Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обструктивная уропатия : 10
1.1. Морфофункциональная характеристика почек 10
1.2. Морфологические изменения в почках при обструктивных уропатиях
1.3 Структурные механизмы, лежащие в основе повреждения почек при обструктивной уропатии
Глава 2. Материал и методы исследования 41
2.1. Методика постановки эксперимента 41
2.2. Гистологические методы исследования 44
2.3. Электронно-микроскопическое исследование 46
2.4. Морфометрия и статистическая обработка 47
Глава 3. Результаты собственных исследований 50
3.1. Морфологическая характеристика почек крыс 50
3.2. Морфологическая характеристика почек крыс при окклюзии мочевыводящих путей
3.3. Морфология почек крыс при внутрипочечной окклюзии 76
Обсуждение полученных результатов 90
Выводы 101
Практические рекомендации 103
Список литературы
- Морфологические изменения в почках при обструктивных уропатиях
- Структурные механизмы, лежащие в основе повреждения почек при обструктивной уропатии
- Гистологические методы исследования
- Морфологическая характеристика почек крыс при окклюзии мочевыводящих путей
Введение к работе
Необходимость исследования морфологических особенностей различных отделов нейрона в норме и в условиях эксперимента продиктована ростом количества больных с патологией органов мочеполовой системы. Поиск и анализ закономерностей структурных и ультраструктурных изменений различных отделов нейронов при экспериментальном моделировании заболеваний органов мочевыделительной системы с использованием трансмиссионной электронной микроскопии, позволяющей в сочетании с другими методиками производить дифференциальную диагностику в соответствии с международными стандартами, является одной из важнейших проблем современной урологии [Мухин Н.А. 2005; Беккер Дж.Г., 2007; Линн К.Л. с соавт., 2007; Пальцев М.А., 2007; Перов Ю.Л., 2008; Kumar V. et al., 2005].
Несмотря на определенный прогресс в исследовании основных механизмов пато- и морфогенеза обструктивной уропатии, некоторые аспекты, касающиеся ультраструктурных изменений в клубочках и канальцах почек при варьирующей обструкции мочевыводящих путей, остаются малоизученными.
Важнейшая роль в.структуре заболеваний мочеполовой системы, вызывающих интра- и экстраренальную обструкцию, принадлежит мочекаменной болезни и хроническому пиелонефриту, для которых характерно длительное рецидивирующее течение с исходом в нефросклероз и развитие хронической почечной недостаточности [Полиенко А.К. с соавт., 2006; Бриттов А.Н. с соавт., 2006; Чиглинцев, А.Ю., Нохрин Д.Ю., 2007; Gillen D.L. et al., 2005; Teylor E.N. et al., 2005].
В настоящее время, исходя из большой сложности и ограниченной .перспективности лечения хронической почечной недостаточности (ХПН), ведущим направлением становится точная морфологическая диагностика и активное лечение основных заболеваний, приводящих к ХПН. Обструктивная уропатия относится к патологическим процессам, имеющим скрытое начало и торпедное течение [Лопаткин Н.А., 2006; Freedmen A.L., 2005; Zhang S.H. et al., 2007].
Наиболее частыми причинами обструкции нижних отделов мочевы-водящих путей у мужчин являются заболевания предстательной железы [Дзеранов Н.К. с соавт. 2004; Ефимова Е.В., 2006; Schanstra J.P. et al., 2002; Boffa JJ. et al., 2003; Evan A.P. et al., 2008]. К росту числа случаев обструк-тивной уропатии среди женского населения приводит увеличение заболеваемостью мочекаменной болезнью, в патогенезе которой отмечена определенная значимость наследственных, обменно-алиментарных, экологических и анатомических факторов [Абдуразиев А.А., 2004]. Однако, по-прежнему, остается актуальным исследование морфологических изменений в различных отделах нефрона при моделировании мочекаменной болезни в экспериментальных условиях.
Застой мочи при обструктивной уропатии приводит к прогрессирующему повреждению почечной паренхимы, а в дальнейшем - к нефросклерозу [Ефимова Е.В., 2006; Вае Е.Н. et al., 2007; Chiglintsev A.Iu, Sokol E.V., 2007]. В современной литературе особенности морфологических изменений в нефронах при обструктивных уропатиях освещены, в основном, с точки зрения клинико-функциональных критериев [Дзеранов Н.К., Москаленко С.А., 2004; Freedmen A.L., 2005; Hilton R., 2006], что не всегда может объяснить различия в степени восстановления функции почек при длительном существовании препятствия оттоку мочи даже после оперативного лечения [Тареева Е.И., 2000; Лопаткин Н.А., 2006; Costa-Bauza A. et al., 2007].
В связи с внедрением малоинвазивных диагностических и лечебных технологий [Дзеранов Н.К., 2003; Лопаткин Н.А., Бешлиев Д.А., 2003; Александров В.П. с соавт., 2005; Назаров Т.Н., с соавт., 2007], многократно возрастающей роли биопсии почек с использованием электронной микроскопии в современной урологической практике существует острая необходимость определения особенностей- ультраструктуры почек в процессе морфогенеза обструктивной, уропатии [Лопаткин Н.А., 2006; Дюсюбаев А.А., Шалашов В.А., 2007; Kehinde Е.О. et al.5 2002; Chen J.J. et al., 2003]. Значимость- определения закономерностей структурных изменений почечной паренхимы при обструктивной уропатии и недостаточность изученности данного процесса актуализируют экспериментальное морфологическое исследование почек с использованием различных моделей обструкции мочевыводящих путей [Иванова Л.Н., с соавт., 2007].
Морфологические изменения в почках при обструктивных уропатиях
Обструктивными;уропатиямш называют комплекс патоморфологиче-ских и патофизиологических изменений в прчечнойшаренхиме; имеющий место; в почке ш мочевых; путях по причине нарушениям оттокашочш и ведущий; к угнетению функции почек [Айвазян- АЗІ, Войно-Ясенецюда А.МІ. 1985].
Существуют многочисленные органические причины нарушения, от-токашочи; изспочки: мочекаменная болезнь, аномалии развития мочевыво-дящих: путей; сужение мочеточников; вследствие: воспалительных процессов, спаещ перегибов? при нефроптозе, при; сдавливании добавочным? сосу-дом: или увеличенными; прилежащими органами! (матка; при миоме или во время беременности) и т.д [ЛопаткинН.А., 1998;; ДзерановіНЖ. сгсоавт., 2001., Айвазян А.ВІ с соавт., 1985].
Многочисленные теории объясняют лишь, отдельные звенья в большой цепи факторов; приводящих к нефролитиазу. Глубокое изменение функции нефрона приводит к тому, что выделяемые с мочой соли и белковые элементы становятся способными сформироваться в конкремент. К заболеваниям, вызывающим обструкцию нижних мочевыводящих путей и при длительном существовании приводящих к нарушению оттока мочи из верхних мочевых путей, относятся стриктуры, камни, опухоли, дивертикулы, клапаны и инородные тела мочеиспускательного канала; склероз и доброкачественная» гиперплазия простаты, опухоли, камни, дивертикулы и инородные тела мочеиспускательного канала. Нередко при локализации препятствия в уретре и мочевом пузыре развивается двухсторонний уретеро-гидронефроз. К этой группе можно отнести также уретероцеле, пу-зырно-мочеточниковый рефлюкс, нейрогенный мочевой пузырь. Причиной уретерогидронефроза может быть даже фимоз [Лопаткин Н.А., 2005].
Любые длительные нарушения оттока мочи ведут к гидронефротиче-ской трансформации. Гидронефроз по определению Лопаткина С.Н. [Урология, 2005] является заболеванием почки, проявляющимся расширением чашечно-лоханочной системы, прогрессирующей гипотрофией почечной паренхимы, сопровождающейся ухудшением всех основных почечных функций в результате нарушения оттока мочи из лоханки и чашечек почки и гемоциркуляции в почечной паренхиме. Если имеет место расширение мочеточника, то гидронефроз может называться уретрогидронефрозом. Гидронефроз может быть открытым, закрытым, интермиттирующим, а каждый из них в свою очередь - асептическим или инфицированным [Панин А.Г. с соавт., 2001.; Лопаткин Н.А., 1998.; Казимиров В .Г. с соавт., 2001].
Гидронефроз является одним из наиболее частых болезней в детской урологии. У взрослых чаще всего — от 20 до-40, у женщин в 105 раза чаще, чем у мужчин, односторонний чаще двухстороннего. Согласно современному учению о гидронефрозе; его течение разделяют на 3 стадии: 1) расширение только лоханки (пиелоэктазия) с незначительным нарушением почечной функции, 2) расширение не только лоханки, но и чашечек (гидрокаликоз) с уменьшением толщины паренхимы почки и значительным нарушением ее функции, 3) резкая атрофия паренхимы почки, вплоть до ее истончения [Урология, 2005]. Приобретенный гидронефроз-заболевание полиэтиологическое. Его могут вызвать.камни и пролежни стенки мочеточников, стриктуры воспалительного характера и внешнее сдавление мочеточника кистами, аневризмами, панкреонекрозами, ретроперитонеальным фиброзом. Причина гидронефроза может быть и обструкция нижних мочевыводящих путей- при гиперплазии и склерозе простаты [Карпенко B.C., 2001].
По причине общности иннервации и питания почки, чашечно-лоханочной системы и верхней трети мочеточника любое нарушение уродинамики вызывает расстройство гемодинамики и метаболических процессов в почке процессов в почке. Возникающая.почечная гипоксия приводит к гипоксии верхних мочевых путей, что в свою очередь влечет за собой острое расстройство уродинамики, а это в дальнейшем усугубляет нарушение почечного кровотока [Панин А.Г. с соавт., 2001.; Лопаткин Н.А., 1998.; Казимиров В.Г. с соавт., 2001].
В начальной стадии гидронефротической трансформации, затруднение оттока мочи в лоханке приводит к развитию-гипертрофии мускулатуры чашечно-лоханочной системы. Постепенно гипертрофия спиральной мускулатуры чашечек приводит к тому, что резко повышенное давления мочи на сосочек и форникальную зону превышает секреторное давление в мочевых канальцах; это создает препятствие к нормальному выделению мочи из сосочков в почечную лоханку, которое компенсируется уменьшением секреции мочи. Но это относительное равновесие продолжается недолго. Вскоре развивается декомпенсация, рабочая гипертрофия мышечных элементов малых чашечек и лоханки сменяется их истончением, что приводит к нарушению оттока мочи из них и дилатации почечной лоханки с последующей гипотрофией сосочков и почечной паренхимы (стадия 2). Следует отметить, что одним из важных моментов в возникновении гидронефроза является затруднение оттока мочи из функционирующих участков почки, который наблюдается даже при кратковременном повышении внутрилоха-ночного давления, не-сопровождающимся расширением лоханки. В повышение давления в почечной лоханке вносят вклад не только скапливающаяся в ней моча, но и сокращение мускулатуры чашечек, особенно форни-кального и чашечного сфинктеров. Сокращение этих гипертрофированных сфинктеров может привести к нарушению целости сводов чашечек, что облегчает обратное поступление мочи из лоханки в паренхиму почки (лоха-ночно-почечный рефлюкс) [Урология, 2005]. При этом изменяется внутри-почечная гемодинамика, сдавливание паренхимы почек расширяющимися полостями приводит к повышению внутрипаренхиматозного давления, в результате чего развиваются лоханочно-почечные рефлюксы. По пути формирующихся каликвенозных шунтов бактерии и продукты их распада (токсины) непосредственно поступают в кровь [Круглов Б.А. с соавт., 1998; Ло-паткин Н.А., 1998]. Но, следует отметить, что при гидронефрозе в стенке мочеточника также действуют и компенсаторные процессы, такие как гипертрофия лейомиоцитов [Мокалев И.Н., 2001].
Структурные механизмы, лежащие в основе повреждения почек при обструктивной уропатии
При обструктивной уропатии почки подвергаются адаптивным гемо-динамическим, биохимическим, клеточным и молекулярным изменениям, которые ведут к ремоделированию тубулоинтерстициальной ткани с последующим возможным исходом в фиброз.
Обструктивные уропатии по многим факторам имеют признаки эндо-токсикоза. Эндотоксикозы (эндогенные интоксикации, аутоинтоксикации) объединяют группу заболеваний, в патогенезе которых большую, или даже ведущую роль играет воздействие на организм токсических продуктов, образовавшихся в результате нарушения тех или иных функций. Интерес к данной проблеме резко возрос в последние годы из-за необходимости разработки методов патогенетической коррекции развивающихся повреждений тканей и органов. Наиболее остро эта проблема стоит у хирургических больных, поскольку интоксикация влияет на показания к оперативному вмешательству и значительно отягощает течение послеоперационного периода [Мишнёв О.Д. с соавт., 2003, 2005].
Среди конечных продуктов метаболизма, участвующих в развитии эндотоксикоза, выделяют аммиак, билирубин, желчные кислоты, остаточный азот, мочевину, креатинин [Мишнёв О.Д. с соавт., 2001], то есть вещества, выводимые через почки.
Одно из центральных мест в структуре любой эндогенной интоксикации отводится микробному фактору. Анализ взаимосвязи бактериальных токсинов с другими биологически активными веществами выявил факт способности первых отдельных участков этих молекул имитировать структуры субъединиц гормонов, нейромедиаторов, ферментов, при этом являясь в какой-то степени их антиметаболитами. Основная роль в этом явлении в последнее время отводится микробным эндотоксинам, являющимися состав ными компонентами наружного слоя цитоплазматических мембран грамот-рицательных бактерий, образующимся после гибели последних и попадающие во внутренние среды организма вследствие генерализованной эндоток-синемии.
Благодаря многочисленным исследованиям было установлено, что эти эндотоксины представляют собой сложный молекулярный комплекс, обозначаемый в микробиологии как О-антиген, который содержит биологически активный химически неоднородный липополисахаридныи комплекс (ЛПС) и белково-фосфолипидную часть.
Основным носителем биологической активности ЛПС является липид А, так как установлено, что в изолированном виде он воспроизводит те же свойства, что и в комплексе с другими компонентами [Мишнёв О.Д. с со-авт., 2001]. Таким образом, системные эффекты» ЛПС, требующие участия липида А, включают в себя: активацию комплемента, стимуляцию гуморальной системы гемостаза, связывание с мембраной тромбоцитов, макрофагов и других клеток, а также развитие вторичных реакций, включающих межклеточную агрегацию, высвобождение интерлейкинов, хемоаттрактан-тов, ростовых факторов, регуляторов апоптоза [Богомолова Н.В., 2005; Сидоренко СВ. с соавт., 2003].
Также необходимо подчеркнуть доминирующее значение системной эндотоксинемии в развитии наиболее неблагоприятной, максимально концентрированной- формы, бактериального эндотоксикоза — инфекционно-токсического (бактериального) шока. Летальность при шоке бактериального происхождениязначительно выше, чем при других его разновидностях и колеблется в пределах 40-90%. Важно подчеркнуть, что1 развитие бактериально-токсического шока возможно у любого больного с гнойно-воспалительными процессами, особенно при сепсисе и воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей.
В то же время, на основании современных представлений, системная эндотоксинемия не может считаться явлением исключительно патологическим, поскольку поверхность кожи, слизистых дыхательных путей, глаз, мочеполовой системы, всего кишечника и в физиологических условиях представляет собой естественный резервуар грамотрицательной сапрофитной флоры и перманентный источник образования эндотоксинов в результате самообновления микробного пула (особенно Е. Coli), а также частично выделяющихся токсинов живыми микроорганизмами [Мишнёв О:Д. соавт., 2003.; Яковлев М.Ю., 2005.; Опарина О.Н. с соавт., 2005]. При значительном увеличении плазменной концентрации эндотоксина на фоне угнетения антиэндотоксинового иммунитета развивается эндотоксиновая агрессия.
Кроме того, из уропатогенных E.coli выделен специфический секреторный токсин, который за счет повреждения мембранных транспортеров канальцевого эпителия способен вызывать его массивную вакуолизацию как в культуре клеток, так и в экспериментах in vivo [Guyer D.M., et al., 2002].
В последнее время в инициализации внутриклеточных изменений на самых начальных стадиях патологии почечного эпителия все большее значения придается нарушением лизосомального контроля внутриклеточного захвата и переноса белков, в том числе и внутриклеточных сигнальных молекул [Futerman А.Н., van Meer G., 2004; Luzio J.P. et al., 2007]. Именно нарушения лизосомального транспорта и сортировки молекул приводит к аккумуляции активаторов вблизи проферментов лизосом и запуску процесса внутриклеточной вакуолизации [de Duve С, 2005; van Meel Е., Klumperman J., 2008].
При воздействии эндотоксина на патологический процесс имеет место вовлечение мочевыделительная система, при этом повреждение почек является обязательным компонентом эндотоксикоза. Существует множество данных, свидетельствующих о том, что основная роль по выведению ЛПС из крови принадлежит почкам, причем после введения ЛПС моча животных приобретает пирогенные свойства [Мишнёв О.Д. с соавт., 2003; Но-вочадов В.В. с соавт., 2005].
Основные аспекты повреждения почек при эндогенной интоксикации заключаются в нарушении микроциркуляции с дальнейшем повреждением гломерулярного и канальцевого аппарата. Эндотоксин может оказывать прямое влияние на почки как суперантиген [Новочадов В.В. с соавт., 2005]. На мембранах клеток мезангия почечных клубочков присутствует большое количество рецепторов к IgG, связывание с которыми приводит к иммуно-комплексному повреждению гломерулярного аппарата, что по своему механизму сопоставимо с действием моноклональных антител к основной мембране клубочковых капилляров, и может быть описана как острая тром-ботическая гломерулопатия [Jean-Philippe Н., et al., 2004]. При её развитии большую роль играет инициация отложения фибрина на базальной мембране, неуправляемая агрегация тромбоцитов и сладж-образование в капиллярах клубочков.
Из вышесказанного можно сделать вывод о том, что на фоне обструк-тивных уропатий вовлечение в процесс эндогенных токсических соединений способно вызвать более тяжелые морфофункциональные последствия для организма по причине усугубления тяжести эндогенной интоксикации за счет повреждения почки как основного эндотоксин-элиминирующего органа. Исходная функциональная неполноценность почки при этом может также играть негативную роль, так как даже относительно небольшое повреждение органа может приводит к его тяжелой функциональной недостаточности.
Гистологические методы исследования
Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, по ван Гизону, по методу Массона [Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996]. После фиксации осуществляли вырезку материала в виде фрагментов размерами 1,0x1,0x1,0 см. В дальнейшем фрагменты проводили по общепринятой гистологической методике через батарею спиртов возрастающей концентрации, хлороформ и заливали в парафин. На санном микротоме изготавливали срезы толщиной 6-7 мкм [Коржевский Д.Э., 2005].
Гистологическая окраска срезов проводилась с использованием гематоксилин Гарриса (5г кристаллического гематоксилина в 50 мл 96% спирта смешать в 10% растворе аллюмоамонийных квасцов, затем к 100мл полученного раствора добавить 60 мл глицерина и 2,5 мл воды). После ополаскивания в дистиллированной воде срез помещают в гематоксилин на 2-5 минут, затем вновь ополаскивают в дистиллированной воде. Далее стекло со срезом для дифференцировки окраски погружают в солянокислый спирт, потом на 5-10 минут в проточную воду, затем ополаскивают в дистиллированной воде. Эозином препарат красится 1 минуту, далее стекло погружали в 96%, а затем в карбол-ксилол. Срезы покрывались покровными стеклами с канадским бальзамом [Микроскопическая техника, 1996г.].
Срезы, окрашиваемые по ван Гизону, погружали на 5-7 минут в проточную воду, затем на 3-5 минут в железный гематоксилин Вейгерта, а после чего прополаскивали в 2-3 порциях проточной воды. Далее срезы окрашивались в течение 2-5 минут в пикрофуксине (1% кислого фуксина и водный раствор пикриновой кислоты в соотношении 1 к 10). Затем препараты промывали в проточной воде, после чего обезвоживали в спиртах восходящей концентрации, просветляли в карбол-ксилоле и ксилоле и заключали под покровное стекло в канадском бальзаме.
При проведении окраски по методу Массона использовали железный гематоксилин эозин Вейгерта, с последующей дифференцировкой соляно-кислым спиртом. После промывки водой окрашивали в красящем растворе, содержащем 0,5 г кислого фуксина, 0,5 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл дистиллированной воды. Ополаскивали дистиллированной водой, затем протравливали (до обесцвечивания соединительной ткани) 1% раствором фосфорномолибденовой кислотой. Далее окрашивали анилиновым1 синим (2 г анилиного синего растворяют в 100 мл дистиллированной воды, добавляя 2,5 мл ледяной уксусной кислоты). Затем препарат промывали в проточной воде, после чего дифференцировали 1% раствором уксусной кислоты, просветляли и заключали под покровное стекло в канадском бальзаме.
Для визуализации базальных мембран импрегнировали срезы азотнокислым серебром по Футу. При проведении данной методики помещали срезы в 0,25 % водный раствор перманганата калия, ополаскивали водой, выдерживали в 5% щавелевой кислоты до побеления срезов. Проводили предимпрегнацию 10% раствором нитрата серебра, а затем ипрегнацию свежим раствором нитрата серебра до потемнения срезов. Затем восстанавливали серебро, помещая срезы в 5% нейтральный формалин. После чего помещали срезы в 5% раствор тиосульфата натрия. Просветляли, заключали срезы.
Производили гистохимическую ШИК-реакцию в модификации McManus для выявления углеводных соединений и визуализации базальных мембран [Хонин Г.А. с соавт., 2004]. Для этого подготовленные парафиновые срезы помещали в дистиллированную воду. Затем обрабатывали их в 0,5 % водном растворе йодной кислоты в течении 3-5 минут. Промывали в дистиллированной воде 5-15 минут. Переносили в реактив Шиффа на 10-15 минут. Промывали в повторно сменяемой водопроводной воде 10-15 минут. Подкрашивали гематоксилином Бемера. Промывали в водопроводной воде 10-15 минут, проводили через спирты, ксилол и заключали в бальзам. 2.3. Электронно-микроскопическое исследование
Для электронно-микроскопического исследования фиксацию кусочков почек размером 1 ммЗ производили в течение 12 часов в 4% растворе параформа на ОДМ какодилатном буфере с последующей постфиксацией в течение 2 часов в 1% растворе тетраокиси осмия на ОДМ какодилатном буфере (рН=7,4) при температуре +4оС (Уикли Б., 1975; Nasser Hajibagheru М.А., 1999). После промывки в нескольких порциях раствора какодилатно-го буфера материал подвергали дегидратации в спиртах возрастающей концентрации и заливали в смесь эпона и аралдита.
Ультратонкие срезы толщиной 50-90 нм получали на ультрамикротоме LKB - 8800. Полутонкие эпон-аралдитовые срезы толщиной» 1 мкм окрашивали метиленовой синью. Ультратонкие срезы монтировали на медные сетки. После контрастирования в 2,5% растворе уранилацетата на 50о этаноле в течение 40 минут и 0,3% растворе цитрата свинца в течение 20 минут (Reynolds E.S., 1963) срезы изучались в электронных микроскопах JEM-100S и Tesla BS-540 при ускоряющем напряжении 60 кВ. Фотодокументирование производили с использованием фотопластинок «Для ядерных исследований». Электронные микрофотограммы изготавливали на фотографической черно-белой бумаге «Унибром 160 БП» и «Kodak».
Морфологическая характеристика почек крыс при окклюзии мочевыводящих путей
При морфологическом исследовании крыс при моделировании окклюзии мочевыводящих путей в мочевом пузыре обнаруживались от одного до шести искусственных конкрементов шаровидной или овоидной формы диаметром от 2 до 8 мм (рис. 11). Объем мочевого пузыря в большинстве случаев был увеличен, сопровождающийся истончением его стенок.
При варьирующей обструкции мочевыводящих путей в почках экспериментальных животных нами обнаружено расширение чашечно лоханочной системы, полиморфно-нуклеарная инфильтрация соединительно-тканной, слизистой оболочки почечных чашечек. Дистрофические изменения в собирательных трубочках в соответствующие сроки эксперимента были более выражены, чем в дистальных канальцах и характеризовались признаками набухания и гидропической дистрофии. Кроме того, в части эпителиоцитов определялись признаки необратимых изменений. В поздние сроки эксперимента в сосудах микроциркуляторного русла в мозговом веществе обнаруживались гиалиновые тромбы.
Наиболее выраженные изменения наблюдались в дистальных канальцах нефронов, определяемые на светооптическом уровне в виде нарастающих дистрофических и атрофических изменений в эпителиальных клетках, начиная с 14 суток и достигая максимума на 30-е сутки опыта. Отмечено нарушение полярности эпителиоцитов, расширение просвета канальцев, появление слущенных эпителиоцитов в просвете. Уже на 21 сутки эксперимента отмечалось очаговое увеличение объемной плотности соединительной ткани (рис. 12). К 30 суткам эксперимента наблюдались изменения тинкториальных свойств цитоплазмы эпителиоцитов, усиление ацидофилии, набухание клеток и признаки гидропической дистрофии. В отдельных дистальных канальцах ядра были смещены к люминальному полюсу клеток. В других дистальных канальцах отмечено уплощение эпителиоцитов и их ядер, которые располагались в широкой части клетки, выступающей в просвет канальца (рис. 13). Встречались уменьшенные в размерах эпителиоци-ты с пикнотически измененными ядрами. Вышеописанные обратимые и необратимые изменения были наиболее выражены в корковом веществе почек в сочетании с резким расширение просвета канальцев, что свидетельствует о нарушении процессов реабсорбции [Тареева И.Е., Кухтевич А.В., 2000; Бекер Дж.Г., 2007].
При морфометрическом исследовании дистальных канальцев при варьирующей обструкции мочевыводящих путей были выявлены наиболее выраженные изменения наружного и внутреннего диаметров канальцев которые увеличивались в 1,6 раза (Р 0,001) и в 4,4 раза (Р 0,001) на 30 сутки, соответственно, по сравнению с контролем. Кроме того, отмечено снижение площади эпителиоцитов и площади их ядер на срезе, достигающее максимальных различий с контролем на 4,8 % и 33,7 % (Р 0,05) на 30 сутки эксперимента, соответственно .
В тонких канальцах отмечено постепенное усиление признаков гид-ропической дистрофии по мере увеличения сроков эксперимента. Цитоплазма части эпителиальных клеток имела оптически пустой вид с набухшими уплощенными ядрами (рис. 15). В некоторых клетках отмечены пик-нотические изменения ядер на фоне резко выраженного расширения просвета канальцев. Отмечено расширение просвета канальцев, а также наличие в их просвете гиалиноподобных эозинофильных масс. В интерстиции обнаруживались признаки нарушений кровообращения в виде очагового полнокровия в перитубулярных капиллярах. Отмечалось очаговое увеличение объемной плотности соединительной ткани в мозговом веществе (рис. 12), хотя при морфометрическом исследовании этот параметр достигал значимых различий с контролем только к 30 суткам эксперимента (табл. 5), возрастая до 17,39±2,80 % (Р 0,05) по сравнению с контролем (7,83±0,71%). Наружный диаметр тонких канальцев незначительно увеличивался к 30-м суткам опыта и составил 12,3±1,15 мкм, что на 6,5% больше контрольных значений. Внутренний диаметр тоже незначительно увеличивался, достигая к 30-м суткам экспериментального воздействия 5,75±0,82 мкм. Высота эпи-телиоцитов постепенно уменьшалась, достигая значимых различий по сравнению с контролем на 30-е сутки эксперимента на 33,3%, и составляла 2,50±0,26 мкм (Р 0,05). Канальцевый индекс постепенно снижался до 0,515±0,089, достоверных различий с контролем не наблюдалось. Площадь ядер эпителиоцитов тонких канальцев на срезе снижалась до 17,7±1,6 мкм2 к 30-м суткам опыта, что на 25% ниже, чем в контроле (Р 0,05).
ШИК-реакция. Ув. х400. В проксимальных канальцах нефрона на светооптическом уровне отмечались менее выраженные изменения тинкториальных свойств цитоплазмы по сравнению с дистальными канальцами. Появлялись признаки карио-лизиса, гомогенизации цитоплазмы, фрагментации апикальных частей отдельных клеток с появлением их фрагментом в просвете канальцев (рис. 16). В некоторых случаях встречались резко гипертрофированные ядра эпителиоцитов с несколькими ядрышками (рис. 13). Признаки набухания и гидропической дистрофии нарастали по мере увеличения сроков эксперимента.
В течение всего периода экспериментального исследования происходило прогрессивное увеличение наружного и внутреннего диаметров проксимальных канальцев, которое было наиболее выражено на 30 сутки опыта на 14,1 % (Р 0,05) и 44,2 % (Р 0,01), соответственно, по сравнению с контролем. Кроме того, отмечено снижение площади эпителиоцитов и площади их цитоплазмы на срезе, достигающее максимальных различий с контролем на 16,11 % (Р 0,05) и 18,0 % (Р 0,05) на 30 сутки эксперимента, соответственно (табл. 3). В результате этого происходило прогрессивное снижение канальцевого индекса (рис. 17), рассчитанного как отношение толщины стенки канальца к диаметру его просвета, достигающее к 30-м суткам 44,2% (Р 0,05).
Таким образом, при обструктивной уропатии на модели окклюзии мочевыводящих путей обнаружены морфологические признаки повреждения различных отделов канальцевого аппарата нефронов. По нашему мнению, структурные изменения эпителия канальцев связаны с повреждением паренхимы почек вследствие нарушения оттока мочи и последующего Рис. 17. Изменение величины канальцевого индекса (проксимальный каналец) при варьирующей обструкции мочевыводящих путей.
При количественном морфологическом исследовании обнаружено прогрессирующее уменьшения среднего объема клубочков капилляров почек с максимальным снижением данного параметра к 30-м суткам эксперимента на 11,8% (Р 0,05) по сравнению с контролем (табл. 4). В то время отмечено постепенное увеличение объема полости капсулы клубочка, которое достигает значимых различий с контролем на 21 сутки эксперимента, увеличиваясь в 2,01 раза (Р 0,05), а на 30 сутки - в 2,2 раза (Р 0,001).
При электронно-микроскопическом исследовании почечных телец при варьирующей обструкции мочевыводящих путей в эндотелиоцитах кровеносных капилляров выявлено уменьшение количества пиноцитозных везикул, кавеол, а также очаговое снижение числа фенестр на 21 сутки опыта (рис. 18). К 30-м суткам обнаружены утолщенные участки эндотелиоци-тов, лишенные фенестр, что свидетельствует о нарушении фильтрационной функции. В части капилляров обнаружены признаки сладжа, в других отмечена адгезия лимфоцитов к стенке капилляра. В.этих участках, лишенных базальной мембраны, цитоплазма эндотелиоцитов была резко истонченной.
