Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные представления о сущности регенерации и механизмах ее регуляции 10
1.1. Особенности регенерации в онтогенезе 10
1.2. Морфогенез и особенности физиологической и репаративнои регенерации в печени при различных ее повреждениях 21
1.3. Пути и средства стимуляции регенерационных процессов в печени 33
Глава 2. Материал и методы исследования 46
Глава 3. Собственные исследования 54
3.1. Морфофункциональныи и регенеративный потенциал печени крыс репродуктивного периода жизни 54
3.2. Экспериментальное моделирование дозированного повреждения печени крыс для изучения регенеративных особенностей 59
3.3. Результаты изучения влияния фитопрепаратов из каллизии душистой на морфогенез и регенерацию печени половозрелых крыс в норме и при экспериментальном повреждении 70
3.3. 1. Биологически активные вещества каллизии душистой и характеристика новых препаратов на ее основе 70
3.3.2. Результаты влияния монофитосубстанции на морфофункционалъные показатели и регенерацию печени крыс при экспериментальном повреждении 80
3.3.3. Результаты изучения влияния препарата «Комбад» на морфофункционалъные показатели и регенерацию печени в норме и при экспериментальном повреждении 93
Обсуждение результатов исследования 100
Выводы 117
Практические рекомендации 119
Список литературы 120
Приложения 147
- Морфогенез и особенности физиологической и репаративнои регенерации в печени при различных ее повреждениях
- Пути и средства стимуляции регенерационных процессов в печени
- Экспериментальное моделирование дозированного повреждения печени крыс для изучения регенеративных особенностей
- Результаты влияния монофитосубстанции на морфофункционалъные показатели и регенерацию печени крыс при экспериментальном повреждении
Введение к работе
Актуальность исследования.
Регенерация представляет собой приспособительный процесс, выработанный в ходе эволюции и присущий всему живому (Струков А.И., Серов В.В., 1985). На протяжении онтогенеза регенерация не остается неизменной ее интенсивность с возрастом и под влиянием внешней среды изменяется (Сидорова В.Ф., 1976; Данилов Р.К., Григорян Б.А., 1996; Де-ев Р.В., 2007). Особый интерес вызывает интенсивность регенерационно-го процесса в репродуктивном периоде онтогенеза, когда органы и системы органов не только наиболее зрелые для реализации их онтогенетически предусмотренных функций, но и должны быть подготовлены к выполнению эксклюзивной для организма роли - воспроизводству потомства (Торчинов A.M., Ханукоева А.К., 2000; Илющенко В.Г., 2003). Именно в этот период особое значение придается морфофункциональной полноценности и высокой регенерационной способности внутренних органов организма матери (Николина О.В., 2004; Chronos G.P., Gold P.W., 1992), тем более что многочисленные сведения по этому вопросу очень разноречивы. Большое число исследований в этом смысле, отводят важную роль печени, которая является полифункциональным органом (Подымова С.Д., 1993; Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А., Котовский Е.Ф., 1999; Михайлов И.В., 2002). Заболевания печени стоят на восьмом месте среди причин смертности населения репродуктивного возраста в разных странах, что связано с усилением физиологически обусловленной нагрузки на нее, как на жизненно важного органа, связанного с интенсивными процессами метаболизма на фоне повышения гормональной активности (Николаев А.В., Рожило Я.А., Старожилова Т.К., Сарнацкая В.В., 2005).
В связи с этим в настоящее время остается высокой потребность в гепатопротекторных средствах, повышающих резистентность печени к действию повреждающих агентов и нормализующих ее метаболизм в условиях напряжения детоксицирующей функции. Большим потенциалом в
этом смысле обладают растения, в том числе ранее не применявшиеся в научной, но получившие широкое распространение в народной медицине (Ивашкин В.Т., 2002; Крылова С.Г., Ефимова Л.А., Вямятина З.К., Зуева Е.П., 2006; Новомлинский В.В., 2007; Bai S., Asiya В., Fa L., 1995). К таким растениям относится каллизия душистая (лат. Callisia Fragrans), единичные препараты из которой (капли, настойка), в том числе для применения per os, уже появились на отечественном фармацевтическом рынке. Однако отсутствуют научно-экспериментальные данные о гепатопро-тективном действии, специфике влияния на механизмы физиологической и репаративной регенерации, а также гепатотоксичности, что позволило бы рекомендовать применение препаратов на основе каллизии душистой в качестве регенеринстимулирующих средств в репродуктивный период жизни.
Современные взгляды на сущность регенерации требуют ее оценки с позиций комплекса показателей, отражающих не только интенсивность пролиферативных процессов, но и с учетом уровня повреждения ткани (Цыпленкова В.Г., Бескровнова Н.Н., 1996; Казначеев К.С., 1999; Жижи-наГ.П., 2002; Цейликман О.Б., 2005; Schulze-Osthoff К., Ferrari D., Los М. et al., 1998). Однако в доступной литературе отсутствует информация не только о зависимости друг от друга значений этих критериев, но и об их взаимосвязи с другими показателями морфофункциональной полноценности печени в тот или иной период онтогенеза или под действием тех или иных повреждающих факторов.
В целом вышеизложенное обусловило актуальность выбранной темы по изучению влияния комплекса биологически активных веществ каллизии душистой на морф о функциональные показатели печени и ее регенераторный потенциал в репродуктивном периоде онтогенеза в норме и с токсическим повреждением.
Целью исследования явилась комплексная оценка морфофункцио-нальных показателей и интенсивности регенерационных процессов пече-
ни крыс в репродуктивном периоде онтогенеза в норме, с токсическим повреждением и под влиянием биопрепаратов на основе каллизии душистой.
В соответствии с этим были определены следующие задачи:
изучить регенерационную способность и выявить критерии мор-фофункциональной полноценности печени у крыс репродуктивного периода онтогенеза;
исследовать морфологические показатели печени крыс в репродуктивном периоде онтогенеза под влиянием биологически активных веществ каллизии душистой в норме и при токсическом повреждении;
изучить динамику гематологических и биохимических показателей у крыс в репродуктивном периоде онтогенеза под влиянием биологически активных веществ каллизии душистой в норме и при токсическом повреждении печени;
исследовать регенерационную способность печени крыс репродуктивного периода онтогенеза под влиянием биологически активных веществ каллизии душистой в норме и при токсическом повреждении;
изучить влияние новой комплексной биологически активной добавки «Комбад» на основе эмбриональных и растительных субстратов на показатели физиологической и репаративной регенерации и морфофунк-циональной полноценности печени в репродуктивном периоде онтогенеза.
Научная новизна исследования. Установлены критерии и степень коррелятивной зависимости показателей морфофункциональной полноценности, регуляторных механизмов регенерации (гистологические, гематологические, биохимические) с непосредственными критериями регенераторной активности печени (митотическая активность, скорость пролиферации и апоптоз) у крыс репродуктивного периода онтогенеза.
Модифицирован и впервые применен колхициновый метод для оценки в сравнительном аспекте скорости пролиферации гепатоцитов.
Установлены показатели соотношения апоптоза, митотической активности и некроза для печени крыс линии Вистар репродуктивного периода в норме.
Впервые с учетом комплекса показателей (гематологических, биохимических, гистологических, уровня апоптоза и некроза, митотической активности) изучено и подтверждено положительное влияние биологически активных веществ настоя каллизии душистой на интенсивность регенерации печени при токсической дистрофии у крыс репродуктивного периода онтогенеза.
Доказана регенеринстимулирующая эффективность комплексного фито-эмбрионального препарата «Комбад» и подтверждены преимущества его применения по сравнению с настоем каллизии душистой для усиления репаративной регенерации печени.
Теоретическая и практическая значимость исследования. Полученные сведения об уровне апоптоза, некроза, митотической активности и скорости пролиферации, а также установленная коррелятивная зависимость этих критериев с показателями регуляторных механизмов регенерации печени крыс, углубляют и расширяют представление о морфо-функциональных особенностях и регенераторном потенциале этого органа в репродуктивном периоде онтогенеза.
Результаты исследования позволяют судить о повышении регенераторной способности печени крыс под влиянием биологически активных веществ каллизии душистой в норме и при экспериментальном повреждении, что может представлять интерес для биотехнологов при получении биологически активных и лекарственных препаратов на ее основе.
Приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом №2320197 на способ приготовления комплексной биологически активной добавки «Комбад» для животных на основе эмбриональных и растительных субстратов.
Результаты исследования используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по биологии развития и размножения, гистологии, эмбриологии и физиологии на медико-биолого-химическом факультете в Ставропольском государственном университете, Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им. М.А. Шолохова, Самарской государственной сельскохозяйственной академии, Северо-Осетинском государственном университете им. К.Л. Хетагурова.
Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на первой, третьей и четвертой ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН (Ростов-на-Дону, 2005, 2007, 2008), где доклады автора отмечены двумя почетными грамотами; на Всероссийской научно-практической конференции (Архангельск, 2006); на Международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (Воронеж, 2006); на научной конференции «Университетская наука - региону» (Ставропольский государственный университет, 2006, 2007); на научной конференции «Физиологические проблемы адаптации» (Ставропольский государственный университет, 2008).
Основные положения, выносимые на защиту.
Комплекс изученных морфофункциональных показателей и характер коррелятивной зависимости между ними объективно отражают особенности морфофункционального статуса и регенеративного потенциала печени белых крыс в репродуктивном периоде онтогенеза. Установленные соотношения параметров интенсивности гибели и пролиферации клеток печени крыс можно использовать в качестве прямых критериев оценки регенеративного потенциала органа.
Биологически активные вещества растения каллизии душистой оказывают в разной степени выраженное стимулирующее действие на физиологическую и репаративную регенерацию печени и могут быть ис-
пользованы для этой цели как в виде монофитосубстанции, так и в составе сложного комплексного препарата «Комбад», при применении которого репаративные процессы наиболее выражены.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ, в том числе две из них опубликованы в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 151 странице компьютерного набора и состоит из содержания, введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 273 источника, в том числе 77 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 11 таблицами, 23 микро- и макрофотографиями, 3 диаграммами.
Морфогенез и особенности физиологической и репаративнои регенерации в печени при различных ее повреждениях
Печень - своеобразная «лаборатория», где осуществляется сложнейший синтез ряда жизненно важных веществ. Несмотря на слабую физиологическую регенерацию, печень обладает очень высокой потенцией к репаративной регенерации (Струков И.В., Серова С.Ю., Саркисов Д.С., 1990). Поражает не только сама способность органа к восстановлению, но также темп и масштабы, характерные для нее. Наступающий вслед за повреждением восстановительный процесс захватывает весь орган на всех уровнях его организации. Он распространяется на все его компоненты, начиная от субклеточных структур и кончая более крупными анатомо-функциональными единицами органа — печеночными дольками и сосудами (Подымова С.Д., 1993; Арешидзе ДА., 2002; Константинова И.С., 2004; Matsuda М., Rifto R., 1996).
Данные о результатах исследований регенерационной способности печени содержатся в трудах отечественных и зарубежных ученых (Ряби-нина З.А., Бенюш В.А., 1973., Сидорова В.Ф., 1976., Карлсон Б.М., 1986; Дубовая Т.К., Топчиева Г.В., Древаль А.А., 2003; Смахтин М.Ю., Канап-ля А.И., Северьянова Л.А., 2003; Константинова И.С., 2004; Hwang T.L., Chen M.F., Chen F., 1993; Maruyama H., Harada A., 1995; Frago L.M., Gimmenez A., 1998; Ogata Т., Okuda K., 1999; Sato Y., Tsukada R., 1999).
Как установлено, функционирование печени в норме и при патологии определяется сложным взаимодействием гетерогенных субпопуляций клеток, формирующих печень. Они включают в себя клетки печени (гепато-циты), эндотелиальные клетки сосудов, макрофаги-резиденты (клетки Купфера), клетки желчных каналов и тучные клетки (клетки Ито). Каждый тип этих клеток разнообразно взаимодействует с соседними клетками, включенными во множество физиологических реакций (Мироджоев Г.К., Павлов В.Л., 1991; Тейлор Б.С., Аларсон Л.Х., 1998; Дубовая Т.К., Топчиева Г.В., Древаль А.А., 2003; Shimada М., Maeda Т., 1994).
Печень представляет собой центральный орган химического гомеоста-за организма, где создается единый обменный и энергетический пул для метаболизма белков, жиров и углеводов. Кроме того, она является не только «фабрикой», но и «складом», депо, где накапливаются многие вещества, необходимые для поддержания жизненных функций организма. Печень, участвуя в большинстве физиологических и патологических процессов в организме, пропускает через себя огромное количество крови. В эмбриональном периоде является органом кроветворения. Столь многочисленные и важные функции печени определяют ее значение для организма как жизненно необходимого органа (Афанасьев Ю.И., Юрин Н.А., Котов-скийЕ.Ф., 1999; Арешидзе ДА., 2002; Ishak K.G., 1994; Fbakumova О., Kutsenko N.G., 1996). Поэтому особую важность имеет морфофункциональная полноценность и высокая регенерационная способность печени, испытывающей в современных условиях на протяжении постнатального онтогенеза колоссальные перегрузки. Как свидетельствуют данные официальной статистики, ухудшение показателей воспроизводства населения России происходит на фоне снижения качества здоровья беременных женщин, в том числе за счет роста числа экстрагенитальных заболеваний, среди которых особое место занимает патология гепатобилиарной системы (Брюхин Г.В., 1994, Минаев Н.Н., 1999; Князева Л.С., Азубаева СТ., 2002).
Во время физиологической беременности все системы материнского организма работают с повышенной нагрузкой. Увеличению обмена веществ у беременных, обеспечению качественного своеобразия этого обмена во многом способствует печень. При нормальной беременности печень находится в состоянии напряжения функциональных резервов. Это обусловлено значительным увеличением нагрузки на орган в связи с необходимостью обезвреживания продуктов жизнедеятельности плода и усиленной инактивацией женских половых гормонов. Вместе с тем необходимо иметь в виду, что печень, истощая свои резервные возможности по мере прогрессирования беременности, становится уязвимой. Следовательно, особое внимание необходимо обращать на функционирование печени в репродуктивном периоде онтогенеза, поскольку при наличии заболеваний гепатобилиарной системы компенсаторно-приспособительные возможности печени иссякают значительно быстрее, чем вне беременности (Бочаров В.Я., Сапин М.Р., Сатюкова Г.С., Селин Ю.М., и др. 1993; Белякова Г.И., 1998; Обернихин С.С. Макарова О.В., Малайцев В.В., 2006; Тор-чинов A.M., Кахраманова В.А., 2006; Sato Y., Koyama S., 1997).
Сведения, полученные о нарушении гепатобилиарной системы у крыс важны, поскольку данное животное является очень удобной биологической моделью. Для изучения многочисленных показателей, в том числе и при изучении морфофункциональных показателей печени (ПодвысоцкийВ.В., 1986; Ищенко Ю.И., Мичурина СВ., 2002; Молодых О.П., Луш-никова Е.Л., 2007; De Jong К.Р., Brouwers М.А., 1998 Kudryavtseva M.V., 1998; Lai H.S., Chen W.J., 1999).
У самок крыс с хронической патологией гепатобилиарной системы имеет место задержка беременности до 28-29 дней. При этом наблюдается снижение численности помета, характеризующееся выраженными признаками физиологической незрелости, что проявляется нарушением структурно-функционального становления различных органов и систем, в том числе иммунной и эндокринной. Развивающийся комплекс изменений этих систем у потомства самок крыс может возникать в результате массированного проникновения через фетоплацентарный барьер патологических продуктов метаболизма при холистатической и токсической патологии печени, а также специфических антител, циркулирующих иммунных комплексов и других гуморальных факторов иммунной системы, что наиболее характерно для аутоиммунных поражений печени. Это приводит к нарушениям иммунного и гуморального гомеостаза плода. Отмечены изменения интенсивности клеток и гуморальных реакций, развитие гиперчувствительности к тканям печени, а также нарушение секреторной активности желез внутренней секреции (Шехтман М.М., Бархатова Т.П., 1982; Ману-хин И.Б., Маркин С.А., 1990; Брюхин Г.В., 2002; Николина О.В., 2004; Geller S.A., 2002).
Пути и средства стимуляции регенерационных процессов в печени
Следует признать, что сегодня гепатология переживает свой ренессанс, так как история изучения патологии печени насчитывает столетия. Достаточно вспомнить имя английского врача М. Bailie, еще в 1793 г установившего связь между злоупотреблением алкоголем и развитием цирроза. В 1888 г СП. Боткин опередив время более чем на 80 лет, предположил инфекционную природу желтухи. При этом долгие годы, как причины, так и механизмы развития болезней печени оставались непознанными (Ивашкин В.Т., 2002).
Печень является органом, обеспечивающим энергетические и пластические потребности организма, а также в значительной степени выполняет дезинтоксикационную функцию, т.е. защиту организма от «экологической агрессии среды», в том числе эндогенной, связанной с лечением многих заболеваний, так как метаболизм большинства лекарственных препаратов происходит в печени. Кроме того, функциональное расположение печени как барьера между кишечником и кровотоком делает ее особенно чувствительной к повреждениям (Минушкин О.Н., 2002; Королева Л.Р., 2005).
Существует множество факторов, которые могут быть причиной нарушений функций печени человека. В общей сложности 15-30% человечества страдает от заболеваний печени и нуждается в медицинской помощи. Заболевания печени стоят на восьмом месте среди причин смертности населения репродуктивного возраста в разных странах (Николаев А.В., Ро-жило Я.А., Старожилова Т.К., Сарнацкая В.В., 2005). Причинами являются неправильное питание, злоупотребление алкоголем, гормональные изменения, предрасположенность к полноте, инфекционные заболевания, воздействие синтетических лекарственных средств на печень при их первом прохождении через нее, эмоциональный стресс, преклонный возраст (Исаев В.А., 2002; Королева Л.Р., 2005).
Многие болезни печени, заканчиваются выздоровлением, но при этом оставляют «след» метаболического нарушения, который сохраняется на многие годы, и нередко переходит в болезнь, требующей лекарственной коррекции (Минушкин О.Н., 2002). Ассортимент лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии заболеваний печени и желчевыводящих путей, насчитывает более тысячи наименований. Среди такого многообразия препаратов выделяют сравнительно небольшую группу, оказывающих избирательное защитное действие на печень - гепатопротекторов. Их действие направлено на восстановление гомеостаза в печени, повышения устойчивости органа к действию патогенных факторов, нормализацию функциональной активности и стимуляцию репаративно-регенерационных процессов в печени (Окови-тый СВ., Иванова О.В., 2002; Touw D.J., 1997; Cupp M.J., Tracy T.S., 1998). В последние годы арсенал современных гепатозащитных средств расширился как за счет появления синтетических препаратов, так и новых природных средств.
Наиболее широкое применение нашли гепатопротекторы растительного происхождения. Экстрактивные вытяжки из растительного сырья содержат биологически активные вещества: витамины, аскорбиновую кислоту, дубильные вещества, сапонины, фенольные соединения, особенно фла-воноиды, а также макро- и микроэлементы. Внесение таких экстрактов в состав биологически активных добавок к пище способствует их обогащению эссенциальными микронутриентами (Турова Н.Д., Сапожникова Э.Н., 1983; Темирбулатова A.M., 2007; Fugh-berman А., 2001).
В первую очередь особенность действия растительных средств обусловлено биогенетическим родством и совместимостью природных веществ с человеческим организмом. Эволюционно развитие животных и растительных организмов на Земле протекало миллионы лет параллельно, приспосабливаясь, и дополняя друг друга. Поэтому вещества из растений не являются чужеродными для нашего организма и способны органично включаться в его структуру и биологические процессы. Организм человека, в свою очередь, располагает обширной системой ферментов и других веществ, способствующих усвоению и использованию природных компонентов в своих многочисленных обменных процессах. Благодаря этому растительные вещества способны проникать в глубокие внутриклеточные процессы и активно на них влиять (Левачев М.М., Кулакова С.Н., Караго-дина З.В., 1998; Pinnock СВ., Graham К, Doulas М., 1990).
Сложный и многообразный химический состав растений является определяющим их многонаправленных биологических свойств и комплексным терапевтическим действием. Это позволяет растительным препаратам комплексно воздействовать на организм, на различные фазы заболеваний, воздействовать на патогенетические факторы, т.е. способствовать устранению причины самой болезни (Величко М.А., Шевченко В.П., 1998; Чудных СМ., Шулутко A.M., Анчиков Г.Ю., 2005; Kuklinski В., Buchner V., 1992). Фитотерапию можно рассматривать как разновидность метаболической терапии, способствующей исправлению и восстановлению нарушенного тканевого обмена, обеспечивающей противорецидивное лечение (Максимов С.Л., Змызгова А.В., Рослый И.М., 1999; Jain S.K., 1996).
Препараты из растений отличаются сложностью химического состава, свойственного растениям и, следовательно, многообразием биологического действия. Они влияют комплексно не на один, а на несколько рецепторов в организме, запуская сразу несколько защитных механизмов (Орлова СВ., 1998; Kinsella J.E., Lokesh В., 1990).
В основе действия препаратов растительного происхождения на,процессы регенерации печени лежит либо прямое активирующее влияние на синтез РНК и белка, либо вторичный опосредованный эффект, связанный с наличием у данных средств противомикробной, противовоспалительной, желчегонной и антиоксидантной активности (Венгеровский А.И., Марина Т.Ф., Бова П.А., 1990; Кульмагамбетова Э.А., Прйбыткова Л.Н., Душкин А.В., 1998).
Перспективным препаратом для изучения гепатопротекторных свойств следует считать экстракт корня цикория. Оригинальный фитопрепарат содержит горькое вещество интибин, фруктозу, левулозу, пентазон, холин, инулин, смолы, витамина В і и С, макро- и микроэлементы, феноль-ные соединения, флавоноиды. Действие фитопрепарата обусловлено наличием холина, ускоряющего синтез фосфолипидов и, следовательно, увеличивающего скорость репарации клеток (Крылова С.Г., Ефимова Л.А., Вы-мятина З.К., Зуева В.П., 2006).
Экспериментальное моделирование дозированного повреждения печени крыс для изучения регенеративных особенностей
В течение жизни организм животного подвергается воздействию целого ряда неблагоприятных факторов внешней среды. Возрастание количества заболеваний, вызванных действием чужеродных для организма химических соединений - одна из самых важных медицинских проблем. Значительное место в структуре заболеваемости, обусловленной действием токсических факторов, занимают химические поражения печени (Заводник Л.Б., Бушма М.И., 1991; Проскурякова И.С., 1995). Приобретенные повреждения печени наблюдаются гораздо чаще, чем врожденные. Наиболее часто поражают печень химические агенты, вызывая острые отравления печеночными ядами, реже — хроническую интоксикацию организма. Поступая в организм через дыхательные пути, желудочно-кишечный тракт или кожу, они всасываются и циркулируют в крови, и, следовательно, захватываются печенью, где и подвергаются реакциям обмена (Крут-скихЕ.В., 1990).
В литературе имеются многочисленные данные о методах и путях применения CCU. Внутрибрюшинное, внутримышечное, подкожное, внут-рижелудочное, ингаляционное и другие введения CCU вызывают морфологические и биохимические изменения в печени животных, которые выявляются по данным одних исследователей, через 4-8 часов после инъекции вещества (Chistie J.D., 1974; Tandon N.P., 1985), а по другим данным - даже через несколько минут (Aizova С.J., 1962; Roschlau В.О., 1979). Степень изменений, зависит от дозы введенного вещества, способа и длительности введения (Гонский Я.И., Корда М.М., Клищ И.Н., 1991; Рябков А.Н., Артемьева Г.Б., Никулин А.А., 1991).
При введении животным различных доз СС14 проявляются разнообразные морфологические изменения печени: от жировой дистрофии и мелкоочаговых некрозов до субмассивных и массивных некрозов паренхимы (Хазанов А.И., 1992).
Поэтому, именно этот агент выбран нами для получения модельного повреждения печени, необходимого для проведения основного эксперимента. Однако не установлены дозы, необходимые для получения такого повреждения печени, которое было бы обратимо, и за достаточно короткий экспериментальный период позволило бы отметить динамику изменений под влиянием испытуемых биологически активных веществ. Этот факт обусловил потребность проведения представленного эксперимента по изучению гематологических, биохимических показателей организма, а так же и морфологических показателей печени.
Во всех подгруппах на третьи сутки после начала воздействия ССІ4 животные начинают терять массу тела. К седьмому дню эксперимента потеря живой массы в первой подгруппе, составила 5,21±0,74 г; во второй подгруппе - 7,98±1,34 г; в третьей - 11,43±0,63 г. Функциональное состояние печени, связанное с морфологической целостностью гепатоцитов, оценивали по уровню содержания в сыворотке крови свободного и связанного билирубина, а также по уровню активности АлАТ и АсАТ. У животных экспериментальных подгрупп по сравнению с контрольной группой отмечено достоверное увеличение концентрации билирубина в крови, в первой подгруппе свободного в 2,2 раза, связанного в 2,5 раза, во второй свободного в 3,7 раза, связанного билирубина в 4 раза, в третьей свободного билирубина в 4,4 раза, связанного в 5,5 раз (табл. 4). Повышение содержания билирубина в сыворотке крови, особенно связанного свидетельствует о нарушениях пигментного обмена в печени.
Из результатов, представленных в таблице 4, видно, что в первой подгруппе под влиянием CCL4 активность АлАТ и АсАТ была выше такового в контроле. Так в первой подгруппе активность АлАТ в сыворотке крови увеличился на 5,8%, АсАТ - 13,6%; во второй подгруппе АлАТ на 19,7% (Р 0,05), АсАТ - 22,4%(Р 0,05); в третьей подгруппе АлАТ на 31,0%, АсАТ - 33,5% (Р 0,005). Вероятно, выявленное повышение активности АлАТ и АсАТ свидетельствует о наличие цитолитического процесса, что имеет большое прогностическое значение.
При анализе гематологических показателей у крыс в течение эксперимента можно отметить следующие моменты. В экспериментальных подгруппах животных, по сравнению с контролем, в крови снизилось количество эритроцитов в первой подгруппе - на 9,2%, во второй - на 13,1% (Р 0,0005), а в третьей подгруппе - на 29,0% (Р 0,05). Отмечается снижение гемоглобина в первой подгруппе - на 2,1%, во второй - на 3,7% (Р 0,05), и в третьей - на 8,3% (Р 0,0005), по сравнению с контрольной группой (табл. 5). Происходит достоверное увеличение числа лейкоцитов во всех экспериментальных подгруппах, в первой подгруппе на 1,5 раза; во второй — 2,4 раза, в третьей - 2,5 раза, по сравнению с контрольной группой животных (табл. 5).
Наблюдение, патологоанатомическое и гистологическое исследование, проведенные у оставшихся пяти крыс, показали, что подобное состояние является, обратимым, и уже через семь дней после прекращения действия повреждающего фактора отмечены признаки восстановления структуры печени без дополнительной коррекции. Поэтому постановка эксперимента на животных с такой степенью повреждения печени, по нашему мнению, не целесообразна.
Во второй подгруппе, печень красная с легким желтоватым (шесть животных) или сероватым оттенком (четыре животных), иногда неравномерно окрашена - пятнистая (пять животных). При этом светло-серые участки неправильной формы чередуются с красно-коричневыми. Рыхлая, легко рвется, на разрезе сочится кровь, ее масса увеличена на 5,0% по сравнению с контролем (табл. 6).
При гистологическом исследовании у крыс второй подгруппы отмечается выраженная дискомплексация печеночных балок. У всех крыс гепато-циты, набухшие цитоплазма мутноватая, границы клеток не четкие, ядра также набухшие, светлые со смазанными контурами. В ряде случаев ядра практически не просматриваются (рис. 5). Соотношение одноядерных клеток к двуядерным составляет 17:1. В клетках при окраске гематоксилин -эозином в большинстве полей зрения отчетливо видны светлые полупрозрачные вакуоли.
Результаты влияния монофитосубстанции на морфофункционалъные показатели и регенерацию печени крыс при экспериментальном повреждении
Анализ доступных литературных сообщений и сведений, приведенных в разделе 3.3.1. послужили основанием для изучения влияния монофитосубстанции (настой каллизии душистой) на морфофункциональные показатели и регенерацию печени крыс в норме и при токсическом повреждении.
Для исключения побочного действия каллизии душистой и уточнения специфики ее влияния на морфогенез и регенеративный потенциал печени применяли настой каллизии душистой 20 здоровым половозрелым крысам. Еще 20 животным настой каллизии душистой применяли после воздействия ССЦ. Показатели крыс этой экспериментальной группы сравнивали с показателями группы крыс с токсическим повреждением печени без применения настоя. В процессе эксперимента все показатели крыс, полученные после применения настоя каллизии душистой и СС14, сравнивали с показателями крыс контрольной группы. Особенности морфогенеза, регенерации и морфофункциональных показателей организма крыс контрольной группы отражены в таблице 8 и подробно обсуждены в разделе 3.1. У здоровых животных первой группы после применения настоя кал-лизии душистой по сравнению с контрольной группой крыс количество эритроцитов увеличилось на 12,2% (Р 0,0005), лейкоцитов на 10% и гемоглобина на 2,0%. Уровень общего белка, свободного и связанного билирубина, активность АлАТ и АсАТ, оставались на уровне показателей крыс контрольной группы (табл. 8). Это подтверждает, прежде всего, отсутствие негативного воздействия БАВ каллизии на печень. Кроме того, настой кал-лизии оказывает стимулирующее влияние на гематологические показатели крыс. Однако установленные закономерности не исключают непосредственного влияния на более тонкие механизмы, отвечающие за регенерацию, в том числе на клеточном и субклеточном уровне. Поэтому наличие влияния на непосредственные показатели регенерации в печени проведены и на морфологическом уровне, результаты чего представлены ниже.
Отсутствие отрицательного эффекта при воздействии на печень здоровых крыс, обусловило целесообразность использования испытуемой мо-нофитосубстанции при токсической дистрофии.
Из результатов, отраженных в таблице 8 видно, что вследствие токсического воздействия СС14 количество эритроцитов в крови стало ниже на 13,0%, гемоглобина на 3,5%) (Р 0,05) ниже, лейкоцитов на 61% (Р 0,0005) выше показателей контрольной группы крыс. Уровень общего белка снизился на 18,7% (Р 0,0005). Содержание свободного билирубина достоверно выше на 74,2%, связанного на 79,0%, активность АлАТ в сыворотке крови выше на 22,0% (Р 0,005), АсАТ на 20,0% (Р 0,05), по сравнению с показателями контрольной группы животных. К концу эксперимента живая масса тела у животных по сравнению с контролем снизилась на 41,8%. Все это свидетельствует о значительном напряжении компенсаторно-приспособительных реакций организма, а также о функциональном нарушении печени (табл. 8).
У животных третьей группы на фоне токсической дистрофии под влиянием настоя каллизии душистой, количество эритроцитов стало выше на 19,3%, гемоглобина на 19,5% (Р 0,0005), количество лейкоцитов стало ниже на 34,2% (Р 0,0005), по сравнению с животными с токсической дистрофией без применения настоя каллизии. Заметно улучшилось функциональное состояние печени, это отразилось в увеличение общего белка на 15,3% (Р 0,0005), уровень свободного билирубина стал достоверно ниже на 51,6%) (Р 0,0005), связанного - 66,2% (Р 0,0005), достоверно снизилась активность аминотрансфераз: АлАТ на 14,0%, АсАТ на 11,0%, по сравнению с показателями животных второй группы. К концу эксперимента масса тела у животных в среднем составила — 2,64±0,81 г (табл. 8).
Так, у здоровых крыс, которым выпаивали настой каллизии душистой (первая группа) печень темно-вишневого цвета, окраска гомогенная, края острые, упругая, на разрезе кровь обильно стекает, желчный пузырь пустой. Абсолютная масса печени выше контрольной группы на 6,6%, что, по нашему мнению, обусловлено кровенаполнением сосудов, а относительная масса печени у этих крыс выше, чем масса печени у контрольных животных в 1,6 раза. Прирост массы тела, по сравнению с контрольной группой, выше на 42,0% (табл. 8).
При микроскопическом исследовании печени крыс, которым применяли настой каллизии душистой видимых нарушений не обнаружено. Дольчатое строение сохранено, дольки неправильной или многоугольной формы, четко отделены одна от другой тонкими соединительно-тканными прослойками, центральные вены хорошо выражены, умеренно расширены, заполнены элементами крови. Межбалочные капилляры умеренно расширены. Между дольками визуализируются хорошо развитые триады. Балки ровные, радиально расходящиеся от центра дольки. Между балками более активно, по сравнению с контрольными животными, выражена реакция купферовских клеток. Соотношение одноядерных клеток к двуядерным в поле зрения составило 13:1, что на 8% выше контроля.
У крыс с токсическим повреждением без применения настоя (вторая группа) печень по структуре рыхлая, легко рвется, на разрезе сочится кровь, в отдельных случаях с уплотненными участками, желчный пузырь пустой. Цвет различный: у пяти крыс - красная с легким сероватым оттенком, у восьми — светло-коричневая с мелкоточечными кровоизлияниями, а у семи крыс — светло-серые участки чередуются с темно-красными. Абсолютная масса печени на 12,6% выше контроля. Относительная масса печени в 1,5 раза выше контроля, данное изменение можно рассматривать, как следствие различий в массе тела животных (табл. 8). Гистологически, при окраске гематоксилин-эозином у большинства крыс второй группы установлены признаки обширной жировой или смешанной (белково-жировой) дистрофии (судан-Ш), характеризующейся выраженным нарушением клеточного и балочного строения, неравномерным набуханием гепатоцитов, расплывчатостью их границ и исчезновением четких очертаний ядер (рис. 15), наличием многочисленных вакуолей, различных размеров или/и наличием достаточно крупных плотных (очевидно) белковых капель (рис. 16).
У семи крыс - моноцеллюлярные некрозы в различных отделах долек, со скоплением вокруг них лимфоидно-клеточных элементов. Перивасук-лярно — скопление лимфоцитов и нейтрофилов, макрофагов, в том числе гистиоцитов (полиморфно-клеточные инфильтраты различных размеров, вплоть до обширных) (рис. 17), а также эритроцитов с признаками гемолиза и наличием гемосидерина. У шести крыс признаки адгезии эритроцитов и внутрисосудистого гемолиза (рис 18.). Отмечается расширение портальных трактов (рис. 19). У двух крыс отмечали наличие единичных милиар-ных некрозов. У восьми крыс - выраженная гиперемия, отек, в отдельных полях зрения отмечены кровоизлияния различных размеров (рис. 20).
