Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Рост и реорганизация сосудов в онтогенезе и при реакции на повреждение 8
1.1.1. Механизмы образования сосудов 8
1.1.2. Этапы ангиогенеза 9
1.2. Стимуляторы постишемического ангиогенеза 15
1.2.1.Сосудистый эндотелиальный фактор роста 17
1.2.2. Фактор роста фибробластов 20
1.2.3. Тромбоцитарный фактор роста 24
1.2.4. Колоние-стимулирующий фактор гранулоцитов 25
1.2.5. Оксид азота 26
1.3. Фактор роста фибробластов и ишемия 28
Глава 2. Материал и методы исследования 32
2.1. Модель неполной ишемии головного мозга 32
2.2. Морфологические методы исследования 34
2.2.1. Импрегнация нитратом серебра по методу Гольджи 34
2.2.2. Инъекция сосудов тушью 35
2.3. Морфометрические исследования 35
2.4. Гистохимические методы исследования 36
2.4.1. Гистохимия NADPH-диафоразы 36
2.4.2. Метод выявления щелочной фосфатазы 37
2.5. Трансмиссионная электронная микроскопия 38
2.6. Статистическая обработка данных 38
Глава 3. Результаты и обсуяедение 39
3.1. Организация микроциркуляторного русла теменной коры 39
3.1.1. Ангиоархитектоника новой коры 39
3.1.2. Локализация NADPH-диафоразы 41
3.1.3. Гистохимия щелочной фосфатазы 41
3.1.4. Общая морфология 44
3.2. Состояние капилляров теменной коры крысы при экспериментальной ишемии 45
3.2.1.Гистохимия NADPH-диафоразы в условиях редукции кровотока..46
3.2.2. Гистохимия щелочной фосфатазы капилляров коры головного мозга крысы в условиях редуцированного кровотока 56
3.2.3. Морфология теменной коры при хроническом ишемическом повреждении 62
3.3.1. Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе через 48 часов от момента ишемии 69
3.3.1.1.Ультраструктурная характеристика микрососудистого русла 69
3.3.1.2. Гистохимия NADPH-диафоразы 71
3.3.1.3. Гистохимия щелочной фосфатазы 75
3.3.1.4. Общая морфология 76
3.3.2. Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе через 12 суток от момента ишемии 79
3.3.2.1. Гистохимия NADPH-диафоразы 79
3.3.2.2. Гистохимия щелочной фосфатазы 82
3.3.2.3. Общая морфология 83
3.3.3. Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе на , 24-е сутки от момента ишемии 87
3.3.3.1. Гистохимия NADPH-диафоразы 88
3.3.3.2. Гистохимия щелочной фосфатазы 90
3.3.3.3. Общая морфология 91
Заключение 96
Выводы 107
Список литературы
- Стимуляторы постишемического ангиогенеза
- Импрегнация нитратом серебра по методу Гольджи
- Состояние капилляров теменной коры крысы при экспериментальной ишемии
- Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе на , 24-е сутки от момента ишемии
Введение к работе
Актуальность проблемы
Ежегодно в России от цереброваскулярных нарушений страдает 450 тысяч человек. При этом более 50% случаев оканчивается летальным исходом (Мельникова, 2007). Это обстоятельство определяет актуальность клинико-морфологических и экспериментальных исследований динамики ишемического поражения головного мозга и механизмов постишемического ангиогенеза.
Центр ишемического повреждения с максимальной выраженностью нейродеструктивных процессов формируется уже на 6-8 минутах после редукции кровотока (Виничук, Черенько, 2003). Аноксия оказывает мощное деполяризующее действие на нейроны и является триггером патологических расстройств, связанных с гипоксией и окислительным стрессом. Изменения микроциркуляторного окружения нейронов дополняются на функциональном уровне дефицитом* нейровазальной регуляции и трофических сигнальных молекул (Haseloff et al., 2005). Поэтому восполнение адекватного уровня кровотока и поддержание регуляторных систем гемоциркуляции являются непременным условием реабилитации структурно-функциональных повреждений клеток при гипоксии и ишемии.
Наряду с традиционными нейропротективными средствами для уменьшения зоны инфаркта в последнее десятилетие предложено использовать факторы роста сосудов (ФРС) - эндогенных олигопептидов, выработка которых компенсаторно усиливается в тканях в ответ на ишемическое повреждение (Бузиашвили и соавт., 2000; Reuss et al., 2003; Бокерия и соавт., 2004). Дополнительное введение этих соединений в ишемизированную ткань стимулирует локальную перфузию и защищает клетки от токсического влияния окислительного стресса (Naldini, Саггаго, 2005; Liu et al., 2006). Пролонгированные эффекты ФРС связаны с компенсаторным неоангиогенезом и
5 становлением коллатеральной сосудистой сети, что является предпосылкой для использования этих соединений в лечении патологий, сопровождающихся артериальной окклюзией и ишемизациеи тканей (Lazarous et al., 2000; Carmeliet, 2000; Conway et al., 2001; Zhang et al., 2005).
Ключевую позицию в процессах постишемического ангиогенеза занимает основной фактор роста фибробластов (bFGF). В мозге bFGF локализуется в цитоплазме нейронов и эндотелиоцитов, а его ангиогенные и нейропротективные эффекты способны уменьшать зону распространения ишемического некроза (Kim et al., 2004; Guoa et al., 2006; Bebdfeldt et al., 2007). Данные биохимических и нейрофармакологических исследований указывают на наличие тесных взаимосвязей bFGF-экспрессирующих клеток с NO-ергической системой мозга (Brasen et al., 2001; Cao et al., 2003; Watanabe et al., 2004). Известно, что степень выработки bFGF может влиять на баланс цитотоксического и нейропротективного эффектов NO в ишемизированной ткани (Hampton et al., 2000). Однако критическое содержание фактора в ткани мозга, при котором цитотоксическое действие N0 меняется на противоположное, остается невыясненным. Неясно также влияние bFGF на пролиферацию компонентов сосудистой стенки на различных стадиях ишемического процесса, что затрудняет интерпретацию данных о его ангиогенном и протективном действии. Это определяет' актуальность проблемы стимулированного ангиогенеза в фокусе экспериментального ишемического повреждения и конкретном влиянии bFGF на состояние предсуществующих и новообразованных сосудов.
Цель исследования состояла в анализе морфофункциональной динамики bFGF-стимулированного ангиогенеза в очагах неполной хронической ишемии в теменной коре крыс.
6 Задачи исследования:
провести качественный и количественный анализ микроциркуляторного русла теменной коры крыс на различных стадиях ишемического повреждения;
исследовать морфологические изменения стенки новообразованных сосудов в области ангиогенной стимуляции и дать им количественную характеристику;
определить локализацию активности NADPH-диафоразы и щелочной фосфатазы в фокусах ишемии на фоне внутриартериального введения bFGF;
изучить влияние экзогенного bFGF на эффективность постишемического ангиогенеза.
Научная новизна и теоретическое значение работы.
Впервые проведен детальный анализ влияния bFGF на состояние стенки микрососудов коры головного мозга на различных стадиях ишемического повреждения. Установлена тесная корреляция между содержанием экзогенного bFGF в капиллярах ишемизированной коры и активностью NADPH-диафоразы. Дана морфологическая характеристика сосудистого русла при bFGF-стимулированном ангиогенезе. Проведенные исследования позволили обосновать и сформулировать научные положения о взаимодействии bFGF и NO-эргических механизмов, лежащих в основе постишемического ангиогенеза, что может иметь важное теоретическое значение для понимания патогенеза церебральной ишемии и ее фармакологической коррекции.
Практическая значимость работы.
Результаты настоящего исследования по экзогенной активации ангиогенеза с помощью bFGF могут найти широкое применение в фармакотерапии ишемического инсульта, инфаркта миокарда,
7 диффузных нарушений кровоснабжения головного мозга, хронической ишемии нижних конечностей и других сосудистых заболеваний. Очевидным преимуществом стимуляции ангиогенеза при интраоперационном использовании является его миниинвазивность, поскольку он может применяться как совместно, так и отдельно от основного хирургического вмешательства.
Положения, выносимые на защиту:
Реорганизация сосудистого русла в очаге ишемии сопровождается изменением активности щелочной фосфатазы и NADPH-диафоразы эндотелиоцитов и зависит от стадии ишемии
Экзогенное введение основного фактора роста фибробластов стимулирует постишемический ангиогенез
Ангиогенные эффекты bFGF опосредованы цитопротективным действием N0 в очаге ишемии
Апробация работы
Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на VII-й и VIII-й Тихоокеанских научно-практических конференциях студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (г. Владивосток, 2006, 2007), V-й Международной конференции по функциональной нейроморфологии «Колосовские чтения - 2006» (г. Орел, 2006). По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы.
Стимуляторы постишемического ангиогенеза
В ответ на ишемию, наблюдающуюся при многих патологических процессах, в тканях увеличивается синтез соединений, стимулирующих компенсаторный ангиогенез. Происхождение и строение этих соединений различно, но их объединяет свойство усиливать рост микроциркуляторного русла в зоне ишемии (Casscells, 1990; Giordano, 1999; Кипшидзе и соавт., 1999).
Стимуляторы ангиогенеза, вышедшие к настоящему моменту из эксперимента и нашедшие клиническое применение (Таблица 1), характеризуются как соединения пептидной природы с полифункциональным действием на растущий сосуд (Post et al., 2001).
Сосудистый эндотелиальный фактор роста - полипептид, экспрессируемыи в цитоплазме эндотелиоцитов, гладких миоцитов сосудов, фибробластах и макрофагах (Dulak et al., 2000). Первоначально VEGF был идентифицирован как опухолевый фактор сосудистой проницаемости (Senger, 1983). Он существует в четырех изоформах, содержащих 121, 165, 189 или 206 аминокислотных остатков. Короткие формы (VEGF121 и VEGF165) способны секретироваться в окружающий периваскулярный матрикс, тогда как более длинные (VEGFi89 и VEGF2o6) остаются связанными с мембраной и мобилизуются гепарином и протеазами.
Рецепторы к VEGF сцеплены с тирозинкиназой и обладают различной субстратной специфичностью. На этом основании выделены рецепторы Flt-1, Flt-4 и Flk-1 (Бузиашвили и соавт., 2000). Рецепторы Flk-І находится только на мембране эндотелиальных клеток, чем объясняется селективность VEGF-стимулированного митогенеза (Fong et al., 1995; Shalaby et al., 1995). При гипоксии в эндотелиальных клетках происходит активация синтеза VEGF, который связываясь с рецепторами, усиливает пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток (Ferrara, 1997), а так же обуславливает повышенную сосудистую проницаемость в области ишемии (Waltenberger, 1997). Asahara (Asahara, 1995) показал, что при механическом повреждении интимы сосуда VEGF стимулирует регенерацию эндотелиального пласта.
Отметим, что сосудистый эндотелиальный фактор роста участвует в развитии сердечно-сосудистой системы в раннем неонатальном периоде (Yokoyama, Hirase, 2001). Tomanek и соавт. (Tomanek et al., 2001) выявили снижение скорости роста капилляров и прекращение процессов дифференцировки артериол у крыс при применении на ранней стадии постнатального периода VEGF-нейтрализующих антител. Морфометрия сосудов показала снижение роста капилляров до 80% от контрольного уровня. В миокарде опытных животных наблюдалось снижение количества кардиомиоцитов, регрессия внеклеточного матрикса, проводящей системы и коронарных сосудов.
Kazemi и соавт. (Kazemi et al., 2002), исследуя культуру ангиобластов человека in vitro, пришли к выводу, что VEGF запускает процесс созревания ангиобластов и трансформации их в первичную сосудистую сеть. VEGF опосредует так же хемотаксис и пролиферацию эндотелиальных клеток. Согласно авторам, VEGF регулирует ранний васкулогенез, а в последующем обусловливает спраутинг микрососудов.
Ангиогенез in vitro при стимуляции VEGF продемонстрирован на монокультуре эндотелиальных клеток, изолированных из пупочной вены человека и легочной артерии теленка (Babaei, 1998). Присутствие сосудистого эндотелиального фактора роста приводило к увеличению количества эндотелиоцитов и появлению в среде множества капилляроподобных трубчатых структур. Наблюдаемая пролиферация и дифференцировка эндотелиальных клеток носила дозозависимый характер.
Matsunada и соавт. (Matsunada et al., 2000) на примере острой миокардиальной ишемии у собаки выявили количественную зависимость экспрессии VEGF от длительности и тяжести ишемии, а так же установили, что изоформа VEGF s является доминирующей при развитии коллатерального микроциркуляторного русла.
Импрегнация нитратом серебра по методу Гольджи
В исследовании использовали метод Гольджи (Белецкий, 1939). Фиксацию тканей проводили у наркотизированного животного интрааортально теплой смесью растворов параформальдегида и глутаральдегида, приготовленных на 0,08 М какодилатном буфере (рН 7,2), содержащем 0,03% хлорида кальция (1,7 г какодилата натрия, 2 мл параформальдегида, 2 мл глутаральдегида, общий объем раствора 100 мл).
После перфузии мозг извлекали на стекло, кору разрезали на кусочки толщиной 5 мм и дополнительно фиксировали в глутар 35 параформальдегидном растворе при 4С в течение 3 часов. Затем кусочки мозга промывали в 0,15 М какодилатном буфере (рН 7,2) в течение 15 минут, и переносили в раствор тетраоксида осмия и дихромата калия, где они выдерживались на протяжении четырех дней. Затем образцы ополаскивали в 0,75%-ном растворе нитрата серебра и погружали в свежий раствор AgNC 3 на 24 часа. По окончании импрегнации образцы обезвоживали и заливали в парафин по общепринятой методике. Затем изготавливали срезы толщиной 50 - 150 мкм, монтировали на предметные стекла, просветляли и заключали в бальзам.
Наливка сосудисто-капиллярной сети мозга осуществлялась суправитально неразведенной многократно профильтрованной черной тушью через левый желудочек сердца.
После перфузии головной мозг извлекали, фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, обезвоживали и заливали в парафин по стандартной методике. Срезы готовили толщиной 25-100 мкм, просветляли и заключали в бальзам.
Морфометрические исследования
Диаметр капилляров измеряли с помощью окуляр-микрометра МОБ-1-15 при увеличении объектива х 40 в 20 полях зрения для каждого случая.
Показатель длины капилляров, или относительную плотность капилляров в единице объема вещества мозга, вычисляли по формуле неравномерного распределения капилляров в ткани (Блинков, Моисеев, 1961): U = N0Nr/NB(2+4 (NB-Nr)/3Nr) где L0 - суммарная длина капилляров в 1 мм3 ткани, N0 - количество открытых концов на 1 мм", Nr - число пересечений горизонтальных линий сетки окуляр-микрометра, NB - число пересечений вертикальных линий сетки. Площадь обменной поверхности капилляров в 1 мм ткани мозга вычисляли по формуле: S = 7С d L где ТЕ = 3,14 d - средний диаметр капилляров, L - длина капилляров в 1 мм3 головного мозга.
Оптическую плотность продуктов гистохимических реакций измеряли на 20 мкм срезах методом спектрофотометрии (Луппа, 1980), с помощью сканирующего монохроматического микроденситометра М85А «Vickers» при длине волны, соответствующей максимуму поглощения продукта гистохимической реакции.
Гистохимические методы исследования 2.4.1. Гистохимия NADPH-диафоразы.
Исследовалось NADPH-d-позитивное сосудистое русло коры головного мозга. Метод основан на образовании в срезе нерастворимого преципитата диформазана в присутствии 3-NADPH и нитросинего тетразолия (НСТ) (Hope, Vincent, 1989). Для этого участки большого мозга животных фиксировали в течение 2 часов при 4С в 4% растворе параформальдегида, приготовленного на 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4). Затем материал промывали в течение суток в 30% растворе сахарозы на 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4) при 4С, с пятикратной сменой раствора. Образцы замораживали в криостате, готовили срезы толщиной 15-25 мкм, монтировали на предметные стекла, высушивали и помещали в инкубационную среду, содержащую 50 мМ Трис-буфер (рН 8,0), 1 мМ 3-NADPH (Sigma), 0,5 мМ нитросинего тетразолия (Sigma) и 0,2% Тритон Х-100. Срезы инкубировали в течение 1 часа при 37С, после чего промывали в дистиллированной воде, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заключали в бальзам по стандартной методике.
Часть криостатных срезов окрашивали в 1%-ном растворе толуидинового синего по методу Ниссля.
Состояние капилляров теменной коры крысы при экспериментальной ишемии
На более поздних этапах постишемической перестройки, соответствующих 12-м суткам эксперимента, в одном поле зрения определяются нейроны, находящиеся на различных стадиях дистрофического процесса. Среди гиперхромных нейронов, локализованных в группы, обнаруживаются слабоокрашенные клетки с неравномерными контурами. Определяется эктопия и уменьшение в размерах ядер. Хроматолиз носит перинуклеарныи или субтотальныи характер.
На 24-е сутки хронической ишемии на стороне поражения наблюдается значительное снижение численности нейронов, преимущественно в III-IV слоях (рис. 24).
Клетки преимущественно нормохромны, что свидетельствует о начинающихся репаративных процессах. Встречаются резко уменьшенные в размерах нейроны с тотальным хроматолизом глыбчатого базофильного вещества. Отмечается значительная вакуолизация цитоплазмы и кариолизис. На противоположной поражению стороне отмечается сегментарная гиперхромия небольшого количества нейронов.
При импрегнации нитратом серебра срезов ишемизированной теменной коры крысы в различные сроки взятия материала на препаратах выявляются клетки преимущественно звездчатой и пирамидальной формы. Они содержат крупное, интенсивно окрашенное ядро, отростки немногочисленны, импрегнируются слабо (Рис. 25). Преобладают клетки размером 20-40 мкм. Сосуды, выявляемые данным методом, имеют диаметр 7-15 мкм, и дают немногочисленные ответвления (Рис. 26).
При заполнении сосудистого русла разведенной тушью в теменной коре выявляется весь сосудистый комплекс - от крупных радиальных артерий до капилляров. На ранних сроках редукции кровотока (48 часов) отмечается тенденция к вазоспазму. Диаметр капилляров правого полушария снижен и составляет 3,26±0,01 мкм, на фоне относительно неизмененного диаметра капилляров интактного полушария (3,58±0,07 мкм). Суммарная длина капилляров снижается примерно на 33 % от исходных величин и составляет 278,3±8,1 мм (р 0,05). Площадь обменной поверхности снижена на данном этапе до 28,48±0,04 мм" (61,2% от исходной). В контрлатеральном полушарии плотность капиллярного русла равна 390,7±2,2 мм, при площади обменной поверхности 43,8±0,02 мм".
На более поздних сроках ишемизации (12 суток) корковые сосуды несколько увеличивают площадь своей обменной поверхности, составляющую 74% от исходных величин, или 34,52±0,01 мм2. Суммарная длина капилляров на данном этапе равна 320,6±4,2 мм, при среднем диаметре капилляров 3,43±0,04 мм. В коре интактного полушария отмечается тенденция к нормализации основных морфометрических показателей: при диаметре капилляров равном 3,60±0,01 мкм, плотность капилляров составляет 394,2±5,1 мм, а обменная площадь равна 44,5±0,07 мм".
На 24-е сутки постишемической перестройки капилляры теменной коры на стороне поражения имеют средний диаметр 3,71±0,02 мм, несколько превосходящий исходный. Плотность капиллярного русла снижена на 17% от исходной, и составляет 341,5±2,1 мм (р 0,05). Площадь обменной поверхности на данном этапе равна 39,78±0,05 мм2, что на 14,5% меньше контроля (Таб. 6). На противоположной перевязке стороне обменная поверхность капилляров равняется 45,5±0,08 мм , при среднем диаметре 3,59±0,05 мкм и сосудистой плотности равной 403,7±6,1 мм. Следует отметить, что средний диаметр капилляров, определяемый методом наливки, несколько выше, чем при использовании гистохимических методов. Это связано, по-видимому, с более тугим заполнением контрастной массой микроциркуляторного русла, производящегося под давлением. Однако, динамика морфометрических показателей, регистрируемых обоими методами, синхронна (Рис. 27, Таб. 7).
Исследовали ишемизированную теменную кору крыс на фоне интраартериального введения основного фактора роста фибробластов. В процессе исследования была установлена четкая корреляция активности ферментов эндотелия и ультраструктурная организация растущих микрососудов в зависимости от сроков ишемии.
На ранних сроках ишемизации в правой теменной коре наряду со спазмированными микрососудами с признаками перикапиллярного отека, встречаются широкие извитые капилляры с сохраненным просветом. В фокусах ишемии отмечается появление на сосудистых стенках почек роста, отходящих перпендикулярно от материнского сосуда (Рис. 28). Почки образованы мигрирующими эндотелиоцитами, вокруг которых отсутствует базальная мембрана, и имеют высокую активность щелочной фосфатазы, снижающуюся на стадии гиалинизации. Эндотелиоциты почек роста не дифференцированны, имеют сложный профиль с многочисленными выростами цитолеммы, отходящими как в периваскулярную ткань, так и в просвет сосуда (Рис. 29). Межклеточные контакты не имеют замыкательных комплексов. Ядра эндотелиоцитов неправильной формы, занимают большую часть клетки и имеют инвагинации. В цитоплазме отмечается повышенное содержание свободных рибосом и митохондрий. Немногочисленные микровезикулы клеток при слиянии образуют вакуоли (Рис. 30).
Морфофункциональная и гистохимическая характеристика капилляров теменной коры крысы при стимулированном ангиогенезе на , 24-е сутки от момента ишемии
В наших исследованиях через 12 суток от момента окклюзии артерии на фоне введения bFGF наблюдается снижение активности NADPH-диафоразы в нейронах и астроцитарной глии. В этом случае диформазан маркирует незначительную популяцию нейронов с низкой и средней степенью активности энзима. Наряду с этим отмечается значительный прирост суммарной длины и площади обменной поверхности NADPH-d-позитивных капилляров. Следует отметить, что хронологически данный временной интервал совпадает с процессами анастомозирования в зоне неоангиогенеза (Куприянов и соавт., 1993). В нашем исследовании анастомозирование новообразованных капилляров выявляется реакцией на щелочную фосфатазу, увеличение оптической плотности которой в сосудистом русле отражает тенденцию к повышению метаболической активности нервной ткани. Дефицит плотности ЩФ-позитивных микрососудов и площади их обменной поверхности становятся на данном этапе менее выраженными -показатели выше в сравнении с группой контроля на 13,2% и 17,5% соответственно (р 0,05).
Электронномикроскопическое исследование новообразованной сосудистой сети выявляет извитые капилляры с широким просветом, эндотелиоциты в которых имеют признаки дефинитивных клеток материнского сосуда и окружены местами прерывистой базальной мембраной. Межэндотелиальные контакты преимущественно замкнуты, отмечается образование перицито-эндотелиальных контактов, что, по-видимому, отражает замедление вследствие контактного торможения процессов направленной миграции эндотелиоцитов (Carmeliet, 2000).
Стабилизация новообразованной сосудистой сети обнаруживается нами на 24-е сутки стимулированного ангиогенеза. При электрономикроскопическом исследовании выявляются капилляры, содержащие дифференцированные эндотелиальные клетки уплощенной формы с вытянутым ядром, образующие плотные межклеточные контакты и окруженные непрерывной базальной мембраной, к которой вплотную прилежат перициты. Поверхность клеток ровная, не дает выростов и трансэндотелиальных каналов, в цитоплазме много микровезикул. Просвет капилляров занимает большую часть от сосудистого профиля.
Гистохимические исследования ишемизированной коры выявляют признаки более полной реабилитации нервной ткани в сравнении с группой чистой ишемии. Так, фосфатазная активность сосудистой стенки достигает на данном этапе максимума и превышает на 22% показатели в группе контроля. Активность NADPH-диафоразы микрососудов и нейронов на 29,3% ниже, чем в контрольной группе (р 0,05). Диафоразная активность снижается синхронно и в астроцитах.
Морфометрия регистрирует преобладание в правой теменной коре нормохромно окрашенных нейронов. Дистрофически измененные клетки содержатся во всех слоях и располагаются диффузно. Положительную динамику реабилитационных процессов также характеризует значительный прирост относительной плотности микрососудов на стороне окклюзии и площади их обменной поверхности (на 12,4% и 10,7% соответственно) (р 0,05).
Проведенные нами исследования показывают, что в среднесрочной и долгосрочной перспективе в зоне bFGF-стимулированного неоангиогенеза отмечается увеличение активно функционирующих микрососудов. Пролонгированное участие в этих процессах bFGF подтверждается исследованием Guoa и соавт. (Guoa et al., 2006), которые изучали содержание эндогенного сывороточного bFGF у пациентов, перенесших инфаркт головного мозга. Было установлено, что синтез bFGF, увеличиваясь с третьих суток от момента ишемии, остается значительно повышенным на 14 день от начала ишемии. Авторы указывают на отчетливую количественную корреляцию между обширностью зоны инфаркта и содержанием фактора роста в сыворотке.
Так же в исследовании отмечается, что пик экспрессии bFGF приходится на реабилитацию неврологического дефицита у пациентов.
Факторы роста сосудов взаимодействуют друг с другом в очаге ишемии, и последовательность этих взаимодействий коррелирует с различными этапами становления новой микрососудистой сети. Это положение подкрепляется рядом экспериментальных работ. Например, активированные макрофаги в очаге ишемии способны синтезировать целый спектр ростковых факторов, включающий в себя VEGF, bFGF, PDGF и ряд других (Naldini, Carraro, 2005). В опыте in vivo Tomanek и соавт. исследовали взаимодействие bFGF и VEGF. Было установлено, что при применении нейтрализующих антител к bFGF на ранней стадии постнатального периода плотность микрососудов в миокарде крыс снижалась на 80% в сравнении с контролем (Tomanek et al., 2001). На модели инфаркта миокарда у собаки Liu и соавт. (Liu et al., 2006) установили, что плотность микрососудов была выше в миокарде с сочетанным применением bFGF и нейротрофинов.
