
Влияние фитопрепаратов, изготовленных на основе лимонника, на перекисное окисление липидов, ферменты супероксиддисмутазу, каталазу и глутатионпероксидазу в ткани печени крыс после интоксикации четыреххлористым углеродом
В следующей группе опытов мы изучили влияние фитопрепаратов лимонника настойки 40%, лимонника настойки 70%, С02 экстракта лимонника, сока лимонника на перекисное окисление липидов и ферменты супероксиддисмутазу, каталазу и глутатионпероксидазу в ткани печени после интоксикации четыреххлористым углеродом. Препараты вводились крысам внутрижелудочно: лимонника настойка, сок лимонника в дозе 150 мкл/кг, С02 экстракт лимонника вводился в дозе 5 мг/кг. 70% лимонника настойка и 40% лимонника настойка выпаривалась под вакуумом и на момент введения не содержала спирта. В данной серии опытов также были взяты две контрольные группы: одной вводился только четыреххлористый углерод в мышцу, второй - четыреххлористый углерод в мышцу и 40% спирт в дозе 0,2 мл/кг внутрижелудочно, поскольку часть исследуемых препаратов содержала спирт. В первом блоке таблиц содержатся сведения об изменении количественного содержания малонового диальдегида под действием изучаемых фитопрепаратов. В таблице 49 представлены данные содержания малонового диальдегида в гомогенате крыс, получавших 40% спирт в дозе 0,2 мл/кг на фоне четыреххлористого углерода (контрольная группа), и крыс, получавших настойку лимонника в дозе 150 мкл/кг массы тела на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом (опытная группа). Как видно из таблицы, настойка лимонника в дозе 150 мкл/кг снижает содержание малонового диальдегида в печени в 1,2 раза на фоне четыреххлористого углерода и 40% спирта (р 0,05). Содержание малонового диальдегида в контроле составило 24,74 ± 2,07 нМоль/мг белка, а в опыте 19,80 ± 4,00 нМоль/мг белка. Как видно из таблицы, под действием настойки лимонника содержание малонового диальдегида в печени отравленных крыс снижается с 25,11 ± 1,96 до 20,48 ± 4,38 нМоль/мг белка печеночной ткани. Разность средних составляет 1,2 раза (р 0,05). Диаграмма показывает статистически достоверное снижение уровня малонового диальдегида при применении настоек лимонника и СО2 экстракта лимонника. Сок лимонника практически не снижает уровень малонового диальдегида. Об изменении уровня фермента супероксиддисмутазы под действием изучаемых фитопрепаратов, можно судить по данным, представленным в следующем блоке таблиц. Как видно из таблицы, настойка лимонника мало изменяет активность супероксиддисмутазы. Увеличение активности фермента с 0,810± 0,147 АЕД/мг белка печени до 0,966 ± 0,134 АЕД/мг белка печени. Разница статистически не достоверна. Как видно из таблицы, СОг экстракт лимонника не повышает активность супероксиддисмутазы на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом. Значения активности фермента меняются с 1,161 ± 0,292 АЕД/мг белка до 1,212 ± 0,241 АЕД/мг белка. Разница статистически не достоверна. Как видно из таблицы, настойка лимонника на 70% этиловом спирте статистически достоверно повышает активность каталазы (р 0,05). Значение в опыте 0,072 ± 0,012 в 1,2 раза выше значения в контроле 0,059 ± 0,013 нМоль/с Н202/мг белка печени. Как видно из таблицы, применение С02 экстракта лимонника дает статистически достоверное повышение активности каталазы печени крыс на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом и составляет 0,098 ± 0,030 нМоль/с НгОг/мг белка печени, активность каталазы в контрольной группе -0,064 ± 0,014 нМоль/с Н2Ог/мг белка печени. Разность активности 1,5 раза. Из таблицы видно, что активность каталазы опытной (0,060 ± 0,016 нМоль/с НгОг/мг белка печени) и контрольной группы животных, отравленных четыреххлористым углеродом (0,059 ± 0,013 нМоль/с НгОг/мг белка печени) практически не изменяется.
Активность глутатионпероксидазы у контрольной группы составляет 1,11± 0,44 мкМоль/мин/мг белка печени, активность глутатионпероксидазы печени крыс, подвергшихся токсическому воздействию, но при этом, принимающих настойку лимонника - 1,25 ± 0,58 мкМоль/мин/мг белка печени. Разность активности в 1,2 раз статистически недостоверна, но можно отметить тенденцию к повышению активности глутатионпероксидазы. Из таблицы видно, что активность глутатионпероксидазы опытной группы крыс (1,02 ± 0,52 мкМоль/мин/мг белка печени) практически не отличается от активности глутатионпероксидазы контрольной группы животных (1,01 ± 0,37 мкМоль/мин/мг белка печени). Различия недостоверны. Как видно из таблицы, активность .глутатионпероксидазы опытной группы крыс составляет 1,16 ± 0,31 мкМоль/мин/мг белка печени, активность глутатионпероксидазы контрольной группы 0,89 ± 0,32 мкМоль/мин/мг белка печени. Разность активности в 1,3 раза, что статистически не достоверно, но можно отметить тенденцию к повышению активности глутатионпероксидазы.
