Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 17
Глава 2. Материалы и методы исследования 57
2.1. Общая характеристика экспериментальных животных 57
2.2. Экспериментальные модели хронических поражений печени
2.2.1. Модель хронического токсического поражения печени 60
2.2.2. Модель хронического аутоиммунного поражения печени 61
2.2.3. Модель хронического алкогольного поражения печени 63
2.2.4. Модель хронического экспериментального поражения печени, вызванного введением супернатанта шестидневной культуры E.coli 66
2.2.5. Модель хронического экспериментального D-галактозаминового поражения печени 67
2.2.6. Модель хронического лекарственного поражения печени, вызванного введением тетрациклина 69
2.2.7. Модель хронического лекарственного поражения печени, вызванного введением парацетамола 71
2.2.8. Модель хронического экспериментального мезенхимального (гранулематозного) поражения печени 72
2.2.9. Экспериментальная модель иммобилизационного стресса 75
2.3. Описание методов исследования 75
2.3.1. Биологические методы исследования семенника 75
2.3.2. Морфологические методы исследования семенника 76
2.3.3. Морфометрические методы исследования семенника
2.3.3.1. Оценка генеративной функции семенника 77
2.3.3.2. Оценка физиологических параметров сперматозоидов 84
2.3.3.3. Оценка инкреторной активности семенника 88
2.3.4. Оценка эндокринной функции семенника методом твердофазного иммуноферментного анализа з
2.3.5. Электронно-микроскопические методы исследования интерстициальных эндокриноцитов семенника 92
2.3.6. Иммуногистохимические методы исследования 94
2.3.7. Иммунологические методы исследования 2.3.7.1. Определение уровня медиаторов межклеточного взаимодействия 96
2.3.7.2. Определение уровня антиспермальных антител в сыворотке крови 97
2.3.8. Определение продуктов перекисного окисления липидов в гомогенате семенников 97
2.3.9. Статистические методы исследования 98
ГЛАВА 3. Собственные исследования 100
3.1. Оценка биологических показателей экспериментальных животных 100
3.2. Характеристика весовых параметров мужских половых желез экспериментальных животных 109
3.3. Анализ генеративной функции семенников экспериментальных животных
3.3.1. Характеристика величины извитых семенных канальцев 112
3.3.2. Характеристика сперматогенных клеток 117
3.3.3. Анализ морфофункциональных параметров эпидидимальных сперматозоидов экспериментальных животных
3.3.3.1. Характеристика эпидидимальных сперматозоидов у экспериментальных животных 143
3.3.3.2. Оценка двигательной активности сперматозоидов экспериментальных животных 146
3.3.3.3. Показатели кислотной и осмотической резистентности сперматозоидов экспериментальных животных
3.3.4. Иммуногистохимические маркеры пролиферативной и апоптотической активности клеток сперматогенного пласта у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени 161
3.3.5. Характеристика фолликулярных клеток – клеток Сертоли 167
3.4. Характеристика эндокринного компартмента мужских половых желез
потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени 174
3.4.1. Характеристика интерстициальных эндокриноцитов 174
3.4.1.1. Оценка площади интерстициальной соединительной ткани 175
3.4.1.2. Количественная характеристика клеток Лейдига 178
3.4.1.3. Концентрация тестостерона и лютеинизирующего гормона в сыворотке крови экспериментальных животных
3.5. Медиаторы межклеточного взаимодействия в сыворотке крови экспериментальных животных 193
3.6. Продукты перекисного окисления липидов в гомогенате яичек экспериментальных животных 197
3.7. Антиспермальные антитела в сыворотке крови экспериментальных животных 202
3.8. Оценка стресс-резистентности экспериментальных животных 204
3.8.1. Характеристика стрессоустойчивости генеративного компонента яичек экспериментальных животных 207
3.8.2. Характеристика стрессоустойчивости эндокринного компартмента яичек экспериментальных животных 220
3.9. Характеристика фертильности экспериментальных животных 228
ГЛАВА 4. Заключение 231
Выводы 256
Список аббревиатур 259
Список литературы 262
- Экспериментальные модели хронических поражений печени
- Оценка эндокринной функции семенника методом твердофазного иммуноферментного анализа
- Характеристика сперматогенных клеток
- Антиспермальные антитела в сыворотке крови экспериментальных животных
Экспериментальные модели хронических поражений печени
В настоящее время в России сложилась модель суженного воспроизводства населения, характеризующаяся существенным падением суммарного коэффициента рождаемости и снижением доли повторных рождений (рождения более одного ребенка) с 51 до 41% [132]. Сложившийся под влиянием социально-экономических и политических факторов уровень рождаемости отражает существенное изменение тенденций в репродуктивном поведении населения, а именно – сокращение количества семей, желающих иметь детей.
В то же время, последние годы знаменуются некоторым улучшением демографической ситуации в нашей стране. Так, в 2012 году был зафиксирован естественный прирост населения – родилось 1,9 млн детей, тогда как в 2006 году данный показатель был равен 1,4 млн. Зарегистрированная положительная динамика, согласно мнению экспертов, может быть связана с наиболее благоприятной для деторождения половозрастной структурой населения, сформировавшейся к данному времени. Однако, в ближайшее время ситуация может резко ухудшиться, в связи с тем, что в детородный возраст вступят малочисленные поколения 90-х годов [8].
На состояние репродуктивного здоровья значимое влияние оказывает соматическое и психическое здоровье населения [187]. В то же время, за последние годы увеличилась доля заболеваний с хроническим рецидивирующим течением, возросли заболеваемость и распространенность болезней системы кровообращения, нервной системы, мочеполовых органов, инфекционных болезней. Большую тревогу вызывает увеличение заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем (ИППП), в том числе инфекцией вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекцией), что происходит на фоне роста частоты токсикомании, наркомании, алкоголизма [48, 175, 121], а так же прогрессивного роста уровня загрязнения окружающей среды [302, 237]. Угрожающие размеры приобретает рост числа заболеваний репродуктивной системы как у женщин фертильного возраста [67, 105, 138], так и у мужчин [48, 63].
Среди факторов, определяющих беременность высокого риска, выделяют демографические, социально-экономические, материальные, плацентарные, родовые, неонатальные. При этом, одной из важнейших причин перинатальной патологии являются экстрагенитальные заболевания женщин детородного возраста (анемии, заболевания мочеполовой, сердечно-сосудистой, эндокринной системы, гестозов), что во многом определяет увеличение числа осложнений беременности и родов [235]. В результате количество нормальных родов в России резко снизилось.
В структуре экстрагенитальной патологии особое место занимают болезни гепатобилиарной системы, в том числе хронические гепатиты, холециститы, холангиты, дискинезии желчных путей, желчнокаменная болезнь. По данным статистических исследований, в последние десятилетия повсеместно отмечается рост числа хронических заболеваний гепатобилиарной системы, в том числе у женщин фертильного возраста. При этом хронические заболевания печени и желчных путей, по данным ряда авторов [266, 267], встречаются у 3-8 % беременных женщин. Многочисленные клинические наблюдения указывают на частые осложнения течения беременности и родов у женщин с хроническим поражением гепатобилиарной системы: высокий процент гестозов, кровотечения в родах, преждевременные роды, первичная и вторичная слабость родовой деятельности, перинатальная смертность [243, 24].
В сочетании с нарушениями в репродуктивной системе все перечисленные факторы формируют контингент высокого акушерского и перинатального риска, т.е. материнской и перинатальной заболеваемости и смертности.
В цивилизованных странах материнская смертность от экстрагенитальных заболеваний занимает 1-е место, и реального снижения этого показателя можно добиться только путем оздоровления больных женщин вне и во время беременности. На решение этой благородной задачи должна быть направлена деятельность врачей всех специальностей, в первую очередь терапевтов, кардиологов, кардиохирургов, нефрологов, гематологов. В случае наступления беременности у женщин с соматическими или инфекционными заболеваниями задача врача – решить вопрос, возможно ли вынашивание данной беременности; каким путем прервать непоказанную беременность; какими средствами проводить профилактику и лечение фетоплацентарной недостаточности, развивающейся при всех случаях болезней женщины, особенно предшествующих беременности [11].
Всё вышеизложенное определяет рост неблагоприятных тенденций в состоянии здоровья новорожденных. Так, каждый третий рожденный ребенок имеет отклонения в состоянии здоровья; кроме того, отмечается высокий процент рождения недоношенных и незрелых детей, сохраняется высокий уровень младенческой и материнской смертности [132].
Антенатальный и ранний постнатальный возраст признаются одними из основных периодов онтогенеза, в которых закладываются основы здоровья в широком понимании этого термина. Фактор сохранности репродуктивного здоровья является одним из основных, характеризующих индивидуума как физически здорового человека. Не вызывает сомнения, что характер репродуктивной функции в молодом возрасте во многом детерминируется антенатальным периодом [254].
Способность к оплодотворению – одна из главных для продолжения рода – в значительной мере зависит от состояния спермы (фертильности), а значит, от разнообразных средовых факторов, влияющих на состояние эякулята [205, 156, 187, 4]. Популяционные исследования, выполненные в разных странах, свидетельствуют, что на протяжении последних десятилетий наблюдается постоянное снижение качества спермы человека и животных [43], и это не случайно, ведь миллионы лет живые организмы имели дело лишь со «знакомыми» сигналами среды. К середине же XX века «антропогенное давление» на биосферу приобрело глобальный характер, сопровождающийся массивным поступлением в среду обитания промышленных, сельскохозяйственных и бытовых отходов. Обусловленные этим изменения физических и химических параметров среды, эффективная адаптация к которым не была выработана в процессе эволюции, стали представлять реальную угрозу здоровью человека, в том числе репродуктивному [159].
Оценка эндокринной функции семенника методом твердофазного иммуноферментного анализа
Со стадии 16 сомитов гонобласты отсоединяются от желточного мешка, мигрируют дорсально по желточному мешку, средней кишке и дорсальной брыжейке и достигают гонадных валиков, располагающихся на средней части мезонефрального гребня, в дальнейшем участвующего в формировании почки [247]. Миграция первичных половых клеток осуществляется так же и с током крови по кровеносным сосудам путем пассивного их вовлечения при дифференциации окружающих клеток в первичные гемоцитобласты. Во время миграции ППК взаимодействуют с изменяющейся окружающей средой, в связи с чем постулируется их способность менять свои адгезивные свойства для адекватного взаимодействия с различными клеточными популяциями и молекулами внеклеточного матрикса. Основными молекулами внеклеточного матрикса, которые могут быть вовлечены в миграцию ППК, являются фибронектин и ламинин [328, 333]. В то же время, ряд исследователей отрицает возможность активной миграции ППК и связывают их перемещение лишь с глобальными ростовыми движениями тканей эмбриона [515, 327].
Первичные половые клетки, достигшие гонад заканчивают движение и заселяют половые шнуры, после чего устанавливают в последних контакт с соматическими клетками. Эти процессы связаны с появлением на поверхности этих клеток интегринов V, 3, 5, 6, 1, 3, а также с усилением экспрессии Е-кадгерина и началом экспрессии P-кадгерина, результатом чего является увеличение адгезивных свойств ППК [305].
В дальнейшем ППК трансформируются в гоноциты, что выражается началом экспрессии белков, свойственных для стволовых сперматогенных клеток (ССК), а также сопровождается полной остановкой пролиферации, которая вызывается действием трех факторов роста: SCF в секретируемой и мембраносвязанной форме и ТФР. Стоит отметить, что в данном случае секретируемая форма SCF (фактор стволовых клеток) вызывает торможение пролиферативной активности, а не ее активацию вследствие наличия мембраносвязанной формы. Кроме того, в этот период осуществляется переключение с паракринной регуляции пролиферации на аутокринную и в половых клетках начинают синтезироваться белки FGF-4 и FGF-8, стимулирующие пролиферацию [364].
В это же время осуществляется запуск процессов массовой гибели гоноцитов, обусловленный смещением равновесия между проапоптотическим белком bax и антиапоптотическим белком Bcl-x в сторону первого. Это приводит к уменьшению в несколько раз популяции гоноцитов, после чего данный процесс останавливается и количество стволовых сперматогониальных клеток остается постоянным вплоть до снятия митотического блока в постнатальном периоде [448].
Первичные половые клетки, неспособные достичь гонад, в большинстве своем подвергаются апоптозу, однако небольшой процент из них способны сохранить жизнеспособность и вступить в профазу мейоза I, что связано с действием на них вырабатываемой в эмбриональных надпочечниках ретиноевой кислоты и привести к развитию тератом. В мужских гонадах большая часть ретиноевой кислоты разрушается соматическими клетками, поэтому гоноциты вступают в митотический блок [376].
Согласно данным Семеновой-Тян-Шанской (1969) [209], у эмбрионов человека 19-20-го дня развития первичные половые клетки в основном локализуются в дистальных отделах желточного мешка. В ходе гаструляции происходит пассивный перенос первичных половых клеток клеточными пластами, и к 26-му дню развития большая часть этих клеток сосредотачивается в мезенхиме в области отхождения аллантоиса, в составе выстилки задней кишки и в формирующемся зачатке печени. Первичные половые клетки, оказавшиеся в составе кровяных островков у эмбрионов 19-20-го дня развития, вместе с током крови разносятся по всему телу, и у эмбрионов 26-28-го дня развития они обнаруживаются в крупных сосудах и капиллярах самых различных частей тела зародыша. На 33-34-й день развития эмбрионов человека происходит дифференцировка клеток целомического эпителия в области будущих зачатков гонад [45], совпадающая с выходом первичных половых клеток из сосудов и накоплением их между дорсальной аортой и первичными почками. У 35-36-дневных зародышей человека первичные половые клетки в результате целенаправленного движения через мезенхиму перемещаются в область развивающихся половых валиков.
После того как первичные половые клетки достигают половых валиков, устанавливается их тесное взаимодействие с соматическими клетками гонады, от которых полностью зависит дальнейшая судьба первичных половых клеток.
В одно и то же время с процессом трансформации ППК в гоноциты начинается дифференцировка соматических клеток половых тяжей, производных целомического эпителия, в предшественники клеток Сертоли, так называемые эмбриональные клетки Сертоли. Этот процесс запускается действием лишь одного гена Y – хромосомы – Sry (sex-determinig regionY). Появившись, эмбриональные клетки Сертоли, синтезируя множество факторов, запускают процесс превращения половых тяжей в эмбриональные семенные канальцы, а также развитие всей индифферентной гонады – в семенники. Половые клетки, по-видимому, не принимают участия в ранних этапах становления семенников. Развитие эмбриональных семенных канальцев из половых тяжей происходит даже в случае отсутствия в них гоноцитов [513].
Как при развитии мужской особи, так и в случае развития женской с самого начала становления имеет место тесный контакт элементов гонад с составными компонентами первичной почки, которые в зависимости от вида будущей гонады примут большее или меньшее участие в формировании половых органов. В обоих случаях составными элементами развивающихся гонад являются: 1. Специальные половые клетки, дающие начало половым клеткам обоих полов – сперматогониям и овогониям; 2. Производные целомического эпителия – будущие эпителиальные элементы половых желез; 3. Мезенхимная ткань – будущие соединительнотканные и мышечные элементы половых желез. В результате образования всех вышеописанных компонентов ( на 7-ой неделе) внутренние половые органы достигают стадии развития, при которой еще нельзя распознать пол будущей особи. Половые железы носят еще индифферентный характер и не различаются по полу [225]. Для индифферентной стадии развития внутренних половых органов характерны следующие компоненты: две индифферентные половые железы, два вольфова тела (мезонефроса), два вольфова выводных канала и два мюллерова канала.
В конце 2-го и в начале 3-го эмбрионального месяца ранее индифферентные стадии развития внутренних половых органов начинают разделяться по мужскому или женскому полу.
Процесс детерминации пола у млекопитающих протекает под действием клеточных и гормональных сигналов, которые, рано или поздно, приводят к развитию мужского или женского фенотипа. В настоящее время, в данном процессе выделяют три основных этапа [436]: формирование хромосомного пола, определение гонадного пола и, наконец, фенотипического пола.
Характеристика сперматогенных клеток
Нами производился подсчет как общего числа сперматогоний, так и числа сперматогоний «А» (сперматогонии ранней степени зрелости), cперматогоний «P» (сперматогонии промежуточного типа) и сперматогоний «B» (сперматогонии конечной стадии зрелости) [45]. Подсчёт сперматогоний производили с 15-го дня постнатального онтогенеза, так как согласно современным представлениям у крыс в период новорожденности практически все сперматогенные клетки являются гоноцитами [524]. Образование первых сперматогоний датируется 3–6 днем постнатального онтогенеза [310, 406, 450, 451, 524], хотя согласно отдельным сообщениям даже у 15-дневных животных часть клеток, морфологически идентичных сперматогониям, в действительности являются гоноцитами [524].
В ходе исследования было установлено (Таблица 5), что с течением постнатального онтогенеза у животных всех экспериментальных групп отмечается постепенное увеличение суммарного количества сперматогоний в извитых семенных канальцах, достигающее максимальных значений к периоду половой зрелости (70-е сутки исследования). В то же время (Таблица 5), у большинства подопытных животных на ранних сроках исследования имеет место уменьшение количества исследуемых клеток в извитых семенных канальцах. Исключение составляют экспериментальные животные D(+)-галактозаминовой (Геп. В) и лекарственной Л2 (Пар.) групп на 15-е сутки исследования; животные в группах (Геп. В) и Л1 (Тетр.) на 30-е сутки наблюдения, а так же подопытные животные в группах (Геп. В) и Л2 (Пар.) на 45-е сутки наблюдения, у которых исследуемый показатель оказался выше, чем в контроле. При этом, в периоде половой зрелости у большинства исследуемых групп наблюдается обратная закономерность.
Наибольший интерес представляют показатели, отражающие содержание сперматогоний различной степени зрелости. Установлено (Рисунок 32), что у интактных животных количество сперматогоний «А» после рождения постепенно увеличивается с 6,37 ± 0,03 (95% ДИ: 6,31 – 6,43) в периоде новорожденности до 22,38 ± 0,18 (95% ДИ: 22,03 – 22,73) к периоду половой зрелости. Аналогичная закономерность выявлена и у животных остальных экспериментальных групп. Вместе с тем, наблюдается некоторое изменение тенденции в увеличении численности клеток данной субпопуляции. Так, у интактных животных наибольший прирост количества сперматогоний «А» наблюдается с 15 по 45-й дни постнатального онтогенеза, что, вероятно, связано с завершением процессов дифференцировки клеток данного типа из гоноцитов [524]; в оставшийся период с 45-го по 70-й дни отмечается незначительный прирост числа сперматогоний «А», что можно связать с достижением к этому времени максимальных темпов предмейотического периода сперматогенеза, вследствие чего данная популяция клеток останавливает свой прирост и стабилизируется в численности [495]. В то же время, у животных опытных групп наблюдается снижение показателя прироста сперматогоний «А» в период с 30-го по 45-е сутки.
При этом, обращает на себя внимание, что на большинстве сроков исследования количество сперматогоний «А» в извитых семенных канальцах подопытных животных уступает таковому показателю в контроле (Рисунок 32). Исключение составили крысята токсической (Т.), аутоиммунной (А.) и алкогольной (Алк.) групп в периоде новорожденности, крысята токсической (Т.) и аутоиммунной (А.) групп в подсосном периоде, крысята от матерей с D(+)-галактозаминовым (Геп. В) поражением печени в периоде полового созревания, а так же животные токсической (Т.), аутоиммунной (А.) и алкогольной (Алк.) групп в периоде половой зрелости.
Анализ содержания сперматогоний «Р» в извитых семенных канальцах позволил выявить следующую закономерность (Рисунок 33): в ходе постнатального онтогенеза количество исследуемых клеток у животных интактной группы снижается вплоть до 30-х суток наблюдения, после чего отмечается увеличение численности последних, достигающее максимума к периоду половой зрелости. Аналогичная закономерность выявлена также и у животных алкогольной (Алк.) и мезенхимальной (Мез.) групп. В то же время (Рисунок 33), у большинства опытных групп наблюдается обратная закономерность, заключающаяся в увеличении численности исследуемых клеток с течением постнатального развития. При этом важно отметить, что в периоде новорожденности у большинства подопытных животных исследуемый показатель уступает таковому в контроле, исключение составили животные алкогольной (Алк.) и лекарственной Л2 (Пар.) групп. Однако, с 15-го дня наблюдения количество экспериментальных групп с повышенным содержанием сперматогоний промежуточного типа в извитых семенных канальцах начинает расти и к периоду половой зрелости (70-й день наблюдения) можно констатировать, что большая часть опытных групп характеризуется увеличением данного показателя по сравнению с контролем.
Результаты анализа содержания зрелых сперматогоний в извитых семенных канальцах у животных всех экспериментальных групп в периоде постанатального развития свидетельствуют об увеличении численности исследуемых клеток (Рисунок 34), максимальное количество которых достигает к периоду половой зрелости (70-й день наблюдения). В то же время (Рисунок 34), у животных опытных групп на большинстве сроков исследования имеет место уменьшение количества сперматогоний «В» в извитых семенных канальцах по сравнению с контролем. Исключение составили в периоде новорожденности животные алкогольной (Алк.) группы, на 30-е сутки наблюдения - животные D(+)-галактозаминовой (Геп. В) группы, животные токсической (Т.), аутоиммунной (А.), алкогольной (Алк.) и D(+)-галактозаминовой (Геп. В) групп на 70-е сутки исследования.
Антиспермальные антитела в сыворотке крови экспериментальных животных
Одним из последствий стресса является ограничение репродуктивного потенциала организма, биологическая целесообразность которого очевидна. У мужских особей острый стресс вызывает уменьшение секреции гонадотропных гормонов и тестостерона, а хронический – снижение оплодотворяющей способности семенной жидкости и качественные изменения сперматозоидов [193]. Ключевое место в этих нарушениях принадлежит нейроэндокринной системе репродукции, прежде всего гипоталамусу и структурам миндалевидного комплекса.
По данным многочисленных экспериментальных исследований [193], стресс нарушает нормальные соотношения нейромедиаторов и регуляторных нейропептидов, в частности, возбуждаются нейропептид-Y-содержащие нейроны аркуатных ядер и усиливается выделение норадреналина нейронами ствола мозга, аксоны которых достигают гипоталамических структур, в том числе паравентрикулярных ядер, где синтезируются кортиколиберин и вазопрессин. Аксоны этих ядер непосредственно контактируют с ЛГ-РГ-продуцирующими нейронами медиальной преоптической области. Кроме того, возбуждение кортиколибериновых нейронов активирует выделение опиоидов и ГАМК в медиальной преоптической области. В дополнение к этому кортиколиберин и вазопрессин стимулируют секрецию гипофизарного АКТГ, что сопровождается при стрессе выбросом в кровь большого количества бета-эндорфина, тормозящего секрецию гонадотропинов.
Современная концепция стресса определяет в развитии бесплодия стрессовую составляющую как одну из наиболее существенных [416]. Так, например, даже краткосрочная иммобилизация у экспериментальных животных вызывает нарушение генеративного и эндокринного компартментов яичек, что находит отражение, в уменьшении количества сперматогенных клеток различных генераций, и, прежде всего, сперматид в составе сперматогенного пласта, снижении концентрации эпидидимальных сперматозоидов, падении уровня сывороточного тестостерона [279]. Экспериментальным путем [497] показано, что стрессовые воздействия вызывают изменение физиологических клеточной мембраны сперматозоидов, что, в свою очередь, ведет к снижению их подвижности, а также нарушению целостности акросомального аппарата. Так, согласно исследованиям [186, 187, 188], действие холодового, теплового и иммобилизационного стресса оказывает негативное влияние на физиологические параметры эякулята экспериментальных животных, в то же время, авторами отмечается возможность развития компенсаторно-приспосбительных реакций в организме животных при длительном воздействии низкоинтенсивного стресса, что находит отражение в увеличении концентрации сперматозоидов и, согласно периодизации стрессовой реакции соответствует стадии адаптации [193]. В то же время известно, что стресс может потенцировать неблагоприятное действие ряда других факторов на мужскую половую систему. Так, гонадотоксическое действие метилтретбутилового эфира и нитробензола в условиях холодового стресса вызывает более грубые изменения функционального состояния сперматозоидов, нежели без него [164], а сочетанное действие солей тяжелых металлов и психогенного стресса приводит к нарушению копулятивного поведения самцов лабораторных крыс, а также к достоверному увеличению доимплантационной гибели и общей эмбриональной смертности в их потомстве [146, 147].
Многочисленные клинические данные, свидетельствующие о сочетанном воздействии стресса и других неблагоприятных средовых факторов подтверждают факт развития мужского бесплодия в 84% случаев [15, 274]. Учитывая важную роль стрессовой составляющей в жизнедеятельности и функционировании любой биологической системы и, опираясь на многочисленные данные литературы о влиянии стресса, в том числе пренатального, на процессы становления репродуктивной оси, считаем целесообразным оценить влияние наиболее выраженного по своему биологическому воздействию [186, 6, 129] иммобилизационного стресса на реактивность и резистентность генеративного и эндокринного компартментов яичек потомства самок крыс с экспериментальным поражением гепатобилиарной системы различного генеза.
Для изучения диапазона стрессоустойчивости половой системы экспериментальных животных воспроизводилась модель иммобилизационного стресса [140], в соответствии с данными литературы, согласно которым стрессовое иммобилизационное воздействие представляет собой один из самых распространенных в реальной жизни смешанных стрессовых влияний [63].
Результаты, полученные в ходе исследования подвергались обработке с помощью программных комплексов IBM SPSS Statistics 20.0 и PAST 3.01 с использованием двухфакторного дисперсионного анализа, что позволило констатировать не только различие между группами, но и установить связь между причинными факторами.. Характеристика стрессоустойчивости генеративного компонента яичек экспериментальных животных Согласно литературным данным [279, 123], уже однократное воздействие иммобилизационного стресса может вызывать существенные длительные (до нескольких недель) изменения сперматогенеза. 208 Так, в ходе исследования было установлено (Таблица 21), что воздействие иммобилизационного стресса способствует напряжению процесса сперматогенеза у животных группы «К.-стресс» по сравнению с интактными животными, что нашло свое отражение в увеличении как суммарного количества сперматогенных клеток, так и их отдельных генераций. При этом, показатель уязвимости сперматогенного пласта (количество канальцев со слущенным эпителием) увеличен по сравнению с контролем практически в 2 раза, а такой важный показатель сохранности сперматогенеза, как его индекс, у стрессированных животных снижен по сравнению с группой контроля.
Всё вышеизложенное позволяет констатировать, что иммобилизационный стресс даже в качестве изолированного фактора оказывает существенное влияние на процессы сперматогенеза.
В то же время, при помощи двухфакторного дисперсионного анализа было установлено (Рисунок 62 - 66), что сочетанное воздействие таких факторов, как патология гепатобилиарной системы матери и иммобилизационный стресс вызывают более существенные изменения процесса сперматогенеза в группах Алк.-стресс и Мез.-стресс (Таблица 21) в сравнении с группой контроля. При этом, обращает на себя внимание, что воздействие иммобилизационного стресса как изолированного фактора, преимущественно, носит стимулирующий характер на процессы сперматогенеза, а сочетанное влияние двух исследуемых факторов носит угнетающий характер на процессы сперматогенеза, что наглядно подтверждается при сопоставлении исследуемых показателей в группах Алк.-стресс и Мез.-стресс с группой контроля и Алк.-стресс и Мез.-стресс с группой К.-стресс, причем сопоставление исследуемых критериев в последних трех группах подтверждает наличие синергии при влиянии патологии печени матери и иммобилизационного стресса на процессы сперматогенеза.
