Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Градиентный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии как универсальный метод анализа 11
1.1.1. Хроматография как один из наиболее распространенных методов анализа 11
1.1.2. Проблемы унификации методик ВЭЖХ 17
1.1.3. Универсальные подвижные фазы в обрашено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии 19
1.1.4. Детекторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии 22
1.1.5. Преимущества и недостатки градиентного варианта высокоэффективной жидкостной хроматографии 27
1.2. Скриниговые методы анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ 28
1.3. Анализ многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин 33
1.3.1. Состав многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин 33
1.3.2. Фармакопейные методы анализа многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин 38
1.4. Химическая структура и физические свойства исследуемых веществ 46
Глава 2. Экспериментальная часть 58
2.1. Приборы, материалы и объекты исследования 58
2.1.1. Объекты исследования 58
2.1.2. Реактивы 58
2.1.3. Приборы 59
2.1.4. Стандартные образцы 59
2.1.5. Хроматографические системы 59
2.1.6. Подготовка хроматографических систем к анализу 60
2.1.7. Тест пригодности хроматографических систем 61
2.2. Условия проведения исследований 62
2.2.1. Условия хроматографирования и детектирования 62
2.2.2. Пробоподготовка 63
2.2.3. Скрининговое определение наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ 64
2.2.4. Определение компонентов лекарственных средств, содержащих кодеин 66
2.2.5. Применение разработанного метода в анализе биологически-активных добавок к пище 68
Глава 3. Результаты и обсуждение 70
3.1. Скрининговый метод определения наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ 70
3.2. Унифицированный метод определения компонентов лекарственных средств, содержащих кодеин 74
3.3. Анализ биологически-активных добавок к пище 77
3.4. Переход с системы градиентного элюирования на систему изократического элюирования 80
Выводы 82
Список литературы 83
- Универсальные подвижные фазы в обрашено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии
- Скриниговые методы анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ
- Скрининговое определение наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ
- Скрининговый метод определения наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ
Введение к работе
Актуальность темы.
Определение наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ остается одной из наиболее актуальных проблем современного анализа: за последние 20 лет произошел взрывной рост числа злоупотреблений веществами этих групп, существенно расширился диапазон используемых для этих целей веществ.
За последнее время списки наркотических средств и психотропных веществ претерпели относительно небольшие изменения (последний раз в 1998 году). Однако списки сильнодействующих веществ меняются достаточно регулярно в сторону добавления новых наименований. И после каждого такого изменения необходимо создавать и утверждать новые методические рекомендации по качественному и количественному определению вновь добавленных веществ. Принимая во внимание большую номенклатуру наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ такой подход не всегда является рациональным.
Другой не менее актуальной проблемой является разработка и внедрение скрининговых методов анализа сложных смесей веществ. Важность этой проблемы связана со значительным увеличением количества фальсифицированной продукции на рынке России. Особенно опасно появление такой продукции в сфере обращения лекарственных средств и продуктов питания (в т.ч. биологически активных добавок к пище).
Учитывая вышесказанное, актуальной является разработка унифицированных подходов к анализу наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, биологически активных добавок к пище.
Цель и задачи исследования:
Целью настоящей работы являлась разработка унифицированных методик анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и биологически активных добавок к пище.
Задачи исследования:
-
-
Разработка методик пробоподготовки исследуемых объектов.
-
Разработка состава подвижной фазы и условий градиентного элюирования.
-
Выбор оптимального подхода к детектированию исследуемых веществ.
-
Расчет и оценка параметров пригодности хроматографической системы в выбранных условиях.
-
Использование разработанных методик в анализе наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БАД к пище.
Научная новизна.
Впервые разработана методика ВЭЖХ, позволяющая за один анализ выявлять и оценивать содержание некоторых наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ (26 веществ), качественно и количественно определять состав ряда многокомпонентных лекарственных средств (20 торговых наименований, содержащих 14 компонентов), определить содержание индикаторных компонентов ряда БАД к пище (более 20 веществ).
Практическая значимость.
Предложен и внедрен метод, позволяющий в течение часа определить:
присутствие или отсутствие в образце ряда наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также их содержание;
качественный и количественный состав многокомпонентного лекарственного средства содержащего кодеин;
подтвердить подлинность и оценить качество некоторых БАД к пище посредством определения индикаторных веществ различных компонентов БАД к пище.
Методика внедрена в экспертно-криминалистическом центре (ЭКЦ) при ГУВД г. Москвы и ЭКЦ МВД РФ для решения задач по определению наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ и выявлению фальсифицированных лекарственных средств. Разработаны методические рекомендации по определению наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ ЭКЦ при ОУВД и ЭКЦ при УВД на метрополитене: «Общие рекомендации по использованию системы «Breeze» в ЭКЦ при ОУВД и УВД на Метрополитене».
Также методика был успешно применена в ГУ НИИ питания РАМН для определения различных веществ в составе БАД к пище: антоцианинов и антоцианидинов, органических кислот, витаминов (В1, В2, В6, РР, Вс (фолиевая кислота)), и других веществ (кофеин, теобромин, теофеллин, гингерол, гуггулостероны E и Z, бетулин, филлантин, цитринин и охратоксин А и др.).
Апробация работы.
Основные положения работы доложены на XII (Москва, 2005 год) и XIII (Москва, 2006 год) Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» и IV-ой межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека» (Санкт-Петербург, 2006). Апробация работы проведена на межлабораторной конференции кафедры фармацевтической химии фармацевтического факультета ММА им. И. М. Сеченова (19 мая 2006 г.).
Публикации.
По результатам проведенных исследований опубликовано 8 печатных работ.
Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической химии фармацевтического факультета ММА им. И. М. Сеченова «Совершенствование контроля качества лекарственных средств» (№ государственной регистрации 01.200.110545).
Объем и структура диссертации.
Универсальные подвижные фазы в обрашено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии
При составлении универсальных элюентов в обращено-фазовой ВЭЖХ используются следующие приемы: - плавное регулирование элюирующей силы путем изменения концентрации модификатора (как правило - метанола или ацетонитрила); - для увеличения селективности и улучшения разрешения полезно использовать смешанный модификатор в соотношении 1:1. Обычно в качестве смешанного применяется смесь метанола и ацетонитрила в соотношении 1:1 по объему, хотя могут использоваться смеси метанол-этанол или этанол-изопропанол; - оптимизация формы и ширины хроматографического пика. В отличие от хроматографии на силикагеле, где уширение хроматографических пиков за счет межмолекулярных взаимодействий проявляется достаточно редко, для обращенно-фазового варианта ВЭЖХ уширение хроматографических пиков средне- и сильнополярных соединений - правило. Основной причиной уширения хроматографических пиков является существование на поверхности адсорбента сложных равновесных систем типа молекулярный ион - молекула - молекулярный ассоциат -молекулярный полиассоциат. Каждая из этих форм ионогенного соединения имеет свое время удерживания - в результате хром атографи чес кий пик соединения уширяется и создается впечатление полной потери эффективности хроматографической колонки. Симметричная форма хроматографических пиков и высокая эффективность разделения средне- и сильнополярных соединений достигается несколькими способами, в зависимости от класса анализируемых соединений: смещение равновесия «диссоциированная форма - молекулярная форма» адсорбата в какую-либо одну сторону; достигается подкислением или слабым подщелачивай и ем элюента; одновременно при подкислении адсорбционно модифицируются остаточные силанольные группы на поверхности адсорбентов С8, С16, С18; увеличение времени удерживания адсорбата достигается путем добавления неорганических солей в элюент. Смысл процедуры заключается в эффекте «высаливания» органических соединений на границу раздела «адсорбент - элюент» и увеличении межфазного поверхностного натяжения «элюент-адсорбат», что, в свою очередь, приводит к увеличению энергии взаимодействия «адсорбат-адсорбент». В сочетании с регулировкой рН для смещения равновесия «диссоциированная форма - молекулярная форма» {молекулярная форма в обращен но-фазовом варианте удерживается всегда сильнее, чем диссоциированная), высаливание позволяет резко увеличить удерживаемые объемы полярных соединений; замена самоассоциата «адсорбат - адсорбат» на поверхности адсорбента на ассоциат «адсорбат - компонент элюента»; достигается путем использования смешанных модификаторов типа «ацетонитрил алифатический спирт» или добавлением в элюент небольших количеств органических кислот или алифатических аминов. Например, при анализе терпенов, на поверхности адсорбента лучше иметь ассоциат «терпен -метанол», который дает меньшее уширение пика, чем «терпен - терпен». При одновременном анализе смесей веществ слабокислого и слабоосновного характера одновременно добавляют в элюент уксусную кислоту и алифатический амин при общем рН 7, чтобы избежать самоассоциации анализируемых веществ любого характера на поверхности адсорбента. Наиболее универсальным элюентом в ОФ ВЭЖХ является смесь "ацетонитрил - 0,03 М дигидрофосфат калия - диэтиламин - фосфорная кислота". Раствор диэтиламина в 0,03 М дигидрофосфат калия подкисляется фосфорной кислотой до рН 2,6 - 3,0. Такой универсальный элюент особенно эффективен при анализе водных, водно-спиртовых или спиртовых растительных или животных экстрактов, содержащих ионогенные соединения как кислого, так и основного характера. Подкисление до рН 2.6-3.0 гарантирует, что все ионогенные соединения кислого характера находятся в молекулярной форме, а слабоосновные существуют в виде ионизрованных соединений и сдвинуты в начало хроматограммы [74].
Применение универсальных элюентов позволяет не только быстро подобрать хроматографическую систему для решения аналитической задачи, но и резко улучшить качество хроматограммы.
Описанные требования к подвижной фазе, а также анализ литературных данных позволяет сделать вывод о том, что наиболее универсальными свойствами обладает следующая хром ато графическая система [76]: - неподвижная фаза: сорбент С18, - подвижная фаза: Компонент А: 0.02 М фосфатный буфер с диэтиламином, рН = 2,6 - 3,0»; Компонент Б: ацетонитрил. - детектирование: УФ (многоволновое) в диапазоне 190 - 360 нм.
Применяемые в ВЭЖХ детекторы должны обеспечить регистрацию изм енени и н екоторых свой ств п о движн ой фазы, п оки дающей хроматографическую колонку, связанных с элюированием из колонки разделенных компонентов анализируемой пробы. Такими свойствами могут быть оптические характеристики в УФ-, ИК- или видимом спектральном диапазоне, показатель преломления, флуоресцентные свойства, электропроводность, диэлектрическая проницаемость, способность к окислению или восстановлению и др.
Детекторы могут быть разделены на две категории: универсальные и селективные. Детекторы первой категории могут регистрировать наличие в элюате любых веществ, кроме компонентов подвижной фазы, безотносительно к наличию или отсутствию у них каких-либо специфических свойств. Такие детекторы находят широкое применение в синтетической органической химии, нефтехимии, биохимии, фармации, медицине и др. [7, 83].
Селективные детекторы способны регистрировать элюирование из колонки веществ, интересующих экспериментатора и обладающих какими-либо специфическими свойствами по сравнению с другими компонентами, присутствующими в элюате. К этой категории относятся, например, флуоресцентные и электрохимические детекторы. Эти детекторы широко используются при анализе следовых компонентов фармацевтических препаратов, наркотиков или биогенных аминов в биологических пробах и объектах окружающей среды [7]
Скриниговые методы анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ
Хроматографическая система считалась пригодной, если выполнялись следующие условия: а) порядок выхода пиков на хроматограмме стандартных образцов следующий: морфин, кодеин, героин, кокаин, тригексифенидил (для скринингового метода анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ); морфин, кодеин, кофеин, папаверин, ацетилсалициловая кислота (для метода анализа многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин); б) разрешение пиков на хроматограмме раствора стандартных образцов должно быть не менее: для морфина и кодеина - 4,0; для кодеина и героина (кодеина и кофеина) - 3,0; для героина и кокаина (кофеина и папаверина)- 5,0, для кокаина и тригексифенидила (папаверина и ацетилсалициловой кислоты) - 6,0; в) коэффициент асимметрии пика кодеина, рассчитанный по хроматограмме раствора стандартного образца, должен быть не более 1,2; для кофеина не более 1,2 (для обоих методов); г) эффективность колонки, рассчитанная по пику кодеина, должна быть не менее 5000 теоретических тарелок, для папаверина не менее 10000 теоретических тарелок (для обоих методов); д) относительные стандартные отклонения площадей пиков, рассчитанные по результатам 5 вводов растворов стандартных образцов для анальгина, парацетамола, кофеина, ацетилсалициловой кислоты не должны превышать 2 %, для кодеина - 5 % (для метода анализа многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин) и для морфина, кодеина, героина, кокаина, тригексифенидила не должны превышать 5 % (для скринингового метода анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ). Скрининговое определение наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ Состав подвижной фазы. Компонент А ацетонитрил; компонент В: к 1 л дистиллированной деионизированноЙ воды добавляли 1 мл Объем вводимой пробы: 5-50 мкл. Колонка «Atlantis» (Waters), С18, 4,6x250 мм, 5 мкм; температура термостата колонки 30С. Детектирование: 210 нм, 254 нм, 274 нм, 285 нм {для получения спектров использовали диапазон сканирования - 200-500 нм). Пробоподготовка исследуемых образцов состояла из следующих этапов: растворение, разбавление (концентрирование) и фильтрование. Скрининговое определение наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ: Если исследуемый образец находился в твердом агрегатном состоянии, навеску образца растворяли в необходимом объеме подходящего растворителя (вода, метанол, смесь ацетон итри л -вода, подвижная фаза).
В тех случаях, когда исследуемый образец находился в растворе, анализировали либо непосредственно образец, либо его часть, предварительно разведенную в необходимом объеме подходящего растворителя.
Если исследуемый образец находился в растворе в следовых количествах, или был непригоден для анализа, то жидкость или выпаривали досуха, или проводили жидкость-жидкостную экстракцию подходящим экстрагентом, после чего экстракт также выпаривали досуха. Сухой остаток растворяли в необходимом объеме подходящего растворителя.
При постановке задачи определить наличие (или отсутствие) тех или иных веществ на поверхностях предоставленного изделия (качественное исследование), с поверхностей изделия делали смыв. Смыв упаривали досуха, а сухой остаток растворяли в 300 мкл подходящего растворителя.
Полученные растворы фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и исследовали. Исследование многокомпонентных лекарственных средств и БЛД к пище Около 0,02 г (точная навеска) порошка растертых таблеток (или содержимого капсулы) помещали в мерную колбу на 50 мл и добавляли 30 мл метанола, встряхивали в течение 15 минут, доводили до метки метанолом и фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и исследовали.
Анализ стандартных образцов для занесения в библиотеку, равно как и образцов поступивших на исследование, проводили строго в одних и тех же условиях. Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляли путем сравнения времени удерживания и УФ-спектра каждого компонента анализируемого образца с имеющейся библиотекой. Библиотека создавалась путем анализа стандартных образцов и образцов с заранее известным составом, определяемых методом ГЖХ-МС. Количественное определение проводили методом абсолютной градуировки двумя способами: 1. С использованием аналитической длины волны - хроматограмма обрабатывалась на длине волны, характерной для каждого исследуемого соединения (как правило, плечо одного из максимумов поглощения, по возможности смещенное в сторону видимого света). 2. Без использования аналитической длины волны - обрабатывалась «максимальная» хроматограмма (на хроматограмме в каждой точке отражалось значение той длины волны, поглощение на которой было максимальным). Это позволяло значительно повышать чувствительность метода. Однако использование такого способа обработки приводило к существенному снижению селективности метода вследствие следующих причин:
Скрининговое определение наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ
Очевидно, что хроматограф и чес кие свойства вещества, проявляемые в условиях разработанного нами универсального метода определения наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ, в некоторой степени характеризуют поведение вещества и в других хроматографических системах. Однако при использовании похожих систем, свойства, обнаруженные в условиях одного метода мало отличаются от свойств, которые будут обнаружены в условиях другого. Исходя из этих предпосылок, мы обнаружили интересный аспект применения полученных нами результатов универсального метода.
После разработки универсального метода определения наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ, перед исследователями была поставлена задача в короткие сроки предложить условия определения этих же веществ при помощи хромато графи ческой системы «Breeze».
Система «Breeze» включает в себя изократический насос (Waters 1515 Isocratic HPLC Pump) и двухволновой УФ-детектор (Waters 2487 Dual ё" Absorbance Detector). Эта система была оснащена колонками Symmetry С18, 3,9(4,6)х150 мм, 5 мкм. Управление системой и обработка данных осуществляется при помощи специальной программы «Breeze» сходной по принципам работы с программой «Millenium 32».
Как мы указали выше, в нашей работе были проанализированы ряд веществ, представленные в таблице 3. Все вещества были условно разделены на 4 группы: - 1-ая группа: со временем удерживания менее 6 минут; - 2-ая группа: со временем удерживания от 6 до 12 минут; - 3-ья группа: со временем удерживания от 12 до 18 минут; - 4-ая группа: со временем удерживания от 18 до 24 минут. Для каждой из групп были рассчитаны (по объему элюирования ацетонитрилом) условия хроматографического разделения для системы «Breeze» (таблица 8) при которых времена удерживания каждого вещества из 1-3 группы составит менее 15 минут, а каждого вещества из 4 группы составит менее 20 минут. 1. При подготовке к анализу наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, лекарственных средств и биологически активных добавок к пище рационально использовать такие универсальные растворители как вода, метанол и их смеси. Выбор растворителя также должен определяться не только растворяющей способностью исследуемых веществ, но и общим составом образца. 2. При создании унифицированных методик ВЭЖХ рационально использовать в качестве подвижной фазы смеси типа ацетонитрил-водный буферный раствор (или подкисленную воду) с рН 3,0-4,0 (как наиболее универсальный элюэнт); а в качестве неподвижной фазы - сорбенты типа С\Ъ (как наиболее универсальный сорбент). Для совместного определения веществ с сильно различающимся хроматографическим поведением необходимо применение широкого градиента концентрации органической составляющей подвижной фазы: от 5 до 90%. 3. Для надежной идентификации в скрининговых методах анализа необходимо совпадение с библиотекой двух характеристических параметров: времени удерживания и УФ-спектра компонента. 4. В разработанных унифицированных хроматографических условиях эффективность колонок составила от 3000 т.т. до 250000 т.т. Относительное стандартное отклонение при 5 повторных введениях не более 4,1%. Пределы обнаружения исследуемых веществ составили от 0,081 мг/л и до 2,3 мг/л, пределы количественного определения - от 0,5 мг/л и до 6,1 мг/л. Это соответствует современным требованиям к параметрам пригодности хроматографической системы. 5. Разработанные методики анализа успешно применены для скринингового качественного и количественного анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также для установления подлинности и количественного определения многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и биологически активных добавок к пище. Время разделения исследуемых веществ на хроматограмме составило не более 30 минут.
Скрининговый метод определения наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ
Если исследуемый образец находился в твердом агрегатном состоянии, навеску образца растворяли в необходимом объеме подходящего растворителя (вода, метанол, смесь ацетон итри л -вода, подвижная фаза).
В тех случаях, когда исследуемый образец находился в растворе, анализировали либо непосредственно образец, либо его часть, предварительно разведенную в необходимом объеме подходящего растворителя.
Если исследуемый образец находился в растворе в следовых количествах, или был непригоден для анализа, то жидкость или выпаривали досуха, или проводили жидкость-жидкостную экстракцию подходящим экстрагентом, после чего экстракт также выпаривали досуха. Сухой остаток растворяли в необходимом объеме подходящего растворителя.
При постановке задачи определить наличие (или отсутствие) тех или иных веществ на поверхностях предоставленного изделия (качественное исследование), с поверхностей изделия делали смыв. Смыв упаривали досуха, а сухой остаток растворяли в 300 мкл подходящего растворителя.
Полученные растворы фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и исследовали. Исследование многокомпонентных лекарственных средств и БЛД к пище Около 0,02 г (точная навеска) порошка растертых таблеток (или содержимого капсулы) помещали в мерную колбу на 50 мл и добавляли 30 мл метанола, встряхивали в течение 15 минут, доводили до метки метанолом и фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и исследовали. Анализ стандартных образцов для занесения в библиотеку, равно как и образцов поступивших на исследование, проводили строго в одних и тех же условиях. Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляли путем сравнения времени удерживания и УФ-спектра каждого компонента анализируемого образца с имеющейся библиотекой. Библиотека создавалась путем анализа стандартных образцов и образцов с заранее известным составом, определяемых методом ГЖХ-МС. Количественное определение проводили методом абсолютной градуировки двумя способами: 1. С использованием аналитической длины волны - хроматограмма обрабатывалась на длине волны, характерной для каждого исследуемого соединения (как правило, плечо одного из максимумов поглощения, по возможности смещенное в сторону видимого света). 2. Без использования аналитической длины волны - обрабатывалась «максимальная» хроматограмма (на хроматограмме в каждой точке отражалось значение той длины волны, поглощение на которой было максимальным). Это позволяло значительно повышать чувствительность метода. Однако использование такого способа обработки приводило к существенному снижению селективности метода вследствие следующих причин: a. увеличения ширины пика и, как следствие, ухудшение разделения пиков, расположенных рядом, вплоть до полного их слияния; b. проявления на хроматограмме всех компонентов (в то время как при использовании аналитической длины волны можно добиться незначительного или оптимального проявления не представляющих интерес компонентов). На рисунке 4 представлена хроматограмма образца изъятого омнопона. основными компонентами которого являются: морфин, кодеин, тебаин, папаверин и наркотин. Анализ стандартных образцов для занесения в библиотеку, равно как и образцов поступивших лекарственных средств, проводили строго в одних и тех же условиях. Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляли путем сравнения времени удерживания и УФ-спектра каждого компонента анализируемого образца с имеющейся библиотекой. Библиотека создавалась путем анализа только стандартных образцов. Количественное определение проводили методом абсолютной градуировки по наиболее оптимальной длине волны из четырех возможных. Это связано с особенностью хроматографической системы «Agilent 1100 Series», которая позволяет одновременно получать сигнал (кроме спектра в заданном диапазоне) по 8 длинам волн, где возможна его количественная обработка. В этом отношении хроматографическая система «Waters Alliance» выгодно отличается от хроматографической системы «Agilent 1100 Series»: она позволяет количественно обработать сигнал на любой длине волны из снимаемого спектра, что бывает необходимо в случаях, когда в реальном образце количественная обработка сигнала на оптимальных длинах волн затруднена. Для «Agilent 1100 Series» потребуется провести или дополнительную пробоп од готовку, или изменить параметры метода с повторной калибровкой. Для «Waters Alliance» достаточно будет перекалибровать хроматограмму стандарта на требуемой длине волны. Такое свойство хроматографической системы «Waters Alliance» позволяет перед калибровкой не прибегать к дополнительным изысканиям по определению оптимальной длины волны.
Полученные хроматограммы лекарственых средств и УФ-спектры их компонентов представлены в Приложении 1. На рисунках 5 и 6 разобрана одну из полученных хроматограмм. Наименование, время удерживания и аналитические длины волн компонентов представлены в таблице 3.
На рисунках 5 и 6 представлены хроматограммы лекарственного средства Седальгин-Нео. Аналогичные хроматограммы получаются при анализе лекарственных средств: Пенталгин-Н.С, Пенталгин-Нова, Пенталгин-ICN, Пенталгин-ФК, Пенталгин-ФС, Пентальфен-МЭЗ, Пентамиалгин, Седал-М.
На рисунке 5 четко видны три преобладающих компонента (анальгин, парацетамол, кофеин), а также два минорных компонента (фенобарбитал и кодеин), причем возможность количественного определения последних неочевидна. При рассмотрении увеличенного варианта хроматограммы (рисунок 6), то мы увидим полное разделение пиков, а интенсивность сигнала как фенобарбитала, так и кодеина достаточна для количественного определения.
Похожие диссертации на Градиентный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии как унифицированный метод определения наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ
-
![Стандартизация и контроль качества лекарственных средств группы фторхинолонов методами хроматографии и ИК-спектроскопии [Электронный ресурс]](/i/i/4375/184827.png "Стандартизация и контроль качества лекарственных средств группы фторхинолонов методами хроматографии и ИК-спектроскопии [Электронный ресурс] Коновалов Андрей Александрович")