Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 6
2.1. Микробные полисахариды и их применение 6
2.2. Химическая модификация лекарственных субстанций полисахаридами 8
2.2.1. Классификация физиологически активных полимеров 8
2.2.2. Требования к полимерным матрицам и физиологически активным веществам 9
2.2.3. Основные направления химической модификации полисахаридов 14
2.3. Периодатное окисление полисахаридов 15
2,3.1. Модификация полисахаридальдегидов. 17
3. Обсуждение результатов. 29
3.1. Свойства декстранполиальдегида (ДПА) в зависимости от условий синтеза и выделения 29
3.2. Реакции декстранполиальдегида с ароматическими аминами 40
3.3. Взаимодействие карбоксиметилдекстранполиальдегида с ароматическими аминами 48
3.4. Исследование реакции декстранполиальдегида с аминопиридинами 53
3.5. Реакции декстранполиальдегида с амино- и гидрокси(оксо)- пири-мидинами 60
3.6. Восстановление продуктов реакции ДПА с аминопиридинами и аминопиримидинами 70
3.7. Разработка и совершенствование методик анализа производных декстрана 74
3.7.1. Совершенствование оксимного метода анализа полиальдегидов 74
3.7.2. Разработка методик стандартизации азометинов 79
3.7.3. Кондуктометрическое титрование азометинов 82
3.8. Биологическая активность синтезированных соединений 83
4. Экспериментальная часть 84
4.1. Материалы и методы 84
4.2. Химическая модификация полисахаридов , 86
4.3. Синтез гетероциклических аминов 96
5. Выводы 98
6. Список литературы , 100
Приложение
- Требования к полимерным матрицам и физиологически активным веществам
- Периодатное окисление полисахаридов
- Взаимодействие карбоксиметилдекстранполиальдегида с ароматическими аминами
- Совершенствование оксимного метода анализа полиальдегидов
Введение к работе
Полисахариды применяются в биотехнологии, медицине, пищевой, косметической, фармацевтической, нефтяной и других отраслях промышленности. С каждым годом все большее число полисахаридов и их производных применяют для лечения различных заболеваний, а также при создании полимерных пролекарств. В ряде случаев полисахариды обладают собственной физиологической активностью и повышают неспецифическую резистентность человека и животных к бактериальным и вирусным инфекциям, действию рентгеновских лучей, возникновению и развитию опухолей. Полисахариды в наибольшей степени отвечают требованиям, предъявляемым к полимерным матрицам при создании физиологически активных полимеров. Они, как правило, не токсичны, не вызывают аллергических реакций, не накапливаются в организме. Химическая фиксация лекарственных субстанций на полимерной матрице позволяет совершенствовать уже известные лекарственные препараты и создавать новые средства пролонгированного действия с низкой токсичностью и необходимым балансом липофильно-гидрофильных свойств. Примерами могут служить выпускаемые промышленностью отечественные и зарубежные препараты: пирогенал, поликапран, стрептодеказа и
др.
Цель работы заключалась в разработке методов получения декстран-полиальдегидов с заданным числом 2,3(3,4)- и 2,4-окисленных фрагментов и их химической модификации алифатическими, ароматическими и гетероциклическими аминами с образованием как гидролитически лабильной C=N, так и прочной ковалентной C-N связи. Для этого необходимо было решить следующие задачи:
исследовать влияние природы буферных растворов, рН реакционной массы, концентрации окислителя и условий выделения на строение образующегося декстранполиальдегида;
определить условия модификации декстранполиальдегида аминами с образованием лабильной азометиновой связи;
исследовать влияние рКви+ ароматического амина на степень превращения альдегидных групп в азометиновые, а также степени карбоксиметилиро-вания на растворимость образующихся азометинов;
синтезировать аминополисахаридные производные с прочной ковалент-ной связью;
разработать методики стандартизации полученных соединений. Научная новизна. В работе впервые подробно изучены реакции декст-ран- и карбоксиметилдекстранполиальдегидов с ароматическими и гетероциклическими аминами и показано, что проведением их в воде варьируя рН раствора, температуру и время можно получать полимеры с заданным числом низкомолекулярных фрагментов. Ароматические и гетероциклические амины, не содержащие других функциональных групп, реагируют с декст-ран- и карбоксиметилдекстранполиальдегидами образуя только азометины, тогда как их амино- и гидрокси(оксо)производные кроме того подвергаются и последующей гетероциклизации за счет взаимодействия с электрофиль-ными центрами полисахарида. 6-Аминоурацилы, в отличие от 5-аминоаналогов, взаимодействуют с декстранполиальдегидом и ароматическими альдегидами, как С-, а не N-нуклеофилы, с образованием на первой стадии соответствующих бис(6-аминоурацил-5-ил)метилдекстранов, аминогруппы которых затем реагируют с карбонилами полисахарида.
Практическая значимость, заключалась в разработке технологичных методов окисления декстрана и карбоксиметилдекстрана, позволяющих получать полиальдегид с заданным числом и соотношением 2,4- и 2,3(3,4)-окисленных фрагментов и модификации декстран- и карбоксиметилдекст-ранполиальдегида физиологически активными аминами для получения физиологически активных полимеров. Разработаны методики стандартизации
синтезированных иминополисахаридов, которые позволили сократить время и трудоемкость анализа.
2. Обзор литературы
Требования к полимерным матрицам и физиологически активным веществам
В связи с тем, что альдегидная группа является одной из наиболее реак-ционноспособных и легко вступает в реакции с аминами, производными гидразина и другими классами органических соединений, одним из путей химической модификации полисахаридов является окисление гликольных группировок, приводящее к образованию полисахаридальдегидов, которые содержат две альдегидные группы на каждое окисленное звено [24, 40 - 42]. При этом, варьируя соотношение полисахарида и окислителя, можно получать полиальдегиды с заданной степенью окисления.
Наиболее часто в качестве окислителей используются метапериодат натрия или калия и тетраацетат свинца. Такие окислители, как перманганат калия или азотная кислота, в большинстве случаев не могут быть применены, так как их действие не является избирательным. Кроме того, эти реагенты способны окислять большинство соединений, образующихся в качестве продуктов реакции.
При использовании тетраацетата свинца скорость реакции гораздо выше, чем при применении периодата натрия, однако окисление тетраацетатом свинца ведут, в основном, в органических растворителях, таких как ледяная уксусная кислота, бензол, хлороформ, нитробензол, диметилсульфоксид, так как он гидролизуется водой [43 - 45]. Для окисления йодной кислотой наиболее подходящим растворителем является вода, что и обусловлено более широким применением этого метода для получения полисахаридальдегидов.
Строение продукта частичного окисления декстрана метапериодатом натрия (NaI04) может быть представлено схемой [16]:
При действии солей йодной кислоты на вицинальные гликоли происходит расщепление углеродной цепи с образованием двух альдегидных групп, причем поглощается 1 моль экв. периодата. В случае аДу-триолов происходит двойное расщепление углеродной цепи с образованием двух альдегидных групп в одном мономерном звене и 1 моля муравьиной кислоты; при таком окислении поглощается 2 моля периодата. Окисление обычно ведут в темноте, используя разбавленные растворы, для сведения к минимуму возможности протекания побочных реакций. При проведении окисления в слабокислых водных растворах используют метапериодат натрия, нерастворимый в щелочах, окисление периодатом калия ведут при рН 7.
Для получения полисахаридальдегидов используют полисахариды самого разного строения и происхождения, нативные и модифицированные, например, декстран с молекулярной массой 10-70 тыс. и а-циклодекстрин, гидроксиэтилкрахмал и инулин, целлюлозу и водорастворимую ацетилцел-люлозу [46 - 51].
Для уменьшения гидролитической способности полисахаридальдегиды применяют в комплексе с другими полисахаридами, такими как хитин [52]. Иногда проводят предварительную этерификацию гидроксильных групп [53].
2.3.7. Модификация полисахаридальдегидов Как уже говорилось, альдегидная группа является одной из наиболее ре-акционноспособных и легко вступает в реакции с различными классами химических соединений. При модификации полисахаридальдегидов (I) аминами образуется лабильная азометиновая связь (II), благодаря малой устойчивости которой к гидролизу лекарственные вещества легко отделяются от полисахарида. Для образования более прочных связей биологически активных соединений с полисахаридом азометиновые связи нередко восстанавливают различными реагентами (боргидридом или цианборгидридом натрия) (III) [24]. В зависимости от условий реакции одна или обе альдегидные группы могут взаимодействовать с аминами с образованием альдиминов, а также циклических структур [34]:
В процессе окисления полисахариды подвергаются деструкции, т.к. гликозидные связи, образованные окисленными звеньями, лабильнее, чем обычные [54, 55]. Тем не менее, мягкие условия взаимодействия с аминами явились причиной частого использования этого метода для присоединения БАВ к полисахаридам.
Реакционная способность полисахаридальдегидов сильно зависит от их строения. Так, в кислых средах в окисленных полисахаридах примерно половина альдегидных групп находится в свободном состоянии в гидратирован-ной форме I [24]. Вторая половина связана полуацетальными межмолекулярными связями II [24]. При повышении рН межмолекулярные связи разрываются, и гемдиольные альдегидные группы образуют преимущественно полу-ацетальные циклические структуры между двумя окисленными группами окисленного звена III. При этом возможен отрыв воды с образованием еноль-ной структуры [24]. С сильными нуклеофилами, такими как гидроксиламин, полисахари-дальдегиды реагируют в диальдегидной форме независимо от степени окисления, при этом на каждое окисленное звено диальдегида приходится две ок-симные группы, а с менее сильными (бисульфитом натрия) — в полуацеталь-но-гидратированной форме. Максимальное содержание сульфитных групп составляет 1.0 на каждое звено [34, 48, 56, 57].
Как правило, модификация полисахаридов аминами проходит при температуре 20-40 С в воде при различных значениях рН (от 4 до 9) с хорошими выходами [16, 46, 56]. Однако условия реакции сильно зависят от нук-леофильности и свойств амина. Так, модификацию 2,3-диальдегидцеллюлозы с высокой степенью замещения по альдегидным группам 5-амино-1,10-фенантролином проводили при 40-140 С в ДМФА в течение 30-240 мин [47]. Взаимодействие высокоокисленных препаратов ди-альдегидцеллюлозы с 5-аминотетразолом, 3,5-диамино-1,2,4-триазолом и 2,4,6-триамино-1,3,5-триазином проводили в водной среде при 94-98 С без катализатора при различном времени реакции [58].
Полисахаридальдегиды модифицируют самыми различными соединеня-ми — аминокислотами, антибиотиками, ферментами, белками и другими биологически активными веществами, содержащими амино- или гидразидные группы. Модификация полисахаридальдегидов аминокислотами.
Детальное исследование реакции диальдегиддекстрана (ДАД) с глицином показало, что ДАД реагирует с аминокислотами очень быстро. Повышение температуры и рН реакционной среды ускоряли реакцию. Хотя продукт был устойчив во время гель-фильтрации, используемой для удаления несвязанного глицина, азометиновая связь легко разрушалась при действии 0.3 М НС1. Среди протестированных аминокислот наиболее реакционными оказались гистидин и глицин, а лизин и аргинин проявили меньшую активность в реакции с ДАД [59].
Периодатное окисление полисахаридов
Получено связанное с декстраном производное другого антиметаболита - 5-фторурацила [101] и изучено влияние полимерной основы на гидролитическую стабильность полимерного пролекарства in vitro.
Для получения комплексных антиопухолевых соединений платины с макромолекулярными носителями широко используется реакция полисаха-ридальдегидов с аминами, такими как этилендиамин, диаминоциклогексан динитрат с последующим восстановлением Шиффова основания цианбор-гидридом натрия. При этом значительно снижается токсичность соединений платины в то время, как терапевтическая активность остается на прежнем уровне [102, 103].
Связывание противоопухолевого агента доксорубицина, обладающего высокой кардиотоксичностью и другими побочными эффектами, с ДАД с последующим восстановлением азометиновой связи боргидридом натрия, привело к значительному снижению концентрации лекарственного вещества в сердце животных, обработанных конъюгатом, показывая тем самым возможность снижения кардиотоксичности доксорубицина [104].
Диагностические или терапевтические агенты (лекарство, токсин, метка) закрепляются на полимерном носителе, который в свою очередь сконъюги-рован (сайт-специфично) с антителом, направляемым к целевой ткани или органу, где и осуществляется диагностическое или лечебное действие. Так, конъюгацией ДАД, модифицированного 1,3-диамино-2-гидроксипропаном с последующим восстановлением боргидридом натрия, с метотрексатом, активированным N-гидроксисукцинимидом и с периодатокисленным моноклональным антителом был получен конъюгат, который был использован для лечения карциномы [105].
Полимерные производные веществ, действующих на нервную систему. Получены препараты катехоламинов (адреналина, норадреналина и изопро-теренола) иммобилизованные на агарозе, которые сохраняли возможность взаимодействия их с белком Р-адренорецептора сердечной мышцы (по данным аффинной хроматографии) [106]. Декстрановые производные дофамина, так же как и сам дофамин ингибировали ключевой фермент биосинтеза катехоламинов тирозингидроксилазу, причем при низких концентрациях препаратов ингибирование выражено более сильно в случае высокомолекулярного соединения. Интересно, что производные дофамина с синтетическими сополимерами не действовали на тирозингидроксилазу [107].
Полимерные производные гормонов и других биорегуляторов. Синтезированы полимерные производные карбоната высокозамещенной 0-(2-гидроксипропил)целлюлозы с эстроном и тестостероном [108]. Карбодии-мидным методом получены декстрановые производные аналогов эледоизина [109, ПО], в которых пептид связан с полимером-носителем амидной или сложноэфирной связью. Активность декстрановых производных на два порядка ниже, длительность действия - на столько же больше. При этом для полимеров со сложноэфирной связью гипотензия наступала через 15-20 мин (для исходных пептидов 2 мин), а полимера с амидной связью - через 60-70 мин.
Пепстатин, пептид бактериального происхождения, является мощным ингибитором ренина и других аспарагиновых протеиназ. Однако, низкая растворимость в воде и слишком кратковременное действе in vivo препятствует его клиническому применению. Конъюгат пепстатина с декстраном, полученный присоединением пептида к этилендиаминовому производному полисахарида карбодиимидным методом, оказался хорошо растворимым в воде и сохранил сильное ингибирующее действие по отношению к ренину [111].
Полимерные производные витаминов и коферментов. Потребность организма в витаминах и коферментах количественно невелика, но непрерывна во времени. Применение полимерных витаминов и коферментов позволяет дольше поддерживать необходимый уровень этих веществ, чем при их использовании в традиционных формах.
Алкилированием никотинамида 0-(3-хлор-2-гидроксипропил)декстра-ном получена полимерная четвертичная соль, содержащая остатки витамина РР [112]. Производные Тчг-(2-аминоэтил)-НАД с декстраном Т-40, активированным бромцианом [113], почти полностью восстанавливается разными де-гидрогеназами со скоростью, составляющей 40 % от скорости восстановления НАД. Полимер достаточно стабилен (отщепляется только 2 % НАД в сутки при рН 7).
Взаимодействием ДАД с человеческим иммуноглобулином М и антиге-нативным антителом с последующим восстановлением боргидридом натрия был получен искусственный эталонный стандарт для иммуноанализа иммуноглобулина М против гепатита В, Стандарт продемонстрировал иммунологические характеристики и человеческого иммуноглобулина М и анти-НВс Ig М в образце крови с использованием этого стандарта, а также показал результаты, схожие с полученными при использовании стандарта, производимого из человеческой крови [114].
Конъюгаты гидролизатов желатина с окисленным декстраном показали физико-химические свойства, пригодные для использования их в качестве кровезаменителя. Исследование влияния условий реакции на скорость геле-образования показало, что оно уменьшается с увеличением концентрации ДАД, повышением рН и увеличением молекулярной массы ДАД [115, 116].
Таким образом, как видно из приведенных выше данных, модификация биологически активных веществ полисахаридальдегидами является перспективным путем для создания лекарственных средств нового поколения, обладающих повышенной стабильностью и более низкой токсичностью. Модификация лекарственных субстанций полисахаридами позволяет снизить токсичность лекарств, пролонгировать их действие, а также создать необходимый липофильно-гидрофильный баланс.
Взаимодействие карбоксиметилдекстранполиальдегида с ароматическими аминами
Оказалось, что наибольшая степень превращения альдегидных групп (84 %) в азометиновые наблюдается при содержании воды в диоксане более 5 %. По-видимому, при выделении из раствора образца ДПА, который содержит как альдегидные, так и спиртовые группы, равновесие реакции между ними полностью смещается в сторону полуацеталей. Безводный диоксан не влияет на состояние этого равновесия, свободных альдегидных групп в таких образцах ДПА мало и реакция с аминопиридином практически не идет (Спа менее 10 %). Добавление воды в диоксан приводит к гидратации образца ДПА (набуханию), установлению равновесия между полуацеталями и альдегидными группами, что способствует протеканию реакции ДПА с аминопиридином. Выход целевого продукта реакции ДПА с 2-аминопиридином увеличился до 95 %.
Для подтверждения этого предположения нами была проведена реакция 2-аминопиридина с декстранполиальдегидом, содержащим только 2,4-окисленные фрагменты, образование лактольных циклов у которых затруднено. Поэтому мы предположили, что такой полиальдегид будет взаимодействовать с 2-аминопиридином в кипящем диоксане без добавления воды. Наши предположения подтвердились. Спа в реакции составила 23 %, что, примерно, в 3-5 раз больше, чем в реакциях с ДПА, содержащим 2,3(3,4)- и 2,4-окисленные фрагменты, который взаимодействует в таких условиях только на 5-7 %.
На основании полученных результатов нами была проведена модификация декстранполиальдегида 2-этокси-6-нитро-9-аминоакридином (А) и 2-этокси-6,9-диаминоакридином (основанием риванола) {Б). Реакцию проводили 24 ч с 3 кратным избытком акридинового производного в диоксане при кипении и в воде при 80 С и рН 10. Продукт выделяли и анализировали как описано выше.
Оказалось, что ДПА в данных условиях не взаимодействует с 2-этокси-6-нитро-9-аминоакридином. По-видимому, это связано с пониженной нук-леофильностью аминогруппы из-за влияния на нее гетероциклического атома азота. При проведении реакции с основанием риванола была достигнута степень превращения альдегидных групп в азометиновые 40 %. Мы предполагаем, что реакция протекает по аминогруппе, находящейся во втором положении акридинового цикла. Это подтверждают ИК спектры (см. Приложение рис. 9, 10). В ИК спектрах 2-нитро-6-этокси-9-аминоакридина имеется полоса валентных колебаний первичной аминогруппы (1230 см"1), в то время как, в ИК спектре основания риванола помимо полосы при 1230 см"1 появляется еще одна полоса валентных и деформационных колебаний первичной аминогрупп (1640 см"1), которая, вероятно, относится к аминогруппе во втором положении акридинового цикла. Полоса валентных и деформационных колебаний первичной аминогруппы (1640 см"1) в ИК спектре продукта реакции ДПА с основанием риванола сдвинулась на 10 см"1, что связано с образованием азометиновой связи. Полоса валентных колебаний при 1230 см"1 осталась неизмененной.
Таким образом, для конструирования новых физиологически активных полимеров можно использовать реакцию ДПА с аминопиридинами в воде и диоксане. Было установлено, что при проведении реакции ДПА, содержащего только 2,4-окисленные фрагменты, с аминопиридином можно использовать безводный диоксан, а при наличии в ДПА и 2,3(3,4)- окисленные фрагменты необходимо добавлять в диоксан 5 % воды. Легче с ДПА реагирует 3-аминопиридин, что можно объяснить его сходством с анилином, тогда как 2-и 4-аминопиридины реагируют с ДПА труднее, что объясняется возможным существованием таутомерных иминоформ. Максимальная степень превращения альдегидных групп в азометиновые в воде достигается за 1 ч при 80 С (рН 10), либо за 2.5 ч при 18-20 С (рН 10).
Многие пиримидиновые соединения входят в состав молекул, отвечающих за функционирование живых организмов, и широко применяются в синтезе лекарственных веществ. Последние, к сожалению, часто обладают побочным действием, токсичностью и быстро выводятся из организма. В связи с этим целью нашей работы была разработка метода связывания серии ами-ногидроксипиримидинов (урацил, 6-метилурацил, 5- и 6-аминоурацилы, их изомер 2-амино-4,6-дигидроксипиримидин, цитозин, 5-гидрокси- и 5-нитроцитозины, 5-гидроксиизоцитозин, 4-гидрокси-6-аминопиримидин, 3-метил-4-амино-2,6-дигидроксипиримидин) с декстранполиальдегидом.
Реакцию ДПА с гетероциклическими аминами проводили в воде при 20 -80 С рН 4 4- 10 .2 в течение 0.5-S-48 ч и мольном соотношении аминогете-роцикла и альдегидных групп ДПА 3:1. Реакция гетерогенна - большая часть амина находится в твердой фазе и растворяется по мере взаимодействия с ДПА. После завершения реакции не растворившийся избыток исходных веществ отфильтровывали и продукт реакции осаждали этанолом, отфильтровывали, промывали этанолом, эфиром и сушили 2-3 ч в вакууме (20-25 мм. рт. ст.) при 60 С. Отсутствие низкомолекулярных соединений в синтезированных образцах устанавливали с помощью тонкослойной хроматографии.
Гетероцикл-поли сахаридные соединения характеризовали степенью замещения С3 (число гетероциклических фрагментов, приходящихся на моно-сахаридное звено), вычисленных по результатам элементного анализа, а о реакционной способности ДПА и аминопиримидинов судили по величине степени превращения альдегидных групп Спа которую рассчитывали по формуле Спа = (CJC3ay 100%. Условия введения в молекулу полиальдегида аминогидроксипиримиди-нов определяли, изучая влияние температуры, времени реакции и величины рН на степень замещения в продуктах реакции ДПА с 6-аминоурацилом.
Как и следовало ожидать, число гетероциклических фрагментов в продуктах реакции ДПА с 6-аминоурацилом увеличивается с 0.01 до 0.58 моль/моль при повышении температуры от 20 С до 80 С (рис. 3.5.1). Однако, зависимость степени замещения от температуры не линейна, что вероятно, связано с повышением растворимости 6-аминоурацила в воде при нагревании и, следовательно, с повышением его концентрации в растворе.
Совершенствование оксимного метода анализа полиальдегидов
К раствору 1 г азометина в 10 мл воды порциями добавляли 0.5 г бор-гидрида натрия, выдерживали 24 ч при 17-20 С. Затем добавляли ледяную уксусную кислоту до рН 5-6 и продукт реакции осаждали этанолом. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали спиртом, эфиром и сушили 2-3 ч в вакууме (20-25 мм рт. ст.) при 60 С. Степень замещения гетероциклических фрагментов по альдегидным группам определяли элементным анализом,
Избыток амина (2-3 моля) растворяли в воде, доводили до нужного значения рН с помощью мономера И-160, доводили объем раствора до 10 мл, добавляли 0.2 г полисахаридальдегида и выдерживали в течение 0,5-4 ч при температуре 20-80 С. Затем добавляли 0.5 г боргидрида натрия и проводили реакцию как описана выше.
З-Аминопирыдин. Проводили по методике [134] В 2-литровый стакан, снабженный механической мешалкой и погруженный в баню со смесью льда и соли, помещают раствор 75 г (1.87 моля) едкого натра в 800 мл воды, К этому раствору прибавляют при перемешивании 95.8 г (30.2 мл 0.6 моля) брома. Когда температура смеси достигнет 0 С, к ней прибавляют в один прием при сильном перемешивании 60 г (0.49 моля) никотинамида. После 15-минутного перемешивания раствор становится прозрачным. Баню со льдом и солью заменяют баней с водой, нагретой до 75 С» и раствор перемешивают 45 мин, при 70-75 С. Раствор охлаждают до 18-20 С, насыщают хлористым натрием (-170 г), и продукт экстрагируют эфиром в экстракторе непрерывно-го действия. Объем эфирных вытяжек доводят до 1 л; экстракт сушат над 4-5 г гранулированного едкого натра, фильтруют, эфир отгоняют при 36-40 С. Остаток при охлаждении закристаллизовывается. Выход темно-красных кристаллов 39-41 г (83-89 % ) с т. пл. 61-63 С.
Неочищенное вещество растворяют в смеси 320 мл бензола и 80 мл петролейного эфира (т. кип, 60-90 С), добавляют 5 г активированного угля и 2 г гидросульфита натрия и нагревают 20 мин при 60-65 С, Уголь отфильтровывают в горячем состоянии без отсасывания, и медленно охладают до 18-20 С, затем выдерживают 10-12 ч в холодильном шкафу при -4 С. Выделившийся осадок отфильтровывают без отсасывания, промывают на фильтре петролейным эфиром (25 мл) и сушат в вакуум-эксикаторе. Выход бесцветных кристаллов 28-30 г (61-65 %) с т. пл. 63-64 С. 2-Этоксг(-б-иитро-9-аминоакридииа.. [135] В круглодонной колбе емкостью 500 мл, снабженной холодильником с водяным охлаждением, смешивают 46 г 2-этокси-6-нитроакридона со 160 мл (270 г, 1.76 моля) хлорокиси фосфора. Смесь медленно нагревают (-15 мин) до 85-90 С- Сразу после начала энергичной реакции, нагревание прекращают и через 5-10 мин, после того как интенсивность кипения несколько уменьшится, смесь нагревают до 135-140 С и выдерживают при этой температуре — 2 ч, Избыток хлорокиси фосфора отгоняют при 140-150 С в вакууме (-50 мм рт. ст.). Остаток охлаждают и выливают в энергично перемешиваемую смесь 200 мл конц. раствора аммиака, 500 г льда и 200 мл хлороформа, колбу обмывают, встряхивая с небольшим количеством (около 25-30 мл) смеси хлороформа и аммиака. Когда больше не останется нерастворившихся твердых частиц, хлороформенный слой отделяют, и водный слой экстрагируют еще 40 мл хлороформа- Объединенный хлороформенный экстракт сушат над 10 г хлористого кальция, отфильтровывают и растворитель отгоняют. Полученный зеленоватый порошок сушат 20 мин при 70 С, Выход неочищенного 2-этокси-6-нитро-9-хлоракридина 44 г ( — 99%). г Неочищенного 2-этокси-6-нитро-9-хлоракридина и 250 мл свежепе-регнанного диметилформамида нагревают в колбе объемом 500 мл при 106-116 С» 4 ч пропуская газообразный аммиак. Выливают в горячую воду (- 90-95 С) и перемешивают 30 мин. Осадок отфильтровывают, промывают горячей водой и сушат при 70 С в вакууме (20-25 мм рт, ст.). Выход 85 %. 5. ВЫВОДЫ
Взаимодействие декстран- и карбоксиметилдекстранполиаль де гидов с ароматическими и гетероциклическими аминами в воде при рП раствора близких к значениям их рКви+ - удобный метод модификации полисахаридов для создания физиологически активных полимеров, позволяющий варьиро вать не только число аминов, вводимых в полимерную цепь, но и баланс ли пофильных и гидрофильных свойств потенциальных лекарств. 2. Вариация рН буферного раствора и отношения количества метаперио-дата натрия на мономерное звено декстран- и карбоксиметилдекстранов и условий выделения продуктов окисления позволяет получать соответствующие полиальдегиды с заданным числом и соотношением 2,4- и 2,3(3,4)-окисленных фрагментов. 3. Ароматические и гетероциклические амины, не содержащие других функциональных групп, реагируют с декстран- и карбокси метил декстранпо-лиальдегидами образуя только азометины, тогда как их амино- и гидро-кси(оксо)производные кроме того подвергаются и последующей гетероцик-лизации за счет взаимодействия нуклеофильных групп амина с электрофиль-ными центрами полисахарида. 4, 6-Аминоурацилы, в отличие от 5 аминоаналогов, взаимодействуют с декстранполиальдегидом и ароматическими альдегидами, как С-, а не N-нуклеофилы, с образованием на первой стадии соответствующих бис(6-аминоурацил-5-ил)метилдекстранов, аминогруппы которых затем реагируют с карбонилами полисахарида. 5, Наибольшее число вторичных аминов в полимере образуется при восстановлении продуктов реакции ДПА с аминами боргидридом натрия без выделения азометинов из реакционной массы при их синтезе.
