Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Проблема постлучевого восстановления кроветворения - одна из ключевых проблем современной радиобиологии. Поэтому любые попытки решения этой проблемы имеют как теоретическое, так и практическое значение и являются весьма актуальными.
Установлено, что клеточным детерминантом восстановления кроветворения являются стволовые кроветворные клетки (СКК). Их уровень в летально облученном организме черезвычайно низок. Помочь организму восстановить их уровень до необходимых значений - значит найти новый путь эффективной терапии (В. Бонд и др., 1971, А.Г. Коноплянников, 1984, К.С. Чертков и др., 1976).
На радиогерапевтическую эффективность были проверены сотни веществ различных классов. Наиболее эффективными оказались экстракты селезенки, тимуса, костного мозга, а также плазма и сыворотка животных различных видов. Показано, что они содержат вещесгва, способствующие восстановлению пораженного кроветворения (Б.Б. Мороз и др., 1973, Д.Х. Маджидова и др., 1982, Г.А.Шалышва и Н.Н.Клемпарская, 1984). Имеющиеся немногочисленные экспериментальные данные наталкивают на мысль о возможном существовании прямой корреляции между радиорезистентностью животного и степенью радиотерапевтической эффективности экстракта селезенки данного животного. Так, у мышей экстракт более эффективен, чем у морской свинки - одной из наиболее чувствительных в ряду позвоночных животных. Экстракт селезенки черепахи - животного, известного своей феноменальной радиорезистентностью, гораздо более эффективен, чем экстракт селезенки мышей (О.И. Олонцева и др., 1987, А.А.Турдыев и др., 1982, 1985, F. Ellinger, 1956, 1961, L.C. Ford, 1968). .
Было показано, что плазма крови черепахи, ее экстракт селезенки и экстракт фетальной печени, являются хорошими терапевтическими препаратами (Д.Х. Маджидова, 1982, Р.Б. Усманов, 1986, Т.Н.Соколова, 1988). Однако неизвестна радиотерапевтическая актнвносп. препаратов из других органов черепахи. Поэтому поиск новых радиотерапевтическнх препаратов из черепахи и очистка веществ, ответственных за эффект, представляются весьма актуальными.
ЦЕЛЬ II ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Целью настоящей работы является получение из черепахи факторов - стимуляторов кроветворения в очищенном виде.
В соответствии с целью были определены следующие задачи:
1. Исследовать радиотерапепгический эффект экстрактов различны\ тканей среднеазиатской черепахи.
2. Максимально очистить препарат , обладающий наиболее выраженным эффектом.
3. Дать физико-химическую и биологическую характеристику очищенного препарата.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ Разработаны способы получения водных экстрактов желчи, почек, печени и мышц, а также цитозоля клеток крови среднеазиатской черепахи. Обнаружено, что все эти препараты, за исключением экстракта желчи, способствуют увеличению выживаемости облученных животных. Максимальным радиотерапевтическим эффектом обладает цитозоль клеток крови. Его удельная активность в 4 раза выше, чем у экстракта селезенки черепахи, а выход - в 12 раз выше при практически равной эффективности.
Изучен состав и биологическое действие цитозоля клеток крови черепахи, названного авторами "Тортезин". В состав препарата входят белки (87%), большую часть которых составляет гемоглобин, сахара (около 5%), липиды (0,74%). Гемоглобин представлен двумя формами с ИЭТ 7,5 и 9,5. Лечебное действие препарата проявляется в стимуляции синтеза РНК и ДНК в костном мозге. Выживаемость леченых животных возрастает на 50-70% (ФУД около 1,4). При введении препарата интактным мышам наблюдается заметная стимуляция реакции антнтелобразования.
Разработан способ трехэтапной очистки препарата "Тортезин" методами колоночной хроматографии. Степень очистки по веществу составила 300, по активности - 100. Новый препарат назван авторами "ТАУ-тортезин". Его биологическое действие аналогично действию препарата "Тортезин". Изучены основные физико-химические свойства нового препарата и доказана его пептидная природа. Препарат содержит до 10 пептидов с М.м. 2400±400 Да, причем два пептида имеют свободные аминогруппы и ИЭТ 5,2±0,2 и 8,0±0.2. Определен аминокислотный состав препарата (16 аминокислот).
Дальнейшая очистка препарата и выделение в гомогенном виде фактора, ответственного за стимулирующий эффект, может дать в руки исследователей тонкий инструмент, способный избирательно воздействовать на пролиферативную активность кроветворных клеток-предшественников. Это открывает перспективы коррекции иммунного статуса и лечения Некоторых гематологических и онкологических заболеваний.
ПУБЛИКАЦИИ И АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. По материалам
диссертации опубликовано 14 печатных работ, получено 1 Авторское свидетельство СССР и 4 Предварительных Патента РУз. Резулыагы работы доложены на Шестом Всесоюзном симпозиуме по химии белков и пептидов (Рига, 1983), 1-й Конференции биохимиков \'«Г>ен-і!сіанл (Ташкент, 1986), 2-й Конференции биохимиков
Узбекистана (Ташкент, 1993), 3-й научно-практической Конференции "Актуальные вопросы медицины" (Ташкент, 1994), 1-м Съезде онкологов Республики Узбекистан с международным участием (Ташкент, 1994), Конференции "Структура и функции биологических мембран" (Ташкент, 1995), 3rd Internat. Meeting NPPE-95 (Dubna, Russia, 1995).
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертационная работа изложена на 110 страницах машинописного текста, состоит из Введения, Обзора литературы (Глава I), Материалов и методов исследований (Глава 2), Результатов исследования и их обсуждения (Глава 3), Заключения, Выводов и списка цитированной литературы, включающего 205 источников. Диссертация иллюстрирована 13 рисунками и 17 таблицами.
