Содержание к диссертации
Введение
Глава I Обзор литературы 10
1.1. Ботанико-географическое районирование 10
1.2. Флористические и ресурсоведческие исследования в Пермском крае 13
1.3. Общая характеристика объектов исследования 16
1.3.1. Багульник болотный - Ledum palustre L.
Семейство вересковые — Ericaceae 16
1.3.2. Душица обыкновенная - Origanum vulgare L.
Семейство яснотковые - Lamiaceae 21
1.3.3. Можжевельник обыкновенный - Juniperus communis L. Семейство кипарисовые - Cupressaceae... 24
1.3.4. Тысячелистник обыкновенный - Achillea
millefolium L. Семейство астровые - Asterасеае 27
1.3.5 Полынь горькая - Artemisia absinthium L.
Семейство астровые - Asteraceae ЗО
Заключение 34
Часть II Экспериментальная
Глава II Объкты и методы исследования 35
2.1 .Обоснование выбора объектов исследования 35
2.2. Методика работы по изучению распространения, учету запасов дикорастущих лекарственных растений 35
2.3. Маршрут экспедиций 37
2.4. Факторы, влияющие на продуктивность зарослей изучаемых видов 38
2.5. Методы оценки качества лекарственного растительного сырья 39
Глава III Ресурсоведческая характеристика и запасы сырья дикорастущих эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края 41
3.1. Ресурсоведческая характеристика дикорастущих эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края 41
3.1.1. Эколого-ценотическая характеристика, плотность запаса сырья и влияние на нее отдельных факторов местообитания 41
3.2.1. Определение запасов багульника болотного 46
3.2.2. Определение запасов душицы обыкновенной 50
3.2.3. Определение запасов можжевельника обыкновенного 54
3.2.4. Определение запасов полыни горькой 57
3.2.5. Определение запасов тысячелистника обыкновенного 62
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 69
Глава IV Оценка качества эфирномасличного лекарственного растительного сырья 70
4.1. Определение числовых показателей 71
4.2. Определение содержания тяжелых металлов 80
4.3. Определение радиационного фона 80
4.4. Атомно-адсорбционный анализ 81
Выводы по главе 82
Глава V Материалы к разработке Фармакопейной статьи на траву и листья полыни горькой 83
5.1. Микроскопический анализ 84
5.2. Качественный анализ 85
5.3. Определение числовых показателей 86
5.4. Количественное определение 93
5.4.1. Разработка количественного определения флавоноидов 93
5.4.2. Определение эфирного масла 100
5.5.3.Определение экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этанолом 101
5.6. Определение сроков годности сырья и норм содержания биологически активных веществ 101
5.7. Микробиологическая чистота 104
Выводы по главе 106
Общие выводы 107
Литература
- Флористические и ресурсоведческие исследования в Пермском крае
- Методика работы по изучению распространения, учету запасов дикорастущих лекарственных растений
- Эколого-ценотическая характеристика, плотность запаса сырья и влияние на нее отдельных факторов местообитания
- Определение содержания тяжелых металлов
Введение к работе
Актуальность темы. Эфирномасличные лекарственные растения (ЛР) широко используются не только в медицине, но и в других отраслях промышленности, что требует обеспеченной сырьевой базы [120, 123, 126].
Сложившаяся ситуация в ассортименте эфирномасличного сырья и его продукции показывает, что почти вся сырьевая база, обеспечивающая потребность в препаратах на фармацевтическом рынке России, оказалась на территории ближнего зарубежья.
В связи с этим, представляются перспективными исследования по изучению сырьевой базы эфирномасличного лекарственного растительного сырья (ЛРС) отдельных регионов [111, 124], в частности Пермского края, позволяющие оценить запасы, доброкачественность и дать экологическую оценку сырья.
Поэтому, с целью расширения лекарственной сырьевой базы сотрудники кафедры фармакогнозии ПГФА проводили изучение запасов эфирномасличных лекарственных растений Пермского края. С 2001 по 2007 года были обследованы Чусовской, Нытвенский, Ильинский, Очерский, Сивинский, Верещагинский, Добрянский, Оханский, Карагайский районы.
Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилась комплексная оценка ресурсов эфирномасличных лекарственных растений подзоны южной тайги (центральных районов) Пермского края.
Для реализации поставленной цели следовало решить следующие задачи:
- обобщить литературные данные по современному состоянию
изученности флоры эфирномасличных лекарственных растений Пермского
края;
проанализировать и обобщить литературные данные о морфологических, химических и фармакологических исследованиях травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного и плодов можжевельника;
- провести изучение ресурсов эфирномасличных лекарственных
растений центральных районов Пермского края, рассчитать биологический запас, эксплуатационный запас и возможный объем ежегодной заготовки. Составить рекомендации по рациональной эксплуатации зарослей эфирномасличных лекарственных растений Пермского края;
- дать комплексную оценку качества сырья на основе качественного и
количественного анализа биологически активных веществ и определить
экологическую чистоту сырья;
- составить карты-схемы размещения зарослей эфирномасличных
лекарственных растений для заготовки в центральных районах Пермского края;
- представить результаты исследования ресурсов эфирномасличных
лекарственных растений центральных районов края в Управление по охране
окружающей среды Министерства градостроительства и развития
инфраструктуры Пермского края для создания Кадастра дикорастущих
лекарственных растений.
- провести стандартизацию опытных и промышленных образцов сырья
полыни горькой для разработки фармакопейных статей «Трава полыни
горькой» и «Листья полыни горькой»;
Научная новизна.
- впервые проведен комплекс ресурсоведческих, фитохимических,
экологических исследований для оценки состояния зарослей
эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского
края;
проведена химическая таксация зарослей эфирномасличных лекарственных растений, позволившая выявить потенциальные заросли для проведения заготовок в промышленных масштабах;
- разработан проект фармакопейной статьи и пояснительная записка
«Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой» для Государственной
фармакопеи XII издания.
Практическая значимость.
Управлением по охране окружающей среды Пермского края
7 используются материалы ресурсоведческих исследований:
- для составления Кадастра дикорастущих лекарственных растений —
номенклатура эфирномасличных лекарственных растений, рекомендуемых
для промышленной заготовки в центральных районах Пермского края;
сведения о распространении, биологическом запасе, эксплуатационном запасе и возможном объеме ежегодной заготовки травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного, плодов можжевельника; карты схемы размещения зарослей эфирномасличных лекарственных растений, для организации заготовки сырья в центральных районах края.
Предложены методики стандартизации сырья полыни горькой, позволяющие объективно оценивать его доброкачественность. Результаты исследований положены в основу фармакопейной статьи для ГФ XII «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой», которая представлена на рассмотрение в фармакопейный комитет РФ.
Результаты качественного обнаружения и количественного определения основных групп биологически активных веществ внедрены и используются в учебном процессе Пермской государственной фармацевтической академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, а также в учебном процессе кафедры фармакогнозии Ярославской государственной медицинской академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, дистанционных курсах повышения квалификации фармацевтических работников МЗ Бурятии.
На защиту выносятся:
- результаты ресурсоведческих исследований эфирномасличных
лекарственных растений центральных районов Пермского края;
данные о комплексной оценке качества эфирномасличного сырья, включающие фитохимический, экологический, микробиологический анализы;
рекомендации по рациональному использованию эфирномасличных
8 лекарственных растений в центральных районах Пермского края;
- материалы по разработке Фармакопейной статьи на траву и листья полыни горькой.
Апробация работы. Основные результаты работы изложены на: межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава "Вузы и регионы", Пермь, 2003 год; международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СПХФА, Санкт-Петербург, 2004 год; XI национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2004 год; на II Всероссийском съезде фармацевтических работников — Сочи, 2005год; юбилейной межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых, посвященной 70-летию КГМУ "Молодежная наука и современность", Курск, 2005 год; XI международной научно-практической конференции "Фармация и здоровье", Пермь, 2005 год; XIII национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2006 год; 2-й международной Российско-китайской конференции "Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice", Пермь, 2006 год; научно-практической конференции "Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, фармация)", Ростов-на-Дону, 2006 год.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки.
Диссертационная работа выполнена на кафедре фармакогнозии ГОУ ВПО Пермская Государственная Фармацевтическая Академия Росздрава России в соответствии с планом научно-исследовательских работ. Номер государственной регистрации 01.9.10018875.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ. Материал для исследования был собран во время экспедиционных работ по изучению ресурсов дикорастущих лекарственных растений Пермского края с 2001 по 2007 гг.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 34 таблицы, 5 рисунков.
9 Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав эксперимента, выводов, списка литературы, включающего 145 источников, из них 4 на иностранных языках.
В I главе представлены литературные сведения о ботанико-географическом районировании, флористических и ресурсоведческих исследованиях в Пермском крае, дана общая характеристика объектов исследования. В экспериментальной части изложена характеристика объектов и методов исследования (глава II), характеристика сырьевой базы и ресурсного потенциала изучаемых объектов в центральных районах Пермского края (глава III), данные фитохимического и экологического мониторинга (глава IV), материалы по разработке фармакопейной статьи на траву и листья полыни горькой (глава V).
В приложении вынесены таблицы по характеристике ресурсов отдельных объектов в исследуемых районах, таблицы с адресом расположения зарослей исследуемых видов, пояснительная записка и проект фармакопейной статьи «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой», акты внедрения результатов исследований в практику и учебный процесс, акты внедрения Управления по охране окружающей среды правительства Пермского края.
ЧАСТЫ
Флористические и ресурсоведческие исследования в Пермском крае
По истории изучения флоры и растительности Пермской области (даже в её современных границах) опубликована весьма обширная литература (Крылов. 1875 - 1878; Коржинский, 1887; Сюзев, 1912; Говорухин, 1937; Игошина, 1966; Пономарев, 1969; Горчаковский, 1975; Овеснов, Яценко, 1984; Верещагина, Белковская, Овеснов, 1986; Овеснов, 1991 и др.)[56, 57, 63, 64,128].
В 90-е годы основное внимание было направлено на изучение флоры Коми-Пермяцкого автономного округа (Овеснов, Москвина, Титова, 1995) и центральной части области (Козьминых, 1995) [13, 34, 54, 91, 92].
Все вышеуказанные исследования не давали оценку сырьевого потенциала для дикорастущих лекарственных растений Пермского края. Первые ресурсоведческие работы были проведены в 50-е годы в Пермской области А.П. Лебедевой и Ф.И. Дерябиной, которые определили запасы сырья и районы заготовки важнейших лекарственных растений [31, 34]. Становление Пермской школы ресурсоведов связано с именем Н.П. Харитоновой - ученицы А.Ф. Гаммерман. Под ее руководством и при непосредственном участии в 60 - 70-е годы проведены экспедиции в северные, западные и восточные районы Пермской области, Коми-Пермяцкий национальный округ и Удмуртию. Предложено все лекарственные растения классифицировать: повсеместно распространенные, имеющие ограниченную сырьевую базу, требующие охраны. Были выявлены конкретные фитоценозы, где заготовка сырья лекарственных растений возможна в промышленных масштабах, рассчитаны запасы сырья и баланс их ресурсов. Изучение запасов и картирование зарослей лекарственных растений осуществлял коллектив кафедры ботаники и кафедры фармакогнозии Пермского фармацевтического института: А. П. Лебедева, Ф. С. Беклемышева, Ф. И. Дерябина на основании материалов экспедиций, проводившихся в период с 1946 по 1965 г., составили карту распространения лекарственных растений в Пермской области. Н. П. Харитонова с сотрудниками (1966 г.) изучили запасы лекарственных растений юго-западных районов Пермской области. Г. А. Глумовым с сотрудниками обследованы северные и горные районы Пермской области [31, 32].
Всесторонние комплексные ресурсоведческие исследования возглавил в конце 70-х Г.И. Олешко. К средине 90-х обследованы области Пермская (Олешко Г.И., Просовский М.А., Белоногова В.Д., Яковлев А.Б.), Свердловская (Печерская Л.Г., Донцов А.А., Яковлев А.Б., Корепанова Н.С., Челпанова Е.В.), Челябинская (Мельчакова Т.Н., Логинова Н.Ф., Русских Ю.А.), Оренбургская (Хлебников А.В., Постникова О.П., Гусев Н.Ф.), Нижегородская (Левинова В.Ф., Зеленина М.В., Челпанова Е.В., Донцов А.А.), Пензенская (Кузин В.П., Вотинова Т.П., Корепанова Н.С.) и Удмуртская республика (Макарова Л.С, Лепина С.Н.), причем в отдельных районах Пермской и Нижегородской области проведено и повторное обследование [14, 78, 82, 83, 134]. Во всех областях проведена ревизия лекарственной флоры, выделены промысловые лекарственные растения, лекарственные растения, не имеющие обеспеченную сырьевую базу, исчезающие виды. Группа промысловых лекарственных растений разделена по перспективе использования и по возможным объемам заготовки сырья. Рассчитаны баланс ресурсов и индексы локализации сырья, предложена специализация в заготовке сырья между районами и заготовительными организациями. Составлены карты-схемы запасов сырья. Организованы промысловые заказники в Свердловской, Оренбургской и Нижегородской областях [44, 133].
Углубленное исследование плодовых и ягодных растений выполнено в Свердловской области [44], лесных видов лекарственных растений (багульника, брусники, ландыша) в Нижегородском Заволжье [78].
Определены показатели возобновления зарослей лекарственных растений после различных режимов заготовки сырья: вахты, ландыша, брусники и багульника, зверобоя, тысячелистника, душицы [78, 93].
В ходе экспедиционных работ были заготовлены образцы сырья для химических исследований. Анализ образцов сырья лекарственных растений Оренбургской области позволил дать рекомендации по их заготовке. В Нижегородской области выявлено зональное распределение багульника болотного с высоким и низким содержанием ледола в эфирном масле. Проведено углубленное химическое исследование ромашки безъязычковой, хвоща полевого, вахты трехлистной, полыни горькой, лапчатки прямостоячей [15, 93].
В 90-е годы XX века объем исследований резко сократился из-за отсутствия финансирования. Однако работы по изучению ресурсов и рациональному использованию дикорастущих лекарственных растений Пермского края были продолжены и проводятся в настоящее время по договору с Управлением по охране окружающей среды Пермского края.
Методика работы по изучению распространения, учету запасов дикорастущих лекарственных растений
Результаты геоботанических описаний и совокупность данных по плотности запасов сырья исследуемых видов на ключевых участках использованы нами для выяснения влияния факторов (типа экспозиции склонов) на продуктивность зарослей луговых видов: душицы обыкновенной и тысячелистника обыкновенного.
Для этого статистически определяли различия между фитоценозами (рассчитывали критерий Стьюдента) и методом однофакторного дисперсионного анализа с разным числом повторностеи определяли по критерию Фишера (F) наличие вариантов, существенно отличающихся от остальных, и степень (л), или долю влияния фактора в общей дисперсии признака [45, 47, 77, 105]. Расчеты проводили в Microsoft Excel 2000.
На каждой конкретной заросли, где определяли запасы сырья багульника болотного, душицы обыкновенной, тысячелистника обыкновенного, были проведены геоботанические описания по общепринятой методике [112]. Всего было изучено 83 популяции душицы, 159 - тысячелистника, 15 - багульника болотного. На основе геоботанических описаний зарослей составляли сводные списки. Каждый сводный список включает типы ассоциаций, в которых лекарственные растения играют роль доминантов или субдоминантов (обилие по шкале Друде не менее sp.), а популяции видов по занимаемой площади и сырьевой фитомассе имеют промышленное значение.
Таким образом, принимая в целом определение ценокомплекса в трактовке М.Е. Пименовой [104], мы рассматриваем только хозяйственно-продуктивные растительные сообщества.
Виды, включенные в сводные списки, имеют константность [137, 138] не менее 30 - 40 %. Составленные списки не тождественны со сводными списками геоботанических описаний фитоценозов, которые со всей возможной полнотой характеризуют ассоциацию.
Методы оценки качества лекарственного растительного сырья
Основным показателем качества лекарственного растительного сырья является содержание биологически активных веществ (БАВ) и экстрактивных веществ. Анализ образцов лекарственного растительного сырья на содержание, влаги, золы, БАВ и экстрактивных веществ проводили по методикам Государственной фармакопеи СССР XI издания [37, 38].
Содержание флавоноидов в траве полыни горькой определяли с использованием дифференциального варианта спектрофотометрического метода, модифицированного нами для данного сырья. Измеряли оптическую плотность окрашенного комплекса, полученного по реакции флавоноидов с 2 % раствором алюминия хлорида с помощью спектрофотометра СФ-2000.
Содержание экстрактивных веществ в траве полыни горькой проводили по методике, изложенной в ГФ XI издания выпуск 1.
Содержание эфирного масла в траве душицы, траве полыни горькой и траве тысячелистника определяли методом 2 Государственной фармакопеи СССР XI издания, выпуск 1. Нами проведен анализ 102 образцов лекарственного растительного сырья: багульник болотный - 8 образцов, душица обыкновенная - 22, можжевельник обыкновенный - 14, полынь горькая - 30, тысячелистник обыкновенный - 28.
Определение микробиологической чистоты проводили по методике ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» [38]. Согласно изменению № 3 от 19.06.2003 в разделе «Требования, предъявляемые к микробиологическому контролю лекарств, субстанций и вспомогательных материалов», категория 4 А предусматривает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов (микробное число). В 1 г сырья допускается не более 10 общего числа аэробных бактерий, общего числа грибов - 10 , а также - Escherichia coli не более 10 . Испытания на микробиологическую чистоту проводили путем определения в посевах на наличие грибов в среде Сабуро, жизнеспособных бактерий — среда № 1.
А также золотистого стафилококка Staphylococcus aureus, синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa - среда № 8, кишечной палочки Escherichia coli-среда № 3.
Испытания проводились в асептических условиях [59]. Экологическую оценку сырья проводили по методике ГФ XI издания в зольном остатке после сжигания сырья [36], радионуклиды определяли по естественному гамма-фону ЛРС [97, 106]. Оценку удельной активности радионуклидов в ЛРС проводили на измерителе мощности дозы РКСБ-104 («Белвар»). Для получения более точного результата проводили три параллельных измерения и считали среднее арифметическое значение.
Токсичные элементы (свинец, кадмий, медь) и железо количественно определяли атомно-адсорбционным методом [26, 132] по ГОСТ 30178-96, мышьяка по ГОСТ 26930-86, пробоподготовку проводили по ГОСТ 26929-94. Анализ проводился в Вологодском областном центре контроля качества лекарственных средств.
Эколого-ценотическая характеристика, плотность запаса сырья и влияние на нее отдельных факторов местообитания
Заготовка всех изучаемых видов сырья проводится в природных популяциях. Расположение зарослей во всех обследованных районах находится в зоне антропогенного воздействия, что увеличивает вероятность заготовки сырья загрязненного тяжелыми металлами. Наибольшему антропогенному воздействию подвергаются луговые виды - душица обыкновенная и тысячелистник обыкновенный, а также рудеральный вид — полынь горькая, наименьшему воздействию лесные виды - можжевельник обыкновенный и багульник болотный.
Степень загрязнения определяли по методике ГФ XI. Результаты анализа представлены в таблицах 4.1, 4.2, 4.3, 4.4. Анализ показал, что во всех образцах сырья окраска испытуемого раствора не превышала окраску эталона.
В связи с тем, что на территории Пермского края проводились ядерные взрывы, а также имеется ряд предприятий, которые используют в своей деятельности радиоактивные изотопы, актуальным является определение общего радиационного фона лекарственного растительного сырья.
По данным управления Роспотребнадзора по Пермскому краю, средняя мощность экспозиционной дозы природно-сформированного гамма-фона по Пермскому краю составляет 6-13 мкР/ч [28].
Данные, полученные при исследовании, представлены в таблицах 4.1, 4.2, 4.3, 4.4
Во всех проанализированных образцах полыни горькой содержание тяжелых металлов не превышало окраску эталона, а общий радиационный фон соответствовал нормам установленным для Пермского края.
Учитывая, что доза гамма-фона в ЛРС исследуемых видов не превышает установленные нормы для Пермского края, заготовка сырья возможна во всех исследованных районах. 4.4. Атомно-адсорбционный анализ
Всестороннее изучение элементного состава лекарственных растений и лекарственного растительного сырья представляет интерес не только по наличию в них комплекса важнейших химических элементов, влияющих на различные реакции и процессы организма, но и в связи с критической экологической обстановкой во многих регионах.
Содержание микроэлементов в растении зависит в первую очередь от почвенно-экологических условий и химических свойств микроэлементов.
Часть лекарственных растений используется непосредственно в пищу. Однако чаще используются отвары и настои. При этом необходимо отметить, что в данные лекарственные формы переходит лишь некоторая доля металла - загрязнителя, содержащегося в сырье, что снижает риск использования ЛРС.
Переход макро- и микроэлементов в лекарственные формы общеизвестен. В наибольших количествах извлекаются в настои и отвары марганец и цинк, в наименьших - железо. Среднее содержание ТМ в водных извлечениях уменьшается для микроэлементов в следующем ряду: кадмий цинк свинец медь железо.
Учитывая, что все изучаемые виды используются для получения экстемпоральных лекарственных форм, определение микроэлементов в сырье имеет практическое значение.
Нами были проанализированы 22 образца ЛРС, собранных в самом экологически неблагоприятном районе исследования—Чусовском [28,29,95].
Результаты определений представлены в таблице 4.6. Таблица 4.6 Нормативное и фактическое содержание тяжелых металлов и мышьяка, мг/кг
Примечание: не обнаружено - ниже предела чувствительности метода контроля.
Анализ показал, что все образцы сырья удовлетворяют требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01 [119] в редакции СанПиН 2.3.2.1280-03 по содержанию кадмия, мышьяка, свинца и не удовлетворяют требованиям СанПиН 42-123-4089-86 по содержанию меди и свинца, но так как эти показатели в овощах и фруктах рассчитаны по сырой массе, а исследования ЛРС предполагает использование воздушно-сухого сырья, то данные ПДК не имеют объективного и компетентного характера, применительно к ЛРС. Поэтому необходима разработка ПДК для ЛРС.
Исследования показали, что все изучаемые объекты накапливают тяжелые металлы. Полученные значения концентраций тяжелых металлов и мышьяка варьируют в зависимости от места произрастания и вида растения.
В целом анализ показал, что все заросли природных популяций исследованных видов, относятся к экологически чистым, что позволяет вести заготовку сырья для нужд фармацевтического производства.
Выводы по главе:
1. Установлено, что образцы сырья травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного, плодов можжевельника по основным показателям качества соответствуют требованиям Государственной фармакопеи XI издания, что позволяет вести заготовку доброкачественного сырья.
2. Установлена химическая неоднородность зарослей. Площадь зарослей с высоким содержанием эфирного масла (не ниже среднего) для можжевельника составила 3,3 га, для душицы - 16,7 га, для тысячелистника 5,75 га, для багульника болотного - 115,0 га.
3. Проведен экологический мониторинг ЛРС центральных районов Пермского края. Установлено, что все образцы сырья удовлетворяют требованиям Государственной фармакопеи XI издания по содержанию тяжелых металлов, что позволяет вести заготовку сырья для нужд фармацевтического производства. Для данных зарослей ЛР составлены рекомендации по их рациональной эксплуатации.
4. Проведено определение удельного радиационного фона в ЛРС исследуемых районов. Установлено, что доза гамма-фона не превышает норм установленных для Пермского края.
Определение содержания тяжелых металлов
Полынь горькая используется как горько-пряное средство для возбуждения аппетита, при заболеваниях печени и желчного пузыря, при пониженной функции желудочно-кишечного тракта. Данные фармакологические эффекты обусловлены содержанием флавоноидов, эфирного масла, горькими гликозидами.
Поэтому для более объективной оценки качества сырья при производстве из него различных лекарственных форм, рационально использование стандартизации сырья по содержанию и эфирного масла. Известно, что на выделение эфирного масла и его компонентов из растительного сырья, существенно влияет: соотношение воды и сырья, рН среды, продолжительность дистилляции [5].
Количественное содержание эфирного масла в сырье полыни горькой определяли методом 2 ГФ XI, вып.1 стр. 290, путем дистилляции водяным паром. Ранее, изучение условий полного выделения эфирного масла из сырья и разработка методики количественного содержания проведена доцентом кафедры фармакогнозии Белоноговой В.Д. [17]. Поэтому, мы использовали при исследовании сырья полыни горькой методику указанного автора. Результаты представлены в таблице 5.8. Содержание эфирного масла составило от 0,52 до 1,48%. Среднее содержание - 0,79±0,09%. Определение экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этанолом
Проводили по методике ГФ XI издания, вып. 1, стр. 295. Результаты представлены в таблице 5.8. Содержание экстрактивных веществ составило от 21,36% до 38,7%. Среднее содержание - 30,47±1,69%.
Для установления срока годности сырья были проведены исследования по изучению стабильности всех показателей качества сырья полыни горькой. При установлении норм этих показателей учитывали исходное наименьшее содержание суммы флавоноидов и экстрактивных веществ в сырье и изменение их при хранении. Рекомендуем содержание в траве полыни горькой суммы флавоноидов в пересчете на рутин, не менее 0,5%. Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этанолом - не менее 20%. Эфирного масла - не менее 0,2%. Результаты представлены в таблице 5.9.
Такие морфологические группы сырья как травы, листья, цветки очень сильно набухают, что не позволяет использовать условное разведение 1:10 (смыв) для посева на питательные среды во время контрольных испытаний.
Так как испытуемое ЛРС содержит эфирные масла, обладающие антимикробным действием, то для устранения этого действия увеличивали разведение, взяв больший объем растворителя.
Из каждого образца ЛРС отбирали 1,0 г сырья, добавляли 10 мл разбавителя (фосфатный буферный раствор рН 7,0), чтобы получилось разведение 1:10, используемое для посева на плотные среды. Далее делали разведение 1 : 100 и 1 : 1000.
Таким образом, смыв получается более гомогенный и повышается эффективность определения микроорганизмов.
Посевы ЛРС на средах № 1, № 3 и № 8 инкубировали при температуре 30-35 С в течение 5 суток, а на среде Сабуро - при температуре 20-25 С в течение 5 суток.
По окончании испытания подсчитывали число колоний на 2 чашках, находили среднее арифметическое и, умножая его на показатель разведения, определяли число колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 г образца. Для получения достоверных результатов учитывали только те чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний бактерий и от 10 до 100 колоний грибов. Определение золотистого стафилококка и синегнойной палочки проводили визуально по наличию или отсутствию мути [59].
Оценка качества сырья по показателю «Микробиологическая чистота» показала, что все образцы сырья соответствуют предъявляемым требованиям.
1. Разработана фармакопейная статья «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой» для включения ее в ГФ XII издания.
2. Разработан раздел «Качественные реакции», подтверждающий подлинность сырья по наличию флавоноидов.
3. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин, спектрофотометрическим методом. Относительная ошибка метода не превышает 3,99%.
4. Проведена оценка качества сырья полыни горькой, установлены нормы содержания: флавоноидов (не менее 0,5%), эфирного масла (не менее 0,2%), экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этанолом (не менее 20%).
5. Изучена стабильность суммы флавоноидов, эфирного масла, экстрактивных веществ при хранении. Установлен срок годности сырья до 2 лет.
