Содержание к диссертации
Введение
Глава I Обзор литературы 9
1. Изменение уровня требований к оценке качества и стандартизации лекарственных субстанций 9
2. Применение термических методов анализа в фармации 27
2.1. Дериватографическое изучение органических веществ 27
2.2. Применение дифференциальной сканирующей калориметрии для изучения органических веществ 34
3. Применение сублимационных методов для очистки органических
веществ 42
Глава II Изучение термического поведения и диаграмм плавкости бинарных систем исследуемых лекарственных веществ 51
1. Объекты исследования 52
2. Дериватографическое изучение исследуемых соединений 56
3. Термический анализ бинарных систем исследуемых соединений 58
4. Обсуждение результатов 71
Глава III Очистка лекарственных веществ методом натравленной вакуумной сублимации 73
1. Методика и аппаратура для направленной сублимации органических веществ 73
2. Направленная вакуумная сублимация лекарственных веществ, производных бензодиазепина 76
3. Направленная вакуумная сублимация лекарственных веществ, кислоты салициловой и ее производных 85
4. Направленная вакуумная сублимация лекарственных веществ, кислоты бензойной и ее производных 93
5. Обсуждение результатов 97
Глава IV Определение чистоты лекарственных веществ методом дифференциальной сканирующей калориметрии . 98
1. Определение температур плавления, энтальпий плавления и криоскопических констант 98
2. Определение чистоты исследуемых веществ 99
3. Изучение лекарственных веществ методом ИК-спектроскопии
4. Определение наличия примесей методом тонкослойной хроматографии 114
5. Обсуждение результатов 120
Глава V стандартизация температур плавления изучаемых лекарственных веществ 122
Общие выводы 127
Список литературы 129
Приложения 142
- Дериватографическое изучение органических веществ
- Дериватографическое изучение исследуемых соединений
- Направленная вакуумная сублимация лекарственных веществ, производных бензодиазепина
- Изучение лекарственных веществ методом ИК-спектроскопии
Введение к работе
Актуальность темы.
На современном этапе развития фармацевтической промышленности, для которой характерно расширение ассортимента лекарственных веществ, повышение требований к их качеству, возникает необходимость в пересмотре j некоторых нормативных требований при. аттестации выпускаемой продукции и ' более широком применении различных физико-химических исследований.
Качество получаемых лекарственных препаратов зависит от степени чистоты исходных продуктов, соблюдения технологического режима. Поэтому важным направлением исследований» в области фармацевтического анализа является* разработка методов контроля качества исходных и промежуточных продуктов получения лекарственных веществ, а также методов/-их очистки (постадийный контроль производства).
Одним из методов контроля чистоты лекарственных веществ является j изучение фазового перехода твердое тело - жидкость, который.нормируется для,* большинства лекарственных соединений, и должен являться не только качественной характеристикой исследуемой субстанции, но и количественным показателем чистоты. Решение этой задачи предусматривает использование физико-химических методов.
Для повышения качества выпускаемой продукции возникает необходимость выпуска стандартных образцов лекарственных веществ, в частности, стандартных образцов температур плавления. В литературе имеются' указания на необходимость таких разработок, отмечающие возможность использования физических констант для объективной характеристики* веществ. В' связи с этим актуальной задачей является поиск методов очистки, позволяющих получать высокочистые лекарственные соединения.
Систематических исследований по применению одной из разновидностей кристаллизационного метода очистки, а именно направленной вакуумной
сублимации для получения высокочистых образцов исследуемых лекарственных соединений до настоящего времени проводилось мало.
Цели и задачи исследования:
- проведение термического анализа бинарных систем лекарственных
веществ с целью обоснования правомерности выбора метода дифференциальной
сканирующей калориметрии для определения криоскопических констант,
температуры плавления, энтальпии плавления и чистоты;
- определение температуры плавления, энтальпии плавления,
криоскопических констант и чистоты исследуемых лекарственных веществ
методом дифференциальной сканирующей калориметрии;
- разработка методики и оптимального режима дополнительной очистки,
изучаемых лекарственных веществ методом направленной г- вакуумной
сублимации;
- определение чистоты исследуемых лекарственных веществ после их
очистки методом направленной вакуумной сублимации;
-уточнение и количественное определение интервала плавления изучаемых лекарственных веществ, отвечающих требованиям-НТД.
Научная новизна исследования.
Впервые методом термического анализа изучены диаграммы плавкости бинарных систем исследуемых лекарственных веществ. Проведено обоснование возможности применения метода дифференциальной сканирующей калориметрии для определения криоскопических констант и чистоты исследуемых лекарственных веществ.
Впервые экспериментально получены энтальпии плавления и из них рассчитаны криоскопические константы шести лекарственных соединений.
Впервые для глубокой очистки шести лекарственных соединений был использован метод направленной вакуумной сублимации.
Разработаны методика и оптимальные режимы процесса очистки изучаемых веществ данным методом.
Экспериментальные данные позволяют рекомендовать метод направленной вакуумной сублимации для получения высокочистых субстанций.
Проведен расчет суммарного количества примесей- в. изучаемых соединениях с учетом нормативного интервала плавления и показано, что чистота соединений не соответствует нормативной.
Предложены интервалы плавления для каждого изучаемого соединения, отвечающие нормативному содержанию примесей.
Практическая значимость работы.
Разработана и произведено внедрение методики "Очистка лекарственных веществ различных фармакологических групп направленной" вакуумной сублимацией" в . учебный, процесс кафедры фармацевтической, и токсикологической, химии медицинского факультета РУДН (5 курс, фармацевтическая химия, «Стандартизация и контроль качества лекарственных средств»),, приложение 1. Результаты диссертационной работы использованы в проекте «Методического руководства по определению качества лекарственных веществ, относящихся к карбоновым кислотам и их производным», (в главном управлении по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники республики Узбекистан), приложение 2.
С помощью экспериментально определенных криоскопических констант лекарственных веществ произведен расчет суммарного количества примесей, независимо от их состава.
Предложены интервалы.плавления для^каждого изучаемого соединения^ отвечающие нормативному содержанию примесей.
Апробация работы.
Основные материалы исследования представлены на международной конференции «Физико-химический анализ жидкофазных систем», в г. Саратове,
2003 г; на «XV международной конференции по химической термодинамике в России», в г. Москве, 2005 г; на VII, VIII, X, XII российских национальных конгрессах «Человек и лекарство», в г. Москве, 2000, 2001, 2003 и 2005 гг.; межкафедральной научной конференции в ГОУВПО ММА им. И. М. Сеченова, 2007 г.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ.
Положения выносимые на защиту.
Возможность применения метода дифференциальной сканирующей калориметрии для анализа чистоты исследуемых лекарственных веществ и определения суммарного количества примесей. Применимость метода направленной вакуумной сублимации для получения высокочистых субстанций, которые могли бы использоваться в качестве стандартных образцов.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУВПО ММА им. И. М. Сеченова по теме: «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические и> экологические аспекты)», № госрегистрации 01.200.118796.
Объем и структура диссертации.
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, четырех глав, посвященных экспериментальным исследованиям, и общих выводов.
Диссертационная работа изложена на 143 страницах машинописного текста, содержит 19 таблиц и 25 рисунков. Библиографический указатель включает 153 источника литературы, из них 69 на иностранных языках.
Обзор литературы посвящен критическому анализу имеющихся данных по применению различных физико-химических методов анализа к лекарственным веществам, очистке органических соединений сублимационными методами, выделен раздел, в котором анализируются различные подходы к требованиям, предъявляемых к качеству лекарственных препаратов, и, в частности, к их чистоте. Проведен анализ изменения уровня требований в фармакопеях разных годов издания к различным показателям оценки качества ацетилсалициловой кислоты. На основе такого анализа сформулированы цели и задачи настоящего исследования.
Во второй главе приводятся данные по дериватографическому анализу
изучаемых веществ. На основе полученных экспериментальных данных
термического анализа представлены диаграммы состояния бинарных систем
исследуемых соединений. /-
В третьей главе представлены конкретные методики и оптимальные режимы очистки объектов исследования методом направленной вакуумной сублимации.
Четвертая глава посвящена определению чистоты исследуемых лекарственных веществ (до и после очистки методом направленной вакуумной сублимации) с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии и их анализу с помощью ИК-спектроскопии и тонкослойной хроматографии
Пятая глава посвящена вопросам стандартизации температур плавления изучаемых лекарственных веществ.
Дериватографическое изучение органических веществ
Методы дифференциального термического анализа (ДТА) широко используются для изучения органических веществ [1, 23, 27, 47, 53, 65, 69, 78, 80, 82, 93, 94, 98, 109, 123, 126, 128, 129, 132, 137, 149]. Поскольку лекарственные вещества в основном по своей природе являются органическими, то данные методы также актуальны и в фармацевтических исследованиях [17, 89, 105, 112, 134, 140, 150, 151].
Метод ДТА основан на способности вещества претерпевать при нагревании структурные и химические преобразования, сопровождающиеся тепловыми эффектами и изменениями массы вещества, которые, в свою очередь, отражаются на графическом результате анализа (дериватограмме). Дериватограф - прибор, одновременно регистрирующий кривые изменения температуры (Т) и ее производной (ДТА), а также изменения массы (ТГ) и ее производной (ДТГ). Кривые ДТА регистрируют тепловые изменения, возникающие в нагреваемом веществе. При отсутствии этих изменений кривая ДТА параллельна оси абсцисс на графике. Превращение, сопровождаемое поглощением тепла, отражается в виде отклонения ниже нулевой линии и называется, эндотермическим эффектом, соответственно, выделение тепла - в виде отклонения выше нулевой линии называется экзотермическим эффектом. Кривая ТГ — кривая изменения массы вещества в процессе нагревания. Кривая ДТГ — дифференциальная термогравиметрическая кривая, регистрирующая скорость изменения массы вещества. На рисунке 1 приведена гипотетическая дериватограмма. По кривой термогравиметрии определяют множество параметров, характеризующих вещество. Методом дериватографии можно определить возможность сублимации вещества. По кривым ТГ и ДТА можно судить о возгонке, кипении и десорбции (уменьшение массы, эндотермический процесс), адсорбции (увеличение массы, экзотермический процесс), разложении (уменьшение массы, экзо- или эндотермический процесс), окислении, восстановлении. Например, методом ДТА было исследовано термическое разложение некоторых органических кислот -щавелевой, малоновой, янтарной, глутаровой, меконовой [69]. Относительно фармацевтических препаратов был исследован ряд субстанций, по которым приводится информация о растворимости, структуре и полиморфизме соединений.
Для суждения о характере взаимодействия веществ в физико-химическом анализе производятся исследования разных физических свойств, чувствительных к изменению состава системы. Этими свойствами являются: температура плавления, теплоемкость, теплота образования, электропроводность, показатель преломления, плотность, вязкость, поверхностное натяжение.
Одним из наиболее распространенных методов построения фазовых диаграмм является термический анализ, при помощи которого можно изучать зависимость температуры плавления (кристаллизации) от состава смеси. Получение кривых нагревания и построение по ним диаграмм плавкости являются первым; этапом изучения и ознакомления с физико-химической системой. Они дают, как правило, необходимые и исходные данные для планирования дальнейших исследований. Знание диаграмм плавкости необходимо для, установления закономерности образования, твердых растворов, эвтектик и других форм взаимодействия между важными органическими соединениями, а также для решения таких задач, как разделение компонентов, очистка, химическая переработка. На рисунке 2 представлена диаграмма плавкости бинарной системы веществ, которые смешиваются во всех пропорциях в жидком состоянии и не образуют твердых растворов и химических соединений.
В некоторых бинарных системах при охлаждении жидкой фазы из нее выкристаллизовываются твердые растворы, являющиеся фазами переменного состава. У веществ с близкими кристаллическими структурами возможно образование непрерывных твердых растворов. При большем различии твердые растворы могут образовываться в ограниченной области концентраций.
В работе [152] проведены исследования с целью выбора несмешивающихся основ для мазей. С помощью ДТА изучались фазовые диаграммы смесей жирных спиртов. Установлено, что при высокой длине углеродной цепи образуются твердые растворы. На рисунке 4 приведена фазовая диаграмма для системы с ограниченной растворимостью компонентов в твердой фазе. В таких системах компоненты частично (иногда незначительно) смешиваются в твердом состоянии, образуя две серии твердых растворов и эвтектику. Твердые растворы представлены составами, охарактеризованными точками на кривых АХ и BY. Эти линии АХ и BY часто находятся вблизи осей чистого компонента, тогда области твердых растворов незначительны, и их влияние на разделение малозаметно.
В работе [138], на основе модельных систем, проведен анализ фазовой диаграммы с целью получения информации о структуре бинарной системы органических лекарственных веществ кофеин - парацетамол в расплаве и наличии взаимодействия между молекулами. Установлено, что в данной системе твердые растворы не образуются.
При исследовании с помощью термического анализа механических смесей сульфаметоксазола с сахарами установлено, что данное вещество с маннитолом образует эвтектическую смесь при концентрации 90,3 %. Построена фазовая диаграмма [103]. 2.2. Применение дифференциальной сканирующей калориметрии для изучения органических веществ.
Как известно, многие современные методы, используемые для установления качества органических соединений, основаны на измерении термодинамических характеристик вещества (например, энтальпии плавления), проявляемых во время плавления или кристаллизации. При этом обычно определяют физико-химический параметр, который заметно изменяется от присутствия примесей. Из таких параметров наиболее подходящими являются понижение температуры плавления или кристаллизации.
При изучении зависимости температуры плавления от состава смеси получают кривые плавления. Эти кривые могут быть определены при условии непрерывного (иногда постоянного) переноса тепла к образцу или от образца. Метод определения кривых при непрерывном потоке тепловой энергии называется динамическим или термометрическим методом. Если кривую температура — теплосодержание определяют с помощью адиабатического калориметра и тепловая энергия поступает с интервалами, метод рассматривается как статический или калориметрический.
В зависимости от измеряемой характеристики термометрические методы подразделяют на дифференциальный термоанализ (ДТА), при котором регистрируется выделение или поглощение энергии, термогравиметрию (ТГА) -изменение веса (массы) образца и дилатометрию - изменение размеров образца.
Дериватографическое изучение исследуемых соединений
На приборе ДТА - дериватографе 1050 MOM Паулик-Эрдеи (ВНР) было изучено поведение исследуемых лекарственных соединений в процессе нагревания. Все испытания проводились в стандартных условиях: скорость нагрева 2 град/мин в динамической атмосфере воздуха, эталон — окись алюминия, масса образца - 100 ± 0,05 мг. Чувствительность ДТА 1:1, ДТГ 1:5. Тигли платиновые, открытые.
При термическом исследовании диазепама проявился эндотермический эффект при 131,0 С, соответствующий температуре плавления вещества. Разложения при плавлении нет. Наблюдается очень небольшая потеря веса на кривой ТГ до плавления. Вероятно, имеет место небольшая сублимация, которая может быть значительной, если препарат нагреть в вакууме. На дериватограмме мезапама проявился эндотермический пик при 102,0 С, соответствующий плавлению без разложения. Наблюдается небольшая потеря веса на кривой ТГ до плавления, что говорит о вероятной сублимации.
Разложение нозепама начинается при температуре, близкой к температуре плавления, поэтому его нельзя перегревать даже на несколько градусов. Салициловая кислота характеризуется эндотермическим эффектом при 159,0 С, связанным с ее плавлением. Наблюдается значительная потеря в весе до плавления, что говорит о вероятной сублимации, о чем имеются указания в литературе [31].
Салициловая и бензойные кислоты, являлись модельными веществами, полученные данные совпали с литературными [6]. Из анализа дериватограмм исследуемых лекарственных веществ следует, что все вещества плавятся без разложения, большинство из них незначительно теряют в весе при нагревании до плавления, что дает основание надеяться на успешную очистку этих соединений методом вакуумной сублимации. Температуры плавления исследуемых веществ отвечают температурному интервалу плавления, указанному в ГФ X и соответствующих ФС, ФСП и НД.
В настоящей работе методом термического анализа изучались диаграммы плавкости 6 бинарных систем на основе исследуемых лекарственных веществ.
Это необходимо для обоснования правомерности использования дифференциальной сканирующей калориметрии, как метода анализа чистоты веществ, так как одним из ограничений применения метода дифференциальной сканирующей калориметрии является возможность образования твердых растворов.
Бинарные системы составлялись из веществ, имеющих сходное строение. Так как компоненты бинарных систем являлись производными одного класса, имеется большая вероятность загрязнения их друг другом. Так естественной примесью к бензоналу является бензойная кислота, которая образуется при гидролизе бензоилхлорида, применяемого- при синтезе [8]. Промежуточным продуктом при синтезе салициламида и ацетилсалициловой кислоты является салициловая кислота [57].
Для определения криоскопической константы достаточно, чтобы выбранная примесь удовлетворяла предъявляемым ей требованиям. Одно из этих требований - образование исследуемым веществом и примесью системы с диаграммой плавкости эвтектического типа без твёрдых растворов; другое - состав эвтектики не должен лежать в области малых концентраций исследуемого вещества.
Были изучены бинарные системы: диазепам - мезапам, диазепам - нозепам, мезапам - нозепам, салициловая кислота - ацетилсалициловая кислота, салициловая кислота — салициламид, бензойная кислота — бензонал. Литературные данные по диаграммам плавкости перечисленных систем отсутствуют. Все экспериментальные данные получены с помощью термического анализа бинарных смесей на дериватографе 1050 MOM (ВНР) при указанных выше условиях. Взвешивание проводилось на весах Е. Mettler (Швейцария) с точностью до 0,05 мг.
Было приготовлено и изучено 12 составов, содержащих различные количества диазепама и мезапама. Для каждого состава снималась дериватограмма. На всех дериватограммах (кроме содержащих, по 100 %. диазепама и мезапама) были зафиксированы два эндотермических пика, причем один из них проявлялся при постоянной температуре независимо от состава, другой при температуре, изменяющейся с изменением состава. Первый пик соответствует плавлению эвтектики при 86,3 ± 0,5 С. Наличие этого пика в области, малых концентраций как диазепама, так и мезапама говорит об отсутствии растворимости компонентов в твердой фазе друг друга. Второй пик, проявляющийся при различных температурах в зависимости от состава системы, соответствовал плавлению смеси. Эвтектическая смесь содержала 55 мол. % диазепама и 45 мол. % мезапама.
Направленная вакуумная сублимация лекарственных веществ, производных бензодиазепина
В качестве объекта для исследований возможностш очистки1 диазепама был использован5 препарат,, соответствующий требованиям: нормативной документации [37], с температурой плавления. 131,3 С Литературныхданных по очистке диазепама; сублимационными методами не1 найдено. По: данным дериватографического анализа, по мере нагревания препаратаг происходила незначительная потеря массы, что давало основание надеяться» на возгонку вещества в вакууме.
Были поставлены две серии- опытов : по: направленной? сублимациш диазепама: первая - с целью подбора оптимальногоірежима возгонки вторая.- с: целью накопления чистого продукта. Были; выбраны оптимальные условия проведения! процесса.
Предварительные опытышоказали;, что образец втечение нескольких часов; необходимо? просушить под вакуумом для удаления влаги,: мешающей сублимации. Диазепам сушили - под вакуумом» 5-10" мм рт; ст. в течение 2 часов . при 20і С и: затем при; 40 (2 в течение 3 часов. При проведении процесса сублимации сначала при? невысокой температуре (90; С);, был собран сублимат первой фракции; содержащий более; летучие примеси, чем основное: вещество; затем при; более высокой температуре (110: G) возгонялся сам диазепам, а в остатке надне сосудаостались нелетучие окрашенные примеси.
В: первом эксперименте после сушкш была- установлена , температура-сублимации 90Єи« в течение 2 часов-собиралась первая- фракция сублимата, состоящая из более летучих примесей, чем основной .компонент. Затем сосуд вытягивался из печи, холодильник опускался на такое же расстояние, а на освобожденное, место в течение 3 часов при температуре 110 С собиралась вторая фракция сублимата. Далее при повышении температуры на 5 С собиралась третья фракция сублимата за 2 часа. Наибольшее количество диазепама содержала вторая фракция. В невозогнанном остатке сконцентрировались примеси с низким давлением паров. Вещества, составляющие вторую, третью и четвёртую фракции, были белого цвета, бесцветными в расплаве (невозогнанный остаток и первая фракция были окрашены в светло-желтый цвет).
По окончании сублимации возогнанное вещество разделялось на фракции, и определялись их температуры плавления методом ДСК и капиллярным методом. Данные, полученные после первой серии опытов, показали, что, во-первых, необходимо увеличить время возгонки при низких температурах, чтобы окончательно выделить летучие примеси, во-вторых, проводить возгонку при 115 С,- чтобы более полно собрать чистое вещество.
Поэтому в режим повторной сублимации были внесены некоторые изменения: возгонка первой фракции при 90 С проводилась более длительное время (3 часа), вторая фракция (содержащая небольшое количество примеси) собиралась при 100 С, а сбор третьей и четвертой фракций, содержащих очищенный диазепам, проводился при ПО и 115 С. Это было необходимо для более полного выделения очищенного диазепама. В соответствии с более полным извлечением летучих примесей и очищенного продукта, количество невозогнанного остатка уменьшилось. Результаты эксперимента приведены в таблице 9 и на рисунке 14.
Полученные данные показывают, что такой режим направленной вакуумной сублимации позволяет получить 90 % очищенного диазепама, температура плавления которого стала на 0,6 С выше, чем у исходного вещества. Очищенное вещество было бесцветным в расплаве, а примеси, как летучие, так и нелетучие, были окрашены.
ИК-спектр неочищенного диазепама совпадал со спектром диазепама, полученным после очистки. Полученные данные свидетельствуют о том, что в процессе направленной вакуумной сублимации разложения диазепама не происходит, что также согласуется с данными дериватографического анализа. Сублимационной очистке был, подвергнут мезапам, соответствующий требованиям фармакопейной статьи предприятия [72], и имеющий температуру плавления 102,4 С. Выбор метода очистки основывался на анализе дериватограммы мезапама, на которой было зафиксировано небольшое уменьшение массы вещества при нагревании до плавления, что говорило о возможности сублимации соединения. Литературных данных о применении сублимационных методов для очистки мезапама не найдено.
Были поставлены две серии опытов по очистке мезапама методом направленной вакуумной сублимации. Предварительно вещество сушилось под вакуумом 5-Ю"2 мм рт. ст. при температуре 30 С в течение 3 часов. Первая фракция собиралась при температуре 50 С в течение 2 часов, но составила очень небольшое количество вещества (практическиі желтый налет на стенках холодильника). При 60 С возогналось также небольшое количество/ вещества, имеющего одинаковую температуру плавления и цвет с фракцией возогнанной при 50 С. При 70 С в течение 2 часов была собрана следующая фракция, имеющая температуру плавления ниже, чем у исходного мезапама. При 80 С была- собрана основная фракция очищенного мезапама. На дне сосуда при этом осталось 15% исходной навески вещества, окрашенной в светло-коричневый цвет.
Повторная очистка проводилась с учетом результатов предварительной, а именно: первая фракция-собиралась при 60 С на протяжении 3 часов, вторая -при 70 С, в течение 3 часов. Основная фракция с очищенным веществом возгонялась при 80 С в течение 5 часов. Затем для более полного извлечения вещества из невозогнанного остатка температура увеличивалась до 85 С и в течение 2 часов собирали четвертую фракцию. Результаты очистки приведены в таблице 10 и на рисунке 15.
Выбранный режим, с учетом всех замечаний, можно считать оптимальным, позволяющим максимально очистить препарат от примесей. Была определена температура плавления и оценена чистота мезапама методом дифференциальной сканирующей калориметрии. В результате удалось повысить температуру плавления очищенного образца по сравнению с исходным на 0,4 С. Выход очищенного продукта составил 83 %. ИК-спектр неочищенного мезапама совпадал со спектром мезапама, полученным после очистки. Полученные данные свидетельствуют о том, что в процессе направленной вакуумной сублимации разложения мезапама не происходит, что также согласуется с данными дериватографического анализа.
Изучение лекарственных веществ методом ИК-спектроскопии
ИК-спектроскопия, впервые введенная в ГФ X для установления подлинности фторотана и натриевых солей метициллина и оксациллина, все более широко применяется в анализе различных классов лекарственных веществ. Общая фармакопейная статья, посвященная ИК-спектроскопии, включена во все современные фармакопеи, что свидетельствует о перспективности применения этого метода в фармацевтическом анализе.
Наличие (или отсутствие) каких-либо основных полос на инфракрасном спектре является указанием на наличие (или отсутствие) функциональных групп, которым это поглощение соответствует. Однако корреляция положения полос и химического строения вещества является правильной только в случаях сохранения стандартных условий определения. Совокупность всех полос поглощения, образующая инфракрасный спектр данного вещества, однозначно определяет его индивидуальность только при сохранении стандартных условий определения. Поэтому все современные фармакопеи рекомендуют проводить испытание на подлинность методом ИК-спектроскопии, предписывая при этом использование стандартного образца.
При планировании и проведении исследования, инфракрасных спектров образцов лекарственных веществ преследовалась основная цель: доказать, что при очистке лекарственных веществ методом направленной вакуумной сублимации не происходит их деструкция. Для этого регистрировались ИК-спектры лекарственных веществ до и после очистки, и устанавливалась их идентичность.
ИК-спектры лекарственных веществ регистрировались на ИК:Фурье спектрометре Tensor - 27 (фирмы Вшкег)в области 400 - 4000 см"1 с разрешением 1 см"1 при числе сканирований 32. Исследуемые вещества смешивались с бромидом калия в соотношении 1 : 100 и прессовались в таблетки. Все спектры поглощения зарегистрированы относительно таблетки с чистым бромидом калия. На рисунках 24 и 25 приведены ИК-спектры ацетилсалициловой кислоты до и после очистки, соответственно. Идентичность полученных спектров,позволяет утверждать, что деструкция ацетилсалициловой кислоты не происходила при очистке методом направленной вакуумной сублимации.
Идентичность спектров до и после очистки диазепама, мезапама, нозепама, салициловой кислоты, ацетилсалициловой кислоты, салициламида, бензойной кислоты и бензонала также позволяет утверждать, что данные вещества не разлагались при их очистке методом направленной вакуумной сублимации.
Использование дифференциальной сканирующей калориметрии для анализа образцов лекарственных веществ позволяет определить суммарное количество примесей. Поэтому для наиболее полной характеристики необходимо определить состав примесей в образце. Из числа методов, используемых для этих целей в испытаниях на чистоту органических веществ, в частности химико-фармацевтических препаратов, широкое распространение получила тонкослойная хроматография.
В работе использовались готовые пластины с тонким слоем сорбента Силуфол УФ-254. Хроматографирование проводили в камерах насыщенных парами различных систем растворителей. Хроматограммы обрабатывали ОД % раствором эозината натрия с последующим облучением УФ светом при(254 нм до появления пятен на желтом фоне [55].
Тонкослойную хроматографию диазепама до и после очистки проводили нанесением 10 мкл 1 % растворов в ацетоне неочищенного, очищенного и стандартного образца диазепама микрошприцом МШ-10 на линию старта пластины Силуфол УФ-254 размером 10x15 см. Хроматографирование проводили восходящим методом в предварительно насыщенной в течение 1 ч камере со смесью растворителей этилацетата и н-гептана 1 : 1 (по объему). Когда фронт растворителя достигал верхнего края- пластины (1 - 2 см от края), пластину сушили в вытяжном шкафу. Хроматограммы обрабатывали 0,1 % раствором эозината натрия с последующим облучением УФ светом при 254 нм до появления фиолетовых пятен на желтом фоне.
Тонкослойную хроматографию мезапама до и после очистки проводили нанесением 10 мкл 1 % растворов в- ацетоне неочищенного, очищенного и-стандартного образца мезапама микрошприцом МШ-10 на линию старта пластины Силуфол УФ-254 размером 10x15 см. Хроматографирование проводили-восходящим методом1 в предварительно насыщенной в течение 1 ч камере со смесью растворителей гексана, диэтиламина и бензола-80 : 15 : 5 (по объему). Когда фронт растворителя достигал верхнего края- пластины (1 - 2 см от края), пластину сушили в вытяжном шкафу. Хроматограммы обрабатывали 0,1 % раствором эозината натрия с последующим облучением УФ светом при 254 нм до появления фиолетовых пятен на желтом фоне.
На хроматограмме мезапама после очистки проявилось одно пятно с Rf = 0,86, соответствующее основному веществу И совпавшее с пятном, полученным на хроматограмме стандартного образца. На хроматограмме мезапама до очистки, помимо основного пятна с Rf = 0,86 было обнаружено одно дополнительное еле заметное пятно с Rf = 0,42, наличие которого свидетельствовало о присутствии небольшого количества посторонней примеси в лекарственной субстанции до очистки.
Тонкослойную хроматографию нозепама до и после очистки проводили нанесением 10 мкл 1 % хлороформных растворов неочищенного, очищенного и стандартного образца нозепама микрошприцом МШ-10 на линию старта пластины Силуфол УФ-254 размером 10x15 см. Хроматографирование проводили восходящим методом в предварительно- насыщенной в течение 1 ч камере со смесью растворителей этилацетата, дихлорэтана и раствора аммиака насыщенного 80 : 20: 5 (по объему). Когда фронт растворителя достигал верхнего края пластины (1 - 2 см от края), пластину сушили в вытяжном шкафу. Хроматограммы обрабатывали 0,1 % раствором эозината натрия с последующим облучением УФ светом при 254 нм до появления фиолетовых пятен на желтом фоне.
На хроматограмме нозепама после очистки проявилось одно пятно с Rf = 0,69, соответствующее основному веществу- и совпавшее с пятном, полученным на хроматограмме стандартного образца. На хроматограмме нозепама до очистки, помимо основного пятна с Rf = 0,69 были обнаружены два дополнительных пятна с Rf = 0,23 и Rf = 0,37, наличие которых свидетельствовало о присутствии посторонних примесей в лекарственной субстанции до очистки.
![Стандартизация и контроль качества лекарственных средств группы фторхинолонов методами хроматографии и ИК-спектроскопии [Электронный ресурс]](/i/i/4375/184827.png "Стандартизация и контроль качества лекарственных средств группы фторхинолонов методами хроматографии и ИК-спектроскопии [Электронный ресурс] Коновалов Андрей Александрович")
