Содержание к диссертации
Введение
2.Обзор литературы 9
2.1. Современные сведения о гемостазе 9
2.2. Свободнорадикальные процессы и их роль в регуляции гемостаза 32
2.3. Природные цеолиты и их биологические эффекты 41
3. Материалы и методы исследования 55
4. Результаты собственных исследований 58
4.1. Влияние природных цеолитов на состояние гемостаза и липопероксидации у здоровых животных 58
4.2. Влияние природных цеолитов на гемостаз, липопероксидацию и состояние систем жизнеобеспечения в условиях экзогенной тромбопластинемии 62
4.3. Влияние природных цеолитов на выживаемость животных игистологическую картину внутренних органов при экзогенной тромбопластинемии 72
4.4. Влияние природных цеолитов на коагуляционный потенциал клеток крови и функциональную активность тромбоцитов 80
5. Обсуждение результатов 86
6. Выводы 108
7. Литература 109
- Современные сведения о гемостазе
- Свободнорадикальные процессы и их роль в регуляции гемостаза
- Влияние природных цеолитов на состояние гемостаза и липопероксидации у здоровых животных
- Влияние природных цеолитов на гемостаз, липопероксидацию и состояние систем жизнеобеспечения в условиях экзогенной тромбопластинемии
Введение к работе
Актуальность проблемы. Широкое распространение патологических состояний, вызываемых реакцией напряжения [55, 90, 126, 133, 140, 148, 249] и проявляющихся тромбогеморрагическими осложнениями, требует поиска новых средств направленного воздействия на гемостаз.
Независимо от причины, обуславливающей ускорение постоянно протекающего внутрисосудистого свертывания, основным разрешающим фактором служит избыточное образование тромбина - сериновой протеазы, вызывающей коагуляционные превращения фибриногена, активацию клеток крови и прокоагулянтов [94]. Среди важнейших инициаторов тромбинемии особое место занимают тромбопластические субстанции, содержащиеся в различных клетках, либо попадающие в кровоток в виде фрагментов мембранных структур в результате повреждения или естественной гибели клеток [31].
Усилия гемостазиологов до настоящего времени в большей степени были направлены на борьбу с последствиями усиленного тромбиногенеза - в клинической практике широко используются различные формы гепарина, обладающие прямым антикоагулянтным эффектом, и ингибиторы синтеза витамин К-зависимых факторов свертывания [15]. Имеются сведения о синтетических пентасахаридах, ингибирующих X фактор свертывания, препаратах с прямым антитромбиновым эффектом, ингибиторах самосборки фибрина и ряде других [159, 206, 262]. Применение известных антикоагулянтов в профилактических целях ограничено их введением путем инъекций (гепарин), кумулятивными свойствами (антивитамины К), необходимостью постоянного контроля за гемокоагуляцией, возможностью развития тромбоцитопении и гиперагрегабельности тромбоцитов.
В исследованиях, проведенных за последние десятилетия, показана возможность снижения угрозы тромбообразования с помощью мяіких неспецифических воздействий, в частности, антиоксидантами из группы витаминов [47]. Профилактическое использование антиоксидантов ограничивает запредельное ускорение постоянно протекающего свертывания крови до рамок ДВС-синдрома в условиях эксперимента и клиники. Так, показан их защитный эффект при акушерской патологии [68, 137], диффузном токсическом зобе [38], аденоме предстательной железы [136], переломах трубчатых костей [33], паразитарных заболеваниях [139] и т.д. Обнаружено, что позитивное действие антиоксидантов обеспечивается разрывом взаимопотенцирующих отношений между гемостазом и липопероксидацией типа «тромбинемия - активация липопероксидации -» активация тромбинемии - ...» или «активация липопероксидации -» активация тромбинемии -» активация липопероксидации- ...»[120].
К субстанциям с доказанными антиоксидантными свойствами относятся цеолиты - природные модуляторы селективных энтеро-доноро-сорбентных взаимодействий между собственной минеральной структурой и сложным биохимическим конвейером желудочно-кишечного тракта, способные улавливать свободные радикалы [180].
Экспериментальные и клинические наблюдения показали, что цеолиты, помимо антиоксидантного, обладают широким спектром эффектов иного рода иммуномодулирующим, регенераторным, антитоксическим,
десенсибилизирующим, гепатопротекторным [18, 83, 150]. Вместе с тем, в доступной нам литературе отсутствуют сведения о направленном воздействии цеолитов на процессы свертывания крови. Учитывая тесную взаимосвязь гемостаза с липопероксидацией, данные об антиоксидантных свойствах цеолитов, а также отсутствие сведений о влиянии цеолитов на гемостаз, нам представлялось перспективным изучить характер, направленность и возможные механизмы влияния на свертывание крови в норме и при активации гемостаза природных алюмосиликатов вулканогенно-пеплового происхождения VII минералогической группы. Цель работы: изучить характер, направленность и механизмы влияния цеолитов на гемостаз в условиях физиологической нормы и при тромбопластинемии.
Задачи исследования:
1. Изучить состояние плазмокоагуляции и ПОЛ крови при дополнительном введении цеолитов VII минералогической группы в экспериментах in vivo.
2. Оценить влияние природных цеолитов на биохимический компонент гемостаза.
3. Сравнить частоту гибели животных и морфологические изменения в тканях внутренних органов при экзогенной тромбопластинемии на фоне введения цеолитов и без них.
4. Исследовать сдвиги гемостаза, ПОЛ крови и других метаболических процессов, вызываемых тромбопластинемией, в условиях предварительного введения цеолитов.
5. Изучить эффект природных цеолитов на морфофункциональные характеристики тромбоцитов и эритроцитов.
Научная новизна:
Впервые установлено, что природные цеолиты оказывают мягкий гипокоагулемический эффект при пероральном введении в условиях нормокоагуляции, что связано с уменьшением активности ряда прокоагулянтов и ростом фибринолитической активности. Впервые показано, что введение цеолитов повышает выживаемость животных при экзогенной тромбопластинемии, ограничивая деструктивные изменения внутренних органов. Получены данные, позволяющие утверждать, что защитное действие цеолитов, проявляющееся ослаблением гемокоагуляционных сдвигов при тромбопластинемии, реализуется за счет изменения функциональной активности тромбоцитов и коагуляционной активности эритроцитов. Впервые установлено, что защитный эффект цеолитов при тромбинемии связан с оптимизацией энергетического обмена, кислородтранспортной функции и ингибированием свободнорадикальных процессов в клетках крови.
Теоретическая и практическая значимость работы:
Полученные данные расширяют фундаментальные представления о биологических эффектах природных цеолитов, в частности - их влиянии на различные компоненты гемостаза в норме и при активации свертывания крови.
Результаты работы обосновывают необходимость дальнейшего изучения механизмов влияния цеолитов на гемостаз с целью возможного их внедрения в клиническую практику как средств неспецифической профилактики тромбогеморрагических осложнений.
Положения, выносимые на защиту:
1. Природные цеолиты VII минералогической группы, ослабляя интенсивность свободнорадикальных процессов, вызывают гипокоагулемический эффект, снижают частоту гибели животных при экзогенной тромбопластинемии, ограничивая нарушения микроциркуляции, и ослабляя дистрофические и деструктивные изменения функционально зрелых элементов внутренних органов.
2. Уменьшение коагуляционного потенциала при введении цеолитов связано со снижением содержания в крови ряда факторов плазмокоагуляции, ростом фибринолитической активности, изменением морфофункциональных свойств тромбоцитов и эритроцитов.
3. Оптимизация субстратного обеспечения клеток на фоне инверсивной реакции гормонов надпочечников в условиях тромбопластинемии, а также ограничение морфофункциональных изменений на клеточном и тканевом уровнях позволяют рассматривать природные цеолиты как фактор неспецифической защиты организма при стресс-воздействиях.
Апробация работы.
Основные положения диссертационной работы доложены на
международных симпозиумах «Югра-эмбрио. Закономерности эмбриофетальных морфогенезов у человека и позвоночных животных» (г. Хашы-Мансийск, 2004, 2006), международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья» (г. Тюмень, 2004), совместном заседании кафедр медицинской и биологической химии, нормальной физиологии и гистологии, цитологии и эмбриологии.
Современные сведения о гемостазе
Согласно классическим представлениям гемостаз - это биологическая система, обеспечивающая с одной стороны, сохранение жидкого состояния циркулирующей крови, а с другой, предупреждение и купирование кровотечений за счет поддержания целостности сосудистой стенки, а также тромбирования сосудов при их повреждении [14].
Гемостаз поддерживается взаимным функционированием его компонентов: сосудистой стенки, клеток крови, плазменных ферментов свертывания крови, антикоагулянтов и системы фибринолиза.
Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз. Сосудистая стенка (преимущественно интима) и клетки крови (прежде всего, тромбоциты, а также эритроциты, лейкоциты и другие) всегда действуют сочетанно, поддерживая сосудисто-тромбоцитарный гемостаз.
Ведущую роль из-за своего прямого контакта с кровью играет интима, выстланная эндотелиоцитами. Клеточная поверхность эндотелиоцитов образует три замкнутых и связанных между собой слоя: внешний (гликокаликс), средний (плазматическая мембрана) и внутренний (субмембранный) [30].
Основу гликокаликса составляют белки, протеогликаны, гликопротеиды и гликолипиды. Около 80% гликозаминогликанов представлены гепарансульфатом и дерматансульфатом, имеющими отрицательный заряд, обеспечивающий антитромбогенную активность [11].
В норме эндотелий тромборезистентен из-за отрицательного заряда гликокаликса и способности синтезировать различные антикоагулянты и антиагреганты. К важнейшим из них относятся ниже следующие.
Простациклин (Pgb) - антиагрегант, образующийся в эндотелии сосудов из арахидоновой и эйкозопентаеновой (серии 1ыЗ) кислот через образование эндоперекисей PgG2 и PgH2 [38]. Синтезирующиеся в тромбоцитах, они поступают в кровь и захватываются эндотелием, где под действием простациклинсинтазы превращаются в Pgl2. Простациклин - мощный эндотелиальный вазодилататор, активность которого регулируется гемодинамическими эффекторами (повреждение сосудистой стенки и пульсовые колебания давления), а также химическими медиаторами (тромбин, гистамин, тромбоксан А2 и др.) [27, 201]. Pgl2 осуществляет свои эффекты при связывании с G-протеиновым рецептором, связанным с аденилциклазой, что ведет к повышению внутриклеточного содержания ц-АМФ. Простациклин ингибирует агрегацию тромбоцитов и не влияет на адгезию [95].
Антитромбин III - белок, синтезирующийся эндотелиоцитами [185] и гепатоцитами [241], связывает и инактивирует тромбин и другие активированные коагуляционные факторы. Его влияние на тромбин усиливается гепарином, с которым он образует комплексы на поверхности эндотелиоцитов [48].
Протеин С синтезируется в печени, является гликопротеином, локализован на поверхности эндотелиоцитов. Активируется тромбином и фактором Ха (активацию ускоряет тромбомодулин), образуя активированный протеин С (АРС). Он в свою очередь инактивирует фф. Va [239] и VIH:K (кофакторы - протеин S, фосфолипиды и Са ) путем ограниченного протеолиза, ингибируя, тем самым, генерацию фактора Ха и тромбина. АРС стимулирует фибринолиз, угнетая ингибитор активатора плазминогена [187].
Активатор плазминогена (ангиокиназа) - сериновая протеаза, аффинная к плазминогену в присутствии фибрина. Ангиокиназу активируют вазоактивные агенты, окклюзия сосудов, физическая нагрузка [221]. Активатор плазминогена превращает плазминоген в плазмин, который расщепляет фибриноген и фибрин до растворимых продуктов и снижает активацию тромбоцитов, модифицируя рецепторы на их поверхности [280].
Помимо этого, в сосудистой стенке образуются субстанции прокоагулянтного ряда.
Эндотелий синтезирует фактор фон Виллебранда (VIII :ФВ) -гликопротеин плазмы, принимающий участие в процессах адгезии и агрегации тромбоцитов в присутствии ристомицина [175]. УШ:ФВ является прокоагулянтным протеином, транспортирующим фактор VIII:K, удлиняя время его полужизни в плазме, защищает ф. VIII от инактивации активированным протеином С и изменяет некоторые другие его свойства. Фактор фон Виллебранда является адгезивным протеином, который содействует образованию первичного тромбоцитарного сгустка, выступая в роли «моста» между тромбоцитами и макромолекулами субэндотелия [193].
Фактор, активирующий тромбоциты (ФАТ), образующийся под действием продуктов липооксигеназного пути метаболизма арахидоновой кислоты - лейкотриенов С-4 и D-4, индуцирует агрегацию тромбоцитов независимо от АДФ и арахидоната [259, 270].
Тканевой фактор (ТФ) - тканевой тромбопластин - высокомолекулярный липопротеин эндотелиальных мембран, аналог фактора III плазмокоагуляции, содержащий апопротеин III [31]. Тканевой фактор при повреждении эндотелия образует Са -зависимый мембрано-связаный комплекс с факторами VH/VIIa, который активирует факторы IX и X, составляя внешний путь свертывания. Связываясь с фактором VII, ТФ повышает степень его активации различными энзимами, выступая в роли аллостерического регулятора [112, 251].
Тромбопластическая активность эндотелия растет под действием тромбина, адреналина, эндотоксинов, компонентов комплемента, тромбоцитов и при повреждении интимы [181]. Эндотелий синтезирует также аналоги плазменных факторов VII, XIII, антигепаринового и ряда других.
Свободнорадикальные процессы и их роль в регуляции гемостаза
Перекисное окисление липидов (ПОЛ) или липопероксидация (ЛПО) -процесс, протекающий по законам радикально-цепных реакций с вырожденным разветвлением. Известны два пути использования кислорода организмом: оксидазный и оксигеназный.
Оксидазный представляет собой четырёхэлектронное восстановление кислорода с образованием воды, реализуется конечным звеном дыхательной цепи - цитохромоксидазой [151].
Оксигеназный предполагает включение одного или двух атомов кислорода в молекулу субстрата. В реакциях, протекающих по этому пути, полное восстановление кислорода не происходит и могут образовываться его активные формы - супероксиданионрадикал, перекись водорода и гидроксильный радикал (Ог , Н202 и НО") [37, 240]. Инициаторы образования активных форм кислорода разнообразны: дисбаланс соотношения субстратов окисления, переносчиков кислорода и водорода (гипоксия, гипероксия, реоксигенация), избыточный выброс катехоламинов при стресс-ситуациях [57], накопление металлсодержащих комплексов переменной валентности, инактивация ферментных и неферментных антиоксидантных систем, воздействие токсикантов (CCU, пестициды, антибиотики, ксенобиотики, соли тяжелых металлов) [36, 145, 161], воздействие физических факторов, дыхательный взрыв лейкоцитов [157].
Липиды биомембран (их жирнокислотные радикалы) взаимодействуют с активными формами кислорода независимо от природы инициирующего воздействия, что приводит к появлению липопероксидов - процесс, свойственный нормально функционирующей клетке. В результате образуются постоянно регенерирующие жирнокислотные радикалы, приводящие к встраиванию кислорода в молекулы липидов и появлению гидропероксидов 33 первичных продуктов ЛПО. Форма этих продуктов - сопряженные диеновые конъюгаты (ДК) [97].
Накапливающиеся гидроперекиси расщепляются до вторичных продуктов окисления (карбонильные соединения, спирты, эпоксиды и др.), дальнейшее окисление которых приводит к появлению диальдегидов, которые определяют по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-активные продукты).
За счет полярных группировок гидроперекиси фосфолипидов осуществляют следующие эффекты [72]. - в микроокружении интегральных белков накопление гидроперекисей фосфолипидов с детергентным действием уменьшает количество ненасыщенных липидов, что увеличивает подвижность полипептидных цепей и активность ферментов. При большем ускорении ЛПО снижается количество непредельных фосфолипидов и это ограничивает подвижность интегральных белков, в результате чего изменяется активность ферментов, рецепторов и каналообразующих пептидов [37]. - из-за увеличения полярности накапливающиеся окисленные фосфолипиды взаимодействют друг с другом, образуя упорядоченные группы - перекисные кластеры, это способствует возникновению каналов проницаемости для разных ионов, в частности для ионов кальция, что в свою очередь приводит (наряду с инактивацией Са2+-АТФ-азы) к повышению концентрации кальция внутри клетки. Выраженная «кластеризация» сопровождается фрагментацией мембран [155]. - диальдегиды - продукты распада гидроперекисей фосфолипидов - образуют со свободными аминогруппами белков биомембраны межмолекулярные сшивки, и это усугубляет инактивацию белков [147]. - активация ЛПО вызывает окисление сульфгидрильных групп активного центра мембранных белков, что также сопровождается их инактивацией [36].
Первый и второй эффекты отчасти обратимы - замена окисленных участков в углеводородных цепях может происходить при участии фосфолипазных и ацилтрансферазных ферментных систем, в то время как последствия третьего и четвертого эффекюв могут устраняться только за счет синтеза поврежденных молекул de novo [72J.
Физиологическая роль липопероксидации, помимо участия в процессах естественного обновления клеточных структур, заключается в обеспечении образования эйкозаноидов - группы биологически активных соединений, включающей простагландины, тромбоксаны и лейкотриены. Предшественниками эйкозаноидов являются арахидоновая кислота и другие жирные кислоты с двойными связями, которые чередуются с метиленовыми группами [147, 181]. Высвобождение этих кислот (главным образом арахидоновой) из мембранных фосфолипидов происходит при участии фосфолипазы Аг. [230].
В условиях физиологической нормы, несмотря на присутствие в клетках инициаторов, субстратов и катализаторов липопероксидации, чрезмерная активация процесса не достигается, так как ей препятствует постоянно функционирующая антиоксидантная система, которая ограничивает окисление во всех его этапах.
Природные антиоксиданты представлены ферментами, витаминами и рядом метаболитов. К антиоксидантам ферментной природы относятся следующие энзимы [37]: - супероксиддисмутаза, трансформирующая супероксиданионрадикалы до менее активной формы - перекиси водорода (Н2О2), которая расщепляется каталазами и пероксидазами [151]. - каталазы - гемсодержащие ферменты, катализирующие реакцию распада перекиси водорода на кислород и воду [166]. - пероксидазы - энзимы, устраняющие перекись водорода, а также гидроперекиси липидов при участии глуїатиона в качестве восстановителя. - комплекс глутатион-пероксидаза защищает лизосомальные мембраны от перекисного окисления [182].
Влияние природных цеолитов на состояние гемостаза и липопероксидации у здоровых животных
Данные литературы, свидетельствующие о способностях природных цеолитов тормозить свободнорадикальные процессы [213] и сведения о взаимозависимости гемостаза и липопероксидации [154] позволили нам предположить, что введение цеолитов может сказаться и на состоянии свертывания крови. Поэтому, приступая к исследованию, мы, прежде всего, изучили влияние цеолитов на показатели плазмокоагуляции и ПОЛ крови у здоровых животных. Для определения оптимальных сроков введения изучаемой субстанции мы исходили
Как следует из данных таблицы 1, 10-дневное введение цеолитов в дозе 0,25 г/кг массы тела привело к двоякому эффекту - торможению свободнорадикальных процессов в клетках крови и гипокоагулемии.
В тромбоцитах и эритроцитах снизилось содержание диеновых конъюгатов и МДА, а в эритроцитах, кроме того, из следующих умозаключений: - необходимо добиться достоверно подтвержденного антиоксидантного эффекта, сопряженного со сдвигами гемокоагуляции; - маловероятно, что этого удастся достигнуть за счет однократного или немногократного введения (в противном случае свойства цеолитов как быстро действующих антикоагулянтов, наверняка были бы описаны); - профилактическое использование неспецифических модуляторов свертывания крови (например, витаминов или других антиоксидантов), как правило, ограничивается 2-3-недельным сроком [33, 131]. Учитывая выше сказанное, в своих исследованиях мы остановились на 10- и 20-дневных сроках введения природных цеолитов.вырос антиоксидантный потенциал.
Гипокоагулемия проявилась удлинением АЧТВ (на 11,7%) и уменьшением ПТИ (на 8%) на фоне снижения уровня ангитромбина III (на 12% ). Обращает на себя внимание существенный (на 53%) прирост фибринолитической активности.
К 20-му дню изменения со стороны параметров пероксидации отличались приростом уровня токоферола в тромбоцитах (табл. 2). В остальном созданный 10-дневным введением цеолитов антиоксидантный фон сохранялся, выражаясь снижением концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ.
Гемостатические сдвиги, имея ту же направленность, что и при 10-дневном введении, усугубились. Степень удлинения АЧТВ составила 19%, ПТИ снизился на 10%, наблюдалось увеличение тромбинового времени (на 44% ). Последний факт может быть связан с еще большей активацией фибринолиза, продукты которого (ПДФ), как известно, тормозят ITI фазу плазмокоагуляции [28].
Значительно, в 2 раза, снизилась концентрация основного белкового антикоагулянта крови - антитромбина III, что мы расценили как «нежелательный» признак, имея в виду его быстрое потребление в ситуациях, связанных с внезапной активацией гемостаза. Это заставило отказаться от столь длительного срока введения цеолитов, тем более, что задача создания стойкого антиоксидантного фона в сочетании с «мягким» гипокоагулирующим эффектом была достигнута уже к 10 суткам введения изучаемой субстанции.
Обнаруженная основными клоттинговыми тестами (АЧТВ и ПТИ) гипокоагулемия, с учетом снижения уровня антитромбина III, не связана, таким образом, с воздействием на антикоагулянтное звено гемостаза. В связи с этим, далее мы изучили влияние цеолитов на содержание факторов плазмокоагуляции.
Оказалось, что 10-дневное введение цеолитов приводит к уменьшению активности большинсіва изученных прокоагулянтов (табл. 3).
Особенно выраженно снизился уровень факторов «внутреннего» пути активации протромбиназы: XI (на 37,7%), IX (на 35,3%) и VIII:C (на 14%). Учитывая, что количественной модификации подверглось и содержание факторов «протромбинового комплекса» - II (снижение на 23,7%) и V (на 11,5%), - становится объяснимым изменение интегральных клоттинговых тестов АЧТВ и ПТИ.
Таким образом, природные цеолиты тормозят свободнорадикальные процессы в клетках крови и оказывают разнонаправленное влияние на плазменные ферментные системы гемостаза. Возникающая при их введении интактным животным гипокоагуляция связана со снижением уровня ряда прокоагулянтов и ростом фибринолитической активности.
Влияние природных цеолитов на гемостаз, липопероксидацию и состояние систем жизнеобеспечения в условиях экзогенной тромбопластинемии
В этой серии опытов мы использовали модель, интегрально отражающую потенциальную возможность организма противостоять внезапно развивающейся активации свертывания крови: крысам вводили тромбопластин в дозах, вызывающих гибель примерно каждого второго животного (4 мг/100 г массы, активность 15 с). Взвесь коммерческого тромбоп ласти на вводили внутривенно интактным и получавшим природные цеолиты животным, контролируя их выживаемость в течение 24 ч.
На фоне предварительного введения цеолитов выживаемость животных составила 58,7%, в контроле - 47,6% (табл. 12). Таким образом, предварительное введение природных цеолитов снизило частоту гибели на 23%. Поскольку причиной гибели животных при внутривенном введении тромбопластина является внутрисосудистое свертывание крови [86], приведенные данные подтверждают на организменном уровне способность цеолитов повышать толерантность к воздействию индукторов тромбиногенеза.
Для проверки этого вывода мы провели гистологические исследования внутренних органов. Для исследования отбирали легкие, почки, надпочечники, печень и селезенку у интактных крыс и крыс, которым ввели тромбопластин (дозы - как в предыдущем эксперименте) на фоне предварительного введения цеолитов и без них. Животных умертвляли через 1, 3, 6 и 24 ч (пробы отбирались только у животных, выживших после инъекции тромбопластина).
После введения ТТП контрольным животным значительные отклонения от исходных показателей определялись в органах с обильно развитой системой васкуляризации (почки), в органах, функциональная состоятельность которых коррелирует со сложившейся метаболической ситуацией в сосудистом бассейне (надпочечник), в структурах, морфологические компоненты которых непосредственно участвуют в регуляции агрегатного состояния крови (легкое).
В почках после инъекции тромбопластина морфологически обнаруживались изменения во всех функционально значимых структурах метанефрона. Нарушался фильтрационный барьер, наблюдалось проникновение форменных элементов в мочевое пространство, изменялись плотность артериального клубочка, соединительнотканная основа и клеточный состав мезангия, подвергалась воздействию канальцевая часть мочеотводящих путей (собирательные трубочки и сосочковые протоки).
Через 1 ч после введения ТТП замедлялся кровоток в приносящих артериолах, уменьшалась плотность артериального клубочка, что, по всей вероятности, следует рассматривать, как результат спазмирования стенок приносящих артериол. В результате снижался объем сосудистого полюса тельца и расширялась полость мочевого пространства. Более наружные сосуды коркового вещества типа междольковых артерий и артериол, а также прямые артерии и вены мозгового вещества почки адаптировались к действию стрессового фактора и заметных отклонений не обнаруживали.
Эпителий капсулы тельца сохранял строение, характерное для интактных структур. Мочевое пространство было замещено гомогенным слабо ШИК-позитивным веществом и не содержало форменных элементов крови.
Спустя 6 ч адаптационные механизмы защиты нефрона постепенно истощились и начали выявляться морфологические признаки процессов дегенеративного характера. Ядра эпителиощлов наружного листка капсулы нефрона округлялись, а сами клетки приобретали кубическую форму. Подоциш и элементы мезангия на этой стадии эксперимента сохраняли признаки витальности, а в клетках клубочка определялись клетки крови, что подтверждало сохранение кровотока. Полость мочевого пространства занималась ШИК-позитивным субстратом, интенсивность окрашивания которого возрастала по сравнению с предыдущей стадией.
Через 24 ч в почке обнаруживались тельца в состоянии развивающегося некроза, мочевые пространства которых заменялись слущенными эпителиоцитами наружного листка, клетками и плазмой крови, апикальными участками деструктивно измененных подоцитов. Базальная мембрана фильтрационного барьера была фрагментирована, однако полностью не разрушалась, что указывает на ее высокую устойчивость к действию экстремальных факторов и возможность регенерации.
Канальцевая часть метанефронов также меняла свою структуру, причем наиболее заметные морфологические сдвиги происходили в проксимальном канальце. Базальная мембрана эпителия канальца была фрагментарно разрушена, щеточная каемка слущивалась практически со всех нефроцитов, сохранившиеся эпителиальные клетки сохраняли регенеративную способность. В их цитоплазме выявлялись фигуры митотического деления, определялись двуядерные клетки. Эпителиальный покров отдельных канальцев слущивался на значительном протяжении, полость канальца без резких границ переходила в интерстиций, замененный геморрагиями: содержимое канальцев характеризовалось наличием плазмы и клеток крови, сладжей тромбоцитов и эритроцитов. В ряде канальцев наблюдался гемолиз эритроцитов, изменение их тинкториальных свойств, разрыхление плазмалеммы, отсутствие четких клеточных границ.
