Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Принцип провизорности в гисто- и органогенезах 8
1.2. Современное представление о репаративнои регенерации опорных тканей 17
1.3. Описторхоз - системное заболевание человека и животных, влияние его на течение некоторых заболеваний и формирование новых нозологически форм 22
1.3.1 Изменения пищеварительной трубки при описторхозной инвазии 23
1.3.2 Патология в сердце при описторхозе 26
1.3.3 Особенности течения вирусного гепатита у больных описторхозом. 27
1.3.4 Холангиоцеллюлярный рак и описторхоз 28
Глава 2. Материал и методы исследования 30
Глава 3. Результаты собственных исследований 34
3.1. Структурно-функциональное состояние паренхимы и стромы печени при описторхозе 34
3.2. Заживление дефекта трубчатой кости у экспериментальных животных на фоне описторхозной инвазии 52
3.3. Рост и превращение эмбрионального провизорного хряща в культурах в организме по методу Ф.М. Лазаренко 62
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 70
Выводы 76
Список литературы 78
- Современное представление о репаративнои регенерации опорных тканей
- Патология в сердце при описторхозе
- Структурно-функциональное состояние паренхимы и стромы печени при описторхозе
- Рост и превращение эмбрионального провизорного хряща в культурах в организме по методу Ф.М. Лазаренко
Введение к работе
После открытия и первых описаний возбудителя описторхоза (S. Rivolta., 1884; К.Н. Виноградов, 1891) гельминтоз стал проблемой пристального внимания биологов и врачей. Были разработаны основные положения, касающиеся эпидемиологии, клиники, морфологических проявлений паразитоза (Н.Н. Плотников 1953, 1976; В.Я. Глумов 1984; В.Г. Бычков и др., 1988, 2006).
В настоящее время социальные, медицинские и биологические вопросы описторхоза не потеряли актуальности, т. к. заболеваемость населения в гиперэндемичных очагах поддерживается на высоком уровне вследствие закрепившихся традиций питания населения. Описторхоз до сих пор остался одной из распространённых форм паразитарной патологии в регионах Среднего Приобья и Обь-Иртышского бассейна. (Т.Ф. Степанова, 2004; Г.Г. Крылов, 2005; Т.М. Гузеева, 2008)
Установлено влияние описторхозной инвазии на органы-экониши гельминта и системы организма, в которых паразит не вегетирует (Г.Г. Крылов, С.А. Соколов, 2005); описторхоз манифестирует соматическую патологию, что заметно экзальтирует течение основных заболеваний (А.А. Бекк и др., 2008).
Формирование новой биологической системы «паразит-хозяин» обеспечивается главным образом наличием адаптационных механизмов у гельминта и несовершенством реакций иммунитета в организме хозяина. По выражению Б.А. Астафьева(1986) «существование одного многоклеточного организма в другом, чуждым ему в антигеном отношении, является иммунологическим парадоксом». Исходя из данной ситуации, возникают определенные проблемы в формировании самой системы «паразит-хозяин» и функционирования защитных механизмов в организме хозяина, которые формируются на внедрение чужеродного антигена. Одним из возможных механизмов адаптации организма хозяина на внедрение паразита является активация тканей внутренней среды и нейрогуморальная функция регуляторных систем организма (В.Н. Морозов, А.А. Хадарцев, 1998). Знакомство с литературой, отражающей вопросы паразитизма, показывает, что в природе параллельно происходят два процесса: усложнение морфофизиологической организации живых организмов и упрощение организации ради усиления репродуктивной функции и выносливости, что сопровождается увеличением численности видов паразитов (Л.Ф. Каленова, 2006). К одной из нерасшифрованных особенностей адаптивных реакций организма хозяина на внедрение гельминта, следует отнести создание позитивных морфофизиологических проявлений, свидетельствующих о неоднозначности системы «паразит-хозяин».
В частности подобная ситуация была обозначена применительно к скелетным тканям (О.Э. Вакулина, 2008). Остаётся неизученным механизм вовлечения в ответную системную реакцию на гельминта важнейших форм биологического субстрата организма хозяина - генома, клеток, тканей.
Всё выше упомянутое привело к убеждению в необходимости параллельного исследования биологических потенций тканей мезенхимного генеза печени, скелетных тканей при заживлении дефектов трубчатой кости и в условиях культивирования в организме поражённого описторхозом животного.
Цель исследования:
Выявить особенности репаративной регенерации и имплантационного роста опорных тканей при описторхозе и установить значимость симбиоза «паразит-хозяин» для формирования адаптивных и морфогенетических реакций в пораженном гельминтом организме.
Задачи исследования:
1. Изучить состояние биологических мембран, биосинтеза и биодеградации коллагена и морфологических преобразований печени на различных сроках при описторхозной инвазии; 2. Провести молекул ярно-генетическое исследование генов эпидермального и эндотелиального факторов роста у сирийских хомяков при хроническом описторхозе;
3. Определить особенности гистогенезов скелетных тканей в зоне дефекта трубчатой кости в условиях эксперимента на животных, зараженных описторхозом;.
4. Изучить особенности имплантационного роста эмбрионального провизорного гиалинового хряща в культурах «in vivo» по методу Ф. М. Лазаренко у интактных животных и при описторхозной инвазии.
Научная новизна.
Впервые показано, что принцип провизорности, как один из механизмов адаптации и эволюционирования, сохраняется на фоне описторхозной инвазии и реализуется в процессе гисто- и органогенезов производных мезенхимы и энтодермальной закладки. При хроническом описторхозе устанавливаются морфофункциональные параллели между состоянием морфологических, ультраструктурных и биохимических показателей печени и тканями, не имеющими непосредственного контакта с гельминтом или его личинками; в печени пролифераты клеток холангиоцитарного дифферона формируют эпителиальные структуры, соответствующие провизорной стадии железистого органогенеза, способные к органотипической дифференцировке; При хроническом описторхозе формируются молекулярно-генетические механизмы регуляции продуктивных процессов, выявляется экспрессия и мутация генов-регуляторов факторов роста и продукции интегральных белков плазмалеммы; ускоряются процессы репаративной регенерации опорных тканей, гисто- и органотипической дифференцировки эмбрионального провизорного гиалинового хряща в культурах в организме.
Установлено, что репаративная регенерация опорных тканей при описторхозе характеризуется конкурентным вовлечением в процессы гистогенеза клеток трёх механоцитарных дифферонов: фиброцитарного, хондроцитарного, остеоцитарного, что приводит к облигатному формированию хрящевых участков в составе регенерата. В то же время морфогенез регенерата у животных незараженных описторхозом характеризуется факультативным хондрогенезом.
Теоретическая и практическая значимость работы.
Существенно расширены представления о механизме адаптивных реакций организма при описторхозе. Выявлена система молекулярно-генетической регуляции биологических потенций тканей различной генетической природы, продуктивных процессов, в том числе репаративной регенерации, способности к тканево- и органо-типической дифференцировке. Показано, что при хроническом описторхозе устанавливаются морфофункциональные параллели в состоянии печени и тканей, не имеющих непосредственного контакта с гельминтом. Установлено, что репаративная регенерация опорных тканей в зоне дефекта трубчатой кости при описторхозе характеризуется конкурентным вовлечением коммитированных клеток механоцитарных дифферонов и обязательным формированием хрящевых зон в составе регенерата. Результаты исследования могут быть использованы при подготовке учебных пособий и лекций по гистологии, патологии, травматологии и инфекционным болезням.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. При описторхозе ускоряются процессы репаративной регенерации опорных тканей и дифференцировка эмбрионального гиалинового провизорного хряща в культурах «in vivo»;
2. На фоне описторхозной инвазии гистогенезы опорных тканей при репаративной регенерации и в условиях имплантационного роста осуществляются в соответствии с принципом провизорности;
3. При хроническом описторхозе в систему регуляции репаративных гистогенезов вовлекаются молекулярно-генетические механизмы и устанавливаются морфофункциональные параллели состояния печени и репарации тканей. Апробация работы и публикации
Основные положения диссертационного исследования были доложены и обсуждены на: Международном форуме по проблемам науки, техники и образования «III тысячелетие-новый мир» (Москва, 2002); Международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья 2003» (Тюмень, 2003); V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004); Российской научной конференции «Новое в экспериментально-морфологическом изучении глаза» (Оренбург, 2005); Международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья 2006»Тюмень, 2006); научном совещании «Актуальные проблемы учения о тканях» (Санкт-Петербург, 2006); научной конференции «Инновационные технологии» (Санкт-Петербургб, 2007); Всероссийской конференции "Актуальные аспекты паразитарных заболеваний в современный период» (Тюмень, 2008).
По материалам диссертации опубликовано: 12 - печатных работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Внедрение результатов исследования
Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедр травматологии и ортопедии, патологической анатомии, гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава» и кафедры гистологии БУ ВПО «Ханты-Мансийский государственный медицинский институт ХМАО-Югры».
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 100 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 7 таблицами и 36 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов. Список литературы содержит 216 источников (156 отечественных, 60 иностранных).
Современное представление о репаративнои регенерации опорных тканей
Морфологические, морфогенетические и эргонтические варианты центрального и локального звеньев регуляторных механизмов организма присущи, практически, всем известным проявлениям гисто - и органогенезов многоклеточных животных, в том числе и человека. Оптимизация морфогенезов, сопровождаемая своеобразными «поведениями» клеточного и неклеточного компонентов в процессе репаративной регенерации и экспериментального изучения гистогенеза скелетных тканей в условиях культивирования в настоящее время представляются в виде довольно обоснованных теоретических взглядов и интерпретаций с учетом банка фундаментальных научных и клинических разработок (Суханов А.В., Аврунин А.С., Корнилов Н.В., 1997; Омельяненко Н.П. и др., 2002а, 20026; Н. Muier, 1983; L. Malaval, 1994; M.W.Long et al., 1995; I.W.S. Li et al., 1996; Y. Ishida, J.N. Heershe, 1997; B. Jiang, M. Li, Y.J. Cao, 2008; R. Z. Geros, 2008).
В настоящее время известно несколько способов стимуляции репаративной регенерации опорных тканей: трансплантация детерминированных остеогенных продромальных клеток (ДОПК), обладающих собственной потенцией костеобразования — остеобластический остеогенез; воздействие специфическими субстанциями, к которым принадлежит костный морфогенетический белок (BMP - bone morphogenetic protein), точнее, семейство морфогенетических белков, индуцирующих фенотипическое преобразование полипотентных стволовых соединительнотканных клеток, или индуцибельных остеопродормальных клеток, в остеобласты - остеоиндуктивный остеогенез, и хондропродормальных клеток в хондробласты или остео- хондроиндукция; воздействие факторами, стимулирующими новообразование костной или хрящевой тканей (TGF-J3, IGF-I, IG-F-II, PDGF, bFGF, aFGF, BMPs), — стимулированный остеогенез (Г.С. Соловьев, 1969; Meyer U. et al., 2001; Wang L. et al., 2004; Dounchis J.S. ,2001). Эти факторы постоянно присутствуют в нативнои костной ткани и являются медиаторами клеточной пролиферации и дифференцировки, ангиогенеза и минерализации как при физиологической, так и при репаративной регенерации костной ткани; пассивная стимуляция ДОПК с помощью аллогенных костных трансплантатов, синтетических либо полу синтетических заменителей кости — остеокондуктивный остеогенез, или остеокондукция. Имплантаты искусственного или биологического происхождения в этом случае являются остовом (кондуктором) для прорастания кровеносных сосудов, после чего происходит врастание клеток (остеобластов) из костного ложа (Н.П. Омельяненко и др., 20026; Ю.М. Ирьянов и Т.Ю. Ирьянова, 2003; Н.А. Кононович, 2006; Gronthos S. and Simmons P.J., 1995; Doherty M.J., Ashton B.A., Walsh S. et al, 1998; Noble B.S, Reeve J, 2000; A. Arkudas, 2007; K.L. Jilka et al, 2008; H. Ideno et al, 2008). Применительно к скелетным тканям в репаративной регенерации могут участвовать элементы трех механоцитарных дифферонов — фиброцитарного, хондроцитарного, остеоцитарного (Kato Y. and Gospodarowicz D, 1985; Kato Y. et al, 2001). Способность дифферона найти свое место в регенераторном процессе многофакторна и обусловлена восприимчивостью клетки механоцитарного дифферона и параллельно наличием фактора — регулятора локального (аутокринного, паракринного) или дистантного (эндокринного) характера действия (А.А. Заварзин, 1967; А.Я. Житников, 1976; Э.Н. Беллендир и Б.М. Ариэль, 2005; A.M. Зайдман и А.В. Корель А.В, 2004; И.А. Хлусов и др. 2006; Г.С. Соловьев, 2002; Yang Z. et al, 2009; Palomares K.T. et al, 2009; Kodama T. et al, 2008).
Репаративные процессы определяются представительством того или иного дифферона, однако активность их участия во многом зависит от стадии регенерационного процесса (Maniwa S. et al, 2001; Masukava H. et al, 2001; Barry F. et. al, 2001). Закономерности морфологической и биохимической картины репарации относятся к категории палингенезов и поэтому регулируются многофакторной системой организма, но вместе с тем сохраняют присущие закреплённым эволюционным механизмам восстановления повреждённых тканей и органов. Клетки остеоцитарного дифферона, способные к участию в нормо- и эктопических очагах гистогенеза, по всей вероятности, обладают сравнительными потенциальными возможностями с клетками других механоцитарных дифферонов, о чем свидетельствуют многочисленные факты. Отсюда следует, что на определённой стадии гистогенезов соединительных тканей не исключена конкурентность за преобладание в конкретной репарации (Р.В. Деев, В.Г. Гололобов, 2008;Р.К.Данилов и др. 2008;Dounchis J., 2001; Ito Y et al., 2001; Maniwa S. et al. 2001; Lin Y., 2005; Umezawa A., Akutsu H.,2008) Возможные участия клеток всех механоцитарных дифферонов в восстановлении повреждённого органного субстрата вполне объяснима с точки зрения обязательного присутствия производные всех трех дифферонов в процессе становления органов скелета. Согласно работам А.Я. Фриденштейна (А.Я. Фриденштейн; К.С. Лалыкина 1973) остеогенные клетки предшественники содержатся как резервное звено в здоровом организме и при необходимости могут принять участие в любых гистогенетических процессах внутри организма, а таюке проявить свои коммитированные способности к дифференцировке и в условиях трансплантации в другой организм или культуру эксплантата (Аврунин А.С.; Тихилов P.M. и др. 2005; Н.В. Родионова, 1989; Cai Metae, 2008; Orris I.R.et al., 2009).
Патология в сердце при описторхозе
Кардиалгии при остром, хроническом и суперинвазионном описторхозе встречаются в 25 % - 52 % наблюдений (В.Г. Бычков, О.И. Асташенко, 1977) Полная дегельминтизация больных в острой фазе ликвидирует боли в сердце; при дегельминтизации в хронической фазе кардиалгии сохраняются в 8,7%; после комплексного лечения больных, включая холецистэктомию, кардиалгии наблюдаются в 3,8% случаев (B.C. Комяков, В.И. Яцкив, 1976). Наиболее характерным проявлением паразитоза является синдром «большой эозинофилии»: доля эозинофильных лейкоцитов периферической крови иногда достигает 80% (G. Solovyov et al., 1996). Морфологическое изучение умерших показало выраженную тканевую эозинофилию внутренних органов, в т.ч. сердца, преимущественно стенки левого желудочка. Эозинофильноклеточная инфильтрация наблюдается во всех оболочках, однако, наиболее выражена в миокарде. Скопления нормо- и hypodens -эозинофилов сопровождается депаренхиматизацией миокардиоцитов, очаговым и диффузным кардиосклерозом ; в случаях скоропостижной смерти (острая левожелудочковая недостаточность) фибропластические процессы выражены слабо (Г.Г. Крылов, 2005).
На экспериментальных моделях показано, что O.felineus выделяют метаболиты, состоящие из многочисленных (более 20) ингредиентов. Метаболиты описторхисов гематогенно и лимфогенно распространяются во все органы хозяина за исключением ЦНС (Г.В. Кондинский, 1978). В местах скопления метаболитов формируются очаги гранулематозного воспаления с привлечением лейкоцитов. Hypodens - эозинофилы выделяют гранулы, содержимое которых обладает выраженным цитотоксическим эффектом. Выявлено, что механизмы деструкции контаминированных метаболитами холангиоцитов и кардиомиоцитов идентичны (В.Г. Бычков с соавт., 2000).
Таким образом при всех формах описторхозной инвазии выявляются структурно - функциональные нарушения сердечной мышцы: холецисто (гепато) - коронарный синдром сопровождается кардиалгиями, скопления метаболитов в миокарде инициируют цитотоксический эффект катионных белков hypodens - эозинофилов с развитием альтеративного миокардита, который может вызвать скоропостижную смерть или очаговый и диффузный кардиосклероз (V.G. Bychkov et al., 1994). 1.3.3 Особенности течения вирусного гепатита у больных описторхозом
Заболеваемость вирусными гепатитами (ВГ) в Западно-Сибирском регионе в 2 раза выше по сравнению с показателями в РФ, причем в гиперэндмичном очаге описторхоза заболеваемость ВГ существенно (в 1,8 раза) превышает таковую в гипоэндемичной зоне (В.Г. Бычков и др., 2003). В клинической картине вирусных гепатитов в сочетании с хроническим и суперинвазионным описторхозом преобладают астенический и болевой синдромы, у 1/3 больных микст-патологией отмечается холестатический и аллергические синдромы, повышается активность щелочной фосфатазы (С.А. Соколов, 2002). При микроскопическом исследовании печени обнаружен внутриклеточный билирубиностаз, особенно при гепатите В и описторхозе с частыми суперинвазиями, более постоянно отмечаются дистрофия и некроз гепатоцитов, гранулемы, инициированные погибшими печеночными клетками, метаболитами и яйцами марит, по сравнению с наблюдениями только с ВГВ (Г.Г. Крылов, 2005). Среди иммунологических показателей в группе хронический вирусный гепатит + суперинвазионный описторхоз выявлено достоверное снижение Т-лимфоцитов, Т-хелперов, повышение Т-супрессоров, IgM, IgG и суммарных ЦИК по сравнению с группой ХВГ (К.С. Булынников с соавт., 2006).
Биохимические показатели сыворотки крови (АЛТ, ACT), характеризующие клеточный цитолиз, у больных хроническим описторхозом в сочетании с ХВГ (гипоэндемичный очаг) существенно не отличались во всех группах наблюдений: ВГ-В, ВГ-С, ВГ-В+С (р 0,05), в гиперэндемичном очаге превышение показателей статистически достоверно (р 0,001)(Е.И. Мигуськина, 2002; Г.Г. Крылов, 2005). У лиц, проживающих в гиперэндемичном очаге, больных хроническим вирусным гепатитом С и СО, отмечалось повышение трансаминаз в 2 раза по сравнению с таковыми показателями при ХГС. Кроме того, у больных паразитоценозом (ХГВ+СО, ХГС+СО) в клеточных мембранах лейкоцитов повышается активность перекисного окисления липидов в 2,68 раза по сравнению с лицами, страдающими только ХГВ и ХГС. Закономерных особенностей течения ХВГ на фоне реинвазионного описторхоза не выявлено: обнаружены достаточно противоречивые данные, что, возможно, обусловлено малым количеством клинических наблюдений и морфологического материала (В.Г. Бычков с соавт., 2003). На основании анализа литературы можно сделать следующие выводы:
1. Течение вирусных гепатитов у больных описторхозом в гипоэндемичном очаге не отягощается паразитарной инвазией, а в некоторых случаях гельминты оказывают протективный эффект, что вполне соответствует «правилам» хозяино-паразитарных систем (Е.И. Мигуськина, 2002)
Структурно-функциональное состояние паренхимы и стромы печени при описторхозе
Исследование динамики показателей альтеративных, продуктивных, воспалительных и репаративных реакций печени выявило нарастанрю показателей повреждения гепатоцитов до 193,5%о на 41 сут инвазии (в контроле - 40,8%о) и снижение их до 92,8%о к 120 сут эксперимента.
Доля гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов (83,1%о и 85,3%о соответственно) достигала максимальных показателей на 24 сут болезни, постепенно к концу эксперимента до 68,8%о И 45,2%О, что существенно выше нормативных показателей (56,2%о и 21,3%о, соответственно).
Митотический индекс гепатоцитов в период 7-16 сут инвазии составил 0,9-0,7%о (в контрольной группе - 1,01%о), в хронической стадии описторхоза этот показатель составил 1,0%о (29 сут) и 3,0%о (120 сут).
Прогрессивно-регрессивный индекс (P/R) - отношение суммы показателей гипертрофированных, двуядерных и делящихся гепатоцитов к показателям погибших - в контрольной группе составил 1,9. С 3 сут инвазии P/R - индекс заметно снижался до 0,8 (41 сут) и достиг 1,3 к концу эксперимента (120 сут), что свидетельствует о значительно выраженной атрофии гепатоцеллюлярного дифферона паренхимы печени.
Индекс площади фиброза - доля (%) элементов собственной соединительной ткани к площади воспалительных инфильтратов - нарастала с 3,0% (7 сут) до 62,1% (120 сут) - наиболее выраженный показатель продуктивных реакций в острой и хронической фазах экспериментального описторхоза.
Особый интерес представляет преобразование в печени на 10 сут заражения животных метацеркариями Opisthorchis felineus: индекс площади фиброза (ИПФ) составил 7,56 ± 1,06%. Общая плотность инфильтратов занимала 19,2±5,8% площади срезов, причем увеличивается доля эозинофильных лейкоцитов до 24,17±2,02%, плазматических клеток -18,52±1,45%, фибробластов - 9,52±0,8%. В составе клеточных коопераций появляются новые элементы, не наблюдавшиеся в более ранние сроки, -коммитированные клетки (КК), доля их составила 6,92 ± 0,93%.
. Коммитированные клетки в инфильтрате. Инвазия 10 суток. ТМх3850. КК (рис. 1, 2) в данном периоде болезни округлой формы со светлым ядром, ядерно-цитоплазматический индекс составляет 2,1 ± 0,8. Диаметр их колеблется от 24,08 до 29,07 Pix (26,48 ± 0,53, CV = 6,3 ± 1,41). Кроме того, встречаются свободно лежащие КК овальной формы с более темным ядром, ядерно-цитоплазматический индекс - 2,9 ±0,7, размеры клеток по длиннику колеблются от 39,0 до 49,82 Pix (44,90 ± 1,47, CV = 10,37 ± 2,32) , в поперечнике - от 18,36 до 26,08 Pix (22,33 ± 0,85, CV = 12,0 ±2,68). Третью группу КК представили элементы, строящие ряды, размеры их колебались по длиннику от 31,26 до 40,61 Pix (32,47 ±2,61, CV = 21,24), в поперечнике -от 17,8 до 23,71 Pix (20,66 ± 0,98, CV = 12,63 ± 3,37). Коммитированные клетки печени - это преобразующиеся клетки, возникающие в процессе пролиферации и созревания стволовых клеток, которые дифференцируются в данный период эксперимента преимущественно в элементы холангиоцеллюлярного дифферона с формированием псевдожелезистых структур - провизорных образований желез. 16-е сутки эксперимента. При световой микроскопии регистрируются усиление выраженности плазморрагий и фибриноидной дистрофии сосудистых стенок, увеличение площади инфильтратов до 24,1 ± 3,1% площади полутонких срезов.
В перидуктальных инфильтратах увеличивается содеожание плазматических клеток (22,53±2,82), фибробластов (26,0±1,06%), пролиферируют камбиальные клетки - 12,05±0,86%, которые в последующие сроки дифференцируются только в холангиоциты. Наблюдается перманентное поступление эритроцитов в желчные протоки, (рис. 3). Важно отметить, что в перидуктальном пространстве, среди волокнистых структур, встречаются диффузные гранулы эозинофилов и дегранулированные эозинофильные лейкоциты.
24-е сут описторхозной инвазии - начало полового созревания O.fe-lineus, период предшествующий яйцепродукции. Площадь инфильтрации клеточными элементами составляет 25,9±2,3% поверхности полутонких срезов, среди которых 14,6% эпителиоциты (дифференцированные камбиальные клетки), формирующие псевдожелезистые образования и узлы регенераты; наблюдается миграция эозинофильных лейкоцитов через базальную мембрану эпителиальной выстилки (рис. 4); нарастает количество фибробластов (12,18 ± 1,21 %) и волокнистых структур.
Печень характеризуется выраженными макроскопическими изменениями: мелкобугристость, расширение и извитость подкапсульных желчных протоков. В протоках обнаруживаются мутная желчь, половозрелые описторхисы, плотные крошковидные массы. При микроскопическом изучении отмечается массивная инфильтрация (ИПВИ - 24,3±2,18%), разделяющая паренхиму на дольки (табл. 1). Заметно прогрессируют склеротические процессы: доля волокнистых структур в перидуктальных инфильтратах нарастает до 34,97±3,26%. В печеночной паренхиме увеличивается число паразитарных гранулем, находящихся в стадиях склероза и некроза. В паренхиме наблюдаются регенеративные процессы за счет гиперпертрофированных и двуядерных гепатоцитов (76,2%о и 65,5%о -соответственно), в меньшей мере - митотическим путем (МИГ - 2,42%о); происходит размножение протоковых холангиоцитов - МИХ - 5,63%о. Следует отметить феномен «капилляризации» синусоидов, заключающийся в отложении волокнистых структур вдоль их стенок. При данном сроке инвазии завершается не только дифференцировка коммитированных клеток в холангиоциты, но образование дуктулярных структур, окруженных соединительнотканными волокнами (рис. 5).
Рост и превращение эмбрионального провизорного хряща в культурах в организме по методу Ф.М. Лазаренко
Данный раздел работы выполнен с целью расшифровки биологических потенций тканей мезенхимной природы при описторхозе и подтверждения детерминированности принципа провизорности.
Исследования показали, что к концу первых суток эксперимента в зоне имплантата начинает формироваться очаг асептического воспаления, обеспечивается адаптация трансплантированных кусочков тканей к новым условиям трофики (рис. 28). Между кусочками пересаженной ткани и кусочками целлоидина располагаются сгустки фибрина, очаги кровоизлияний, нарушенные фрагменты соединительнотканного ложа имплантата. К 3 суткам воспаление переходит в фибробластическую стадию, начинается оформление соединительнотканного каркаса и сосудистого бассейна имплантата. В сгустках фибрина выявляется гранулярный и аморфный ШИК позитивный материал (рис. 29), Хейл - позитивные субстраты, возрастает степень метахроматической окраски. Процессы тканевого роста постепенно смещаются от периферии к центральным зонам имплантата. В это же время устанавливаются межтканевые отношения формирующегося каркаса и пересаженных кусочков. К 7 суткам эксперимента отмечаются очаги скопления митотически делящихся клеток трансплантированного материала и соединительнотканных разрастаний (рис. 30). В скелетогенных и хондроидных островках накапливается гиалуронидазолабильное метахроматическое вещество (гиалуронаты), входящее в состав формирующейся межклеточной субстанции опорных тканей.
Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Инвазированное животное. Стадия опыта 7 сут. Установление межтканевых отношений имплантированных кусочков и формирующегося соединительнотканного каркаса имплантата. Фигуры митотического деления клеток механоцитарных дифферонов. Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: толуидиновый синий, рН 4,6. Ув. 90x7. На последующих стадиях в центральных отделах хрящевых бластем клетки обретают способность кумулировать гликоген, сульфатированные гликозаминогликаны и дифференцироваться в хондроциты (рис 31). В хрящевых островках осуществляется оппозиционный и интерстициальныи рост, вокруг островков оформляется надхрящница. К 16 суткам опыта кусочки хряща просматриваются невооруженным глазом в экстирпированных имплантатах (поверхность имплантатов имеет бугристый вид). Очаги хондрогенеза в имплантатах выделяются на ранних стадиях эксперимента в периферических участках, а затем выявляются и в центральных зонах. Хрящевые островки характеризуются способностью к тканевой и органотипической дифференцировке: в их центральных отделах образуются изогенные группы хондроцитов, зоны столбчатого и пузырчатого хряща (рис 32). Процесс замещения хряща костной тканью в имплантатах аналогичен закономерностям развития костной ткани на месте гиалинового хряща в онтогенезе. Вокруг дифференцированных хрящевых фрагментов начинается процесс перихондрального окостенения (рис. 33). Вслед за перихондральным механизмом окостенения в имплантатах выявляются признаки эндохондрального остеогенеза. Глубокие участки хрящевых островков кальцифицируются, в них со стороны надхрящницы врастают тяжи рыхлой соединительной ткани с кровеносными сосудами, формируются сосудистые лакуны и сосудистые каналы (рис. 34). Диффузный механизм трофики хрящевых островков сменяется на ангиогенный (рис. 35). Постепенно, в центральных зонах дифференцированных хрящевых островков формируется костномозговая полость и осуществляется процесс формирования энхондральных костных балок. На заключительных этапах эксперимента ретикулофиброзная костная ткань активно замещается тонковолокнистой костной тканью, образуются остеоноподобные структуры (рис. 36). Таким образом метод культивирования по Ф.М. Лазаренко позволил подтвердить детерминированность принципа провизорности и охарактеризовать этот принцип как один из адаптивных и морфогенетических механизмов гисто- и органогенезов. Анализ морфологической текстуры имплантатов позволил так же констатировать ускорение гистогенезов опорных тканей при культивировании в организме животного с описторхознои инвазией. Во всех имплантатах опытной серии наблюдалось соотношение кусочков хряща и костной ткани не менее 1:3, в имплантатах интактных реципиентов соотношение хрящевых и костных структур было преимущественно с преобладанием костных образований, хрящевые фрагменты составляли не более 20 %. Результаты исследования с использованием метода культивирования тканей и органов по методу Ф.М. Назаренко позволили продемонстрировать реальное существование провизорности как механизма гисто- и органогенезов, подтвердить детерминированность провизорности и значимость самого метода в системе экспериментального изучения биологических потенций тканей и органов.
Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Инвазированное животное. Стадия опыта 10 сут. Островок провизорного хряща в имплантате на стадии тканевотипической дифференцировки. Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: толуидиновый синий, рН 4,6. Ув. 90x7.
Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Инвазированное животное. Стадия опыта 16 сут. Органотипическая перестройка глубоких отделов хрящевого остравка. Формирование зон столбчатого и пузырсачого хряща. Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: реакция связывания коллоидального железа по Хейлу. Ув. 90x7.
Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Инвазированное животное. Стадия опыта 24 сут. Перихондральная костная манжетка вокруг дифференцированного хрящевого островка. Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: крезиловый прочный фиолетовый. У в. 10x7. Рис. 34. Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Инвазированное животное. Стадия опыта 29 сут. Предостеогенная дифференцировка провизорного хряща, формирование сосудистых каналов в глубоких отделах хрящевых островков Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: крезиловый прочный фиолетовый. Ув. 40x7.
Рис. 35. Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Неинвазированное животное. Стадия опыта 41 сут. Ангиогенный тип трофики костных структур. Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: реакция связывания коллоидального железа по Хейлу. Ув. 10x7. Рис. 36. Имплантат эмбрионального провизорного гиалинового хряща. Инвазированное животное. Стадия опыта 41 сут. Формирование пластинчатой костной ткани. Кальцификация межклеточного вещества перекладин ретикулофиброзной костной ткани. Фиксация: жидкость Карнуа. Окраска: ализариновый красный по методу Даля. Ув. 10x7.
