Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы
1.1. Современные тенденции изменения активности сперматогенеза 8
1.2. Факторы, влияющие на сперматогенез 11
1.3. Методы исследования спермы 24
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования 38
ГЛАВА III. Результаты собственных наблюдений
3.1. Сравнительная характеристика данных спермограмм
в Приморском крае 44
3.2. Морфологические изменения в яичках мужчин 48
3.3. Основания для внедрения метода окрашивания сперматозоидов по Шорру в судебно-биологическую практику и результаты экспериментального исследования 57
3.4. Исследование сперматозоидов в презервативе в зависимости от давности и условий хранения 81
3.5. Биологическое исследование клеток влагалищного эпителия в посткоитальных образцах 93
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов исследования 98
Выводы 108
Практические рекомендации 109
Приложения 110
Список литературы
- Факторы, влияющие на сперматогенез
- Методы исследования спермы
- Основания для внедрения метода окрашивания сперматозоидов по Шорру в судебно-биологическую практику и результаты экспериментального исследования
- Биологическое исследование клеток влагалищного эпителия в посткоитальных образцах
Факторы, влияющие на сперматогенез
Препараты мужской контрацепции. Использование тестостерона энантата еженедельно в дозе 200 мг приводит к снижению уровней фолликулостимулирующего гормона и лютеинизирующего гормона на 50% по сравнению с базовым уровнем секреции, в то время как уровень свободного тестостерона в плазме крови повышается незначительно. При этом концентрация сперматозоидов колеблется от 5 млн/мл до азооспермии. После окончания приема контрацептива уровень гонадотропных гормонов и концентрация сперматозоидов возвращаются к исходному количеству.
Комбинация тестостерона энантата и даназола позволяет сократить прием медикаментов до одного раза в месяц. Даназол - это синтетический аналог 17-альфа-алкилированного этинилтестостерона. Максимальная доза его составляет 800 мг. Эффект сравним с действием чистого тестостерона энантата. Эффективность приближается к 85%. Гестагенные контрацептивы (прогестины) включают норэтандролон, норэтиндрон, R2323, мегэстерол-ацетат, депо-медроксипрогестерон. Прогестины вызывают угнетение сперматогенеза, однако для выраженного эффекта необходимы их большие дозы. Прием этих препаратов вызывает снижение либидо и длительный период восстановления сперматогенеза после окончания приема. 19-нортестостерон - анаболический стероид со слабо выраженным гестагенным действием. Вызывает обратимое снижение концентрации сперматозоидов вплоть до азооспермии. Препарат практически не оказывает влияние на либидо и эрекцию.
Комбинацию препаратов депо-медроксипрогестерона ацетат в сочетании с тестостерона энантаном и ципронатом, а также норэтиндрон с 19-нортестостерона гексифенилпропионатом (анадуром) принимают один раз в месяц. Во время приема комбинированных средств развивается выраженная олигозооспермия, азооспермия наблюдается в 50-60% случаев.
Нафарелин - агонист гонадотропин-релизинг гормона, полученный синтетическим путем. При длительном применении угнетает продукцию ЛГ и ФСГ. Инъекции нафарелина в сочетании с тестостерона энантана вызывают угнетение сперматогенеза, азооспермия отмечается в 50% случаев.
Госсипол - естественный продукт, выделенный из семян, стеблей и корней хлопка. Он ингибирует ряд ферментов, содержащихся в сперматозоидах и клетках сперматогенного эпителия, а именно лактатдегидрогеназу и глютатион-альфа-трансферазу. Это приводит к снижению подвижности зрелых сперматозоидов и угнетению сперматогенеза на стадии сперматид. Эффективность препарата достигает 90%. При длительном применении госсипола изменения сперматогенеза становятся необратимыми.
Tripterygium Wilfordi - это растение, применяемое традиционной китайской медициной. Сумма гликозидов, содержащихся в нем, обладает выраженным сперматотоксическим эффектом на уровне придатка яичка. Наиболее быстро контрацептивный эффект наступает при действии препаратов, влияющих на зрелые сперматозоиды (их дозревание в придатке яичка, подвижность). Кроме того, после окончания приема этих средств фертильность восстанавливается быстро и в полном объеме [14].
Антибактериальные препараты. Сульфаниламиды и такие антибиотики, как гентамицин, окситетрациклин, некоторые цефалоспорины, колимицин, калиевая соль пенициллина, триметаприл и другие, оказывают отрицательное действие на сперматогенный эпителий, блокируя а-рецепторы, вызывая сокращение семявыносящих протоков, ампулы и семенных пузырьков. Это приводит к обструкционной аспермии или угнетению сперматогенеза, когда прекращается, частично или полностью, мейоз сперматогоний и сперматоцитов первого порядка [24, 77]. В 1973г. в эксперименте на крысах, применяя терапевтические и токсические дозы неомицина, стрептомицина и тетрациклина, Ю.М. Кушнирук отметил отрицательное их влияние на функциональное состояние сперматозоидов (увеличение числа патологических форм и снижение времени подвижности). При гистологическом исследовании препаратов яичка автор отмечал поражение самых молодых клеток семенного эпителия и уменьшение суммарного числа сперматогоний.
Согласно исследованиям О.В. Лисаковской [36] антибактериальные препараты подразделяются на препараты, вызывающие кратковременные и продолжительные нарушения семяпродукции, качества эякулята и содержания тестостерона.
К антибактериальным препаратам, вызывающим кратковременные нарушения семяпродукции, качества эякулята и содержания тестостерона относят амикацин, ампициллин, цефазолин, цефуроксим, ципрофлоксацин, рокситромицин, которые приводят к значительному увеличению количества патологических форм сперматозоидов и снижению общего количества и процента подвижных спермиев. Фуразидин и нитроксолин, кроме вышеперечисленных нарушений, вызывает снижение уровня тестостерона. Через три месяца показатели возвращаются к исходному уровню, что позволяет сделать заключение об обратимости и кратковременности нарушений, происходящих под воздействием антибактериальных токсических агентов. Антибактериальные препараты, вызывающие продолжительные нарушения семяпродукции, качества эякулята и содержания тестостерона включают в себя метранидазол, гентамицин, доксициклин, линкомицин, нитрофурантоин, пефлоксацин, пипемидиновая кислота, рифампицин, цефотаксим, цефтриаксон вызывающие нарушение качества эякулята сохраняющееся через три месяца. Доксициклин, линкомицин, нитрофурантоин, рифампицин, цефтриаксон также вызывают снижение концентрации тестостерона.
Цитостатические препараты в организме в первую очередь угнетают сперматогенез, как наиболее активно делящиеся клетки [65]. Эти эффекты обусловлены цитотоксическим действием препаратов на герминативный эпителий, оказывая угнетающее влияние на подвижность спермиев, а также на продукцию зрелых мужских гамет, за счет подавления и нарушения нормального митотического деления сперматогониев и последующих процессов мейоза [84], приводя к развитию необратимой азооспермии [31].
Гипотензивные средства. Тиазидные диуретики, клонидин, метилдофа, Р-адреноблокаторы вызывают блокаду периферических адренергических рецепторов и угнетение постсинаптических а-адренорецепторов vas deferens, семенных пузырьков семявыбрасывающего протока, что приводит к снижению объема секрета и гаперпролактинемии [6]. В целом, антигипертензивные препараты, обладают антиандрогенной активностью, неблагоприятно влияют на половую функцию через блокирование активности тестостерона, являющегося одним из главных стимуляторов сперматогенеза на всех его этапах [101].
Методы исследования спермы
Для решения вопроса о сроках сохранения спермы в презервативе проведено исследование на 7 здоровых мужчинах в возрасте от 22 до 34 лет, добровольно сдавших сперму в обычном латексном презервативе без спермицидной смазки после утреннего коитуса (147 наблюдений). Эякулят исследовался на фиксированных мазках, окрашенных 1% кислым фуксином, метиленовым синим. Исследование проводилось через 1,5 часа, 12 часов, 2, 3, 4, 5, 6, 7 суток, а затем через 2, 3, 4, 5, 6 недель. Презервативы хранились при относительно оптимальных условиях: температура 0, +5С, влажность 70%, пограничных: температура +10 и +15С, влажность 70% и неблагоприятных условиях: температура +20, +25 и +30С, влажность 100%.
После полового акта (не позднее 4-х часов) проводился забор материала из заднего свода влагалища на марлю по общепринятой методике. Марля хранилась при температуре +15С, влажность 70%. Исследование выполнялось через 24 часа, 2, 3, 4, 5, 6, 7 суток, а затем через 2, 3, 4, 5, 6 недель путем нарезания равных частей марли (1,5x1,5). После извлечения сперматозоидов с предмета-носителя по Серопяну, проводили окрашивание 60 мазков по методу Шорра (Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью, 1999). Для контроля исследовали мазок влагалищного содержимого и эякулята давностью не более 1 часа. Окрашивание поводилось следующим образом: после промывания в проточной воде путем погружения стекол 15 раз, стекла помещали в гематоксилин на 2 минуты, с последующим промыванием в проточной воде -15 раз, затем переносили в аммиачный спирт - 5 пассажей по 5 секунд каждый, и повторное промывание в проточной воде - 15 раз. После погружения в этанол 50% на 5 минут, опускали в краситель Шорра на 5 минут; для удаления воды из срезов погружали в этанол в возрастающих концентрациях по 5 минут в каждом: 50, 75 и 95%, затем в абсолютный спирт (100%) - 2 пассажа по 5 минут каждый. Обесцвечивание и фиксирование (рационализаторское предложение №2619 от 20.09.2005г.) проводили в карбо-ксилоле, ксилоле - по 5 минут. Заключали в полистерол. Покрытие - покровным стеклом.
На 12 супружеских парах исследовали образцы крови женщин, а также смывы с полового члена мужчин после полового акта биологическими и молекулярно-генетическими методами, для решения вопроса установления наличия клеток влагалищного эпителия в посткоитальных образцах. Образцы брали до полового акта, сразу после полового акта, после гигиенической процедуры. Методика забора осуществлялась путем увлажнения ватной палочки в физиологическом растворе натрия хлорида и смывании (без усилия) с головки, крайней плоти и тела полового члена. Ватные палочки высушивали при комнатной температуре. Образцы крови брали согласно «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». Кровь выливали на чистую марлевую салфетку, высушивали при комнатной температуре. Обработка образцов крови, контрольных и посткоитальных образцов проводились согласно схемы дифференциального лизиса по P. Sean Walsh, A. David [137]. Обработка образцов крови. В маркированные пробирки фирмы «Eppendorf» емкостью 1 500 мкл. с фрагментом марли около 3 кв. мм. добавили 1 мл бидистиллированной воды, периодически помешивая, выдержали 30 минут в условиях комнатной температуры. Затем центрифугировали со скоростью 14 000 об/мин в течение 3 минут, с последующим удалением около 800 мкл надосадочной жидкости. Добавили 100 мкл 5% Chelex (DNA Extraction Reagent), конечный объем составил около 200 мкл. Материал интенсивно перемешали; после инкубации в термостате при 56С в течение 20 минут, повторно перемешивали и снова проводили инкубацию в термостате при 100С в течение 8 минут. Интенсивно встряхнув в течение 10 секунд, центрифугировали со скоростью 14 000 об/мин в течение 7 минут. Надосадочная жидкость использовалась в реакции энзиматической амплификации. Обработка контрольных и посткоитальных образцов. Ватные головки помещали в маркированные пробирки фирмы «Eppendorf» емкостью 1500 мкл., добавили 1 мл бидистиллированной воды, периодически помешивая, выдержали 30 минут в условиях комнатной температуры. Интенсивно встряхивая в течение 20 секунд, центрифугировали при 14 000 об/мин в течение 3 минут, не нарушая осадок, содержащий эпителиальные клетки и клетки спермы, удалили около 950 мкл. надосадочнои жидкости оставив около 50 мкл. Осадок ресуспензировали с последующим изъятием материала для микроскопического контроля (3 мкл) и для приготовления мазков для дальнейшего морфологического исследования (10 мкл). При обнаружении эпителиальных клеток - начинали дифференциальный лизис. После этого к осадку добавили 100 мкл 5% Chelex и 5 мкл протеиназы К (10мг/мл). Выдержали при температуре 37С 1 час, чтобы разрушить эпителиальные клетки, но не более 2 часов, чтобы минимизировать лизис спермы. Центрифугировали со скоростью 14000 об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре. Отмывание осадка спермы проводили следующим образом: взболтали осадок в 0,5 мл моющего буфера (10 mM Tris-HCI, 10 тМ EDTA, 50 тМ NaCI, 2% sodium dodecyl sulfate [SDS], pH 7,5); перемешали; центрифугировали со скоростью 14000 об/мин в течение 5 минут; удалив надосадочную жидкость, повторили отмывание 2 раза. Отмывание в бидистиллированной воде: ресуспензировав осадок в 1 мл воды, перемешали, центрифугировали со скоростью 14000 об/мин в течение 5 минут; удалили надосадочную жидкость до конечного объема 50 мкл; осадок ресуспензировали; взяли 3 мкл для приготовления мазка, микроскопировали, окрасили. Добавили приблизительно 150 мкл 5% Chelex к 50 мкл ресуспензированных спермальных клеток осадка (конечный объем около 200мкл); добавили 5 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и 7 мкл 1 М 3,5 /3 меркаптоэтанола, перемешали; периодически интенсивно встряхивая, проводили инкубацию при 37С в течение 18 часов, затем инкубация при температуре 100С в течение 8 минут. Интенсивно перемешав в течение 5-10 секунд центрифугировали со скоростью 14000 об/мин в течение 5-7 минут. Полученные образцы вносили в качестве матрицы в реакционную смесь с целью проведения ПНР количестве 3,4 мкл. ДНК из образцов выделяли по стандартной методике с использованием реактива Челекс-100. Был проведен анализ продуктов амплификации, определение аллелей амплифицированных локусов. При использовании наборов «ТАПОТИЛИ» амплифицированные фрагменты ДНК подвергали электрофорезу в 2% агарозных и 8% ПААгелях. В качестве маркеров молекулярных масс использовалась аллельная лестница фрагментов ДНК. После завершения электрофореза результаты документировали путем окрашивания гелей бромистым этидием и серебром, фотографировали цифровой камерой Nikon Coolpix 4500. Оценку величины фрагментов ДНК выполняли с помощью программы EASYWIN 32 (Германия).
Исследование полученных образцов ДНК проводили на термоциклерах марки «Хайбейд» (Англия) и «Эппендорф» (Германия) и соответствующих коммерческих наборов согласно протоколам разработчиков: наборы реактивов для амплификации ДНК в судебно-медицинских и криминалистических исследованиях («ТАПОТИЛИ», ГНЦ «ГосНИИгенетика», г. Москва). При этом генотипирование осуществляли по следующим полиморфным локусам: HUMvWFII, vWA, ТН01.
Образцы хранились при температуре 2-8С, для длительного хранения при -20С. Клетки плоского эпителия окрашивались по общепринятому методу окраски цитологических препаратов (Г.Г. Автандилов, 1998) по методу Романовского-Гимзе.
Основания для внедрения метода окрашивания сперматозоидов по Шорру в судебно-биологическую практику и результаты экспериментального исследования
Всего за 5 лет 1 степень олигозооспермии составила 22,1%, 2 степень — 74,4%, 3 степень - 2,3%. Случаев азооспермии, аспермии зарегистрировано не было. Эякулят с количеством сперматозоидов более 61 млн./мл составил 1,7% всех обследованных. Однако в настоящее время по данным Т.И. Устинкиной [82] существует другая классификация олигозооспермии: умеренная олигозооспермия - 19-10 млн./мл, тяжелая форма олигозооспермии менее 10 млн./мл. Согласно этой классификации наши данные по форме патоспермии распределились: у 37,2% обследованных мужчин была выявлена умеренная и у 2,3% тяжелая форма олигозооспермии.
В норме количество активно подвижных сперматозоидов должно быть более 25%, суммарное количество активно подвижных и малоподвижных клеток - более 50%, неподвижные сперматозоиды должны составлять менее 50%. Результаты, полученные в работе показателя подвижности сперматозоидов сопоставимы с нормой. Показания распределились следующим образом (таблица 7): Таблица 7
Количество морфологически нормальных сперматозоидов соответствует более 60%. В 1999 году усредненный показатель нормальных форм сперматозоидов составил 14,8%, что является ниже нормы почти в 3,5 раза (рис. 22). По мнению как отечественных, так и зарубежных авторов, число нормальных форм сперматозоидов составляющих менее 60% является следствием хронических заболеваний [46, 129]. Можно предположить, что в 1999 году высоким был процент латентно протекающей хронической урогенитальной инфекции. Несмотря на это, анализ формы трендов за пять лет, показал рост числа нормальных форм сперматозоидов по отношению к дегенеративным.
Несмотря на то, что морфологические изменения в сперматозоидах сохранялись в пределах нормы, в основном изменения сопровождались патологией головки, на втором месте - хвоста, и на третьем — шейки сперматозоидов. В среднем за весь исследуемый период, патология головки сперматозоидов составила 8,7%, хвоста - 5,2%, шейки - 3,7%. Мы считаем, что преобладание патологии головки почти в 2 раза связано с ростом ИППП.
Таким образом, обследование мужчин детородного возраста г. Владивостока показало, что количество сперматозоидов в эякуляте имеет тенденцию к снижению (с 1999 по 2003 гг. с 77,6 до 58,6 млн.) и число нормальных форм сперматозоидов находится на нижней границе нормы.
Взяв методом случайной выборки, гистологический материал (яички) от 50 трупов практически здоровых лиц мужского пола в возрасте 25-40 лет, умерших от насильственных причин (транспортная травма) в период с 2000 по 2004г. установили нарушения сперматогенеза и изменения морфологической картины строения яичек. Причина смерти приведена в Приложении 5.
Макроскопические изменения в яичках проявлялись незначительным уменьшением их размеров и массы (таблица 9). Общий план микроскопического строения яичек во всех наблюдениях единообразен и не противоречил имеющимся данным [11].
В 9 наблюдениях из 50 количественный состав содержимого семенных канальцев оказался полон, клетки герминативного эпителия распределены равномерно. Интерстиций яичек компактен, гормонпродуцирующий аппарат представлен достаточным количеством островков Лейдига, состоящих из клеток крупных и средних размеров с признаками высокой функциональной активности (Рис. 23).
Случаи с нарушенным гистологическим строением были разделены на три группы в зависимости от характера выраженности патологии. I группа: преобладание склеротических изменений без изменений сперматогенеза (8 наблюдений). Выявлен умеренный диффузный фиброз интерстициальной ткани, с умеренным интра- и перитубулярным фиброзом стенок семенных канальцев, где отмечался нормально протекающий сперматогенез семенных канальцев, в отдельных канальцах выявлялись трудноидентифицируемые клеточные сочетания с дегенеративными изменениями (Рис. 24). Рис. 23 Неизмененные семенные канальцы яичка. Мужчина К., 25 лет. Окр. г/э. Ув.100
Семенные канальцы яичка. Мужчина П., 28 лет. Фиброз интерстициальной ткани, стенок семенных канальцев. Окр. г/э. Ув.100 II группа: преобладание склеротических изменений, сочетающихся с угнетением сперматогенеза (16 наблюдений). Обращал на себя внимание выраженный склероз белочной оболочки (Рис. 25); резкая деформация семенных канальцев за счет отека и грубоволокнистого склероза интерстициальной ткани. Кроме того, наблюдался ангиоматоз с грубым перивазальным фиброзом. Декомплексация клеток Лейдига сочеталась с преобладанием малых инволютирующих элементов: малый размер, овальная форма, пенистая цитоплазма (Рис. 26).
Биологическое исследование клеток влагалищного эпителия в посткоитальных образцах
Проблема повсеместного снижения общего количества сперматозоидов в эякуляте здоровых мужчин [10] является одной из важнейших в плане репродуктивной функции человека. В 50-70 годы нормой концентрации сперматозоидов в 1 мл. эякулята считалось не менее 60 млн./мл, в настоящее время - 20 млн./мл [69]. Проведенные в последние 50 лет исследования состояния сперматогенной функции мужчин - доноров спермы в различных странах мира, свидетельствуют, что средняя концентрация спермиев снизилась на 42 % и составляет 66 млн./мл. Также уменьшился и средний объем эякулята - с 3,4 до 2,75 мл [104, 112, 114]. В Великобритании, Париже анализ спермограмм выявил отчетливую тенденцию к снижению величины общего содержания спермиев в эякуляте со скоростью 2% в год [102,125]. Снижение показателей подвижности, доли морфологически нормальных спермиев, общего количества спермиев в эякуляте подтверждают исследования бельгийских ученых [106]. В то же время, в ряде стран Европы и в США, при исследовании спермы фертильных мужчин, ученые не выявили тенденции к снижению концентрации спермиев [140, 150]. По данным М. Vierula с соавт. [119] в Финляндии с 1967 по 1994г. общее содержание сперматозоидов в эякуляте составило 396,6 млн.
Проведенный нами анализ состояния спермы у мужчин детородного возраста, проживающих в Приморском крае за 5-летний период (1999-2003 гг.) продемонстрировал снижение общего количества сперматозоидов с 77,6 до 58,6 млн. В среднем общее количество сперматозоидов составило 69,4 млн.; концентрация сперматозоидов в 1 мл. - 24 млн./мл; средний объем эякулята -2,8 мл. У 37,2% обследованных мужчин выявлена умеренная и у 2,3% тяжелая форма олигозооспермии. Показатели подвижности сперматозоидов находились в пределах нормы. Периодически отмечалось снижение нормальных форм сперматозоидов по сравнению с нормой в 3 раза, что, по мнению как иностранных, так и российских авторов, является следствием хронических заболеваний репродуктивной системы [46, 129]. Внутриклеточные возбудители: хламидии, уреаплазмы, микоплазмы, гарднереллы, урогенитальный герпес легко передаются при половом контакте, являясь причиной заболеваний половых органов: хламидии, прикрепляясь к сперматозоидам, поражают любые отделы сперматозоида, в том числе и головку, вызывая олигоастенотератозооспермию. Уреаплазмы прикрепляться к сперматозоидам, вызывая агглютинацию, нарушая их подвижность [27, 45, 46]. В дерматовенерологических учреждениях России случаи хламидийной инфекции наблюдают в 2 - 3 раза чаще гонореи [83]. Медико-социальная значимость этого заболевания подчеркнута тем, что с 1994г. хламидиоз включен в ряд инфекционных заболеваний, подлежащих обязательному статистическому учету. Снижение концентрации сперматозоидов, по нашему мнению является следствием скрыто протекающей урогенитальной инфекции, хронического простатита, других экзо- и эндогенных интоксикаций, воздействием вредных факторов. Бессимптомность или проявление не ярко выраженной клинической картины, а, следовательно, необращаемость к специалистам и не лечение может привести к дальнейшему угнетению сперматогенеза.
Для подтверждения гипотезы снижения сперматогенеза в популяции мужчин Приморского края методом случайной выборки был изучен гистологический материал яичек лиц мужского пола репродуктивного возраста, умерших от насильственных причин (транспортная травма) в период с 2000 по 2004 гг. Наши исследования не расходится с данными J. Pajarinen с соавт. [117, 120]. Авторы обращают внимание, что при изучении двух серий наблюдений проведенных в Финляндии ненарушенный сперматогенез отмечен в 21,2 и 41,7% случаев. В нашем исследовании ненарушенный сперматогенез отмечен лишь в 18 % случаев, что может быть объяснено молодым возрастом исследуемых и их высокими компенсаторно-приспособительными возможностями. В 16% преобладали только склеротические изменения. В 50% имел место выраженный склероз белочной оболочки, резкая деформация семенных канальцев за счет отека и грубоволокнистого склероза интерстициальной ткани. Сперматогенный эпителий находился на разных этапах сперматогенеза. Преобладание среди гормонпродуцирующих клеток малых инволютирующих элементов указывает на снижение функциональной активности инкреторного аппарата мужских половых желез Острое течение с выраженными расстройствами кровообращения (полнокровие сосудов, диапедезные кровоизлияния в строму), угнетение сперматогенеза до стадии сперматогоний отмечено в 16% (подобные изменении могут быть связаны с развивающейся тканевой гипоксией). Снижение активности сперматогенеза установлено на фоне уменьшения массы яичек и развития фиброза.
На ухудшение показателей спермограмм здоровых мужчин в значительной степени оказывают влияние экологические факторы [21], инфекции передающиеся половым путем [94], воспаление придаточных половых желез [89, 90, 91]; лекарственные препараты, к которым относятся, как препараты мужской контрацепции, так и препараты для лечения соматических заболеваний (сульфаниламиды, антибиотики, цитостатики, гипотензивные средства, гормональные препараты и др.) [75, 127, 128, 135, 138, 142]. Как неумышленное (по показаниям), так и умышленное использование этих средств оказывает влияние на репродуктивную функцию мужчин, приводя к угнетению сперматогенеза. А так как бесспорным доказательством наличия спермы остается морфологический метод, то это в свою очередь это создает сложность в идентификации обвиняемого в изнасиловании при проведении судебно-биологических экспертиз. Стресс нарушает гармонию вегетативной нервной системы и даже при нормальном состоянии яичек может привести к психической стерильности, азооспермии [77]. Алкоголь способен вызывать тяжелые нарушения сперматогенеза, повреждая сперматогенные клетки и интерстициальные гландулоциты нарушая метаболизм половых стероидов, -поражая гипоталамус и гипофиз. В яичке алкоголиков гистологически выявляется атрофия клеток Лейдига и извитых семенных канальцев с потерей сперматогенных клеток (вплоть до полной - синдрома «только клетки Сертоли»), снижается содержание зрелых сперматозоидов и доли подвижных и морфологически нормальных форм, развивается фиброз яичка. Более 80% хронических алкоголиков стерильны [120, 122, 130, 132, 143, 151]. По-видимому, в Финляндии высокие значения концентрации сперматозоидов в эякуляте с нашей точки зрения могут быть объяснены сухим законом -государственной программой продажи спиртного и его возрастного ограничения.
