Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы
1.1. Морфология органов иммунной и эндокринной систем белых крыс в онтогенезе 10
1.2. Эмбриотоксический эффект и тератогенное действие лекарственных препаратов и химических веществ 23
1.2.1. Этиология и частота врожденных пороков развития 23
1.2.2. Влияние лекарственных препаратов и химических веществ наэмбрио- и фетогенез 27
1.3. Воздействие внутренних факторов на репродуктивную функциюкрыс и физическое развитие плодов 33
1.4. Взаимодействие гуминовых соединений различного происхождения с макро- и микроорганизмами 39
1.4.1. Роль гуминовых соединений в биосфере, современные представления о молекулярном строении гуминовых кислот 39
1.4.2. Влияние препаратов, созданных на основе гуминовых соединений, на живые организмы 44
Глава II. Материалы и методы исследования 51
1 2.1. Характеристика групп исследования 51
2.2. Методика проведения эксперимента и морфологические методы исследования 51
2.3. Методы оценки тератогенного, эмбриотоксического эффектов и физического развития потомства белых крыс 56
2.4. Препарат на основе торфяных гумусовых кислот и химические методы исследования 59
Глава III. Морфология тимуса, селезенки и надпочечников беременных самок и плодов, развивающихся в физиологических условиях 60
3.1. Структура тимуса и селезенки половозрелых экспериментальных животных контрольной группы 60
3.2. Морфология надпочечников самок крыс контрольной группы 77
3.3. Структура тимуса и селезенки плодов от самок с физиологически протекающей беременностью 82
3.4. Морфология надпочечников плодов контрольной группы 94
Глава IV. Морфологические перестройки в тимусе, селезенке и надпочечниках крыс под влиянием гуминовых соединений, экстрагированных из торфа 100
4.1. Структурные особенности тимуса и селезенки самок крыс, получавших гуминовые соединения 100
4.2. Морфология надпочечных желез самок крыс, получавших гуминовые соединения 110
4.3. Особенности структуры тимуса и селезенки плодов от самок, получавших гуминовые соединения 114
4.4. Морфология надпочечных желез плодов от самок, получавших гуминовые кислоты 125
Глава V. Оценка эмбриотоксичности и тератогенной активности гуминовых соединений 131
Глава VI. Особенности физического развития I и II поколений потом ства экспериментальных животных 133
Глава VII. Обсуждение полученных результатов 138
Заключение 150
Выводы 151
Список литературы
- Эмбриотоксический эффект и тератогенное действие лекарственных препаратов и химических веществ
- Методы оценки тератогенного, эмбриотоксического эффектов и физического развития потомства белых крыс
- Структура тимуса и селезенки плодов от самок с физиологически протекающей беременностью
- Особенности структуры тимуса и селезенки плодов от самок, получавших гуминовые соединения
Введение к работе
Проблема антенатальной охраны здоровья потомства на фоне снижения демографических показателей, уровня здоровья и высокой перинатальной летальности в последние годы приобретает особую актуальность. Следует учесть увеличившееся число внешних факторов, отрицательно воздействующих на развивающийся плод, в первую очередь это фармпрепараты. Общеизвестно, что наиболее чувствителен к влиянию неблагоприятных факторов развивающийся организм в антенатальном периоде онтогенеза [123]. Даже относительно слабые воздействия негативных факторов, не вызывающие структурных изменений в органах на эмбриональном этапе развития приводят к длительным, а порой и постоянным нарушениям нейроэндокринных и нейрохимических механизмов регуляции [62, 63].
Поскольку позитивный исход беременности и здоровье новорожденного в значительной степени определяется течением пренатального периода, существует необходимость дальнейшей разработки способов профилактики и лечения перинатальной патологии, в том числе и таких наиболее часто встречающихся состояний как гипоксия и гипотрофия плода. Выше обозначенная медицинская проблема не только расширяет круг специалистов, участвующих в совершенствовании известных и используемых методов терапии, но и побуждает осуществлять поиск новых методов.
Некоторые исследователи [68], занятые решением актуальной проблемы медицины, относят к наиболее перспективным нетрадиционные методы профилактики и лечения, аргументируя тем, что применение лекарственных препаратов на фоне изменения иммунного статуса сопровождается развитием аллергических реакций у матери и оказывает эмбриотоксическое и тератогенное влияние на плод.
В настоящее время большой научный интерес представляет не только поиск новых биологически активных веществ, но и изучение их патогенетических механизмов, позитивно влияющих на систему "мать-плацента-плод".
Апробация таких природных препаратов на беременных животных позволила бы изучить и обосновать некоторые механизмы их влияния на рост и формирование органов у плодов, что в последующем помогло обосновать применение препаратов с целью профилактики заболеваемости новорожденных и получения более здорового потомства. К таким новым веществам, из подаренных цивилизации природой, можно отнести гуминовые соединения.
По химической природе гумусовые вещества представляют собой нерегулярные сополимеры ароматических поликарбоновых кислот с включением азотсодержащих и углеводных фрагментов, содержащие карбоксильные, гидрокснльные, карбонильные функциональные группировки. Молекулярное строение обусловливает высокую активность гумусовых соединений. В последние годы особый интерес у исследователей во всем мире вызывает их ярко выраженная биологическая активность, которая зависит, главным образом, от вида исходного сырья и технологии выделения гумусовых веществ. Наиболее высокой биологической активностью отличаются торфяные гумусовые соединения.
В ряде литературных источников приводятся результаты влияния гу-миновых соединений на живые организмы, относящиеся к различным таксономическим группам. Так, в частности, получены данные, указывающие на уменьшение мутагенности по отношению к штаммам Salmonella typhimunum в присутствии гуминовых кислот, обладающих метаболической активностью [176, 188]. Экспериментально доказана активизация обменных процессов в организме лабораторных животных за счет изменения функционального состояния клеточных и субклеточных мембран. В экспериментах на растениях и животных выявлен ряд жизненноважных и необходимых свойств гуминовых кислот, таких как хлорпоглощающая способность, бактерицидные и фунгицидные свойства [165, 172], антиоксидантная активность [168], ком-плексообразовательная способность по отношению к таким солям тяжелых металлов как медь, кадмий, свинец [177, 180], иммуномудулирующие свойства [145, 189, 140, 141]. Исследованиями J.Woyton et al. (1995) in vivo дока-
6 зано стимулирующее влияние гуминовых кислот на регенерационные процессы эпителиальной ткани в шейке матки при ее повреждении.
Таким образом, несмотря на полученные в последние годы результаты позитивного воздействия гуминовых соединений на макроорганнзм, остаются неизученными влияние гуминовых кислот на физическое развитие плодов и потомства, на структуру органов основных систем матери и плода; в публикациях отсутствуют сведения об эмбриотоксичности и тератогенности гуминовых соединений. Все сформулированные задачи актуальны, поскольку прогрессирующее снижение деторождения и демографических показателей, увеличение антенатальной смертности, перинатальной патологии и заболеваемости новорожденных, как и увеличение числа врожденных пороков развития, напрямую связанных с методами профилактики нарушений в системе «мать-плацента-плод» различными лекарственными формами. С учетом актуальности темы и практической необходимости с целью получения новых теоретических знаний проведено настоящее исследование.
Цель исследования.
Изучить морфологические изменения в тимусе, селезенке и надпочечниках беременных крыс и их потомства и оценить влияние гуминовых соединений, экстрагированных из торфа, на физическое развитие крысят в динамике.
Задачи исследования:
Выявить морфологические изменения в тимусе, селезенке и надпочечниках у самок и плодов крыс, получавших гуминовые соединения.
Оценить эмбриотоксичность и тератогенную активность изучаемых соединений.
Проследить в динамике с момента рождения до периода половозре-лости влияние гуминовых соединений на физическое развитие первого и второго поколений потомства крыс.
Научная новизна исследования
Впервые у беременных самок крыс, получавших гуминовые соединения, в тимусе выявлены гипертрофия коркового вещества с увеличением корково-мозгового индекса, увеличение удельной доли сосудистого компонента в органе и количества дифференцированных лимфоцитов в корковом и мозговом веществе. В селезенке самок под влиянием данных соединений происходит гиперплазия В-зон, в надпочечниках - увеличение удельной доли сосудов н функциональной активности спонгиоцитов всех зон. У потомства от самок, получавших изучаемые соединения, выявлено ускорение диффе-ренцировки лимфоцитов в тимусе, активация гемопоэза и усиление митоти-ческой активности клеток в селезенке, увеличение удельной доли сосудов в надпочечниках.
Впервые установлено, что гуминовые соединения в дозе 10 мг/кг веса не оказывают эмбриотоксического и тератогенного действия.
Впервые в динамике выявлено опережающее физическое развитие I и II поколений потомства крыс, получавших гуминовые соединения.
Научно-практическая значимость исследования
Выявленные морфологические изменения в органах иммунной и эндокринной систем у самок крыс и их плодов позволяют обосновать необходимость проведения дальнейших экспериментальных исследований по применению гумнновых соединений с целью коррекции перинатальной патологии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. В центральном органе иммуногенеза самок и плодов крыс под влиянием гуминовых соединений происходит стимуляция пролиферации и диф-ференцировки лимфоцитов, в селезенке самок - гиперплазия В-зон, в селезенке плодов - активация гемопоэза.
В тимусе, селезенке и надпочечниках самок и плодов крыс под влиянием изучаемых соединений происходит увеличение удельной доли сосудистого компонента.
Гуминовые соединения в дозе 10 мг/кг массы тела не обладают эм-бриотоксичностыо и не оказывают тератогенного действия на потомство крыс.
Апробация диссертационного материала;
Основные положения работы доложены и обсуждены на научных конференциях молодых ученых ГУ ИвИИИ МиД (Иваново, 2002-2004), Республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы лабораторной и функциональной диагностики в акушерстве, гинекологии и пери-натологии» (Иваново, 2002), Республиканской конференции «Новые медико-социальные и медико-организационные технологии охраны здоровья семьи» (Иваново, 2002), Всероссийской конференции «Молодые ученые - медицине» (Самара, 2003), конференции «Актуальные проблемы клинической патологии», посвященной 100-летию со дня рождения профессора П.П.Ерофеева и 70-летию кафедры патологической анатомии ГОУ ВПО "ИвГМА" МЗ РФ (Иваново, 2003), Всероссийской научной конференции «Молодые женщины в науке» (Иваново, 2004), научной конференции «Молодая наука - развитию Ивановской области» (Иваново, 2005), V Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2005), межлабораторной конференции ГУ НИИ морфологии человека РАМН (Москва, март 2006).
Получена серебряная медаль на VII Международном салоне промышленной собственности «Архимед-2004» в разделе медицина и бронзовая медаль на V Московском международном салоне инноваций и инвестиций за разработку «Новые препараты из торфа» (2005 г.).
Работа выполнялась при поддержке гранта РФФИ № 05-04-96405 и гранта Президента РФ НШ-2245.2003.4.
Публикация результатов исследования.
По результатам диссертационного исследования опубликовано 9 работ, из них в журналах, рецензируемых ВАК - 1.
Структур» и объем диссертации.
Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 16 таблицами, 4 графиками, 25 рисунками и фотографиями. Библиографический указатель содержит 120 отечественных и 70 иностранных источников.
Эмбриотоксический эффект и тератогенное действие лекарственных препаратов и химических веществ
Врожденные пороки развития занимают одно из первых мест в структуре детской заболеваемости, инвалидности и смертности [44]. Показатели популя-ционной частоты в отдельных странах колеблется от 2,7 до 16,3%. По данным ВОЗ более 1% новорожденных имеют пороки развития различных органов, а ранняя детская смертность на 20% обусловлена тератогенной патологией. Результаты анализа частоты врожденных пороков свидетельствуют о прогрессивном увеличении частоты рождения детей с указанной патологией, особенно значительном за последние 30 лет [45].
Большая часть пороков, особенно тканевых или "малых", клинически не проявляется, либо проявляется в пубертатном периоде. Пороки с выраженными отклонениями в строении органов, вызывающие сразу после рождения явные нарушения функций, встречаются в 2-3%. Этот процент существенно увеличится, если учесть ранние и поздние отдаленные последствия пороков, количество самопроизвольных выкидышей с несовместимыми с жизнью пороками развития, а также число индуцированных прерываний беременности до 27 недель гестации, медицинским показанием для которых являются чаще множественные, сочетанные или комбинированные пороки. Следует отметить, что многие пороки органов чувств, эндокринных желез диагностируются спустя несколько месяцев (адентия) или лет (пороки развития органов репродуктивной системы) после рождения. Поэтому фактическая частота врожденных пороков очень высока. По данным различных авторов частота выявляемых пороков колеблется от 7 до 10% [7]. Один из ведущих специалистов в области тератологии А.П. Дыбан (1990) полагает [41], что в основе снижения умственных способностей, жизнеспособности организма, плохой приспособляемости к окружающим условиям, предрасположенности ко многим заболеваниям зачастую лежат пороки развития. Внутриутробная гибель зародыша особенно на стадиях морулы и в эмбриональном периоде, когда гибнет большая часть продуктов зачатия, в значительной степени обусловлена генными и хромосомными аберрациями.
Врожденные пороки развития могут быть следствием мутаций, результатом воздействия тератогенов либо следствием сочетания указанных факторов. Под тератогенными факторами понимают такие факторы, которые действуя на плод в период беременности приводят к формированию у него пороков развития, не вызывая при этом нарушений наследственных структур. К тератогепам относят физические (радиация, рентген-лучи, гипотермия и т.д.), химические и биолопіческне факторы. Химические тератогены целесообразно разделять на несколько групп, выделив среди них сильные и слабые. Сильные тератогены вызывают уродства как у животных, так и у человека. Слабые химические тератогены обладают потенциальной способностью вызывать уродства. Эти способности реализуются в жизни лишь при стечении многих неблагоприятных факторов.
К сильным тератогепам относят противоопухолевые препараты и половые гормоны. Препараты группы салициловой кислоты в больших дозах также вызывают уродства не только у крыс, мышей, но и у обезьян [7, 41]. Многие фармпрепараты не проявляют своей активности при исследовании их на здоровых животных (жаропонижающие, противокашлевые, противосудорожные препараты). Мнения о механизмах действия различных химических факторов неоднозначны. Большое значение имеет доза того или иного химического вещества. Установлено, что тератогенная доза не всегда соответствует токсической [44]. У ряда тератогенов, например талидомида, тератогенная доза значительно ниже токсической и совпадает с терапевтической, однако она всегда ниже летальной. Для многих тератогенов очень важен характер введения: неоднократно и дробными дозами, или однократно, когда за короткое время объектом получена "ударная" доза препарата. Известно [41], что длительное применение малых доз кортизона оказывает больший тератогенный эффект, чем однократное введение большой дозы.
Тератогенная активность экзо- и эндогенных факторов различна. Она зависит от специфичности агента, дозы, времени действия в эмбриогенезе, генотипов матери н плода, а также от сочетания с какими-то другими внешними воздействиями. Следует отметить, что один и тот же порок развития может быть результатом действия разных тератогенов, при этом характер изменений напрямую зависит от того, на какой стадии развития зародыша воздействовал тот или иной патогенный фактор. Большая часть лекарственных препаратов даже в очень больших дозах не вызывают уродств, то есть не обладают тератогенным действием.
Лучшей моделью для изучения тератогенной активности многих химических веществ являются лабораторные крысы. Этому факту существует ряд объяснений. Во-первых, у крыс и человека - одинаковый тип плаценты - гемохори-альный. Плацента различных млекопитающих имеет отличительные признаки, она различается по форме, расположению и взаимосвязям ворсинок хориона со слизистой оболочкой матки. Во-вторых, у крыс редко возникают спонтанные аномалии, которые могли бы затруднить оценку экспериментального эмбриогенеза. С другой стороны - ограничиваться испытанием разрабатываемых веществ только на одном виде животных опрометчиво, поскольку крысы обладают относительно высокой устойчивостью ко многим химическим агентам. Поэтому существует негласное правило экспериментаторов - если на зародышах крыс получен отрицательный результат, второй этап тестирования проводят на мышах - чувствительность их эмбрионов к ряду тератогенов выше, чем у эмбрионов крыс. При получении повторного отрицательного результата используют беременных крольчих. По мнению А.П.Кирющенкова, М.Л.Тараховского (1990), если тератогенные свойства испытуемого препарата обнаружены при проведении экспериментов на крысах, то дальнейшие испытания препарата на других видах животных можно не проводить.
Методы оценки тератогенного, эмбриотоксического эффектов и физического развития потомства белых крыс
На 21 день беременности, за день до предполагаемых родов, проводили эвтаназию 10 животных из каждой группы с помощью этаминал-натрия в дозе 60 мг/кг. Затем осуществляли аутопсию самок и плодов контрольной и основной групп.
Забор надпочечников у самок крыс осуществлялся после удаления рогов матки с плодами. Часть животных (по 4 самки из каждой группы) рожали самостоятельно. У самок оценивали продолжительность беременности, количество потомства, среднюю плодовитость, а также физическое развитие новорожденных крысят. Крысята 2 группы на протяжении всего периода наблюдения получали с питьевой водой препарат на основе гуминовых соединений в дозе 10 мг/кг веса.
У самок и извлеченных плодов определяли основные параметры физического развития (массу тела, длину тела, длину хвоста). Массу тела оценивали путем взвешивания на аптечных весах "Chirana", линейные размеры - с помощью измерительной линейки. Осуществляли органометрию тимуса, селезенки и надпочечников. У беременных самок крыс оценивали массу и линейные размеры органов, а у плодов - массу. Массу органов определяли путем взвешивания на электронных весах с точностью до 1 мг, линейные размеры - с помощью измерительной линейки с ценой деления 1 мм. Объем надпочечника вычисляли по методу Nowak М. (1989), исходя из его массы и коэффициента плотности - 1,039. V=M k, где М -масса надпочечника, к- коэффициент плотности.
Макроскопическое описание исследуемых органов проводили после освобождения их от сгустков крови в среде 199 или растворе Хенкса. При визуальном исследовании изучаемых органов целенаправленно искали пороки развития. Кроме этого оценивали целостность капсулы, изменения массы, формы, цвета, рельефа органов.
Для изучения исследуемых органов самок крыс и плодов на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях использовали обзорные методы (окраска гематоксилином и эозином, по ван Гизону, по Маллори), морфометрию (по модифицированной методике Г.Г.Автандилова [2] и с помощью автоматизированной программы Видео-ТесТ Мастер «Морфология 4.0»), элективные методы (выявление ДНК по методу Фельгена-Россенбека и РНК по методу Браше с соответствующими контролями) в сочетании с трансмиссионной электронной микроскопией.
В связи с исключительно важной биологической ролью нуклеиновых кислот - дезоксирибонуклеиновой (ДНК) и рибонуклеиновой (РНК) - в синтезе белков определяли их содержание и распределение в клетках изучаемых органов. Для ДНК контролем служили препараты, гидролизированные 0,1 Н соляной кислотой. Методом Браше выявлялась ядерная и цитоплазматиче-ская РНК. Последний метод основан на применении в качестве основных красителей метилового зеленого и пиронина G, при этом структуры, содержащие РНК в ядре и цитоплазме, окрашиваются пиронином. Контрольные срезы до окраски инкубировали в течение 3-6 часов в 5% растворе трихло руксусной кислоты при комнатной температуре, из срезов экстрагируется ба-зофильный материал, который следует считать рибонуклеиновой кислотой.
Для выявления различных элементов соединительной ткани (коллаге-новых, ретикулиновых, мышечных волокон) капсулы и септ органов использовали метод окраски по Маллори, при этом коллагеновые и ретикулиновые волокна окрашивались в интенсивно синие, эритроциты и мышечные волокна -ярко-оранжевые, ядра клеток - красные или красно-фиолетовые тона.
Для обзорных и гистологических методик, гистостереометрии и гистохимии материал забирали в 10%-ый нейтральный формалин, фиксаторы Кар-нуа и Буэна [57] не позднее 5-10 минут с момента забора органов. Материал заливали в парафиновые блоки, с которых готовили срезы толщиной 4-5 мкм. Часть срезов окрашивали гематоксилином Эрлиха с докраской эозином, а часть - гематоксилином Вейгерта и пикрофуксином и заключали в канадский бальзам. В дальнейшем препараты использовали для гистостереометрии. Другую часть срезов использовали для гистохимических методик.
Гистологические и гистохимические методики выполняли по прописям, изложенным в руководствах по гистологической технике и гистохимии [18,42,56,57,73].
Гистостереометрию осуществляли на обзорных и полутонких препаратах, окрашенных метиленовым синим в сочетании с азуром II и фуксином основным, с использованием базовой методики Г.Г.Автандилова (1990) и автоматизированной программы «ВидеоТест-Мастер Морфология 4.0». Из морфометрических параметров определяли: удельный объем коркового и мозгового вещества, стромы и внутридольковых сосудов в тимусе; удельный объем красной и белой пульпы, диаметр лимфоидных фолликулов в селезенке; толщину слоев и площадь сосудов в надпочечниках. С помощью методики Г.Г.Автандилова, используя 100-точечную измерительную сетку, в иммунных органах определяли процентное соотношение популяций клеток. Окрашенные гематоксилином и эозином срезы исследовали при увеличении х40 с окулярной сеткой, имеющей вид решетки с шагом равным 0,1 мм.
Структура тимуса и селезенки плодов от самок с физиологически протекающей беременностью
Надпочечники во всех случаях округло-треугольной формы, эластичные по консистенции, окружены соединительнотканной капсулой, ткань на разрезе желтоватого цвета. Средняя масса левой и правой надпочечных желез самок крыс контрольной группы составила соответственно 55,3±5,28 мг и 51,8±4,96 мг (рис. 6), а их объем - 57,46±5,48 мм3 и 53,82±5,15 мм3. Капсула надпочечников тонкая, представлена матриксом и упорядоченно расположенными волокнистыми структурами, синтезируемыми фибробластами. Волокна ориентированы параллельно друг другу. Между волокнами находятся фибробласты с гиперхромными веретенообразными ядрами. Очаговые утолщения капсулы связаны с появлением сосудов среди стромальных компонентов.
Надпочечные железы имеют стереотипную структуру: ворота, куда подходит сосудисто-нервный пучок, корковое и мозговое вещество. Корковое вещество состоит из следующих слоев: клубочкового, пучкового и сетчатого. 70 Масса надпочечников самок крыс в исследуемых группах
Клубочковый слой, расположенный субкапсулярно, неравномерный по толщине за счет сформированных клеточных инвагинатов, проникающих в подлежащие слои. Спонгиоциты клубочкового слоя различны по структуре и функциональному состоянию. Среди клеточного массива можно выделить два типа клеток (рис. 7а). Первые мелкие, расположены группами, в которых насчитывается от 3-4 до 9-10 ядер. Это активные, делящиеся клетки, объединенные единой цитоплазмой. Ядра клеток округлые, умеренно гиперхромные с равномерным распределением хроматина. Между группами клеток находятся мелкие по диаметру капилляры. Второй тип клеток - крупные, округлые по форме, с эозинофильным субстратом или оптически пустой цитоплазмой. Ядра в клетках либо смещены на периферию к плазмолемме, либо, без особой упорядоченности, взвешены в оптически светлой цитоплазме. Электронная плотность ядер различна. Большая часть ядер содержит конденсированный и маргинированныи гетерохроматин, меньшая - эухроматин и чаще одно, реже два ядрышка. Между группами таких клеток расположены фибробласты и мелкие капилляры, выстланные уплощенными эндотелиоци-тами. Комплексы клеток создают картину «клубочков». В просвете капилляров, средняя площадь которых составила 46,2±2,3 мкм", содержатся эритроциты (табл. 8). Толщина коркового слоя составляет 170,83±0,02 мкм (табл. 8). Спонгиоциты пучкового слоя формируют упорядоченные ряды, между которыми располагаются щелевидные капилляры. Клетки этого слоя неправильно-округлой, полигональной формы, превосходят по величине спонгиоциты клубочкового слоя. По функциональному состоянию клетки классифицируются на крупные с сетчатой полупрозрачной эозинофильной цитоплазмой и с вакуолями различной величины, вплоть до гигантских. В спонгиоцитах с гигантскими вакуолями вместо цитоплазмы прослеживается оптическая пустота. Ядра в таких спонгиоцитах оттеснены на периферию, несколько уплощены и содержат больше эухроматина, чем гетерохроматина. Описанный тип клеток мы обозначили как «светлые» (рис. 76). Меньшие по размерам клетки с равномерно окрашенной цитоплазмой и эксцентрично расположенным округлым ядром. В других, более мелких спонгиоцитах, ядра содержат равномерно распределенный гетерохроматин. Форма клеток разнообразная -треугольная, овальная, многоугольная. Ориентируясь на структурную характеристику ядра и цитоплазмы, мы отнесли эти спонгиоциты к «темным» (рис. 76). Между спонгиоцитами локализуются клетки с вытянутыми ядрами, напоминающие фибробласты. Средняя площадь капилляров пучкового слоя со-ставляет57,25±2,1 мкм (табл.8).
Спонгиоциты сетчатого слоя по структуре аналогичны клеткам пучкового. Встречаются вышеописанные два типа клеток, из которых преобладают «светлые». Существенно увеличивается количество синусоидных капилляров. Капилляры умеренно расширены, в их просвете находятся эритроциты. Средняя площадь синусоидов в сетчатом слое составляет 76,7±3,1 мкм (табл. 8).
Мозговое вещество, расположенное в центре органа, занимает значительную площадь. Оно представлено полнокровной венулой, синусоидными капиллярами с гемолизированными эритроцитами, вокруг которых в виде неравномерного клеточного вала располагаются хромаффинные клетки (рис. 7в). Средняя площадь сосудов в мозговом веществе составляет 122,4±8,6 мкм2 (табл. 8). Клетки меньшие по размерам, чем спонгиоциты, с округлыми и овальными гиперхромными ядрами мы отнесли к хромаффинным (рис. 7г).
Толщина коркового слоя, мкм 170,8±0,02 180,5±0,03 Площадь капилляров клубочкового слоя, мкм 46,2±2,3 58,6±2,1 Площадь капилляров пучкового слоя, мкм2 57,25±2,1 75,5±3,0 Площадь капилляров сетчатого слоя, мкм2 76,7±3,1 105,5±3,0 Площадь сосудов мозгового вещества, мкм2 122,4±8,6 244,4±10,7 Достоверность различий между группами 1-2: - р 0,05 - р 0,01 - р 0,001
Существенное количество ДНК выявляется в ядрах фибробластов, расположенных в капсуле, фибробластоподобных клеток и клеток резерва или клеток первого типа клубочковой зоны, а также в ядрах «темных» спонгиоцитов пучково-сетчатой зоны. Содержание ДНК колеблется от умеренного до минимального в ядрах «светлых» спонгиоцитов и функционально активных клеток второго типа клубочкового слоя. ДНК не обнаружена в некробиотически измененных клетках и зонах некроза спонгиоцитов. В контрольных срезах ДНК не содержится.
В существенном количестве РНК определяется в гипертрофированных и гипергранулированных ядрышках «темных» спонгиоцитов пучково-сетчатой зоны, а также в ядрышках первого типа клеток клубочкового слоя. Умеренное количество РНК содержится в ядрышках и цитоплазме «светлых» спонгиоцитов и клетках второго типа клубочковой зоны. В последних, как и в «светлых» спонгиоцитах пучково-сетчатой зоны, ядрышки диссоциированы и сегрегированы. В контрольных срезах РНК не определяется.
Особенности структуры тимуса и селезенки плодов от самок, получавших гуминовые соединения
Надпочечные железы у всех плодов округлой формы, с поверхности белесовато-серого цвета, эластичные по консистенции. Средняя масса левого и правого надпочечников плодов соответствует контрольным и составляет соответственно 2,27±0,10 мг и 2,18±0,09 мг (табл. 13).
Соединительнотканная капсула органа утолщена за счет пролиферации клеток соединительной ткани - фибробластов, гипертрофии коллагеновых волокон, расположенных среди умеренно отечного матрикса. Клетки соединительной ткани располагаются в 5-6 рядов параллельно друг другу. Среди зрелых клеточных элементов встречаются более юные фиброциты.
На поверхности органа, в пределах капсулы, и субкапсулярно из спон-гиоциов формируются дополнительные микродольки. Последние представлены очаговым скоплением пролиферирующнх, функционально активных спонгиоцитов. Клетки содержат пшерхромные ядра округлой, вытянутой, неправильной формы, с инвагинатами кариолеммы. Объем цитоплазмы у клеток минимальный, поэтому ядра расположены максимально близко друг к другу. В клеточном массиве встречаются клетки с вакуолизацией цитоплазмы и лизисом ядер и зоны фокального некроза.
Средняя толщина коркового слоя достоверно меньше параметра контрольной группы и составляет 60,1±0,03 мкм (табл. 13). Клубочковая зона равномерно тонкая на всем протяжении. Дифференцированные спонгиоцнты этой зоны округлые и овальные, с такой же формой ядер, в которых суб-мембранно локализуется гетерохроматин, а в центре - эухроматин (рис. 24а). В незначительном количестве спонгиоцитов в ядрах преобладает эухроматин и увеличивается объем цитоплазмы. Встречаются единичные клетки с крупными или гигантскими вакуолями в цитоплазме.
Подлежащая пучково-сетчатая зона состоит из стереотипных полигональных клеток, которые отличаются по структуре в поверхностных и глубоких слоях (рис. 246). Если поверхностные спонгиоцнты пучкового слоя с компактными, гииерхромными ядрами и неравномерной по окраске цитоплазмой за счет чередования участков уплотнения и просветления, то спонгиоцнты глубоких слоев сетчатой зоны не только с подобными изменениями цитоплазмы, но и с компактными, содержащими больше эухроматина, чем гетерохроматина ядрами.
На фоне более зрелых с высокой функциональной активностью клеток клубочкового слоя увеличивается его васкуляризация, причем капилляры зачастую расширены и полнокровны (рис. 24в). Средняя площадь капилляров превышает показатель группы контроля и составляет 43,4±0,7 мкм (р 0,01; табл. 13). Электронномикроскопически клетки пучково-сетчатой зоны надпочечников плодов обладают округлым, центрально расположенным ядром, содержащим эухроматин (рис. 25а). В цитоплазме содержатся многочисленные рибосомы, липидные капли и митохондрии (рис. 256, в). Последние обладают везикулярными кристами (рис. 25г). Клеточные мембраны спонгиоцитов образуют немногочисленные, но разнообразные по форме, выпячивания.
Уменьшение толщины клубочковой и пучково-сетчатой зон коркового вещества сопровождается ускоренным формированием мозгового, по сравнению с контрольной группой. Пролиферирующие хромаффинные клетки образуют клеточные скопления, количество которых по сравнению с контролем увеличено (рис. 24г). Клеточные ассоциации отличаются разнообразием как по количеству клеток, так и по их локализации. Крупные скопления из 15-60 хромаффинных клеток расположены в центре органа и между спон-гиоцитами глубоких слоев пучково-сетчатой зоны. Мелкие скопления, насчитывающие от 6 до 10 клеток, располагаются не только между спонгиоци-тами пучково-сетчатой, но и достигают границы с клубочковой зоной.
Структура клеток в крупных клеточных скоплениях различна: часть клеток с дистрофическими и некротическими изменениями, другая часть - на разных стадиях митоза. Клетки, расположенные на периферии клеточных образований, с вакуолизированной цитоплазмой. Мелкие клеточные ассоциации содержат единичные клетки с рексисом ядер и митотически делящиеся хромаффиноциты. Между группами клеток расположены полнокровные капилляры и венулы, средняя площадь которых превышает контрольные пока-зателн и составляет 67,3±3,1 мкм (р 0,01; табл. 13).
Большое количество ДНК находится в ядрах спонгиоцитов клубочковой зоны, соединительнотканных клеток капсулы и хромаффинных клеток, умеренное - в ядрах спонгиоцитов пучково-сетчатой зоны. В контрольных срезах ДНК-ая субстанция не обнаружена.
Максимальное количество РНК содержится в ядрышках и цитоплазме спонгиоцитов глубоких и поверхностных слоев пучково-сетчатой зоны, умеренное - в ядрышках и цитоплазме хромаффинных клеток и стромальных клеток капсулы, минимальное - в спонгиоцитах клубочковой зоны. В контрольных срезах РНК не выявляется.
Таким образом, надпочечные железы плодов от самок, получавших препарат на основе гуминовых соединений, характеризуются следующими структурными перестройками: формированием дополнительных микродолек; завершенной дифференцировкой спонгиоцитов в клубочковой и пучково-сетчатой зонах; повышением васкуляризации коркового и мозгового вещества с различной функциональной активностью капилляров; пролиферацией хромаффиноцитов и ускоренным формированием мозгового вещества; увеличением количества органелл, ДНК и РНК в клетках коркового вещества.
