Введение к работе
Более полувека витамины используют не только в профилактике и лечении гиповитаминозов, но и в качестве соединений, контролирующих состояние обменных процессов, определяющих резистентность организма в широком смысле слова [Б.А.Лавров 1957; О.А.Громова, Л.С.Намазова, 2003; П.Н. Шараев, 2004; A.Opperhuizen е.а., 2005; C.Weiss е.а., 2005; A.K.Shirakawa, 2008; О. Erdeve, 2009]. Выявлена связь витаминов со свободно-радикальным окислением [В.П.Мищенко, 1981], поддерживающим проницаемость биомембран [Е.Б. Бур-лакова, 1997; Ю.А.Владимиров, 2005; A.Opperhuizen, 2008]). Их применяют в терапии патогенетически отличающихся болезненных состояний [М.И.Смирнов, 1974; А.А. Колесов, 1987; Ю.А.Овчинников, 1987;- И.П.Баранов и др., 2003; В.СЛрочкин, 2004; Е.Л.Грякалова, 2005; Э.Н.Согрин, 2005; O.Lidegaard, 1995; A. Hoffer, 2010], в том числе и протекающих с нарушениями гемостаза.
Установлены позитивные эффекты некоторых витаминов при заболеваниях с явлениями оксидативного стресса. В этом плане особое внимание уделено вита-минам-антиоксидантам [В.П.Мищенко, 1981; СЛ.Галян, 1993; А.Ш.Бышевский и др., 2003; П.Я.Шаповалова и. др., 2008; М.Р. Iqbal е.а., 2005; A.Mahmood, е.а., 2005; Y.Nadir е.а., 2007]. Вместе с тем, при изучении связи вигамины-гемостаз редко учитывают исходный уровень обеспеченности витаминами организма подопытных, и лишь изредка используют пищевые рационы, сбалансированные по нутриентам, в том числе и по витаминам [Г.В.Андреенко и др., 1958, 1969; А.Ш.Бышевский и др., 2006, 2009; Е.М.Шаповалова и др., 2008; MJ.Cooper е.а., 2006; К. Groenbaek е.а., 2006]. Лишь в последние годы начали изучать влияние витаминов не только на отдельные про- и антикоагулянты, но и на группы маркеров, отражающих наклонность к кровоточивости или к тромбофилии. Изучение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) при авитаминозах и избытке витаминов выявило связь между скоростью НВСК и интенсивностью липидпероксидации (ЛПО) [Е.А.Винокурова, 2003, 2006; А.Ш. Бышев-ский и др., 2005; В.П.Мищенко и др., 2005].
Утвердился взгляд, в согласии с которым НВСК, медленно протекающее в физиологических условиях, ускоряясь, может перерасти в диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови [Д.М.Зубаиров и др., 1989; З.С.Баркаган, 1989; Д.М.Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2000, 2002]. Показано также, что сдвиги НВСК, оцениваемые по уровню ряда маркеров, позволяют выявить наклонность к внутрисосудистому тромбообразованию - следствию усиленного тромбиноге-неза [З.СБаркаган, А.П.Момот, 1998; И.Н.Бокарев, 2002; M.Lomtadze е.а., 2005; H.W. Park е.а., 2005; H.Bernhard е.а., 2009; O.Segers е.а., 2010].
Установлено и следующее: 1) в терапии заболеваний с нарушениями гемостаза чаще других используют витамины А, Е, В5, Bi2 и С, дефицит или избыток которых по степени влияния на толерантность к тромбину располагаются в следующем порядке: А > Е > Ви > С > В5 [Е.М.Шаповалова и др., 2008; А.Ш.Бышевский и др., 2009]; 2) влияние витаминов-антиоксидантов на способность организма реагировать на гипертромбинемию и их влияние на интенсивность НВСК, как величину, обратную толерантности к тромбину (ТкТР), освещена в единичных работах [А.ШБышевский и др., 2003, 2005; Е.М.Шаповалова
и др., 2008; A.Sh. Byshevsky е.а., 2008], а экспериментальные данные о НВСК и ТкТР при гипертромбинемии - лишь в двух публикациях [СЛ.Галян, 1993, В.Г. Соловьев, 1997)], хотя гипертромбинемия - непременная составляющая наклонности к тромбофилии [Д.М.Зубаиров, 2000]; 3) эффекты витаминов-антиоксидантов на ТкТР (по частоте гибели животных при введении тромбина) [А.Ш.Бышевский, 1978] и единственное исследование, в котором оценивалась толерантность к тромбину при введении сочетаний витаминов А, Е, В5, В12 и С [А.Ш.Бышевский и др., 2009], выявили, что витамины А и Е заметнее остальных влияют на это свойство организма.
Этими данными обоснована необходимость и перспективность продолжения исследований с тем, чтобы экспериментально оценить способность сочетания витаминов А и Е (их отсутствия и избытка) на липидпероксидацию и гемостаз и получить сведения, которые могли бы использоваться в лечении состояний, протекающих с гипертромбинемией, т.е. с риском тромбообразования.
Цель исследования
Изучить экспериментально закономерности изменения интегральных показателей состояния гемостаза {непрерывного внутрисосудистого свертывания и толерантности к тромбину), липидпероксидации и антиоксидантного потенциала тромбоцитов в отсутствии и при избытке витаминов А и Е порознь и в сочетаниях.
Задачи исследования
-
Количественно оценить изменения интенсивности липидпероксидации, антиоксидантного потенциала тромбоцитов, плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, фибринолиза и толерантности к тромбину в отсутствии и при избытке витамин А.
-
Количественно оценить все перечисленные в п. 1 величины в отсутствии и при избытке витамин Е.
-
Количественно оценить все те же величины при одновременном отсутствии и избытке витаминов А и Е.
-
Все те же показатели изучить в условиях провоцируемой гиперкоагуляции при длительном содержании подопытных животных на рационе без витамина А или Е и без обоих витаминов, а также при их избытке в рационе питания.
-
Изучить зависимость изменения тех же показателей от степени создаваемой гиперкоагуляции (дозированное введение тканевого тромбопластина - ф. III свертывания крови).
-
Провести статистический и графический анализ полученных данных для установления характера взаимосвязей между состоянием липидпероксидации, непрерывного внутрисосудистого свертывание крови, фибринолиза и толерантностью к тромбину при всех изученных экспериментальных ситуациях.
Дизайн экспериментов
Оценить состояние ЛПО, АОП, уровня маркеров НВСК, фибринолиза и толерант
ности к тромбину при исключении из рациона крыс ретинола или токоферола и
обоих витаминов одновременно, а также при их избытке; установить зависимость
оцениваемых величин от степени провоцируемой гиперкоагуляции в тех же усло
виях (подопытные животные - нелинейные крысы-самцы с массой тела - 148±10,3г)
в серии экспериментов:
-
Крысы содержатся на А-авитаминном рационе.
-
Крысы содержатся на Е-авитаминном рационе.
-
На рационе, из которого исключены ретинол и токоферол.
-
На рационе с избытком ретинола и токоферола при изменении соотношений ме-жду дозами витаминов А и Е (в пользу ретинола и в пользу токоферола).
-
Содержание крыс на А-авитаминном, Е-авитаминном и А+Е-авитаминном ра-ционах, включающих тироксин.
-
Содержание крыс на включающем тироксин рационе с избытком ретинола, то-коферола порознь или обоих витаминов одновременно.
-
Содержание на А-авитаминном или Е-авитаминном рационе, или на рационе с избытком витаминов и последующим введением тканевого тромбопластина (опре-делять спустя 15 мин всех оцениваемые величины).
Научная новизна. 1. Впервые установлено, что исключение ретинола или токоферола из рациона питания, сбалансированного по остальным микро- и мак-ронутриентам, вызывает нарастающее ускорение перекисного окисления липи-дов и снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов, рост их высвобождающей способности и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисо-судистого свертывания крови, угнетение фибринолиза и падение толерантности к тромбину. 2. Впервые показано, что при содержании животных на рационе, в котором отсутствуют и ретинол и токоферол, сдвиги липидпероксидации в тромбоцитах и сдвиги в гемостазе, наблюдающиеся при исключении из питания одного из этих витаминов, усиливаются в форме неполной суммации. 3. Установлено, что введение со сбалансированным рационом питания ретинола и токоферола (порознь и одновременно, в дозах, эквивалентных лечебным) сопровождается замедлением липидпероксидации и повышением антиоксидантного потенциала тромбоцитов, уменьшением их способности к высвобождению факторов Рз и Р4, а также снижением уровня маркеров непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови, активацией фибринолиза и ростом толерантности к тромбину. 4. Изменяя соотношения между дозами витаминов А и Е при одновременном введении, впервые установили, что вклад токоферола во влиянии на интенсивность перекисного окисления липидов в тромбоцитах, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину выше, чем вклад ретинола. 5. Установлено, что отсутствие в питании ретинола и токоферола, особенно обоих одновременно, усиливает влияние на непрерывное внутрисо-судистое свертывание крови и на толерантность к тромбину воздействий, сопровождающихся гиперкоагулемией, вызываемой ускоренным тромбиногенезом, и показано, что избыток этих витаминов в рационе, повышает способность организма адекватно реагировать на гиперкоагулемию. 6. Подтверждено в неисполь-
зовавшихся ранее экспериментальных ситуациях, с помощью графического и математического анализа всех полученных данных, что сдвиги липидпероксида-ции и высвобождающей способности тромбоцитов предшествуют изменениям в гемостазе, и, следовательно, эффекты токоферола и ретинола на гемостаз реализуются через их влияние на перекисное окисление липидов в тромбоцитах.
