Введение к работе
Актуальность проблемы Псориаз является широко распространенным кожным заболеванием, частота встречаемости которого в некоторых странах составляет до 3-4% населения. Патологический процесс при псориазе носит полиорганный характер и не ограничивается исключительным поражением кожи. Помимо тяжести соматического характера, поражения кожных покровов приносят больным проблемы психоэмоционального и социального плана.
К сожалению, до сих пор остаются невыясненными некоторые аспекты патогенеза данного заболевания, что существенно снижает эффективность его лечения. Несмотря на многочисленные исследования морфологических и иммунологических основ патогенеза псориаза [Бутусова Н.Н., 1990, Гришко Т.Н., 1992, Маркушева Л.И, 1997, Самцов А.В., 1997, Криницына Ю.М., 1998, Адаскевич В.П., 2000, Молочков В.А., 2001, Папонов В.Д., 2001, Кунгуров Н.В., 2002, Baadsgaard О., 1990, Travers J., 1999, Gilhar А., 2002, Gottlieb А., 2002], характер нарушения структуры и функциональной активности клеток кожи, а также особенности реализации иммунопатологических реакций остаются недостаточно изученными.
Известно, что в эпидермисе при псориазе происходят изменения процессов пролиферации и дифференцировки клеток [Мордовцев В.Н., 1992, Адаскевич В.П., 2000, Новиков А.И., 2003, Суханова Н.М., 2003]. При этом изменяется выраженность запрограммированной клеточной гибели - апоптоза. Данные об интенсивности апоптоза при псориазе немногочисленны и носят противоречивый характер [Неепеп М., 1998, Laporte М., 2000, Fukuya Y., 2002, Yamamoto Т., 2003]. Кроме того, не сформированы четкие представления о механизмах нарушения апоптоза кератиноцитов при псориазе. Известно, что псориатические кератиноциты устойчивы к индукторам апоптоза, а также определено, что в стадию регресса псориатического процесса резистентность клеток к апоптозу меняется [Wrone-Smith Т., 1997]. Это подразумевает возможность направленного воздействия на механизм запрограммированной клеточной гибели кератиноцитов с целью достижения терапевтического эффекта при псориазе, однако отсутствие данных о клеточных белках, изменение экспрессии или активности которых ассоциировано с нарушением развития апоптоза, не позволяет разработать наиболее эффективные подходы к лечению псориаза.
Важным событием в развитии апоптоза является нарушение целостности митохондрий, формирование мегаканалов (MPT - mitochondria permeability transition роге) в участках контакта внутренней и наружной митохондриальных мембран и появление митохондриального содержимого в цитоплазме, что
приводит к активации специфического каскада протеолитических реакций и генерации свободных радикалов [Crompton М., 1999]. Ключевая роль митохондрий в генезе апоптоза, процессах пролиферации и дифференцировки позволяет рассматривать белки митохондриальной локализации (прежде всего, входящие в состав МРТ) в качестве маркеров выраженности патологических состояний, связанных с нарушением апоптоза, а также в роли «мишеней» терапевтического воздействия.
К числу такого рода белков относятся сравнительно недавно идентифицированные и интенсивно изучаемые периферические бензодиазепиновые рецепторы, которые экспрессируются в клетках различных тканей, принимая непосредственное участие в формировании MPT [Costantini Р., 2000]. Лиганды периферических бензодиазепиновых рецепторов обладают биологической активностью (регуляция транспорта холестерина в митохондрии, регуляция внутриклеточного гомеостаза кальция, модуляция дыхательной активности митохондрий) и, как было продемонстрировано в некоторых клетках, могут играть роль в развитии апоптоза и регуляции клеточной пролиферации [Bono F., 1999, Beinlich А., 2000, Decaudin D., 2002]. Вместе с тем, существуют лишь единичные данные об экспрессии периферических рецепторов в кератиноцитах эпидермиса [Stoebner Р., 1998], а ее изменения при псориазе не описаны.
Известно, что периферические бензодиазепиновые рецепторы экспрессируются в антигенпрезентирующих клетках и участвуют в регуляции процессов фагоцитоза и хемотаксиса [Finnerty М., 1991, Cosentino М., 2000]. С учетом роли антигенной нагрузки организма в инициации и прогрессии псориаза [Travers J., 1999], перспективным представляется изучение особенностей функциональной активности антигенпрезентирующих клеток при псориазе, а также возможность ее модуляции агонистами периферических бензодиазепиновых рецепторов.
Цель работы
Исследовать взаимосвязь между клиническими проявлениями и интенсивностью запрограммированной клеточной гибели кератиноцитов и экспрессией периферических бензодиазепиновых рецепторов в клетках эпидермиса и нейтрофилах периферической крови больных псориазом для разработки патогенетического обоснования новых методов лечения.
Задачи исследования
-
Оценить уровень апоптоза кератиноцитов у больных псориазом с длительностью заболевания до 10 и от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования и регресса заболевания, а также корреляцию этого параметра с митотической активностью кератиноцитов, степенью лимфоцитарной инфильтрации эпидермиса и клинической стадией заболевания.
-
Выявить уровень экспрессии в коже и нейтрофилах периферической крови периферических бензодиазепиновых рецепторов у больных псориазом с длительностью заболевания до 10 и от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования и регресса заболевания.
-
Оценить функциональную активность нейтрофилов периферической крови и изучить модулирующий эффект лигандов периферических бензодиазепиновых рецепторов в отношении функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных псориазом с длительностью заболевания до 10 и от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования и регресса заболевания.
-
Доказать патогенетически обоснованность возможность применения лекарственных препаратов, действие которых направлено на модуляцию апоптоза и экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов для лечения псориаза.
Научная новизна
-
Впервые показано, что у больных с длительностью заболевания менее 10 лет отмечается более интенсивное возрастание уровня апоптоза в стадию регресса, что коррелирует с более быстрым регрессом клинических проявлений, по сравнению с больными с длительностью заболевания от 11 до 20 лет.
-
Впервые установлена корреляция между уровнем апоптотических кератиноцитов и лимфоцитов в эпидермисе больных псориазом (г=-0,90).
-
Впервые обнаружено увеличение экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов в коже больных псориазом в стадии прогрессирования заболевания и снижение данного показателя в стадию регресса, что коррелирует с уровнем апоптоза в кератиноцитах; помимо этого, идентифицирована субклеточная и интрадермальная локализация периферических бензодиазепиновых рецепторов.
-
Впервые выявлено, что экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов у больных псориазом в нейтрофилах периферической крови
остается неизмененной по сравнению со здоровыми людьми как в стадию прогрессирования, так и регрессса заболевания. 5. Впервые выявлено, что функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных псориазом с различной длительностью заболевания значительно превышает показатели у здоровых людей, как в стадию прогрессирования, так и в стадию регресса; активность периферических бензодиазепиновых рецепторов в нейтрофилах периферической крови у больных псориазом модулируется их лигандами -DBI и диазепамом.
Практическая значимость работы.
-
Уровень апоптоза кератиноцитов и изменение его динамики в эпидермисе больных псориазом являются адекватным маркером интенсивности патологического процесса и терапевтической мишенью при данном заболевании.
-
Выявлено непосредственное участие апоптоз-ассоциированного белка -периферического бензодиазепинового рецептора в патогенезе псориаза, что позволяет рассматривать его в качестве маркера для диагностики и прогноза течения заболевания, а также степени выраженности патологических изменений в коже больных псориазом и эффективности проводимой терапии.
-
Дано патогенетическое обоснование применения лекарственных препаратов, модулирующих апоптоз и экспрессию периферических бензодиазепиновых рецепторов кератиноцитов для лечения псориаза.
-
Полученные данные позволяют разрабатывать новые патогенетически обоснованные подходы к лечению псориаза у больных с различной длительностью заболевания.
Положения, выносимые на защиту
-
Для стадии прогрессирования заболевания характерно торможение апоптоза кератиноцитов и увеличение экспрессии в них периферических бензодиазепиновых рецепторов, что сопровождается лимфоцитарной инфильтрацией эпидермиса.
-
В стадию рессирования заболевания происходит интенсификация апоптоза кератиноцитов и снижение экспрессии в них периферических бензодиазепиновых рецепторов.
-
Для псориаза характерно повышение функциональной активности нейтрофилов периферической крови вне зависимости от стадии течения
патологического процесса, что свидетельствует о персистентой активности антигенпрезентирующих клеток у больных псориазом.
-
Лиганды периферических бепзодиазепиновых рецепторов обладают выраженным модулирующим эффектом в отношении нейтрофилов периферической крови при псориазе.
-
У больных псориазом с длительностью заболевания менее 10 лет наблюдается более выраженная динамика регресса как клинических, так и морфологических изменений (апоптоз кератиноцитов, уровень лимфоцитарной инфильтрации, экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов) на фоне проводимой терапии по сравнению с больными с длительностью заболевания от 11 до 20 лет.
Внедрение результатов исследования.
Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, внедрены в практику в краевой клинической больницы №1, ООО "Лаборатория иммунохимических методов исследования", межкафедральной научно-исследовательской биохимической лаборатории КрасГМА, а также используются при чтении лекций и проведении практических занятий и семинаров у студентов КрасГМА, врачей-курсантов ФУВ.
Л пробация работы.
Основные положения диссертации доложены на IX и X Международном российско-японском симпозиумах (Канадзава, 2001, Якутск, 2003), научно-практической конференции "Современные аспекты биологии и медицины" (Томск, 2002), краевой конференции дерматовенерологов, посвященной 60-летию кафедры кожных и венерических болезней КрасГМА (Красноярск, 2003), заседании Красноярского краевого общества дерматовенерологов (2000), заседании кафедры биохимии с курсом медицинской химии Красноярской государственной медицинской академии (2002), совместном заседании проблемных комиссий «Теоретические проблемы медицины» и «Кожные и венерические болезни» Красноярской государственной медицинской академии (2003).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах текста, состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы. Работа содержит 14 фотографий, 8 рисунков, 19 таблиц.
Библиографический список включает 203 источника, из которых 51 отечественных и 152 иностранных авторов.
