Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 9
1.1. Общая характеристика и функциональные связи в системе мать — плацента — плод, основные причины ее нарушения и особенности реакции плода на внешние воздействия 9
1.2. Особенности влияния лекарственных средств на прена- тальное развитие млекопитающих 30
1.3. Биологически активные вещества растительного и животного происхождения. Перспективы и проблемы их применения в период беременности 36
Глава II. Материалы и методы исследований 46
Глава III. Результаты собственных исследований 55
3.1. Общая характеристика нового биологически активного препарата на основе растения «Каллизия душистая» и эмбрионально-яичной массы и перспективы его использования в процессе беременности 55
3.1.1. Характеристика препарата «Комбад» 55
3.1.2. Результаты исследования биологических свойств препарата (активность, оптимальная доза, безвредность,) 63
3.2. Результаты исследования влияния препарата «Комбад» на течение беременности у крыс и морфофункциональные показатели эмбрионов 71
3.2.1. Особенности течения беременности и родов у крыс 71
3.2.2. Эмбриотоксическое и тератогенное действие препарата «Комбад» 83
3.2.3. Визуальные, патоморфологические характеристики и морфометрические показатели эмбрионов крыс 86
3.2.4. Гистологические показатели жизненно важных органов эмбрионов 93
3.2.5. Гематологические и биохимические показатели организма в перинатальном периоде
3.2.6. Особенности формирования скелета эмбрионов крыс под влиянием препарата 117
Обсуждение результатов исследования 122
Выводы 141
Практические рекомендации 144
Список литературы 145
Приложения 178
- Особенности влияния лекарственных средств на прена- тальное развитие млекопитающих
- Биологически активные вещества растительного и животного происхождения. Перспективы и проблемы их применения в период беременности
- Визуальные, патоморфологические характеристики и морфометрические показатели эмбрионов крыс
- Особенности формирования скелета эмбрионов крыс под влиянием препарата
Введение к работе
Актуальность исследования. Развитие живого организма в сложных условиях современности связано с влиянием многочисленных экологических, эпидемических, эпизоотических, антропосоциальных и других стрессирую- щих факторов, часто приводящих к срыву адаптационных возможностей организма, формированию различных патологических процессов и нарушений развития. Особую важность в этом смысле представляет наиболее уязвимый пренатальный период, когда закладываются все органы и системы, обусловливающие комплекс показателей морфофункционального статуса организма на всю дальнейшую жизнь (Сивочалова О.В., Радионова Г.К., 1999; Вельти- щев Ю.Е., 2000; Серов В.Н. и др., 2001; Буштырева И.О., Чернавский В.В., Левченко М.В., 2007; Бондарева Н.И., 2008; Tran H., 2005).
Формирование здоровья новорожденного, в том числе его иммунной системы и адаптационных реакций, во многом зависит от иммунного гомео- стаза в системе мать — плацента — плод (Иммунитет новорожденных детей, 1986; Хаитов P.M., Вербицкий М.Ш., 1986; Тимошенко JI.B. и др., 1990). Различные патологические состояния, сопровождающиеся недостаточностью приспособительных возможностей, снижением резистентности и иммунологической реактивности материнского организма во время беременности, за-
частую способствует развитию многочисленных нарушений в структуре и функции тканей и органов плода (Мучаидзе Ю.А. и др., 1990). Все возрастает частота врожденных, неонатальных и ранних постнатальных иммунодефици- тов, возникающих на фоне фетоплацентарной недостаточности, вызванной неблагоприятными воздействиями (Савельева Г.М., 1991; Коваль Г.С., 1995).
В связи с этим, особо актуален вопрос поиска эффективных и безопасных средств, способных поддержать естественные силы материнского организма без ущерба для здоровья плода. Современным подходом к данной проблеме является фармакологическая коррекция на основе применения антиок- сидантных, иммуномодулирующих, адаптогенных биологически активных препаратов (Назаренко JI. Г., 1990; Колхир В.К. и др., 1995; Грек O.P., 1999;
Абрамченко В.В., 2001; Побединский Н.М., Беришвили М.В., 2007; Стацевич Л.Н., 2007; Mikhail M.S. et al., 1994 и др.).
При создании высокоэффективных лекарственных препаратов и БАД с такими свойствами целесообразным является использование растительных и животных объектов, уже изначально представляющих собой эволюционно предопределенный сочетанный и комплементарный набор биологически активных веществ, адекватно влияющих на метаболические системы организма. Однако, при использовании их беременным, даже комплексы из естест-
венных источников могут оказывать непредвиденное, в том числе отрицательное воздействие на внутриутробное развитие организма.
В связи с этим поиск новых перспективных сырьевых объектов растительного и животного происхождения с целью создания на их основе биологически активных препаратов, использование которых допустимо в период беременности, должны базироваться на всестороннем изучении особенностей пренатального развития плода в условиях экспериментального воздействия на их матерей.
Цель исследования: комплексно изучить морфофункциональные особенности эмбрионов крыс, получавших на протяжении всего периода беременности новый биологически активный препарат на основе эмбрионально- яичной массы и лекарственного растения «Каллизия душистая».
Задачи исследования:
на основе технологических и биологических характеристик обосновать возможность применения в течение беременности нового биологически активного препарата на основе эмбрионально-яичной массы и растительного сырья каллизии душистой;
изучить показатели эмбриональной смертности и тератогенный эффект препарата на экспериментальных группах крыс;
исследовать морфометрические показатели развития эмбрионов крыс при использовании препарата;
исследовать гистологические показатели жизненно важных органов эмбрионов;
оценить гематологические и биохимические показатели эмбрионов крыс под влиянием исследуемого препарата;
изучить особенности формирования скелета эмбрионов крыс под влиянием препарата.
Научная новизна работы. Впервые экспериментально апробирован на беременных животных новый комплексный биологически активный препарат, обладающий свойствами иммуномодулятора, изготовленный по оригинальной технологии из активированных эмбрионально-яичной массы куриного яйца и побегов растения каллизии душистой. Определены минимально эффективная и оптимальная дозы, а также отработана схема применения препарата беременным.
Дана сравнительная оценка комплекса морфометрических, гематологических, биохимических, гистологических и остеометрических показателей развития потомства в условиях экспериментального воздействия на их матерей в течение всего срока беременности препарата в дозах 0,1 и 1 мл/кг.
Впервые проведена всесторонняя оценка полноценности физического развития плодов крыс на основе применения метода индексов (Кетле, Борн- гардта, Пинье, Вервека, Эрисмана, Ливи, Рорера), характеризующих алло- метрический рост, пропорциональность и крепость телосложения, а также физическую организацию тела, как в норме, так и при использовании беременным животным препарата «Комбад» в исследуемых дозах.
Впервые проведена оценка минерального состава тканей организма плода на 20-е сутки эмбриогенеза, характеризующего биохимический онтогенез органов и тканей в данный период возрастного развития крыс в норме и под влиянием препарата в исследуемых дозах.
Установлено отсутствие эмбриотоксического и тератогенного действия при использовании доз препарата 0,1 и 1 мл/кг. Отмечена положительная динамика морфофункциональных показателей развития плодов.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные сведения об особенностях пренатального развития под влиянием нового биологически активного препарата, при применении его в период беременности, существенно дополняют и расширяют представления о роли внешних факторов в обеспечении закономерностей онтогенетических процессов и вносят теоретический вклад в биологию размножения и развития.
Дано экспериментальное обоснование целесообразности применения нового биологически активного фитоэмбрионального препарата «Комбад» беременным крысам, что является основанием для дальнейших доклинических и клинических испытаний с целью использования биологически активной кормовой добавки «Комбад» для животных и человека в комплексной и монокоррекции фетоплацентарной недостаточности и антенатальном формировании здоровья потомства.
Приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом №2320197 на способ приготовления комплексной биологически активной добавки «Комбад» для животных на основе эмбриональных и растительных субстратов. Разработана техническая документация.
Результаты исследования используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по биологии размножения и развития, гистологии и эмбриологии, физиологии, на медико-биолого- химическом факультете Ставропольского государственного университета, в Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им. М.А. Шолохова, Самарской государственной сельскохозяйственной академии, Брянском государственном университете им. академика И.Г. Петровского.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях Ставропольского государственного аграрного университета (Ставрополь, 2005-2006), Третьем съезде Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2005), научно-методических конференциях «Университетская наука - региону» (Ставропольский государственный университет, 2006, 2007, 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием (Архангельск, 2006), научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр ЮНЦ РАН (Ростов, 2007, 2008, 2009), где доклады были отмечены двумя почетными грамотами, а также дипломом лауреата, 6-й Международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2008).
Основные положения, выносимые на защиту.
Препарат «Комбад» не обладает эмбриотоксическим и тератогенным свойствами и за счет широкого комплекса БАВ, уже в малых дозах оказывает положительное воздействие как на организм матери, способствуя коррекции иммунного и метаболического статуса ее организма, так и на плод.
Использование препарата беременным животным оказывает до- зозависимое стимулирующее и оптимизирующее влияние на морфометриче- ские, гематологические, биохимические, гистологические и остеометриче- ские показатели потомства в процессе пренатального развития.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ, в том числе одна из них опубликована в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 184 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 26 фотографиями, в том числе 16 микрофотографиями, четырьмя диаграммами, 26 таблицами. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов исследования, выводов, практических рекомендаций и приложений. Список использованной литературы содержит 351 источник, в том числе — 91 зарубежных авторов.
Особенности влияния лекарственных средств на прена- тальное развитие млекопитающих
При функциональной недостаточности тех или иных органов материнского организма из физиологического процесса взаимосвязи матери и плода может возникнуть патологический процесс — преждевременная функция плода. Это связано с тем, что органы плода включаются в работу преждевременно, так как мать начинает эксплуатировать плод, заставляя функционировать его системы для сохранения беременности, что приводит впоследствии к нарушениям здоровья в постнатальный период развития (Колосовский Б.Н., 1968; Торбек В.Э., 1986; Петрянкин Ф.П., 1997; Лобко П.И., Кононелько Е.Г., Солнцева Г.В., 2000; Дроздова Л.И., Шкуратова И.А., Барашкин М.И., 2002; Федотова H.A., 2004).
За время пренатального развития организм переживает различные изменения со стороны окружающей его среды. Смены способа «общения» с организмом матери и, прежде всего, смены способа питания, являются теми моментами, к которым, по мнению Аршавского И.А. (1967), можно приурочить критические периоды развития. Им отмечено, что «по отношению к млекопитающим можно говорить не столько о самом антенатально развивающемся организме, сколько об организации соответствующей специфической среды, создаваемой матерью на определенных переломных этапах и обеспечивающей возможность реализации наследственных потенций развивающегося эмбриона и плода».
Выделяемые в антенатальном онтогенезе критические стадии развития — это периоды высокой повреждаемости ФСМ1111, характеризующиеся повышенной чувствительностью зародыша и эмбриона к повреждающим действиям различных факторов. Известно также, что у млекопитающих они совпадают со временем имплантации и плацентации. Эффект повреждающего фактора в первый критический период реализуется чаще всего в виде гибели зародыша, так как в это время он еще не обладает защитными реакциями. Второй критический период связан с формированием системы мать — плацента — плод, вследствие становления связей между отдельными ее компонентами, которые пока не являются достаточно прочными. Для третьего критического периода характерна существенная диссоциация между прекращением прироста массы плаценты и быстрым увеличением массы самого плода (Светлов П.Г., 1960; Тельцов Л.П., 1992; 1998; Милованов А.П., 1999; Мас- лова И.В., 2002; Иванов B.C., 2003; Шабалов Н.П., 2004).
Таким образом, в зависимости от срока возникновения, врожденные пороки принято условно делить на гамето-, бласто-, эмбрио- и фетопатии. Устойчивость развивающегося зародыша к действию повреждающих факторов неодинакова и зависит от срока беременности в момент воздействия: наибольшая отмечается в конце беременности, наименьшая - в начале, когда еще не развиты приспособительные реакции со стороны зародыша к изменениям гомеостаза организма матери (Милованов А.П., 1999).
Период, в течение которого повреждающие факторы вызывают конкретный порок развития, принято называть тератогенным терминационным периодом. Тератогенный фактор, если он действует в то время, когда происходит формирование определенного органа, может привести к пороку его развития. Следовательно, его терминационный период определяется окончанием развития этого органа или ткани (Тератология человека, 1991; Шабалов Н.П., 2004). В качестве тератогена может выступать вещество или физический агент, нарушающий структурное или функциональное развитие, при этом, тератоген может действовать однократно или в течение всего внутриутробного периода и приводить к возникновению врожденного порока (Ха- матханова Е.М., Кучеров Ю.И., 2007).
Среди многочисленных факторов, принимающих участие в тератогенезе, особого внимания, опять же, заслуживают неблагоприятные факторы окружающей среды. Репродуктивное здоровье населения и состояние здоровья детей является одним из наиболее чувствительных параметров, отражающих изменения качества окружающей среды. Именно окружающая среда и условия жизни являются теми из важнейших факторов, определяющих формирование любой патологии (Хван Л.К., 1998; Тимофеева Н.Б., 2007). Некоторые отечественные авторы предлагают использовать врожденные пороки и аномалии развития новорожденных в качестве индикатора внешнесредовых воздействий на популяцию населения, отражающего уровень здоровья в зависимости от среды обитания (Попкова Л.В., Алексеева Л.Д., Глебова Л.А., 1999).
В тесной связи с загрязнением окружающей среды находятся медико- демографические показатели, среди которых наиболее значимыми являются частота пороков развития, частота хромосомных болезней, частота умственной отсталости и аномалий поведения у детей, а также частота детей — инвалидов и инвалидов детства (Кучма В.Р. и др., 1993; Вельтищев Ю.Е., 1999). По данным зарубежных и отечественных авторов в большинстве развитых стран в структуре детской заболеваемости и смертности на первое место выходят врожденные пороки развития плода и новорожденных (Антипенко Е.И., Когут H.H., 1991; Минков И.П., 1992; Ковчур П.И., 1996; Крикунова Н.И., 1996; Хуссамова Н.Р., Минигамизова А.Я., 1996; Иванов В.П., Чурно- сов М.И., Кириленко А.И., 1997; Кобринский Б.А., Демикова Н.С., 2001; Гле- бова JT.A. и др., 2003; Барашнев Ю.И., Бахарев В.А., Новиков П.В., 2004; Ха- матханова Е.М., Кучеров Ю.И., 2007).
В настоящее время в педиатрии активно поднимаются проблемы экологической патологии, определяющей в большей степени не заболеваемость, а частоту и тяжесть хронических болезней, появление необычных заболеваний у детей, более свойственных взрослым. Доминируют нарушения со стороны медленно развивающихся нервной, эндокринной, иммунной, репродуктивной систем (Вельтищев Ю.Е., 1999).
Экологические факторы влияют на организм через неспецифические нарушения в виде ослабления уровня неспецифической резистентности вследствие истощения системы антиоксидантной защиты, противостоящей избыточной интенсивности процессов свободно-радикального окисления в тканях организма, в частности плаценты (Прокопенко В.М. и др., 2002), ослабления защитно-приспособительных механизмов, снижения устойчивости клеточных мембран. Причем перечисленные патогенетические механизмы могут реализоваться при гипо- и гипервитаминизации беременных. Зачастую патология развивается у детей с повышенной чувствительностью к конкретным повреждающим факторам и при относительно слабом, но продолжительном их воздействии (Вельтищев Ю.Е., 1999).
Биологически активные вещества растительного и животного происхождения. Перспективы и проблемы их применения в период беременности
Перинатальная охрана плода является одной из наиболее важных проблем в практическом акушерстве (Камилова Н.М., 2006), уже ни у кого не вызывает сомнений необходимость совершенствования помощи беременным и новорожденным с целью снижения перинатальной заболеваемости и смертности, профилактики нарушений развития (Горячев В.В., 1990; Яковцо- ва А.Ф. и др., 1990; Ахмина Н.И., 2005; Володин H.H., Байбарина E.H., Дегтярев Д.Н., 2006). В связи с тем, что здоровье плода и новорожденного во многом определяется условиями его эмбрионального развития, в значительной мере заболеваемость детей может быть снижена через уменьшение осложнений беременности и сохранение здоровья матери (Ахмина Н.И., 2005).
Ключевым моментом для благоприятного течения и исхода беременности, развития здорового ребенка, устойчивости его организма к действию инфекций и других неблагоприятных факторов, способности его к обучению во все возрастные периоды, безусловно, является адекватное и сбалансированное питание беременных и кормящих женщин (Соколова М.Ю., 2005; Ни- замова А.Ф., 2007). Потребности женского организма в период беременности закономерно возрастают. Пищевые вещества, или нутриенты (белки, жиры, углеводы, витамины, макро- и микроэлементы), используются как для питания материнского организма, так и для построения органов и структур плода и его жизнеобеспечения, поэтому формированию сбалансированного рациона питания беременной и кормящей женщины необходимо уделять большое внимание. Однако с помощью пищевой коррекции не всегда удается восполнить дефицит витаминов. Увеличение поступающих питательных веществ и микроэлементов в организм беременной может быть достигнуто за счет обязательного назначения ей витаминно-минеральных комплексов со специально подобранным составом. Такие комплексы позволяют в достаточном объеме получить основную часть необходимых микронутриентов в соотношениях, оптимальных для матери и развития плода (Соколова М.Ю., 2005).
Необходимость применения поливитаминов, макро- и микроэлементов во время беременности в настоящее время не вызывает сомнений. Известно, что использование данных препаратов приводит к значительному снижению частоты развития врожденных пороков развития у плода, а также невынашивания, гестоза, плацентарной недостаточности, гестационной анемии и других осложнений беременности (Омельянюк Е.В., Мозговая Е.В., 2005). Однако комплексные поливитаминные препараты не всегда способны оптимально обеспечивать реальные потребности организма в микронутриентах. Вопрос возможного влияния избыточности нормируемых витаминов, которые официально признаны ВОЗ токсичными, подробно затронут Лебедевым А.Г. (2004).
Так, рекомендуемые нормы потребления пищевых веществ, в том числе и витаминов (Нормы физиологических потребностей в пищевых веществах и энергии для различных групп населения СССР, 1991), значительно превышают среднюю физиологическую потребность организма в них (Тутельян В.А. и др., 1999; Коровина H.A., 2001). Реальные индивидуальные потребности в витаминах у подавляющего большинства населения существенно ниже (Коровина H.A., 2001). Не должно быть превышения суточной потребности витаминов А, D, Вь В2, В5, Вб, В7, Bi2, РР, фолиевой кислоты более чем в 3 раза, Е и С более чем в 10 раз. Стандартная витаминизация рационов, которая не соответствует индивидуальным особенностям и потребностям, может давать обратный эффект, а в рассматриваемой ситуации способна неблагоприятно влиять на состояние и развитие плода, новорожденного и самой матери (Лебедев А.Г., 2004).
Исходя из вышесказанного, очевидно, что превышение рекомендуемых норм потребления нутриентов допустимо только в ограниченных пределах и, в большинстве случаев, только по лечебным показаниям. Сами же рекомендуемые нормы потребления являются избыточными для значительной части населения в силу индивидуальных особенностей (Коровина H.A., 2001), определяемых, прежде всего, наследственной предрасположенностью к той или иной патологии.
Таким образом, роль полноценного и адекватного питания матери во время беременности настолько велика, что можно ставить вопрос о питании как один из возможных путей управления внутриутробным развитием плода через материнский организм (Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980).
Однако лишь небольшую часть нарушений процесса беременности возможно предотватить лишь пищевой коррекцией. В последние годы большое внимание уделяется изучению иммунологических аспектов патологии гестационного процесса, ведется разработка эффективных методов иммуно- коррекции (Назаренко Л.Г., 1990).
Так, несмотря на существование множества схем лечения плацентарной недостаточности, причиной которой могут быть и иммунные факторы, терапия данной патологии не всегда эффективна, в связи с чем, продолжается поиск новых методов коррекции (Сидорова И.С., Макаров И.О., 2000; Гри- щенко О.В., Лахно И.В., Зеленин Ю.В., 2001; Серов В.И., 2002; Гутикова Л.В., 2005; Краснопольский В.И. и др., 2006). В последние годы в схемы лечения и профилактики ФПН начали включать препараты с антиоксидантной активностью, в том числе препараты из группы антиоксидантов- флавоноидов, которые находят все более широкое применение во врачебной практике (Колхир В.К. и др., 1995; Савельева Г. М., Сичинава Л. Г., 1995; Грек O.P., 1999).
Установлено, например, достоверное снижение риска развития фетоп- лацентарной недостаточности, обусловленное нормализующим влиянием ди- гидрокверцитина на систему гомеостаза, в частности, снижением интенсивности свободнорадикального окисления и усилением активности антиоксидантной системы, избирательным иммуномодулирующим действием. Прием антиоксидантов-флавоноидов при фетоплацентарной недостаточности улучшает кровообращение в ФСМ1111, что, в свою очередь, отражается на развитии плода - реже выявляются изменения, характерные для его внутриутробной гипоксии. При этом тяжелых нарушений не наблюдается. Напротив, отмечается пролонгирование беременности до физиологических сроков родоразре- шения, достоверно снижается частота осложнений в родах, а также количество оперативных вмешательств, что позволяет констатировать существенное улучшение перинатальных показателей (Побединский Н.М., Беришвили М.В., 2007).
В настоящее время у многих авторов не вызывает сомнений применение антиоксидантов как дополнительных средств неспецифической терапии гестозов (Абрамченко В.В., 2001; Mikhail M.S. et al, 1994). Такой подход обусловлен выявленным изменением процессов перекисного окисления липидов во всех звеньях ФСМПП. Наряду с множеством факторов, вносящих свой вклад в развитие этого полиэтиологического синдрома, не исключается, что возникновение гестозов обусловлено нарушением прооксидантно- антиоксидантного равновесия, в регуляции которого участвуют витамины- антиоксиданты (Гутикова JI.B., 2005). Известно, что антиоксиданты различной химической структуры проявляют выраженные антигипоксантные свойства (Суслина З.А. и др., 2000; Зарубина И.В., Миронова О.П., 2002; Halliwell В., Gutteridze J.M.C., 1999).
Визуальные, патоморфологические характеристики и морфометрические показатели эмбрионов крыс
Кроме того, в составе растения имеются элементы, содержание которых в живом организме измеряется миллионными и миллиардными долями процента, называемые ультра-микроэлементами. Так, галлий — металл, свойства которого во многом схожи со свойствами железа. В настоящее время выявлено мощное противовирусное и антибактериальное действие данного элемента в отношении широкого спектра микроорганизмов (Chitambar C.R., Narasimhan J., 1991; Kaneko Y. et al., 2007). Торий и стронций, который является аналогом кальция, постоянно присутствуют в тканях животных и принимают участие в формировании костной ткани (Бадалов С.Т., 2005). Ванадий влияет на углеводный и липидный обмены, в значительных количествах обнаружен в эритроцитах. Ионы рубидия сходны по своему действию с эффектами калия, могут участвовать в процессах калий-натриевого обмена и регулировать мембранные потенциалы. Примечательно, что перечисленные элементы оказывают свои эффекты в организме в диапозоне малых доз, что, по мнению некоторых авторов (Подколзин A.A., Гуревич К.Г., 2002) исключает их побочное действие.
Количество свинца и урана, определение которых проводилось в соост- ствие с обязательными нормативными требованиями к БАД, было значительно ниже значений допустимых ГОСТ.
Анализ химического состава сока каллизии, указывает на наличие у него антиоксидантных и адаптогенных свойств. Было установлено присутствие в растении ряда дубильных веществ, проявляющих мембраностабилизирую- щий эффект, обладающих антиоксидантным действием. В свою очередь, известно, что антиоксиданты обладают антигипоксантным действием (Зарубина И.В., Миронова О.П., 2002; Halliwell В., Gutteridze J.M.C., 1999), что крайне важно при развитии беременности.
Кверцитин и кемпферол, являющиеся представителями флавоноидов, входящих в состав золотого уса, оказывают мощное воздействие на секреторную и антитоксическую функцию печени, функциональные резервы которой, как известно, при беременности находятся в состоянии напряжения. Улучшение работы печени способствуют лучшему обезвреживанию продуктов жизнедеятельности плода, в ней усиливается инактивация материнских половых гормонов (Калинская Н.С., 2009).
Органическим кислотам отведена важная роль в обмене веществ, участии в синтезе белка, гемоглобина, гликогена в печени. Аскорбиновая кислота, найденная в соке растения, участвует в антиоксидантной защите в функциональной связи с глутатионом и токоферолом (Лебедев А.Г., 2004).
Важно и то, что баланс химических веществ каллизии душистой в значительной мере-сохраняется даже после разрушения самого растения и экстракции входящих в него компонентов. Высокая концентрация и соотношение между собой этих веществ определяют их выраженную физиологическую активность при воздействии на организм, направленную на мобилизацию его защитных, компенсаторно-приспособительных механизмов и уменьшения.патогенетических изменений в нем (Тимченко Л.Д., 2005).
Однако, несмотря на достаточно богатый химический состав исследуемого растения, напрашивается необходимость пополнения его дополнительными ингредиентами для обеспечения оптимизации витаминного состава, а также обогащения белковыми компонентами и соединениями животного происхождения.
Эмбрионально-яичная масса куриного яйца — эксклюзивный и уникальный по своим характеристикам сырьевой объект, используемый при создании препарата. Эмбриональная ткань обладает колоссальным жизненным потенциалом, в своем составе она содержит богатейший набор различных БАВ, в том числе и такие ценные компоненты как лизоцим, цитаминподоб- ные вещества и биогенные стимуляторы,(Ржепаковский И.В., 2003), которые активизируют жизнедеятельность клеток и при необходимости могут восстанавливать утраченные механизмы саморегуляции.
Животные белки, входящие в состав эмбриональных тканей, играют исключительную роль в развитии беременности, так как необходимы материнскому организму для роста матки, плаценты, молочных желез, увеличения массы крови, являются пластическим материалом для зародыша и плода. В виде полноценной пищевой смеси белки и аминокислоты обладают усвояемостью не менее 95% и отвечают за синтез ферментных белков в пищеварительных и непищеварительных органах потомства (Тимофеева Н.М. и др., 2003).
Физиологическая роль аминокислот в поддержании репродуктивной функции и формировании организма плода очевидна (Соколова М.Ю., 2005). Проведенная в нашей лаборатории оценка аминокислотного состава эмбрионально-яичной массы куриного яйца выявила наличие не менее 15 соединений данного ряда (Ржепаковский И.В., 2003). Важнейшими из них являются аргинин, гистидин, лизин, метионин, таурин, триптофан, фенилаланин, глу- таминовая и аспарагиновая кислоты, отвечающие за развитие мозговой, костной тканей, синтез гемоглобина, детоксицирующую функцию печени, синтез альбумина, серотонина и др.
Жирорастворимые витамины А и Е, содержащиеся в эмбриональных тканях, в сочетании с аскорбиновой кислотой, входящей в состав сока калли- зии душистой, являются мощными антиоксидантами, синергизм которых между собой доказан (Коровина М.А., 2001). Велико значение витамина Е на постимплантационное развитие эмбриона (Соколова М.Ю., 2005).
Эмбрионально-яичная масса также содержит основные гормональные вещества {табл. 2). Их количество является оптимальным и необходимым для поддержания беременности и нормального развития плода (Рере G.J., Albrecht E.D., 1995; Challis J.R.G. et al., 2000; Szekeres-Bartho J. et al., 2001).
В тканях куриного эмбриона установлено содержание альфа- фетопротеина, являющегося важнейшим регуляторным белком в эмбриональном развитии, а также отвечающим за защиту организма матери от иммунного конфликта с плодом. При этом на 10 сутки эмбрионального развития его концентрация в тканях эмбриона составляет 32,29 ± 9,51 Е/мл (Тимченко Л.Д. и др., 2008).
Особенности формирования скелета эмбрионов крыс под влиянием препарата
Однако на 10 день после начала выпаивания препарата отмечена тенденция к повышению количества лейкоцитов крови (на 11,57 % при Р 0,05) при сравнении их со значениями фона. Процент моноцитов выше значений этого показателя в фоне на 1,19 % (Р 0,05). Подобные изменения картины крови указывает на стимулирующее влияние биологически активных веществ препарата на фагоцитарную функцию крови, а также усиление неспецифических механизмов защиты организма.
При увеличении дозировки вводимого per os препарата до 0,05 мл/кг зарегистрировано повышение сегментоядерных нейтрофилов на 5,50 % (Р 0,05) и моноцитов на 1,77 % (Р 0,05) в сравнении со значениями, полученными от этих же животных до начала эксперимента.
В группах крыс, которым применялась дозировка 0,1 мл/кг, количество сегментоядерных нейтрофилов повысилось по сравнению с исходными значениями для данного показателя на 8,60 % (Р 0,05), при этом в фоне их количество составляет 20,90±3,20 %. Количество моноцитов увеличилось на 3,34 % (Р 0,01) в сравнении с их количеством, выявленным у крыс до начала выпаивания препарата, где он оставлял 2,12±0,70 %. Необходимо отметить, что эти значения также не выходят за пределы физиологических показателей, однако в сравнении с результатами, полученными от животных, которым препарат применяли в меньшей дозе (0,05 мл/кг), интенсивность прироста данных показателей происходит с более высокой степенью достоверности.
Дальнейшее увеличение дозировки препарата с 0,1 до 0,5 мл/кг, продемонстрировало сохранение стабильных показателей, выявленных для дозы 0,1 мл/кг. В группах крыс, получавших исследуемый препарат в дозах 1 мл/к г, 3 мл/кг и 5 мл/кг выявлена нестабильная динамика изменений лейкоформулы и количества лейкоцитов крови. Так, у животных экспериментальной группы, в которой проводили тестирование препарата в дозе 1 мл/кг зарегистрировано повышение общего количества лейкоцитов в 1,3 раза (Р 0,05) в сравнении со значениями фона, где этот показатель составил 5,12±0,31х109/л. Установлено также повышение количества моноцитов на 3,32 % (Р 0,01) при исходных значениях этого показателя в пределах 2,13±0,40.
У крыс, получавших ежедневно 3 мл/кг исследуемого препарата, при подсчете общего числа лейкоцитов зарегистрировано их увеличение к концу эксперимента в 1,5 раза (Р 0,05), в то время как до начала выпаивания препарата абсолютное число лейкоцитов у животных данной группы составляло 5,10±0,31хЮ7л. В целом по группе, в лейкоформуле крыс отмечено увеличение лимфоцитов с 59,30±0,38 % до 64,56±0,68 % (Р 0,05), сегментоядерных нейтрофилов с 20,75±1,36 % до 22,68±1,03 % (Р 0,05) и моноцитов с 2,34±0,44 до 4,14±0,28 % (Р 0,01). Индивидуальный анализ лейкоцитарной формулы крови у данных животных выявил значительные различия соотношения отдельных форм лейкоцитов у разных крыс, при этом у 40 % крыс общее содержание лейкоцитов крови превышает нормативные значения (лейкоцитоз).
Достоверное повышение общего количества лейкоцитов в.- 1,5 раза (Р 0,05) в сравнении с фоном, было также получено в группе крыс, которым перорально вводили препарат «Комбад» в дозе 5 мл/кг. Исследование лейкоцитарной формулы крови также выявило индивидуальные различия показателей у животных. Так, у пяти из десяти крыс зарегистрировано повышение сегментоядерных нейтрофилов на 5,07 %, моноцитов на 0,39 % и лимфоцитов на 6,64 % (Р 0,05). У трех животных отмечено увеличение только процента моноцитов на лейкограмме крови с 2,05±0,41% до 4,08±0,52% (Р 0,05). У двух крыс установлено повышение эозинофилов на 0,70 % и базофилов на 0,47 %, при исходных значениях для данных показателей 2,0±0,15 % и 1,10±0,26 % соответственно.
В тех группах, где крысам препарат выпаивали в дозировках 7 мл/кг и 10 мл/кг, было зарегистрировано повышение абсолютного числа лейкоцитов в 1,6 и 1,7 раза (Р 0,01) соответственно в сравнении со значениями фона (5,36±0,28х109/л). Установлено увеличение содержания базофилов и эозинофилов до 1,90±0Д9 % и 5,23±0,74 % соответственно в группе крыс при применении препарата в дозировке 7 мл/кг, что на 0,60 % и 3,10 % (Р 0,05) выше фоновых, где эти показатели равнялись 1,30±0,17 % и 2,13±0,15 % соответственно. При этом прослеживается тенденция к росту процентного содержания базофилов и эозинофилов пропорционально увеличению концентрации вводимого препарата. Так, их содержание в крови крыс, получавших «Комбад» в дозе 10 мл/кг увеличилось на 2,20 % и 3,84 % (Р 0,05) соответственно в сравнении с данными показателями до начала эксперимента. Проведенный индивидуальный анализ лейкоформулы показал увеличенное содержание эозинофилов и базофилов у 40 % животных, получавших препарат в дозе 7 мл/кг и у 80 % крыс из группы, где производили тестирование препарата в максимальной дозе (10 мл/кг).
Содержание моноцитов крови у крыс в группах, где производили тестирование препарата «Комбад» в дозах 7 мл/кг и 10 мл/кг уменьшилось в сравнении с группой животных, получавших 0,1 мл/кг препарата, где нами было зарегистрировано их наибольшее количество, на 2,42 % и 2,31% соответственно. Однако по сравнению с фоном (2,13±0,15%), эти показатели соответственно увеличены на 0,59 % и 0,70 % (Р 0,05).
Подобная динамика изменений в процентном соотношении лейкоцитов крови, заметное увеличение эозинофилов и базофилов в группах крыс, получавших «Комбад» в дозах 7 мл/кг и 10 мл/кг, по-видимому, связана с сенсибилизацией организма на повышение концентрации некоторых веществ, входящих в состав препарата.
Результаты взвешивания крыс не выявили достоверных различий в прибавлении живой массы животных опытных групп, в которых препарат применяли в дозировках 0,01 мл/кг и 0,05 мл/кг в сравнении с контрольной группой. Достоверно значимым оказался среднесуточный привес крыс, получавших препарат в дозировках от 0,1 мл/кг до 10мл/кг. При этом привес в группах животных, которым выпаивали препарат в дозах 0,1 мл/кг и 0,5 мл/кг оказался не менее чем на 11,06±1,03 % (Р 0,05) выше суточного привеса животных контрольной группы. У крыс, получавших препарат в дозах 1 мл/кг, 3 мл/кг и 5 мл/кг среднесуточный привес увеличился по сравнению с контролем на 15,12±1,70 % (Р 0,05), 18,67±1,9 % (Р 0,05) и 21,04±1,30 % (Р 0,05) соответственно.
