Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Психонейроиммунные взаимодействия 10
1.2. Морфофункциональная характеристика клеток иммунной системы 13
1.2.1. Характеристика поверхностного фенотипа различных субпопуляций клеток иммунной системы 15
1.3. Суточные биоритмы иммунной системы 22
1.3.1. Суточные биоритмы морфофункциональных характеристик лимфоцитов крови 23
1.3.2. Суточные вариации морфофункциональных параметров клеток лимфоидных органов
1.4. Суточные биоритмы иммунных функций 31
1.5. Кататония у крыс. Крысы с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК), как модель психопатологических состояний человека .
1.5.1. Кататония 34
1.5.2.Крысы с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК) 36
1.5.3. Моноаминэргические системы мозга у крыс ГК 37
1.5.4. Особенности стресса у крыс ГК 39
1.6. Анаболические стероиды и их влияние на психоэмоциональное состояние, стрессреактивность и иммунную систему 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы 50
Методика определения активности оксидоредуктаз 55
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 59
3.1. Суточные вариации клеточного состава лимфоидных органов и крови у интактных крыс Wistar з
3.2. Суточные вариации клеточного состава лимфоидных органов и крови у интактных крыс ГК 65
3.3. Сравнительный анализ морфологических показателей лимфоидных органов и крови у интактных крыс Wistar и ГК 70
3.4. Морфологические показатели и субпопуляционный состав лимфоидных органов и крови у крыс Wistar и ГК после введения ретаболила 82
3.5. Влияние ретаболила на кататонические реакции (время застывания) у крыс с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК) и у крыс Wistar 86
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 87
Заключение 102
Выводы 105
Список литературы
- Морфофункциональная характеристика клеток иммунной системы
- Кататония у крыс. Крысы с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК), как модель психопатологических состояний человека
- Сравнительный анализ морфологических показателей лимфоидных органов и крови у интактных крыс Wistar и ГК
- Влияние ретаболила на кататонические реакции (время застывания) у крыс с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК) и у крыс Wistar
Введение к работе
Актуальность темы. Нарушения психической сферы человека и животных часто сопровождаются изменениями иммунного статуса, что ведет к снижению резистентности к инфекциям, повышению риска развития опухолевого процесса, преждевременному старению. Биологически активные вещества (цитокины и нейромедиаторы), вырабатываемые иммунокомпетентными клетками, влияют на функции головного мозга (Девойно Л.В., Ильючонок З.Ю., 1993; Крыжановский Г.Н., 2002; Гусев Е.И., Крыжановский Г.Н., 2009; Restak R., 2006; Goodvin G. et al, 2009; Freudenreich O. et al, 2010). Нарушение выработки нейротропных биологически активных веществ в условиях психонейроиммунопатологии может привести к прогрессированию и поддержанию психических сдвигов. В связи с этим исследование психонейроиммунных взаимодействий на моделях психопатологии у животных представляет актуальную научную проблему.
Для эффективного изучения механизмов развития психосоматических и психоиммунологических нарушений, а также возможностей их комплексной коррекции, необходимы адекватные модели подобных состояний у животных.
В этом отношении представляют интерес крысы неинбредной линии с генетически обусловленными нарушениями функции центральной нервной системы (генетическая предрасположенность к каталепсии – ГК), выведенной в Институте цитологии и генетики СО РАН. У этих животных обнаруживается сходство целого ряда нейрофизиологических и нейропсихических параметров с характеристиками некоторых патологических состояний нервной системы у человека, в частности, с тем, что известно о шизофрении и депрессии (Колпаков В.Г., 1999). Особый интерес представляет то, что крысы ГК обнаруживают патологическую реакцию на стресс как в поведенческом, так и нейроэндокринном аспектах. Кроме того, ранее были обнаружены особенности морфоцитохимических характеристик лимфоцитов у данных животных по сравнению с крысами Wistar, позволяющие предположить, что у крыс ГК имеются нарушения иммунного гомеостаза, вероятно, обусловленные сдвигами в деятельности нервной и эндокринной систем (Грязева Н.И. и др., 1994; 1998; 1999). На сегодняшний день практически отсутствуют сведения о характере функционирования иммунной системы у этих животных. Изучение морфофункциональных характеристик иммунокомпетентных клеток у крыс ГК в сравнении с исходной популяцией Wistar могло бы пролить свет на некоторые аспекты иммунонейроэндокринных взаимодействий особенно в связи с развитием психопатологических проявлений, а также обосновать возможность и целесообразность использования крыс линии ГК в качестве адекватной модели для исследования иммунонейроэндокринных взаимосвязей и скрининга методов комплексной коррекции их нарушений.
Функциональное состояние иммунной системы тесно связано с ее структурно-временной организацией (Козлов В.А. и др., 1978, 1982; Бородин Ю.И. и др., 1992, 2000, 2007; Шурлыгина А.В. и др., 1992, 2000, 2008, 2011; Труфакин В.А. и др., 2004, 2005, 2008, 2012). Поэтому при исследовании морфоцитохимических параметров лимфоидных клеток во временном аспекте можно получить более полную информацию об особенностях иммунного гомеостаза. В связи с этим является актуальным изучение суточных вариаций клеточного состава лимфоидных органов и активности ферментов окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов крови.
Учитывая имеющуюся у самцов ГК андрогенную недостаточность (Шульга В.А. и др., 1996; Колпаков В.Г. и др., 2004), представляет интерес исследовать характер влияния на поведенческие и иммунные параметры анаболических стероидов, в частности, ретаболила. Известны стресспротекторные, анксиолитические и иммуномодулирующие свойства анаболических стероидов (Грундинг П., Бахман М., 2011), поэтому мы предположили, что ретаболил может оказать комплексное воздействие на нейроиммунные нарушения у крыс с генетической предрасположенностью к каталепсии.
Цель исследования – дать сравнительную морфоцитохимическую характеристику лимфоцитов с учетом суточных вариаций показателей у интактных крыс ГК и Wistar и оценить влияние ретаболила на поведенческие и иммуноморфологические параметры у этих животных.
Задачи исследования:
1. Изучить общее количество и субпопуляционный состав лимфоцитов в тимусе, селезенке и паховом лимфоузле у крыс ГК и Wistar.
2. Изучить активность ферментов энергетического метаболизма лимфоцитов крови у крыс ГК и Wistar.
3. Изучить особенности суточных вариаций иммуноморфологических параметров у крыс ГК и Wistar .
4. Изучить морфоцитохимические параметры лимфоцитов (субпопуляционный состав клеток тимуса и селезенки, активность дегидрогеназ лимфоцитов крови) у крыс ГК и Wistar после введения ретаболила.
5. Оценить влияние ретаболила на поведенческие характеристики крыс ГК и Wistar.
Научная новизна. Получены новые данные об особенностях клеточного состава лимфоидных органов и крови, а также активности дегидрогеназ лимфоцитов крови у крыс ГК в сравнении с Wistar.
Впервые обнаружено, что у крыс ГК изменены суточные вариации иммуноморфологических параметров по сравнению с крысами Wistar, что свидетельствует об изменении временной организации иммунной системы и согласуется с данными об особенностях суточных вариаций метаболизма моноаминов в головном мозге этих животных.
Впервые показано, что ретаболил по разному влияет на лимфоциты крови и лимфоидных органов крыс ГК и Wistar, что свидетельствует о межлинейных особенностях эндокринно-иммунных взаимоотношений.
Получены ранее неизвестные факты о том, что крысы ГК и Wistar различаются по характеру комплексной реакции поведенческих параметров и показателей иммунокомпетентных клеток в ответ на введение ретаболила. Гормон оказывает разнонаправленное действие на выраженность каталептической реакции у этих животных, однако у крыс ГК при выраженном корригирующем эффекте на поведенческий статус ретаболил почти не изменяет характеристики иммунокомпетентных клеток.
Научно-практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований дополняют знания об особенностях структурно-метаболических характеристик клеток иммунной системы при различных психоэмоциональных состояниях и поведенческих расстройствах с учетом временного фактора.
Выявленные межлинейные особенности реакций нервной и иммунной системы у крыс ГК и Wistar на гормональное воздействие позволяют использовать данную модель для изучения механизмов психонейроиммунных взаимодействий и для разработки методов персонифицированной коррекции.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Крысы ГК и Wistar значительно различаются по ряду морфологических и цитохимических показателей клеток иммунной системы, что позволяет предполагать единый генез психонейроиммунных нарушений у крыс ГК.
2. Крысы ГК и Wistar значительно различаются по суточным вариациям морфологических и цитохимических показателей лимфоцитов, что свидетельствует об измененной суточной временной организации нейроиммунных взаимоотношений у крыс ГК.
3. У крыс ГК и Wistar существуют различия в способности нервной системы и иммунокомпетентных клеток реагировать на гормональный стимул, что проявляется в разнонаправленных эффектах введения ретаболила на клетки иммунной системы и поведенческие параметры у этих животных.
Апробация работы. Результаты работы обсуждены на Всероссийской конференции «Нейроиммунология» (Москва, 1999); VI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999); IV съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); научной конференции с международным участием «Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса» (Новосибирск, 2004); Международном конгрессе «Эндоэкологическая медицина» (Новосибирск, 2007); Международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008); межлабораторной научной конференции ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» СО РАМН (Новосибирск, 2013).
Публикации. По теме диссертации опубликованы 8 работ, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертационных исследований.
Структура и объем работы. Диссертация содержит разделы: введение, обзор литературы, материал и методы исследования, результаты исследования, обсуждение, заключение, выводы и список литературы. Работа изложена на 139 страницах машинописного текста, содержит 15 таблиц и 19 рисунков. Список литературы содержит 283 работы, из них 96 отечественных авторов и 187 – зарубежных.
Морфофункциональная характеристика клеток иммунной системы
Нервная и иммунная системы в комплексе с эндокринной системой выполняют совместную функцию сохранения и поддержания динамического гомеостаза в организме. Они объединяются в нейроиммунноэндокринную систему, в которой они взаимодействуют по принципу взаимной регуляции, осуществляемой нейромедиаторами, нейропептидами, трофическими факторами, гормонами, лимфокинами через соответствующий рецепторный аппарат.
Эта взаиморегуляция, с одной стороны, и определяет надежность их совместной деятельности, но с другой стороны, создает риск развития функциональных расстройств общей системы при первичном нарушении какой-либо из подсистем. Такого рода расстройства можно определить как дизрегуляционную патологию, патогенез которой может быть связан с нервными, эндокринными или иммунными механизмами (Крыжановский Г.Н. и др., 1997; 2002; 2009).
Связь между психическими расстройствами и иммунными процессами изучается давно. Нарушения клеточного и гуморального иммунитета были отмечены при шизофрении, эпилепсии, органических поражениях ЦНС (Семенов С.Ф. и др., 1984; Ветлугина Е.П., 2000; Evans D. et al.,1988; Restak R., 2006; Goodwin G., 2009). Выявлены изменения иммунного статуса и у больных с различными невротическими расстройствами (Потапова В.А., ТрубниковВ.И., 1987; Крыжановский Г.Н., Магаева СВ., 1995; Гаврилова Е.А., Шабанова Л.Ф., 1998; Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. , 2004; Ветлугина Е.П и др., 2006; Ader R., 2000; BabaY. et al, 2005; Bonartsev P. et al., 2009; Freudenreich O. et al., 2010). В настоящее время известно о роли неиромедиаторов в модуляции иммунного ответа. Большое значение придается анализу роли нейромедиаторных систем мозга в этиологии и патогенезе психических болезней (Девойно Л.В.,
Илыочонок З.Ю., 1993; Девойно Л.В. и др., 2009). Имеются убедительные работы с использованием фармакологического анализа и электролитического выключения определенных структур мозга, показывающие тормозное действие серотонинергической системы и иммуностимулирующее действие дофамин - и ГАМК - ергической систем в иммуномодуляции (Девойно Л.В., Илыоченок З.Ю., 1993; Pellegrino Т., Bayer В., 1998; Basu S. et al., 2000; Saha В. et al., 2001; SarkarC. etal., 2009).
Каждая из нейромедиаторных систем действует на иммунную функцию во взаимодействии с другими, а не изолированно (Девойно Л.В., Илыочонок З.Ю., 1993), в основе чего лежат морфофункциональные связи (Kelland М., et al, 1990; Benloucif S. et al., 1991; Rasmusson A. et al., 1994; Missale С et al., 1998; Ase A. et al., 2000; Vuillermot S. et al., 2009). В результате этого взаимодействия создается определенная нейрохимическая картина мозга с преобладанием в мозговых структурах доминирующей системы (серотонинергической или дофаминергической), которая оказывает определенное воздействие на состояние организма (психосоматика) и, в частности, на иммунную систему (Девойно Л.В., Илыочонок З.Ю., 1993; Девойно Л.В. и др., 2009). Нейрохимическая установка мозга может быть создана фармакологическим путем, а также формируется при определенных формах поведения, сопровождающихся психоэмоциональным напряжением, при психопатологии.
В настоящее время вскрыты механизмы нейроиммунных взаимодействий на уровне рецепторного аппарата мембран клеток. На мембранах лимфоцитов обнаружены рецепторы к медиаторам - бета-эндорфину, метэнкефалину, белку Р, адренергическим веществам. Установлено, что иммунокомпетентные клетки способны продуцировать кортикотропин, эндорфин, энкефалин. Доказана возможность действия медиаторов иммунитета - интерлейкинов (ИЛ-1, ИЛ-2 и ИЛ-6), интерферонов, фактора некроза опухолей (ФНО) - на нейроглиальные клетки и нейроны. Под влиянием ИЛ-1 и ФНО усиливается секреция кортикотропина клетками гипофиза. В свою очередь, нейроны способны продуцировать ИЛ-2 и ИЛ-6 (Булгакова О.С., 2011).
Установлено, что мембраны нейронов и лимфоцитов снабжены одинаковыми рецепторами для кортикотропина, вазопрессина и бета-эндорфина. Постулируется, что таким образом с помощью общих клеточных рецепторов и растворимых гормонов, нейропептидов и цитокинов иммунная и центральная нервная система обмениваются информацией между собой (Хаитов P.M., 2002; Blach-Olszewska Z., 2005). Доказано, что при синдроме гиперпродукции цитокинов избыточная секреция макрофагами ИЛ-1, интерферона и ФНО является причиной депрессивных состояний, что сопровождается мышечной слабостью, длительным субфебрилитетом, панцитопенией. Это подтверждается следующими аргументами: 1) развитием депрессии у людей, которым с лечебной целью вводят цитокины; 2) изменением под влиянием ИЛ-1 гормонального статуса, приводящим к депрессии; 3) частой ассоциацией с депрессией болезней, сопровождающихся активацией макрофагов (ишемия, ревматоидный артрит и др.); 4) большей частотой депрессий у женщин вследствие того, что эстрогены усиливают секрецию ИЛ-1 макрофагами (Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. и др., 2001; Михайленко А.А., Базанов Г.А. и др., 2004).
Развитие депрессии ведет к снижению функции ЕК-клеток на фоне резкого повышения продукции кортикостерона и кортизола. В условиях длительного стресса под влиянием глюкокортикоидов и половых гормонов подавляется функция иммунной системы. Адреналин и норадреналин подавляют миграцию лейкоцитов и активность лимфоцитов.
Кроме того, лимфоциты на своей мембране имеют также рецепторы к таким гормонам, как инсулин, тироксин и соматотропин. Последний также способен модулировать функцию Т - и В-лимфоцитов. Известно, что на мембране Т-лимфоцитов и нейронов имеется общий антиген Тх-1, что еще раз свидетельствует в пользу общности этих систем.
Кататония у крыс. Крысы с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК), как модель психопатологических состояний человека
Анаболическая активность того или иного препарата определяется по отношению к анаболической активности тестостерона, которая принимается за единицу. Описано несколько механизмов действия анаболических стероидов. Эти механизмы включают экспрессию рецептора андрогена и, как следствие, изменение внутриклеточного метаболизма и транскрипционной активности. Другие механизмы включают антикатаболический эффект, связанный экспрессией рецептора глюкокортикоида, что и приводит к поведенческим изменениям (Losel R. et al., 2003; Kicman A., 2008). Влияние анаболических стероидов на белковый обмен связано, прежде всего, с воздействием на генетический аппарат клетки. Анаболические стероиды проникают туда через клеточные мембраны непосредственно в ядро клетки и блокируют ген-депрессор синтеза белка. В результате происходит усиление синтеза белка в клетке. Усиливается как синтез матричных белков, так и синтез РНК и ДНК. Кроме того, повышается проницаемость клеточных мембран для аминокислот, микроэлементов и углеводов. Повышается скорость синтеза гликогена. В результате применения анаболических стероидов происходит усиление активности пентозофосфатного цикла, где происходит синтез частей белковых молекул из углеводов. Анаболические стероиды улучшают углеводный обмен, усиливают действие инсулина, снижают сахар в крови. Заслуживает внимание способность потенцировать действие эндогенного соматотропина (гормона роста) (Грундинг П., Бахманн М., 2011).
Выявлено свойство анаболических стероидов улучшать липидный обмен. В крови снижается уровень холестерина. У старых животных на фоне применения анаболических стероидов появляются признаки омоложения. У молодых лиц они способствуют усилению роста и увеличению массы тела, однако, при этом ускоряется созревание скелета и происходит преждевременное закрытие зон роста, данная особенность анаболиков используется для лечения конституционной высокорослое (Грундинг П., Бахманн М., 2011). В геронтологии используются малые дозы стероидов для лечения старческих болезней для улучшения состояния здоровья и замедления развития возрастных заболеваний (Rudolph I., Palombo-Kinne Е. et al., 2004; Sheffield -Mooreet M., 2006).
Многое говорит в пользу того, что анаболические стероиды обладают еще и сильным антикатаболическим действием. Благодаря им снижается процент протеина, разрушающегося в мышечной клетке. Кроме того, стероидные молекулы блокируют находящиеся на мембране мышечной клетки, рецепторы кортизола. При этом производимый организмом кортизол, сильный катаболический гормон, теряет свою активность, и мышечная клетка не теряет протеин (Физиология эндокринной системы. Под редакцией Гриффина Дж., Охеды С, 2010).
Еще одно преимущество стероидов в том, что они повышают в мышечной клетке синтез креатинфосфата (КФ). КФ играет решающую роль в восстановлении аденозинтрифосфата (АТФ). АТФ - предпосылка всех мышечных движений
Круг показаний для назначений анаболических стероидов достаточно широк: тяжелые хирургические травмы и переломы, послеоперационное состояние, тяжелые заболевания желудочно-кишечного тракта, острые и хронические заболевания сердца, инфаркты, сахарный диабет, болезни надпочечников, карликовость, туберкулез, малокровие, снижение иммунитета, истощение нервной системы, старение, обширные ожоги, болезни почек, рак молочной железы, сильная степень близорукости и некоторые другие заболевания (Basaria S. et al., 2001; Shahidi N., 2001; Грундинг П., Бахманн М., 2011).
В научной литературе широко обсуждается вопрос о влиянии анаболических стероидов на психическое здоровье человека. Однозначного мнения по этому вопросу пока не существует: анаболические стероид могут, как увеличивать, так и уменьшать проявление агрессии и беспокойства (Clark A., Henderson L., 2003; Trenton A., Currier G., 2005).В исследованиях этих авторов было показано, что анаболические стероиды могут вызвать глубокие изменения в умственном здоровье. Психиатрические побочные эффекты включают - агрессию, беспокойство, депрессию, и нарушение познавательной деятельности. У экспериментальных животных, многие из этих эффектов были связаны с множественными изменениями в системе медиаторов. Длительное применение анаболических стероидов, в частности, ретаболила (nandrolone decanoate) может затронуть моноаминергические и пептидергические системы, что и приводит к поведенческим изменениям.
С другой стороны, было убедительно показано что, совместное применение антидепрессантов с некоторыми анаболичскими стероидами, в частности ретаболилом, приводит к улучшению психического состояния больных с маниакально- депрессивными психозами. Симптомы болезни ослабевают или исчезают (Sinitskn V. et. al., 1988).
Злоупотребление анаболическими стероидами проявляется перепадами настроения и депрессией. Однако, природа этой ассоциации все еще в значительной степени не изучена. В работах Matrisciano F. и др., (Matrisciano F., Modafferi A. et al., 2010) было показано, что анаболические стероиды уменьшают уровни полученных нейротрофических факторов в гиппокампе и предлобной коре, уменьшают выраженность рецепторов к глюкокортикоидам и увеличивают уровень кортикостерона в плазме крови. Все эти изменения были связаны с патофизиологией депрессивного расстройства.
Неоднократно сообщалось, что у спортсменов, и у мужчин и у женщин, при приеме анаболических стероидов, особенно при их длительном применении в высоких дозах, может проявляться агрессивное поведение. В экстремальных случаях это может привести к насилию (Грундинг П., Бахманн М.,2011). Katz D. (Katz D., 1990) и Pope Н. (Pope Н., 1994; 1996), так же сообщали о том, что после отмены препаратов анаболических стероидов у пациентов часто развиваются психические расстройства - мания или гипомания (мания умеренного типа) и депрессивные симптомы. Имеются сообщения о том, что у некоторых спортсменов при применении стероидов развивается депрессия. Причина, видимо, в том, что эти атлеты склонны к повышенной конвертируемости принимаемых ими препаратов в эстрогены. Смены настроения и депрессии объясняются тем, что гипоталамус мужчины реагирует на женский гормон эстрадиол. Но убедительных доказательств того, что употребление спортсменами анаболических стероидов приводит к психической зависимости от них, а окончание их приема вызывает психические явления абстиненции, не получено. (Грундинг П., Бахманн М., 2011).
Сравнительный анализ морфологических показателей лимфоидных органов и крови у интактных крыс Wistar и ГК
Для комплексного воздействия на поведенческие и иммунные параметров мы исследовали возможность использования инъекций ретаболила. Особую значимость представляют его эффекты, связанные со стресслимитирующими механизмами и реализующиеся через нейроэндокринные каналы (Ebeling P., Koivisto V., 1994).С другой стороны, мало известно о непосредственном влияние ретаболила на функции иммунной системы. В связи с этим, представляет интерес исследование эффектов ретаболила на иммуноморфологические параметры при нарушении функции иммунной и нейроэндокринной систем. В качестве активного контроля вводили стерильное оливковое масло.
В таблице 13 представлены данные, полученные после введения крысам Wistar ретаболила. Эксперименты показали, что введение ретаболила крысам Wistar вызывает в тимусе достоверное увеличение общего количества клеток в органе. Количество клеток с фенотипом СБ4+достоверно увеличивается, по сравнению с активным контролем (р 0,05), а вот количество CD8+- тимоцитов резко уменьшается (р 0,05). Количество активированных лимфоцитов достоверно не изменятся.
Введение ретаболила не оказало никакого влияния на селезенку- общее количество клеток в органе и субпопуляционный состав достоверно не изменяется. Также введение ретаболила не повлияло и на общее количество клеток в лимфоузле.
Введение ретаболила оказывает выраженное влияние на клеточный состав крови крыс Wistar. Количество лейкоцитов и эозинофилов достоверно уменьшается по сравнению с активным контролем (р 0,05). Количество нейтрофилов и лимфоцитов также уменьшается, но эти изменения не достоверны (р 0,01). Активность оксидоредуктаз лимфоцитов крови - СДГ и ЛДГ под влиянием ретаболила у крыс Wistar не изменяется.
Примечание : - параметры, достоверно отличающиеся друг от друга (активный контроль - ретаболил р 0,05). Крысам ГК ретаболил и растворитель вводили в той же дозе и в те же часы, что и крысам Wistar. Полученные данные представлены в табл.14. Клеточный состав крови и субпопуляционный состав лимфоидных органов у крыс ГК после введения ретаболила. Показатель Количество наблюдений (п) Масло(М±т) Ретаболил(М±т) Тимус (кл. х; О6) Клеток в органе 10 423,9 ±58,6 338,2 ±49,2 CD4+ 10 294,9 ± 50,5 192,4 ±41,8 CD8+ 10 242,8 ± 28,6 129,5 ±41,8 Актив. Лимфоциты 10 164,9 ±21,2 200,5 ±30,1 Селезенка (кл. хЮб) Клеток в органе 10 713,8 ±54,0 720,3 ± 80,9 CD4+ 10 58,75 ± 6,4 84,04± 8,2 CD8+ 10 80,42 ± 8,2 93,00 ±5,2 Актив, лимфоциты 10 39,9 ±6,1 91,54 ±4,8 Лимфоузел (кл. х10) Клеток в органе 10 53,0 ±12,6 36,9 ± 8,9 Кровь (кл. х106) Лейкоциты 10 10,25 ±1,4 10,5 ±1,5 Лимфоциты 10 7,0± 0,9 7,1 ± 1,0 Нейтрофилы 10 2,5 ± 0,2 2,8 ± 0,6 Эозинофилы 10 0,4 ±0,1 0,4 ±0,1 Активность оксидоредуктаз лимфоцитов (гранул на клетку) лдг 10 8,9 ±0,5 9,6 ±1,0 едг 10 12,9 ± 0,9 11,8 ±0,6 Примечание: - параметры, достоверно отличающиеся друг от друга (активный контороль - ретаболил р 0,05). Из таблицы видно, в тимусе крыс ГК введение ретаболила вызывает достоверное уменьшение общего количества клеток по сравнению с активным контролем. Количество лимфоцитов с фенотипом CD4+ и активированных лимфоцитов достоверных различий не имеет. Количество лимфоцитов с фенотипом CD8+ достоверно увеличивается по сравнению с активным контролем (р 0,05).
В селезенке крыс ГК ретаболил вызывает достоверное увеличение количества активированных лимфоцитов, остальные параметры достоверно не изменяются.
На клеточный состав крови и активность оксидоредуктаз лимфоцитов у крыс ГК введение ретаболила достоверного влияния не оказывает.
Таким образом, представленные данные показывают, что крысы Wistar и ГК по-разному реагируют на введение ретаболила. У крыс ГК в тимусе ретаболил приводит к уменьшению, всех исследуемых параметров с различной степенью выраженности (с достоверностью р 0,05 или с тенденцией к снижению) относительно активного контроля, а у крыс Wistar, наоборот, приводит к увеличению всех этих параметров за исключением лимфоцитов с фенотипом CD8+( достоверное уменьшение (р 0,05)).
В селезенке крыс ГК и Wistar наблюдается сходная, слабо выраженная тенденция к увеличению общего количества клеток в органе. Количество спленоцитов с фенотипом CD4+ и CD8+ и активированных лимфоцитов у крыс Wistar под влиянием ретаболила слабо уменьшается. В селезенке крыс ГК все исследуемые параметры имели тенденцию к увеличению под влиянием ретаболила (разной степени выраженности), количество активированных лимфоцитов в селезенке крыс ГК достоверно увеличивается (р 0,05), в отличие от крыс Wistar. Количество клеток в лимфоузле не изменяется при введении ретаболилаи и у крыс ГК и у крыс Wistar. На клеточный состав крови у крыс ГК ретаболила не оказывает, ни какого влияния, а у крыс Wistar, напротив, наблюдается достоверное уменьшение общего количества лейкоцитов и абсолютного количества эозинофилов (р. 0,05). Активность оксидоредуктаз лимфоцитов крови под влиянием ретаболила достоверно не изменяется, как у крыс ГК, так и у крыс Wistar. Исходя из полученных результатов, можно предположить существование разной направленности реакции иммунной системы на гормональное воздействие у крыс ГК и Wistar.
Для изучения возможности использования ретаболила для коррекции поведенческих реакций мы исходили из предположения, что ретаболил, как слабый андроген и стресслимитирующий фактор, возможно, окажет положительное влияние на стрессиндуцированную кататонию у крыс ГК, у которых уровень андрогенов, в частности тестостерона, изначально снижен (Колпаков, 1990). Из таблицы 15 видно, что введение ретаболила приводит к достоверному сокращению времени застывания у крыс ГК, относительно активного контроля (р 0,05), по-видимому, это можно расценивать как коррекцию поведенческой аномалии.
Влияние ретаболила на кататонические реакции (время застывания) у крыс с генетической предрасположенностью к каталепсии (ГК) и у крыс Wistar
В настоящей работе установлено, что у крыс Wistar и ГК имеются различия в клеточном составе лимфоидных органов, энергетическом метаболизме лимфоцитов и в суточных ритмах этих показателей.
У крыс Wistar с нормальной поведенческой реакцией на стресс активность всех исследуемых ферментов утром достоверно выше, чем вечером (р 0,05). В тимусе достоверных суточных колебаний обнаружено не было. В селезенке крыс Wistar достоверные суточные колебания зарегистрированы только для количества спленоцитов - CD8+ Количество клеток в лимфоузле имеет минимальное значение в утреннее время и достоверно увеличивается к вечеру, что совпадает с часами наибольшей физической активности крыс. В крови интактных крыс Wistar общее количество лейкоцитов имело достоверные различия в утренние и вечерние часы. Утром этот показатель был выше. Абсолютное количество нейтрофилов вечером было достоверно больше, чем утром.
У крыс ГК, реагирующих на стресс проявлением кататонического синдрома, и обладающих особенностями нейроэндокринного статуса, получены противоположные результаты. Так, наименьшее количество клеток в тимусе отмечено утром, а к вечеру оно достоверно увеличивается. Абсолютное число клеток с фенотипом CD4+ не имеет достоверных суточных колебаний. Количество CD8+ -тимоцитов и количество активированных лимфоцитов достоверно возрастает в вечернее время. Абсолютное количество клеток в селезенке и количество всех исследованных клеточных субпопуляций у крыс ГК не имеет достоверных суточных колебаний. Анализ активности СДГ, ЛДГ и альфа - ГФДГ лимфоцитов крови показал, что у крыс ГК, только активность ЛДГ имеет достоверные суточные колебания.
Таким образом, у крыс ГК выявленое снижение показателей характеризующих функциональное состояние лимфоидных клеток 103 активности дегидрогеназ лимфоцитов крови и изменения субпопуляционного состава лимфоидных органов и клеточного состава крови, разной степени выраженности, указывает на возможное снижение функций иммунитета у этих животных, что может быть обусловлено изменениями метаболизма моноаминов головного мозга (Kolpakov V.G. et al., 1996; Уколова Т.Н., 2012).
Клетки иммунной системы и поведение крыс ГК и Wistar по-разному реагируют на введение ретаболила. У крыс ГК в тимусе ретаболи приводит к уменьшению исследованных параметров с различной степенью выраженности, относительно активного контроля: общее количество клеток в органе и CD8 -тимоцитов под влиянием ретаболила становится достоверно меньше, количество СВ4+-тимоцитов и количество активированных лимфоцитов достоверно не изменятся. У крыс Wistar, наоборот, приводит к достоверному увеличению количества клеток в органе и CD4+ - тимоцитов. Количество CD8 -тимоцитов достоверно уменьшается. Количество активированных лимфоцитов не изменяется.
В селезенке крыс ГК и Wistar наблюдается различная картина: у крыс ГК введение ретаболила приводит к слабому увеличению общего количества клеток в тимусе и CD4-+ и CD8+- спленоцитов, количество активированных лимфоцитов под влиянием ретаболила увеличиватся достоверно. На селезенку крыс Wistar ретаболил не оказал никакого влияния (слабое уменьшение количества клеток всех исследованных субпопуляций). Количество клеток в лимфоузле при введении ретаболила у крыс и ГК и Wistar достоверно не изменятся (незначительное снижение). На клеточный состав крови крыс ГК ретаболил не оказывает никакого влияния, а у крыс Wistar, напротив, наблюдается достоверное уменьшение общего количества лейкоцитов и абсолютного количества эозинофилов (р 0,05). Количество лимфоцитов и нейтрофилов достоверно не изменяется. Активность оксидоредуктаз лимфоцитов у крыс Wistar так же, как и у крыс ГК под влиянием ретаболила достоверно не изменяется.
Исходя из полученных результатов, можно говорить о разной направленности реакции иммунной системы на гормональное воздействие ретаболила у крыс ГК и Wistar.
Поведение крыс ГК и Wistar также по-разному изменялось после однократного введения ретаболила: у крыс ГК время застывания снижается относительно активного контроля, что можно расценивать как коррекцию поведенческой аномалии Введение ретаболила крысам Wistar, напротив, приводит к увеличению времени застывания относительно активного контроля (но остается в пределах нормы).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что лимфоидные клетки крыс ГК с генетически обусловленной каталептической реакцией на стресс имеют характеристики, позволяющие предположить снижение функций иммунной системы, которое может быть вызвано особенностями нейроэндокринного статуса этих животных. Лимфоидные клетки крыс Wistar и ГК характеризуются различной реакцией на гормональное воздействие ретаболила, что позволяет предположить наличие изменений рецепторного аппарата лимфоцитов крыс ГК.
Ретаболил приводит к нормализации поведенческого статуса крыс ГК, но практически не влияет на исследованные параметры их лимфоцитов. Это может свидетельствовать об относительной независимости свойств нервной и иммунной систем у данных животных.
Похожие диссертации на Морфофункциональная характеристика лимфоцитов крови и лимфоидных органов у крыс с генетической предрасположенностью к каталепсии
