Введение к работе
Актуальность проблемы
Несмотря на успехи, достигнутые в последние годы отечественной и зарубежной сифилидологией, проблема диагностики ранних форм сифилитической инфекции остается по-прежнему актуальной Это определяется эпидемиологическими особенностями распространения инфекции высокой контагиозностью специфических проявлений на коже и слизистых оболочках больных, опасностью заражения половых партнеров, возможностью развития врожденного сифилиса В связи с несвоевременным установлением диагноза на ранних стадиях инфекции отмечается рост заболеваемости поздними формами сифилиса, нейросифилисом Все это не может не вызывать обеспокоенности, особенно если учитывать отрицательный прирост населения в Российской Федерации Следует особо отметить патоморфоз сифилитической инфекции, который в последние десятилетия коснулся не только клинических, но и серологических особенностей заболевания Данное обстоятельство вызывает необходимость разработки эффективных методов и алгоритмов диагностики сифилиса на ранних стадиях заболевания с учетом клинико-лабораторных данных (Островский А Г, 2003)
К проблемам диагностики ранних форм сифилитической инфекции на современном этапе относятся недостаточно высокая чувствительность темнопольной микроскопии (ТПМ), трудность дифференциации патогенных трепонем и трепонем-сапрофитов, наличие «серологического окна» при первичном сифитисе, когда классические серологические реакции дают отрицательный результат, ложноположительные и ложноотрицательные результаты серологических реакций при других ранних формах инфекции - вторичном, скрытом раннем сифилисе
Лабораторная диагностика сифилиса осуществляется путем применения прямых и непрямых методов исследования С целью решения вышеуказанных проблем создаются новые методы диагностики При этом среди прямых методов наибольшее развитие получила полимеразная цепная реакция (ПЦР), а среди серологических методов - иммуноблоттинг (ИБ)
Диагностическая чувствительность ПЦР во многом зависит от клинического материала, взятого для исследования (кровь, спинномозговая жидкость, рейц-серум сифилидов и др) Наибольшая чувствительность достигается при исследовании отделяемого сифилидов ввиду большей концентрации возбудителя в материале для исследования Специфичность метода во многом обусловлена правильным выбором мишени для амплификации Наиболее специфичными, по данным литературы, являются 47kDa, polA гены ДНК и 16s рибосомальный ген РНК Т pallidum Выявляя в исследуемом материале фрагмент ДНК, характерный только для данного возбудителя, что обеспечивается нуклеотидной
последовательностью праймеров, ПЦР-диагностикумы, в отличие от серологических методов, исключают проблемы, связанные с перекрестно-реагирующими антигенами, тем самым обеспечивая абсолютную специфичность Вместе с тем, метод ПЦР при диагностике сифилиса пока носит исследовательский статус Работы, посвященные сравнительному изучению данного метода в сравнении с другими прямыми методами детекции возбудителя сифилиса, представляют в России значительную редкость (Шахматов ДА 1999, Петухова ИИ, 2002, Стрельченко ОВ, 2002), что не позволяет разработать рекомендации по применению ПЦР при диагностике ранних форм сифилиса
Несмотря на широкое применение прямых методов исследования, на первом месте по частоте использования в диагностике сифилиса продолжают оставаться непрямые (серологические) методы Итоговый результат, получаемый при постановке любой их серологических реакций на сифилис, зависит от содержания в испытуемой сыворотке крови специфических антител к антигенным детерминантам возбудителя сифилиса Вместе с тем не все из применяемых методов исследования являются достаточно чувствительными при диагностике ранних стадий заболевания, что влечет за собой ошибки диагностики и несвоевременное назначение лечения Это вызывает необходимость совершенствования диагностических методов и определения их роли среди общепринятых методов исследования
Одним из перспективных непрямых методов диагностики сифилитической инфекции является метод иммуноблоттинга (ИБ) Метод является одним из вариантов иммуноферментного анализа и заключается в одновременном выявлении антител к рекомбинантным антигенам бледной трепонемы, иммобилизованным на нейлоновых тест-полосках За счет высокой степени очистки рекомбинантных антигенов и одновременного выявления антител к наиболее иммуногенным детерминантам возбудителя сифилиса метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью (George R, 1998, Marangom А, 2000, Backhouse J L ,Nesteroff S 1, 2001, Sambn V et al, 2001, Hagedorn HJ et al, 2002) При сравнении IgM и IgG диагностикумов большинство зарубежных авторов отдает предпочтение IgG-иммуноблоттингу как более высокочувствитепьному на всех стадиях заболевания сифилисом (Кувшинов MB с соавторами, 2006, Baker-ZanderS А, 1986, Sanchez PJ, 1988, Schmidt BL, 1994) Среди отечественных дерматовенерологов отношение к данному методу диагностики еще не сформировалось Не установлена диагностическая значимость метода иммуноблоттинга у больных ранними формами сифилитической инфекции, не разработаны клинические рекомендации для использования этого метода при первичном, вторичном, скрытом раннем сифилисе, а также у лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом
Целью настоящего исследования явилась клиническая оценка значимости использования современных методов диагностики (полимеразнои цепной реакции и иммуноблоттинга) у пациентов с ранними формами сифилиса
В задачи исследования входило
Изучить особенности клинического течения ранних манифестных форм сифилиса (первичного и вторичного) на современном этапе
Провести сравнительное изучение клинической значимости полимеразнои цепной реакции в сравнении с темнопольной микроскопией у больных с манифестными проявлениями при ранних формах сифилитической инфекции (первичный и вторичный сифилис)
Исследовать эффективность метода иммуноблоттинга при диагностике ранних форм сифилиса (первичный, вторичный и скрытый ранний сифилис) и у лиц, находившихся в половом контакте с больными сифилисом (ЛБПК)
Разработать рекомендации по применению полимеразнои цепной реакции и иммуноблоттинга для диагностики ранних форм сифилиса
Научная новизна исследований
Впервые при диагностике ранних форм приобретенного сифилиса на большом клиническом материале показана высокая диагностическая эффективность полимеразнои цепной реакции и иммуноблоттинга в сравнении с традиционными методами исследования темнопольной микроскопией (ТПМ) и традиционно применяемыми для диагностики сифилиса серологическими тестами (иммуноблоттинг)
Практическая значимость
Впервые в практике отечественной дерматовенерологии разработаны рекомендации по рациональному использованию методов ПЦР и иммуноблоттинга, позволяющие устанавливать диагноз при ранних формах сифилиса, что будет способствовать своевременному выявлению больных сифилисом и повышению уровня оказания медицинской помощи населению
Отмечены особенности современного клинического течения первичного и вторичного сифилиса, что будет способствовать уменьшению диагностических ошибок и своевременному выявлению заболевания
Основные положения, выносимые на защиту
Клиническое течение ранних манифестных форм сифилитической инфекции (первичного, вторичного сифилиса) в настоящее время имеет ряд особенностей в сравнении с данными дерматовенерологов конца XIX - первой половины XX века
Метод ПЦР с использованием в качестве мишени гена Ipp47 Т pallidum является более чувствительным методом при исследовании райц-серума сифилидов больных первичным и вторичным сифилисом в сравнении с прямым методом - темнопольной микроскопией Специфичность метода ПЦР составляет 100%
Метод линейного иммуноблотгинга имеет высокую чувствительность при диагностике ранних форм приобретенного сифилиса, превышающую чувствительность нетрепонемных и трепонемных тестов (кроме РИФабс) при первичном сифилисе и чувствительность нетрепонемных и трепонемных тестов при скрытом раннем сифилисе Специфичность метода составляет 98%
Методы ПЦР и иммуноблотгинга могут быть рекомендованы к применению на ранних стадиях сифилитической инфекции (первичный, вторичный, скрытый ранний сифилис, у лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом) в качестве дополнительных к регламентированным методам диагностики сифилиса
Аппобапия работы
Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов, Москва, 2005, IX, XI и XII междисциплинарных симпозиумах «Новое в дерматовенерологии, андрологии, акушерстве и гинекологии наука и практика», Москва, 2004,2006,2007гг
Публикации
По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ
Структура и объем диссертации
