Введение к работе
Актуальность проблемы. Метод тканевой терапии был предложен и обоснован выдающимся отечественным ученым В. П. Филатовым в 1933г. (В.П. Филатов 1943, 1948). Многочисленные клинические и экспериметальные исследования по изучению действия тканевых препаратов на организм человека и животных показали, что тканевая терапия приводит к изменению реактивных свойств организма (НА Пучковская, 1975).
Современный этап развития учения о тканевой терапии характеризуется
тем, что в клинике активно используются клеточные препараты из
различных фетальных тканей человека и животных (живые, криоконсервированные и лиофилизированные клетки) (B.C. Репин, Г.Т. Сухих 1998; Г.Т. Сухих, А.Н. Ерин, 1996,1998; F. Smid, 1983, 1992). Интерес к фетальным тканям (ФТ) и клеткам (ФК) объясняется тем, что они обладают большой пластичностью, связанной с высоким содержанием стволовых и полустволовых элементов, включают в себя значительное количество ростовых факторов и стадиоспецифических антигенов (В.И. Говалло 1998; Г.Т. Сухих, 1998).
При клиническом применении различных препаратов фетальных тканей человека и животных в более чем сорока клиниках Российской Федерации и Украины установлено, что они эффективны при лечении различных заболеваний желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой, нервной, эндокринной, костной и мышечной систем, кожи, органов женской половой сферы, а также при некоторых онкологических заболеваниях (Г.Т. Сухих, А.Н. Ерин, 1996, 1998). Особого внимания заслуживают данные немецкого ученого F. Smid (1983,1992 ), который с успехом применял лиофилизированные ткани животных при лечении 141 заболевания человека, используя, как правило, сочетание трех различных тканей.
В настоящее время сложилась точка зрения, что при действии ФТ и ФК проявляются специфические и неспецифические механизмы. К первым относится заместительный эффект живых ФК и ФТ, когда они определенное время функционируют в организме реципиента, выполняя при этом свои специфические функции, характерные для того или иного типа клеток (В.И. Говалло, 1996; B.C. Репин, 1998; Г.Т. Сухих, 1998). Неспецифичекий эффект действия ФТ и ФК связывают прежде всего с активацией иммунной системы реципиента. При этом возрастают защитные силы организма, сязанные с повышением уровня специфических и неспецифических иммуноглобулинов, ростом фагоцитарной активности лейкоцитов (Д.С. Щастный,1950; Е.Е. Шулюмова, 1962; З.И. Дорогая, 1963; К.А. Федько, 1965). Кроме этого активированная иммунная система в совокупности с многочисленными ростовыми факторами и цитокинами способствует усилению процессов регенерации различных клеток и тканей (АГ.Бабаева,Е.АЗотиков,1987;Н.В Васильев, 1998). Некоторые авторы при этом подчеркивают, что, учитывая сложность связей между иммунной системой и другими интегрирующими
системами организма (нервной, эндокринной), реакцию иммунной системы следует считать специфической (Н.В. Васильев, 1998).
Учитывая все вышеизложенное, а также тот факт, что иммунная система организма — это прежде всего ее органы (тимус, селезенка, красный костный мозг, в определенной степени печень и т.д. (НА Жарикова, 1979; Р.В. Петров, 1982 ; М.Р. Сапин, Л.Е. Этинген, 1996), реакция которых на введение ФК и ФТ практически не изучена, выбранная нами тема диссертационного исследования является актуальной.
Согласно постановлению 76 сессии Общего собрания РАМН (17 - 20 февраля 2004г.), принято решение: "Считать разработку клеточных технологий в интересах различных областей медицины одним из приоритетных направлений медицинской науки."
Цель и задачи исследования
Основной целью настоящей работы является изучение гистофизиологии органов иммунной системы, периферической крови и печени мышей линий Balb/c и СВА разного возраста после имплантации животным криоконсервированных препаратов фетальных тканей человека, с одновременным исследованием гормональной и морфологической характеристик данных прпаратов после их размораживания.
В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:
1. исследовать морфофункциональное состояние тимуса, селезенки,
красного костного мозга, периферической крови и печени 8-месячных мышей
линии Balb/c на 7, 14, 42 и 64 сутки после однократной имплантации животным
различных доз супензии феталыюй печени и экстракта плаценты человека;
2. определить иммуноморфологические параметры тимуса, селезенки,
красного костного мозга 12-месячных мышей линии СВА после серийного (7
дней подряд) введения животным комплексного препарата фетальных
тканей человека;
З.изучить иммуноморфологическую перестройку тимуса, селезенки, красного костного мозга и периферической крови старых (двухлетних) мышей линии СВА на 7, 14, 42 и 64 сутки после однократной имплантации животным комплексного препарата фетальных тканей человека;
-
исследовать иммуноморфологические параметры тимуса, селезенки, красного костного мозга, периферической крови и печени 8-месячшлх мышей линии Balb/c после введения животным стандартного антигена - эритроцитов барана;
-
описать гистологическую картину размороженных криоконсервированных препаратов фетальных тканей человека: суспензии печени, экстракта плаценты и пупочного канатика, комплексного препарата фетальных тканей человека, состоящего из клеток гипоталамуса, печени, желудка, кишечника, селезенки, гонад, матки, простаты, надпочечников и
плаценты с параллельным определением уровня ряда гормонов и белков зоны беременности в вышеуказанных тканях,
6 дать иммуноморфологическую характеристику суспензии и
отпечатков печени плода человека 16-22 нед развития до криоконсервирования
Научная новизна
Впервые в эксперименте изучены морфофункциональные изменения органов иммунной системы, крови и печени при введении мышам разного возраста ряда криоконсервированных препаратов фетальных тканей человека СФП, ЭП, КПФТЧ
Препараты ФТЧ в виде 2% раствора содержат пролактин, ЛГ, ФСГ, СТГ, ПлЛ, этрадиол, ТТТ, сТ-3, сТ-4, кортизон и тестостерон в концентрациях, соответствующих сывороточному уровню взрослого здорового человека, а содержание прогестерона, ПАМГ-1, АМГФ, АФП, ХГЧ превышает контрольные значения
Криоконсервированные при -196 С без криопротектора и размороженные при +37С препараты ФТЧ характеризуются низкой жизнеспособностью клеток (1-8%) и относительно высокой сохранностью морфологической структуры различных клеток
При однократном введении субтолерантных и клинических доз ФТЧ, а также эритроцитов барана в тимусе животных развивается акцидентальная инволюция, стадийность которой (I-IY стадии) определяется тканевым составом и дозой ФТЧ, а также возрастом мышей и сроком от начала эксперимента
Имплантация подопытным животным различных доз
криоконсервированных ФТЧ не приводит к видимым повреждениям в органах иммунной системы мышей и вызывает повышение спонтанной пролиферативной активности составляющих эти органы клеток
Однократное введение 8-мес мышам различных доз СФП и ЭП приводит к увеличению митогешшдуцированной пролиферации Т- и В-лимфоцитов селезенки, увеличению в ней количества плазматических клеток При этом общее число спленоцитов, относительное и абсолютное содержание Т- и В-лимфоцитов зависят от дозы ФТЧ
Однократное введение 8-мес мышам субтолерантных доз СФП и ЭП вызывает активацию костномозгового эритро- и в меньшей степени гранулопоэза, что обусловлено возрастанием в костном мозге количества Т-лимфоцитов
Однократная имплантация 8-мес животным субтолерантных доз СФП и ЭП инициирует развитие неспецифического реактивного гепатита слабой степени актизности, чего не наблюдается при введении указанных ФТЧ в клинической дозе
При однократной имплантации 24-мес. мышам КПФТЧ задерживается процесс возрастной инволюции тимуса и селезенки, а в костном мозге уменьшается абсолютное количество эритрокариоцитов и всех клеточных форм гранулопоэза, что связано с уменьшением в нем количества Т-лимфоцитов.
Дробное 7-дневное введение 12-мес. мышам субтолерантных доз СФП и ЭП приводит к развитию в селезенке животных картины иммунодефицитного состояния с резким уменьшением в ней количества Т- и В-лимфоцитов как на весь орган, так и на 1 мг массы органа.
Имплантация препаратов ФТЧ вызывает в сыворотке крови подопытных животных повышение уровня суммарных иммуноглобулинов, что является следствием активации В-лимфоцитов, плазмобластов и плазматических клеток иммунной системы организма.
Научно — практическая значимость
Установленные нами иммуноморфологические характеристики органов иммунной системы, периферической крови и печени после имплантации мышам различных препаратов ФТЧ могут быть положены в основу теории, объясняющей механизм действия ФТЧ на организм реципиента, т.к. в определенной степени дают научное обоснование этого метода тканевой терапии.
Полученные данные позволяют в известной степени прогнозировать состояние органов иммунной системы и печени человека после введения ему различных фетальных ксенотканей и при необходимости вносить коррективы в проводимую терапию.
Проведенные исследования показали, что однократное введение мышам различных доз СФП, ЭП и КПФТЧ не влияют токсически на тимус, селезенку, красный костный мозг, печень и периферическую кровь подопытных животных. При этом повышается функциональная активность Т- и В-лимфоцитов, спонтанная пролиферативная активность клеток, составляющих вышеуказанные органы иммуногенеза.
Полученные нами данные по состоянию тимуса, селезенки и красного костного мозга старых мышей после имплантации животным субтолерантных доз КПФТЧ делают возможным рекомендовать данный препарат ФТЧ в гериатрии, но в дозах меньших, чем субтолерантная для мышей.
Обоснована непригодность ежедневная (в течение 7 дней подряд) имплантация КПФТЧ в субтолерантной дозе.
Положения, выносимые на защиту
1.Размороженные после криоконсервирования без криопротектора фетальные ткани человека (ФТЧ) представляют собой комплекс, состоящий из 95-98% мертвых клеток, гормонов и белков зоны беременности, обладающих различной иммуномодулирующей активностью
2 Введенные мышам препараты ФТЧ и эритроциты барана вызывают в вилочковой железе подопытных животных морфологические изменения, характерные для I - IY стадий акциденталыюй инволюции тимуса.
3.Имплантация мышам ФТЧ и эритроцитов барана вызывает в селезенке подопытных животных изменения, характерные для каждого типа иммунизирующего агента.
4. После введения мышам ФТЧ и эритроцитов барана в печени животных развивается неспецифический реактивный гепатит минимальной степени активности.
3.Имплантация мышам препаратов ФТЧ и введение эритроцитов барана инициирует в красном костном мозге подопытных животных изменения клеточного состава, зависящие как от типа иммунизирующего агента, так и от возраста мышей.
Апробация полученных данных.
Результаты иследований доложены на конференции « Актуальные
проблемы развития человека и животных» (Москва, 1981); К Всесоюзном
съезде АГЭ ( Минск, 1981); конференции « Гистогенез и регенерация»
(Ленинград, 1986); IY Всесоюзной конференции по патологии клетки (Москва,
1987); Всесоюзном симпозиуме « Морфология и развитие органов иммунной
системы» (Пермь, 1988); IY-м Всесоюзном симпозиуме по иммунологии
репродукции (Киев, 1990); 27 ежегодном конгрессе Европейского общества
педиатрической нефрологии (ФРГ, Гайдельберг, 1993); Международном
симпозиуме « Иммунология репродукции» (Киев, 1993); IY Международной
конференции « Традиционные и нетрадиционные методы оздоровления детей»
(Москва, 1995); Международном симпозиуме « Фетальные клетки и ткани-
клиническое применение» (Москва, 2000); Межинститутских ежегодных
конференциях НИИ морфологии человека РАМН: «Актуальные вопросы
современной гистопатологии «(Москва, 1990); «Актуальные вопросы
современной гисто- и цитопатологии» (Москва, 1991); «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» (Москва, 2002, 2003, 2004).
Научные публикации
Результаты исследований по теме диссертации опубликованы в 30 печатных работах, включающих 14 статей в центральных журналах.
Структура и объем диссертации
