Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Из систематики грецкого ореха 11
1.2. Морфология 11
1.3. Химический состав грецкого ореха 20
1.4. Применение грецкого ореха и препаратов на его основе в народной и научной медицине 25
1.5. Применение керосина в медицине 39
1.6. Народнохозяйственная и медицинская значимость эхинококкоза для России и стран СНГ 41
Глава 2. Материалы и методы исследований 47
Глава 3. Химическое исследование зеленых плодов грецкого ореха и полученных препаратов 59
3.1. Химический состав зеленых плодов грецкого ореха 59
3.2. Экспериментальное исследование состава углеводородного экстракта зеленых плодов грецкого ореха 76
Глава 4. Изучение токсичности тодикампа 95
4.1. Изучение острой токсичности тодикампа 95
4.2. Изучение хронической токсичности тодикампа 121
4.3. Изучение длительного воздействия тодикампа на организм животных 129
4.3.1. Изучение токсичности тодикампа при аппликациях на кожу животных 129
4.3.2. Длительное внутрижелудочное введение тодикампа собакам и свиньям 151
4.4. Клинико-физиологическое состояние обезьян под воздействием тодикампа 162
4.5. Иммунотоксическое и аллергизирующее действие тодикампа 191
4.6. Токсичность тодикампа в противочесоточных средствах, содержащих бензилбензоат 201
4.7. Изучение мутагенной и ДНК-повреждающей активности тодикампа 213
4.8. Исследование действия тодикампа на механическую интеграцию клеток в ткани 220
Глава 5. Изучение токсичности препарата Чеблин-СК-1 224
5.1. Острая токсичность ЧСК-1 224
5.2. Хроническая токсичность ЧСК-1 232
5.3. Клинико-физиологическое состояние обезьян под воздействием ЧСК-1 234
5.4. Накожное воздействие ЧСК-1 на организм животных 237
5.5. Иммунотоксичность и аллергизирующее действие ЧСК-1 242
5.6. Эмбриотоксичность и тератогенность ЧСК-1 244
5.7. Изучение мутагенной и ДНК-повреждающей активности ЧСК-1 248
Глава 6. Острая токсичность препаратов СК-3 и СК-6 255
6.1. Изучение острой токсичности препарата СК-3 255
6.2. Острая токсичность СК-6 259
Глава 7. Фармакологическая активность препаратов на основе лекарственного растительного сырья и новых экстрагентов. Противопаразитарная активность изучаемых препаратов 263
7.1. Эффективность препаратов группы СК при сифачиозе, аскаридиозе, гетеракидозе, трихоцефалёзе и гименолепидозе животных 263
7.2. Испытание препаратов группы СК при эхинококкозах и чесотке 270
7.3. Оценка клинического испытания тодикампа и ЧСК-1 при лечении эхинококкоза в хирургических клиниках Узбекистана 275
7.4. Иммунотропные и противомикробные свойства ЧСК-1 и тодикампа 290
7.5. Гепатопротекторные свойства тодикампа и ЧСК-1 297
7.6. Противовоспалительное, анальгезирующее, местнораздражающее свойства тодикампа и ЧСК-1 301
7.7. Использование препаратов тодикампа и ЧСК-1 в ветеринарии 306
Обсуждение результатов 308
Выводы 327
Литература 332
Приложения 360
- Применение грецкого ореха и препаратов на его основе в народной и научной медицине
- Длительное внутрижелудочное введение тодикампа собакам и свиньям
- Эмбриотоксичность и тератогенность ЧСК-1
- Оценка клинического испытания тодикампа и ЧСК-1 при лечении эхинококкоза в хирургических клиниках Узбекистана
Введение к работе
Актуальность-проблемы. Тысячелетиями человечество использует ле
карственные растения для лечения различных заболеваний. Обилие синтети
ческих лекарственных препаратов, ставших причиной аллергических и хро
нических заболеваний, привели в настоящее время к возрастанию интереса к
лекарственным растениям. Препараты лекарственных растений занимают
значительный удельный вес в общем объеме лекарственных средств.
Перспективные лекарственные растения, на основе которых созданы препараты широкого спектра действия, заслуживают особого внимания исследователей.
Грецкий орех (Juglans regia L.) - лекарственное растение, которому по-свяшсно более 10 тыс. литературных источников, отражающих использование его в народной медицине и ветеринарии. Применяется гомеопатический препарат югланс, изготовленный из листьев грецкого ореха (Кент Л.Т., 1997).
По данным E.Barbas et al. (1993), D.Clienevard et al. (1994), Р.Э.Лойко и Т.С.Шнрко (1994), З.А. Троян и соавт. (1999), плоды, листья грецкого ореха содержат большое количество биологически активных веществ, в том числе витамины, жирные кислоты, макро- и микроэлементы. Фармацевтическая наука еще недостаточно использовала лекарственные возможности этого растения.
Л.Г.Маленков и соавт. (1995) запатентовали препарат тодикамп, полученный из плодов грецкого ореха молочно-восковой спелости с помощью нефтяной фракции лепефр, представляющей собой часть нефти, выкипающей при температуре до 150('С. Еще до этого более 30 лет керосиновый экстракт зеленых плодов грецкого ореха успешно применялся в народной медицине для лечения радикулита, простатита, цирроза печени, иммунодефицита, опухолей (Кашницкий С, 1990).
В настоящее время используются лекарственные препараты, полученные из нефтепродуктов. Так, например, вазелиновое масло - продукт очищенной нефти, применяется внутрь детям и взрослым при запорах (Машков-ский М.Д., 1989, 1999; Харкевнч Д.А., 1993, 1999). В России и яругах странах применяется препарат петролеум, изготовленный из нефти (Шаретт Ж., 1997, Глаз В.Г., 1998), обладающий широким спектром фармакологического действия. Петролеум используется с 1913 г. (Френкель Л.Д., 1913, 1993) без побочного и токсического действия, а в настоящее время свободно реализуется в аптеках России.
По данным Г.Г.Онишенко (2000), в России ежегодно страдают паразитарными болезнями более одного млп людей. Такое заболевание как эхлно-коккоз сопровождается вторичным иммунодефицитом и функциональной недостаточностью печени (Гостищев В.К. и др., 1999, 2000, Бирюков Ю.В. и др., 1999-2002, Чебышев Н.В. и др., 1998-2002). Отсутствие достаточного количества отечественных препаратов на основе лекарственного раститель-
ного сырья, обладающих противоэхинококкозным, гепатопротекторным, им-мунотропным свойствами, делают проблему актуальной.
В Таджикистане в 90-х годах был изготовлен тодикамп, который поступил в реализацию в Узбекистане. Тодикамп и чеблин-СК-1 (ЧСК-1), полученный нами и представляющий собой керосиновый экстракт из зеленых плодов грецкого ореха молочно-восковой спелости, также стали использовать при лечении людей и животных. Ситуация не контролировалась медицинской и ветеринарной практикой и наукой. В связи с этим представляется целесообразным изучение токсичности и фармакологической активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья и экстрагентов из нефтепродуктов. Требует анализа клиническое испытание тодикампа и ЧСК-1.
Цель исследования. Целью исследования явилось изучение фармакологической активности и токсичности препаратов тодикампа и ЧСК-1, а также других лекарственных средств, изготавливаемых экстрагированием растительного сырья с помощью очищенных нефтепродуктов.
Задачи исследования
Изучить химический состав плодов грецкого ореха в процессе созревания для определения оптимальных сроков заготовки сырья.
Провести экспериментальное исследование состава углеводородного экстракта зеленых плодов грецкого ореха.
Изучить, острую токсичность при внутрижелудочном введении препаратов, полученных из лекарственного растительного сырья с использованием новых экстрагентов.
Изучить хроническую токсичность при длительных внутрижелудоч-ных введениях и аппликаций кожи животным тодикампа и ЧСК-1.
Определить иммунотоксичность, аллергизирующую способность, эм-бриотоксичность, тератогенность, мутагенность, ДНК-повреждающее действие тодикампа и ЧСК-1.
Изучить фармакологическое действие препаратов, полученных из растительного лекарственного сырья с использованием новых экстрагентов:
а) противопаразитарную активность изучаемых препаратов;
б) гепатопротекторное, иммуномодулирующее, противомикробное
свойства изучаемых препаратов.
Разработать лабораторную модель для коррекции остаточной полости при эхинококкэктомии и применения противопаразитарных средств.
Разработать новый метод иммунодиагностики эхинококкозов.
Оценить клинические испытания тодикампа и ЧСК-1 в Республике Узбекистан.
10.Разработать рекомендации по использованию результатов исследований.
Научная новизна. Из плодов грецкого ореха в молочно-восковой зрелости на научной основе нами созданы препараты ЧСК—1, чеблин (Чебышев Н.В., Стреляева А.Вг, Самылина Й.А., Коваленко Ф.П. Способ получения средства для лечения ларвального и стробилярного эхинококкозов чеблин— СК-1 // Пат. РФ № 2136303. Бгол. - 1999. - №25; Чебышев Н.В., Стреляева А.В., Самылина И.А., Коваленко Т.Ф. Способ получения препарата чеблин, обладающего противоаскаридным действием // Пат. РФ № 2136304. Бгол. — 1999. - №25; Гостищев В.К., Стреляева А.В., Чебышев Н.В. Способ коррекции остаточной полости при эхинококкэктомии у взрослых. - Патент РФ №2177443. - Бюл. - 2002. -- № 1.) и показано, что по выраженности токсических свойств тодикамп и ЧСК-1 классифицировали по К.К.Сидорову (1973) как чялотоксичные и практически нетоксичные (IV и V класс токсичности).
Изучена динамика накопления действующих веществ в плодах грецкого ореха и обоснованы сроки заготовки сырья.
Впервые раскрыты гепатопротекторные, иммуномодулирующие, проти-вомикробные свойства тодикампа и ЧСК—1.
Установлена противогельминтозная, противочесоточная активность тодикампа и ЧСК-1.
Разработан новый метод иммунодиагностики эхинококкоза животных на принципе реакции антигенсвязывания лимфоцитов. В производственных условиях в животноводческих комплексах ветеринарными специалистами апробирована лечебная эффективность препаратов тодикамп и ЧСК-1.
Создана лабораторная модель гидатидозного эхинококкоза животных для разработки способа коррекции остаточной полости при эхинококкэктомии и использования противопаразитарных средств.
В теоретическом плане создана предпосылка для развития нового направления в фармации по изысканию препаратов растительного сырья с использованием экстрагентов, полученных из нефтепродуктов, подверпгутых тщательной очистке от токсических веществ.
Практическая значимость. Фармакогностическими исследованиями нами установлено, что наибольшее количество биологически активных веществ содержится в зеленых плодах растения в середине мая. На примере препарата ЧСК-1 открывается возмоленость изготовления ряда лекарственных средств с использованием очищенного авиационного керосина и ленеф-ра. Препараты тодикамп и ЧСК-1 перспективны для использования в медицине и ветеринарии.
Результаты внедрения. Препараты тодикамп и ЧСК-1 использованы в хирургической практике Республики Узбекистан для лечения больных эхи-нококкозом различной локализации, а также для обработки остаточной полости при эхинококкэктомии. В хирургических клиниках СамГосМи разработанный иммунологический метод диагностики эхинококкоза широко при-
меняется для выявления заболевания. Иммунотропные свойства препаратої тодикамп и ЧСК-1 использованы для иммунореабилитации больных.
Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедр обще»: биологии, генетики и паразитологии, фармакогнозии, фармакологии с курсов технологии лекарств ММА им. И.М. Сеченова.
Препараты тодикамп и ЧСК-1 апробированы специалистами ветеринарии и животноводства Республики Узбекистан для лечения больных животных.
Положения, выносимые на защиту
1. Изучение состава липофильной и гидрофильной фракций плодое
грецкого ореха в динамике накопления биологически активных ве
ществ в процессе созревания.
2. Результаты исследования токсичности тодикампа и ЧСК-1.
Фармакологическая активность тодикампа и ЧСК-1 (противогель-минтозная, противочесоточная, гепатопротекторная, иммунотропная, противомикробная).
Результаты доклинических экспериментальных исследований тодикампа и ЧСК-1.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на: Республиканской научно-практической конференции с международным участием «Нагноительные заболевания легких и плевры» (Самарканд, 1998); научной конференции, посвященной 80-летию Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского ММА им. И.М.Сеченова (Москва, 2000); VII, VIII и IX Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2000, 2001, 2002); международной научно-практической конференции «Проблемы эхинококкоза» (Махачкала, 2000); научной конференции «Проблемы эхинококкоза» (Джизак, 2001); научной конференции Научно-исследовательского института медицинской паразитологии им. Л.М.Исаева (Самарканд, 2002); научной конференции Самаркандского государственного медицинского института им. акад. И.П.Павлова (Самарканд, 2002); научных конференциях ММА им. И.М.Сеченова (2000, 2001, 2002).
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа выполнена согласно плану научно-исследовательских работ кафедры фармакогнозии ММА им. И.М.Сеченова по теме «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом антропогенных факторов» (код темы 0407093) соответствует проблеме № 1006 АМН РФ (номер Государственной регистрации 01-93-000-69-76).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 66 работ, в том числе 3 монографии, 3 патента на изобретение; КГтезисов, 50 статей.
Объем и структура диссертации
Применение грецкого ореха и препаратов на его основе в народной и научной медицине
Лекарственным сырьем, главным образом, являются листья, свежие незрелые плоды и околоплодник [71, 72,151, 282,319, 342,432,440]. Однако и другие части грецкого ореха, например, корни дерева и кора корней используются для заживления ран и при рахите. В Иране на их основе изготовляют мазь, используемую при геморрое [279]. Кора корней белого орешника и грецкого ореха употребляется как нежное слабительное средство, не вызывающее болей [112]. В древесине особенно ценятся сок и капы, представляющие собой ранозаживляющее и кровоостанавливающее средство [8, 279, 318]. Отвары коры ствола применяются при язвах, опухолях, венерических заболеваниях и рахите [279].
Листья грецкого ореха (Folium juglandis) были включены в I-IV издания отечественной фармакопеи и являются официальными в ряде Южноамериканских и Западно-Европейских стран [279, 310]. В настоящие (действующие) издания (X и XI) Государственной фармакопеи СССР части грецкого ореха не включены [84, 85].
Собирают отдельные листочки во время цветения, лучше в июне [239, 319]. Листочки обрывают руками и сушат в тени [319] или на солнце [239], разложенными тонким слоем на холсте, полотне или фанере [112]. После сушки листочки почти утрачивают бальзамический запах. Побуревшие и почерневшие листочки удаляют [239]. В гомеопатии листья и околоплодник используются в качестве маточного средства [66, 112, 222, 239. 279]. Препараты из листьев и околоплодника обладают фитонцидными, протистоцидными и бактерицидными свойствами [196, 279]. Они могут использоваться как антисептики при лечении гнойных и грибковых поражений кожи, заболеваний, вызванных простейшими микроорганизмами [279]. В Болгарии и нашей стране настои и отвары применяют для улучшения обмена веществ, при хронических экземах, дерматомикозах, экссудативном диатезе и рахите [112, 239, 279], гнойных ранах, золотухе и сердечных заболеваниях [319], фурункулах, карбункулах (иногда для этого готовят мази на подсолнечном масле) [239], при легочном, кожном и других формах туберкулеза, заболеваниях слизистой оболочки рта и горла [66, 156, 239, 279], как аппетитное средство и при желудочных заболеваниях [237, 279], для лечения сахарного диабета [194, 239, 279, 313], подагры, малокровия и авитаминозов, при белях [66, 181], дисменореях и венерических заболеваниях, для укрепления и роста волос [196, 279]. Настои и отвары обладают антигельминтными, инсектицидными и ихтиоцидными свойствами [279]. Для лечения туберкулезной волчанки предложен также препарат карион, получаемый из листьев грецкого ореха [239]. Флавоноиды из листьев в опытах на животных оказывают гипотензивное, спазмолитическое и противовоспалительное действие [279]. В работах Гаммерман [71, 72] отмечается, что содержание аскорбиновой кислоты в листьях увеличивается по мере их развития и достигает максимума в середине вегетационного периода. Затем витаминность листьев значительно снижается. В народной медицине незрелые плоды используются аналогично листьям [279, 288].
Околоплодник (Fructus et cortex-scu nucum juglandis) обладает антибактериальными и антипаразитарными свойствами и был включен в I-III издания отечественной фармакопеи. Официнален в Венесуэле [279, 310]. Еще Гиппократ применял зеленые околоплодники для изгнания гельминтов [239]. В научной медицине листья и незрелые плоды (в околоплоднике) рекомендуются применять как вяжущее, при гиповитаминозе С, при кровоточивости желудочно-кишечного тракта [193, 319]. Плодовую корку собирают с недозрелых плодов приблизительно в августе и быстро высушивают в теплом помещении. В свежем состоянии плодовая корка снаружи зеленая, внутри беловатая и слегка губчатая. После сушки она становится темно-бурой [112]. В народной медицине Средней и Южной Америки, Ирана, Средней Азии, на Кавказе незрелые плоды используют против аскарид и тениид [239]. Отвары из плодовых оболочек и листьев используют в народной медицине Западной Сибири как тонизирующее и «кровоочистительное» средство, особенно при диатезах [239]. При болях ревматического характера, кожном зуде, мокнущем лишае в медицине народов Востока рекомендуются ванны из коры молодых побегов и листьев маньчжурского ореха [68].
В древности зрелые грецкие орехи считались средством, предупреждающим отравление самыми сильными ядами. Для этого рекомендовали натощак утром принимать два грецких ореха с двумя винными ягодами, с листьями и солью [66].
В восточной медицине в качестве лекарственного сырья используют ядро ореха. Кожура незрелых плодов используется для натирания пораженных участков тела при потливости, сопровождающейся воспалением кожи [303].
Зрелые орехи используются как средство, улучшающее работу печени и желудка, для лечения малярии, как антигельминтное средство [66, 239, 279]. Орехи рекомендованы для пищевого рациона больных с повышенной или пониженной кислотностью, в диетическом питании больных атеросклерозом [239]. Они применяются в народной медицине Ирана и Пакистана. Благодаря наличию в орехах солей кобальта и железа, орехи рекомендуются при малокровии [66]. Масло орехов применяют наружно при кожных заболеваниях, внутрь - как слабительное, антигельминтное и диуретическое средство [279], при мочевых камнях [66]. В настоящее время в медицине масло почти не применяется [112].
Перегородки ореха в виде настойки применяются при сахарном диабете, заболеваниях щитовидной железы [96, 279], тиреотоксикозе, колитах, заболеваниях суставов [279].
В народной медицине Дагестана [237] грецкие орехи употребляют при гипертонии в чистом виде или с медом. При хроническом гастрите листья грецкого ореха включаются в сборы других растений с вяжущими свойствами.
В монографии [32] систематизированы данные по лекарственным растениям, описанным в трактате "Дзэйцхар Мигчжан" и использующимися в практике тибетской медицины. Из семейства ореховых в трактате упоминается использование плодов грецкого и маньчжурского орехов при болезнях «rlung» и заболеваниях суставов. Как указано в монографии, для понятия «rlung» трудно подобрать соответствующие научной медицине требования. Более подробно состояние «rlung» описано в публикации [192]. Указано, что под физиологическим началом «rlung» надо понимать нарушение обмена веществ между организмом и внешней средой. При лечении расстройства «rlung» многие препараты готовятся на бульоне различных костей с добавлением масляных лекарственных средств в виде кашицы, что способствует быстрому восстановлению равновесия.
В научной медицине отвар листьев и околоплодника грецкого ореха используется для ингаляций [15]. Под влиянием комплекса витаминов, флавоноидов и дубильных веществ увеличивается резистентность бронхиального дерева. Присутствие эфирных масел и юглона, обладающих бактерицидным действием, ставит применение отвара в ряд этиопа-тогенетических средств. Наличие йода улучшает бронхоэскалационную функцию. Рекомендовано включать ингаляции из отвара в комплексную терапию больных с бронхолегочными заболеваниями.
Фитонцидная активность листьев сеянцев грецкого ореха и её изменчивость под влиянием облучения семян гамма-излучением Со60 показана в работе Г.Кудиной [147]. Установлено, что с увеличением дозы облучения от 100 до 2000 Р фитонцидная активность листьев однолетних побегов двухлетних сеянцев закономерно возрастает, а при дальнейшем увеличении дозы уменьшается.
В работе [129] отражена активность фитонцидов листьев и околоплодника незрелых грецких орехов по отношению к Trichomonas vaginalis и установлено, что фитонцидная активность нативного сока околоплодника выше, чем листьев. Наиболее высокой активностью обладают фитонциды ореха, произрастающего на Апшеронском полуострове. Наибольшей протистоцидной активностью обладали летучие и нелетучие фракции фитонцидов листьев, собранных в период с 1 по 15 июня. Фитонциды зеленых листьев и околоплодника также приведены в работах [127, 128]. Фунгицидные свойства исследованы на таких объектах: поверхностная трихофития Trichophytia superficialis, Trichophyton violaceum, микроспориум (Microsporum lanosum) и Achorion schonlein. Установлено, что, как и в предыдущей работе, тканевый сок и водный экстракт незрелого околоплодника грецкого ореха обладают более сильным фунгицидным действием, чем листья. Нативный сок незрелого околоплодника на микроспории оказывал во всех случаях губительное действие, а при первом случае на Achorion schonlein. Сделан вывод о необходимости внедрения фитонцидов незрелого околоплодника в дерматологическую лечебную практику.
Длительное внутрижелудочное введение тодикампа собакам и свиньям
На 25-ти беспородных собаках и на 15-ти беспородных свиньях, зараженных экспериментально стробилярным и ларвальным эхинококкозом по общепринятым методикам [221], нами была установлена противоэхинококкозная активность тодикампа. При этом при лечении стробилярного эхинококкоза собак ЕД50 оказалась равной 10 мг/кг, при лечении эхинококкоза легких и печени свиней ЕД50 - 20 мг/кг. Хирурги на 27-ми добровольцах, больных эхинококкозом, установили, что при химотерапии эхинококкоза тодикампом ЕД5о =25 мг/кг.
Опыты по изучению хронической токсичности тодикампа проведены на 15-ти щенятах, полученных от двух самок-собак породы бигл и 15-ти поросятах, полученных от одной беспородной свиноматки. Животные содержались в стандартных вивариях, обслуживаемых учеными зооинженерами и ветеринарными врачами. В рацион животных, помимо обычных виварных кормов подобного назначения, были включены субпродукты первого сорта в вареном виде; яйца, натуральный творог, тертая сырая морковь, капуста, яблоки, виноград.
Каждый вид животных был распределен на 3 группы: первой контрольной ежедневно однократно в течение 6 месяцев вводилась внутрь В течение 6-ти месяцев при ежедневных внутрижелудочных введениях не отмечено побочного или токсического действия испытуемых агентов. В течение всего эксперимента животные чувствовали себя хорошо, шерсть блестящая, видимые слизистые бледно-розового цвета, мочеиспускание и дефекация нормальные, аппетит хороший, активность высокая, развитие и рост соответствуют нормативным показателям собак и свиней. Со стороны сердечно-сосудистой системы отклонений не было.
Комплексные анализы крови по группам собак не имеют статистически значимых отклонений. В каждой группе по 5 животных: 3 самца, 2 самки. До 4-месячного возраста самки и самцы каждой группы содержались вместе, затем были разъединены. После 6-месячного возраста каждое животное содержалось отдельно.
Статистическая обработка цифрового материала показала по общему анализу крови собак, что в количестве эритроцитов, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, гемоглобине, в лейкоцитарной формуле, гематокрите, скорости свертывания крови, резистентности эритроцитов между контрольной и группами, получавшими тодикамп, нет статистически достоверной разницы.
В табл. 4.3.10 - 4.3.12 приводятся материалы биохимических исследований крови собак до введения тодикампа, через месяц после ежедневных введений и через 6 месяцев после введений. Через месяц после внутрижелудочных введений тодикампа собакам в дозах 10 ЕД5о наблюдалось статистически достоверное увеличение ЛИИ, количества холестерина, триглицеридов, АсАТ, АлАТ, ЛДГ (Р 0,05).
Если у контрольных собак лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) составил 1,09±0,13, то у собак третьей группы он поднялся до 1,44+0,02, содержание холестерина в крови у контрольных собак 4,47±0,13 ммоль/л, а у собак третьей группы - 5,88±0,047 ммоль/л, триглицеридов соответственно - 1,32+0,5 и 1,75±0,06 ммоль/л. Ряд исследователей считали, что повышение уровня триглицеридов в крови больных атеросклерозом встречается чаще, чем гиперхолестеринемия. Напротив, имеется и другое мнение, когда приводятся материалы, показывающие, что при атеросклерозе коронарных артерий чаще повышено содержание холестерина в крови, чем триглицеридов [140].
По-видимому, отмеченные изменения некоторых показателей крови у собак под воздействием месячного введения тодикампа в дозе 10 ЕД5о не связаны с токсическим действием испытуемого агента, а являются реакцией организма на введение биологически высокоактивного вещества, так как через 6 месяцев после ежедневных введений тодикампа произошла нормализация отмеченных биохимических показателей, и не было статистически достоверной разницы в изученных биохимических показателях между животными трех групп (табл.4.3.10-4.3.12). Кроме того, наиболее высокой была живая масса животных, получавших тодикамп, по сравнению с контрольными (табл. 4.3.13).
Интересно отметить, что у поросят под влиянием длительного внутрижелудочного введения тодикампа в таких же, как и у собак, изученных биохимических показателях крови, не произошло статистически достоверных отклонений в течение всего эксперимента по сравнению с контролем. Но в данных общего анализа крови у всех подопытных животных через 6 месяцев от начала эксперимента измени-лось содержание количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и СОЭ (табл.4.3.14, 4.3.15). Если у поросят первой группы (контрольной) до введения тодикампа количество эритроцитов составило 7,5±0,16-10 /л, гемоглобина 109,0±3,85 г/л, лейкоцитов 7,4±0,36-109/л, СОЭ 24,1±1,4 мм/час, то через 6 месяцев от начала эксперимента эти показатели соответственно изменились: количество эритроцитов и гемоглобина снизится соответственно до 6,9 ±0,17- 1012/л и 97,0 ± 3,74г/л, произошло повышение уровня лейкоцитов до 9,60±0,13-109/л и СОЭ до 32,2±1,16 мм/час. Такие же изменения произошли и у поросят второй и третьей групп. Подобные отклонения не связаны с побочным или токсическим действием тодикампа, а это четкое отражение возрастной физиологии свиней, когда у молодых животных в крови увеличено количество эритроцитов и гемоглобина и снижено количество лейкоцитов и замедлена СОЭ, а к более старшему возрасту, например, шестимесячному наступило в крови животных увеличение количества лейкоцитов и СОЭ, а так же снижение количества эритроцитов и гемоглобина.
Кроме того, нами изучалось также количественное содержание свободных аминокислот в сыворотке крови поросят до внутрижелудочного введения тодикампа и в процессе введения испытуемого агента (табл.4.3.16). Через шесть месяцев после ежедневных внутрижелудочных введений тодикампа поросятам второй группы установлено уменьшение в сыворотке крови количества валина, гистидина, серина, треонина, увеличение количества глутамина, лейцина, тирозина, цистина по сравнению с контрольными животными. К этому времени у поросят третьей группы наступило уменьшение в сыворотке крови количества серина, треонина и увеличение количества тирозина, цистина по сравнению с контрольными животными, а также с исходными данными (табл. 4.3.16). На наш взгляд, подобные отклонения в содержании свободных аминокислот в сыворотке крови подопытных поросят связаны не с токсическим действием тодикампа, а воздействием биологической активности препарата, так как они носили обратимый характер и при обследовании животных спустя месяц и шесть месяцев после отмены введения тодикампа наступила нормализация количественного содержания в сыворотке крови свободных аминокислот.
Длительное внутрижелудочное введение тодикампа свиньям не только не проявило токсического воздействия, а наоборот, даже стимулировало прибавку массы поросят. После завершения экспериментов во взрослом состоянии свиньи, получавшие длительно тодикамп, превзошли по массе животных контрольной группы, которым вводилась дистиллированная вода (табл.4.3.17). Если масса контрольных свиней через 12 месяцев от начала эксперимента составила 150,6±2,58 кг, то у свиней второй группы, которым вводилась доза ЕД5о-169,8±2,49 кг, у животных третьей группы, которым вводилась доза тодикампа 10 ЕД5о - 160,2±0,9 кг. Эти отклонения статистически достоверны (Р 0,05).
Патологоанатомами при вскрытии собак и свиней не обнаружено разницы между контрольными и подопытными животными. Гистологические исследования головного мозга, сердца, печени, почек, легких, селезенки, тимуса, надпочечников, желудка, кишечника, мочевого пузыря, поджелудочной железы, костного мозга, щитовидной железы, лимфатических узлов, семенников у самцов, матки и яичников у самок не выявило разницы между контрольными и опытными собаками и свиньями, а также каких-либо патоморфологических отклонений от нормы у животных.
Таким образом, длительное, ежедневное, шестимесячное введение внутрь собакам и свиньям тодикампа в дозах ЕД50 и 10 ЕД5о не вызывает нарушения функции и морфологических изменений жизненно важных органов.
Эмбриотоксичность и тератогенность ЧСК-1
Эмбриотоксичность и тератогенность препарата ЧСК изучена на 190 девятидневных куриных эмбрионах. Препарат ЧСК, введенный в желудочный мешок 9-дневным куриным эмбрионам в дозах 0,5 - 5,0-50 мг/кг, не проявил эмбриотоксичности и тератогенности, но при введении дозы 500 мг/кг на 19-е сутки инкубации зафиксированы уменьшение массы эмбриона, кранио-каудального размера, массы сердца, массы печени. Разница в отмеченных показателях с эмбрионами, которым вводились дозы препарата ЧСК: 0,5 -5,0-50,0 мг/кг, а также эмбрионами контрольной и интактной групп, статистически высокодостоверна (Р 0,01) [241,242].
Препарат ЧСК, введенный куриным эмбрионам, в дозах: 800,0 - 1600 -2000,0 - 2400,0 мг/кг, начинал проявлять летальное действие, что дало возможность установить летальные дозы препарата ЧСК для 9-дневных куриных эмбрионов [241].
Отсутствие тератогенности препарата ЧСК установлено на 10-ти курах породы хайсигс-браун (2 петуха, 8 кур-несушек), которые в течение 15-ти дней подряд получали ежедневно препарат ЧСК в дозе 3000,0 мг/кг. От них было инкубировано 65 яиц и получено 56 полноценных цыплят, которые были выращены до взрослой птицы. Аналоги 10 голов птицы в течение 15-ти дней подряд получали препарат сравнения талидомид в дозе 0,1 г/кг. От них инкубировали 56 яиц, вылупилось 45 цыплят, которые были без ног, некоторые без крыльев, они были нежизнеспособными и через 10 дней после вылу-пления все погибли. От контрольных 10-ти кур аналогов, которые не получали никаких препаратов, инкубировано 66 яиц и получено 57 полноценных цыплят [241, 242].
Были также выполнены эксперименты на взрослых свиньях. Две свино-матки-первородки, покрытые хряком Б, с месячной стадией беременности ежедневно с кормом получали 0,5 г талидомида. Две свиноматки-первородки, скрещенные с тем же хряком Б, с месячной стадией беременноети ежедневно с кормом получали по 4 г препарата ЧСК. Две свиноматки-первородки, покрытые хряком Б, служили в качестве контроля и никаких препаратов не получали. Все подопытные свиноматки происходят от одной свиньи М, родились в один день, являются аналогами.
Свиноматки, получавшие талидомид, принесли всего лишь по два поросенка, поросята были очень мелкими и родились мертвыми. На вскрытии отмечен недоразвитый мозг. Свиноматки, получавшие препарат ЧСК, принесли нормальных, здоровых поросят, у одной родились 7, а у другой - 8 поросят. Свиноматки контрольной группы родили по 5 здоровых поросят. Поросята от свиноматок контрольной группы и свиноматок, получавших препарат ЧСК, росли и развивались хорошо, соответствовали местным стандартам роста и развития свиней. Препарат ЧСК не проявил тератогенных свойств в отношении поросят [241,242].
В табл. 5.6.1 приводятся результаты изучения эмбриотоксичности препарата ЧСК на крысах. В эксперименте 5 групп животных: первая группа в общей сложности получила на одно животное 11,2 г/кг препарата ЧСК и такое же количество экстрагента очищенного авиационного керосина получили животные 2-й группы. Каждое животное 3-ей группы получило 2,8 г/кг тали-домида, животные четвертой группы получили по 11,2 г/кг семян псорален. Животные 5-й группы никаких препаратов не получили и служили в качестве контроля (табл. 5.6.1).
По результатам наших исследований самая высокая постимплантацион-ная и предимплантационная смертность оказалась в группе животных, получавших семена псорален, а также в группе животных, получавших талидомид, что статистически высокодостоверно по сравнению с другими группами (Р 0,01). Под воздействием препарата ЧСК не произошло повышение смертности животных в экспериментах, наоборот, она была ниже, чем в контроле, разница статистически достоверна (Р 0,05).
Наибольшее число аномалий костной системы произошло у детенышей крыс, которые получали талидомид или семена псорален. Разница по сравнению с группой животных, получавших препарат ЧСК, и контрольными животными статистически высокодостоверна (Р 0,01), что отражено в табл. 5.6.2.
Нами было также установлено, что под воздействием талидомида и псорален задерживалось развитие крысят, их масса была значительно ниже по сравнению с животными контрольной группы и животными, получавшими препарат ЧСК, что видно из табл. 5.6.3. Разница живой массы крысят сравниваемых групп статистически достоверна (Р 0,05).
Таким образом, препарат ЧСК не влиял отрицательно на рост и развитие крысят, наоборот, стимулировал эти показатели (табл.5.6.3).
В табл. 5.6.4 отражены результаты изучения влияния препарата ЧСК на генеративную функцию крыс. Самыми низкими индексы плодовитости и беременности оказались в группе крыс, получавших семена псорален. В группе животных, получивших препарат ЧСК, индексы плодовитости и беременности оказались выше, чем в группе интактных животных (контрольных), что показано в табл. 5.6.4.
Таким образом, препарат ЧСК стимулировал плодовитость и беременность животных.
Оценка клинического испытания тодикампа и ЧСК-1 при лечении эхинококкоза в хирургических клиниках Узбекистана
Тодикамп и ЧСК-1, превратившись в средства народной медицины, стали самостоятельно изготавливаться населением и применяться самовольно. В нашей работе приведены материалы по лечению эхинококкоза людей и других паразитарных заболеваний тодикампом и ЧСК-1, принадлежащие профессорам Республики Узбекистан: Б.У.Сабирову, Б.С.Турсунову, А.Р.Саламову, С.А.Абдуллаеву, А.К.Габченко, доцентам: О.М.Мамышеву, Э.Э.Кабилову, З.И.Муртазаеву, Э.Мамараджабову и другим. По этим материалам мы делаем заключение, что противопаразитарная и иммунокорригирующая способность тодикампа и ЧСК-1 должна быть обязательно проверена в клиниках России с разрешения Фармкомитета РФ, а приводимые нами в диссертации материалы следует учитывать как доклинические исследования (приложения 7 - 14).
В хирургических клиниках Республики Узбекистан препараты прошли испытание на добровольцах. К испытанию были допущены 186 больных эхм коккозом с различной локализацией, которые до операции принимали ЧСК. В качестве контроля было 26 больных эхинококкозом, которые не принимали препарат. Всем больным до начала лечения и в конце курса наряду с общепринятыми проводились специальные исследования.
После проведения курса лечения больных препаратом ЧСК-1 проведено тщательное изучение паразитарных ларвоцист эхинококков, извлеченных хирургами во время операции. У леченых больных отмечалась в 85 - 95 случаях деструкция с гибелью зародышевых элементов паразитарных ларвоцист, у 26 больных (контрольная группа), не получавших препарат, но оперированных по поводу эхинококкоза, в ларвоцистах содержались жизнеспособные, морфологически неизмененные зародышевые элементы. Назначение препарата больные перенесли без жалоб и клинических осложнений. Установлено, что препарат больными переносился без побочных реакций, оказывал благоприятное воздействие на больных, восстанавливал белково-аминокислотный обмен у больных эхинококкозом, улучшался иммунный статус, что не отмечалось у контрольных больных.
На 35-ти добровольцах, больных эхинококкозом, изучено противоэхинококкозное действие препарата ЧСК-1 в возрастающих дозах в трехнедельном курсе.
Пример 1. Больная К., 29 лет. Диагноз: эхинококкоз головного мозга и левого легкого. Длительность заболевания 2 года. В клинической картине преобладают жалобы на головные боли, тошноту, потерю аппетита, нарушение координации движения.
Реакция сколексопреципитации (РСКП), латекс-агглютинации, непрямой гемагглютинации положительные.
Компьютерной томографией головы обнаружена кольцевидная, с четкими границами зона повышенной плотности в области полюса левой лобной доли мозга диаметром в 14 мм, внутри полюса пониженная плотность, симметрично расположено подобное образование в правой лобной доле мозга диаметром в 12 мм. Кроме того, в различных участках мозга обнаружены 4 шаровидных образования с плотностью, близкой к плотности воды, диаметром 4-5 мм.
На рентгенограмме в верхней доле левого легкого четко прослеживается эхинококк шаровидной формы, диаметром около 30 мм.
Больной проведено трехнедельное лечение препаратом ЧСК-1. Больная препарат перенесла хорошо, лишь только ощущала неприятный запах. После проведенного курса лечения общее состояние больной начало улучшаться, тошнота и головные боли исчезли, восстановилась координация движения.
Через 6 месяцев курс лечения повторили. Общее состояние больной резко улучшилось. Через год после проведенного второго курса лечения больная родила девочку массой 3600 г, девочка нормально растет и развивается.
Через два года после проведенного второго курса лечения сделаны компьютерная томография мозга и рентгенография легкого. На томограмме в местах выявления эхинококков обызвествленные участки, на рентгенограмме в легком спавшийся обызвествленный эхинококк.
Иммунологические реакции: РСКП, латекс-агглютинации, непрямой гемагглютинации отрицательные.
Пример 2. Больная М, 36 лет. Диагноз: множественный рецидивный эхинококкоз легких. Длительность заболевания 6 лет. Иммунологические реакции: РСКП, латекс-агглютинации, непрямой гемагглютинации положительные.
Больная сначала оперирована по поводу эхинококкоза селезенки, во время операции произошел разрыв ларвоцисты величиной 7x8 см. Через четыре года больную оперировали по поводу эхинококкоза печени. Спустя год после операции, выявлено на рентгенограмме множественное поражение эхинококками легких: в левом 14 эхинококков величиной 6-8 мм в диаметре, в правом легком 11 эхинококков такой же величины. Больная деморализована. Проведен курс психотерапии, организована встреча с больными, которые выздоровели. Больная самовольно увеличила дозу препарата вдвое. Курс лечения больная перенесла хорошо. Показатели общего анализа крови и мочи остались на исходном уровне. Биохимические показатели крови и мочи также остались без изменений. Через 6 месяцев проведен второй курс лечения (двойная доза препарата). Лечение прошло без осложнений. Общее состояние здоровья больной стало улучшаться.
Через два года после второго курса лечения выполнены контрольны исследования, которыми на рентгенограмме легкого обнаружены обызвествленные участки. Иммунологические реакции: РСКП, латекс-агглютинации, непрямой гемагглютинации отрицательные. Наступило выздоровление больной.
На основании проведенных испытаний установлено, что препарат ЧСК -1 переносится больными легко, без побочных реакций, оказывает благоприятное воздействие на больных эхинококкозом, сначала происходит торможение роста паразитарных ларвоцист с деструкцией и гибелью 85-95% зародышевых элементов ларвоцист с последующей гибелью паразитов. После проведения курса лечения у больных эхинококкозом восстанавливается белкойо-аминокислотный обмен. У 27-ми больных эхинококкозом применен тодикамп, в таких же дозах, как и ЧСК-1. Получен положительный результат лечения, с гибелью паразитарных ларвоцист.
По архивным материалам прослежена иммунореабилитация больных эхинококкозом под воздействием тодикампа и ЧСК-1.
Материал, приводимый вышеуказанными авторами (Б.У. Сабиров и др., 2000, Б.С. Турсунов, 2000) в этой части работы, охватывает 211 взрослых больных, прооперированных по поводу эхинококкоза, из которых одиночный эхинококкоз печени выявлен у 69-ти (32,7 %) больных, одиночный легких -47-ми (22,3 %), одиночно-сочетанный - 26-ти (12,3 %), множественный - 45-ти (21,3 %), множественно-сочетанный - 24-х (11,4 %).
В табл.7.3.1 приводятся результаты иммунологических исследований больных эхинококкозом лёгких с сопутствующими заболеваниями. Под воздействием препарата ЧСК-1, применённого в ничтожно малых дозах в сутки 1 капля (терапевтическая доза при эхинококкозе до столовой ложки) в течение 10-20 дней, у больных эхинококкозом лёгких с сопутствующими заболеваниями проявилась тенденция к нормализации иммунного статуса: увеличение в крови количества СДЗ+, СД8+-, СД16+, СД21+, повышение фагоцитоза и его качества, уменьшение иммуноглобулинов и ЦИК. Аналогичный результат получен при лечении 14-ти больных эхинококкозом легких при использовании препарата тодикампа в таких же дозах, как и ЧСК-1.
Ни в одном случае применения препарата ЧСК-1 не отмечено ни местных, ни общих побочных реакций, как при введении препарата, так и в течение всего курса лечения. При применении препарата не отмечалось никаких ухудшений клинической картины.
При оценке лабораторных исследований выявляется тенденция к нормализации гематологических и биохимических показателей. При оценке лабораторных исследований выявляется тенденция к нормализации гематологических и биохимических показателей. При оценке фагоцитарного звена прослеживается тенденция к повышению средних величин, отражающих функциональную активность клеток: фагоцитарного индекса, спонтанной и индуцированной ЛмЗХЛ (люминолзависимой хемилюминесценции) и люцигенинзависимой хемилюминесценции (ЛцЗХЛ) и индекса стимуляции. Такими же свойствами обладал препарат сравнения (табл.7.3.1, 7.3.2) - полиоксидоний, который вводился больным один раз в сутки внутримышечно от 6 до 12 мг.
