Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1 . Защитная роль каротина в организме животных 9
1.2 Пути метаболизма, биодоступность и биоконверсия каротиноидов 13
1.3. Биологическая роль цинка 21
1.4. Биологическая роль аскорбиновой кислоты 25
1.5. Характеристика водно-дисперсных комплексов витаминных препаратов, применяемых в животноводстве 31
2. Материал и методы исследования 36
3. Собственные исследования 43
3.1. Технологическая схема промышленного производства бетавитона и бетацинола, состав и физико-химические свойства изучаемых препаратов 43
3.2. Определение безвредности бетавитона и бетацинола 45
3.3. Влияние бетацинола на организм молодняка кроликов 62
3.3.1. Интенсивность роста и сохранность 62
3.3.2.Морфологические показатели крови 64
3.3.3. Биохимические показатели крови
и содержание витаминов А и С в печени 66
3.3.4. Показатели естественной резистентности 70
3.3.5. Биохимические показатели мяса 73
3.4. Сравнительная оценка влияния бетацинола, бетавитона и нитамина на физиологические и биохимические показатели организма молодняка кроликов 77
3.4.1. Сохранность и мясная продуктивность 77
3.4.2.Морфологические показатели крови 79
3.4.3. Биохимический состав крови и содержание витаминов в печени 81
3.4.4. Показатели естественной резистентности 85
3.4.5. Биохимические показатели мяса 88
3.5. Влияние бетацинола, бетавитона и нитамина на физиологическое состояние подсосного молодняка и биохимические показатели крови и печени лактирующих самок 92
3.5.1. Физиологическое состояние лактирующих самок и подсосных крольчат 92
3.5.2. Морфологические и биохимические показатели крови лактирующих самок 94
3.5.3. Показатели естественной резистентности 98
3.6. Производственные испытания препаратов и определение экономической эффективности их использования 102
4.Обсуяедение результатов исследования 105
Выводы 114
Практические предложения 116
Список использованной литературы 117
Приложения 137
- Защитная роль каротина в организме животных
- Биологическая роль аскорбиновой кислоты
- Определение безвредности бетавитона и бетацинола
- Биохимический состав крови и содержание витаминов в печени
Введение к работе
Актуальность темы. Кролиководство относится к той отрасли животноводства, которая имеет большие потенциальные возможности наращивания в короткие сроки темпов производства и увеличения объёмов выпуска ценного в гигиеническом отношении и относительного дешёвого мяса (И. С. Вакуленко, 1986, 1991). Успешное, экономически выгодное ведение этой отрасли невозможно без знания особенностей роста, развития и воспроизводства кроликов, физиологических особенностей и биохимического статуса их организма, постоянной селекционной работой по поддержке высокого уровня продуктивности (А. А. Колчев, 1986; В. Г. Плотников, 1989, 1991, 1996; В. Г. Куземкин, 1991; И. С. Вакуленко, 1999; В. П. Брылин, М. И. Казаков, 2003; Т. Л. Чичкова, 2004). Одной из основных причин, препятствующих полной реализации генетического потенциала продуктивности сельскохозяйственных животных, является нарушение обмена веществ, снижение уровня естественной резистентности организма и ухудшение воспроизводительной способности, обусловленные недостатком или низким усвоением биологически активных веществ, в частности провитаминов и витаминов (В. С. Сысоев, 1985; А. Р. Вальдман с соавт., 1985, 1993; В. Т. Самохин, А. Г. Шахов, 1981, 2000; Д. Н. Перельдик, 2003; Н. П. Кириллов с соавт., 2004).
С учётом этого весьма актуальной задачей следует считать разработку эффективных и безопасных средств с высокой их доступностью для организма, повышающих его резистентность и иммунную реактивность, и, в конечном счёте, способствующих реализации потенциала высокой продуктивности (О. В. Мерзленко, 1998; А. А. Шапошников, 1998; В. А. Антипов, 2001; В. И. Дорожкин с соавт., 2001; Б. П. Струнин с соавт., 2001).
Витамин А относится к таким средствам, поскольку он участвует в регуляции многих метаболических процессов, включая и протеосинтез (А. А. Душейко, 1989). Поскольку этот витамин не синтезируется другими растениями, в организм травоядных животных он поступает в виде своего предше-
ственника - р-каротина, которым богаты морковь, зелёные корма, травяная мука и другие кормовые средства. В случаях дефицита этих кормов приходится использовать синтетические аналоги Р-каротина.
В условиях промышленного кролиководства только за счёт оптимальной обеспеченности каротином и витамином А удаётся поддерживать нормальное физиологическое состояние и высокую продуктивность животных (В. Н. Помытко с соавт., 1982; А. А. Шевченко, 2000; В. А. Александров, 2001).
Несмотря на довольно широкий арсенал препаратов с А-витаминной активностью их применение пока ограничено, что связано с высокой их стоимостью, малой эффективностью либо нетехнологичностью предлагаемых для групповой подкормки лекарственных форм, например масляных растворов. В последние годы как в нашей стране, так и за рубежом разработаны новые водно-дисперсные формы Р-каротина, а также его сочетания с другими веществами-синергистами, обеспечивающими лучшее его усвоение и биотрансформацию в витамин А (А. В. Комаров, 1999; В. А. Антипов с соавт., 2001). К таким композиционным средствам относятся отечественные препараты бетавитон и бетацинол. Однако для их внедрения в практику кролиководства необходимо знать их токсичность для кроликов, особенности влияния на физиологическое состояние организма этих животных, на воспроизводство, биохимический состав тканей и качество получаемой продукции.
Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы состояла в изучении токсикологических свойств бетавитона и бетацинола, определении влияния их на физиологическое состояние, продуктивность и интерьерные показатели кроликов, а также в сравнительной оценке их эффективности с водно-дисперсным витаминным препаратом нитамином с тем, чтобы выбрать из них оптимальное средство, которое бы в наибольшей степени стимулировало продуктивность без ущерба физиологическому состоянию организма. В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:
изучить токсичность бетавитона и бетацинола;
определить физиологическое состояние, морфологические и биохимические показатели крови у молодняка и взрослых кроликов, потреблявших бетавитон, бетацинол и нитамин;
изучить влияние препаратов на показатели естественной резистентности организма, депонирование биологически активных веществ в печени;
обосновать физиологически и экономически дозы препаратов, обеспечивающие высокую интенсивность роста и сохранность молодняка, воспроизводительные качества взрослых животных;
провести органолептическую и товарную оценку мяса, получаемого после применения препаратов;
выбрать из числа изучаемых препаратов наиболее эффективное средство стимуляции продуктивности кроликов и разработать режимы его использования.
Научная новизна работы. Установлено, что бетавитон и бетацинол относятся к средствам малотоксичным для кроликов. Они не обладают местно-раздражающим, аллергенным и эмбриотропным действием, что гарантирует безопасность их дозирования групповым способом. Впервые на кроликах доказано положительное влияние бетавитона, бетацинола и нитамина на физиологическое состояние организма, морфологический и биохимический состав крови, интенсивность роста и сохранность молодняка, молочность взрослых самок. Определены биохимические параметры, органолептические и товарные показатели мяса от кроликов, потреблявших изучаемые препараты.
Практическая значимость работы. Совместно с химиками-технологами и фармакологами разработана нормативная документация, определяющая условия технологического процесса производства каротинсодержащих препаратов, показатели их качества и методы контроля. Технические условия на промышленное производство бетавитона и бетацинола и наставление по их
применению одобрены Ветфармбиосоветом и утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ. Препараты выпускает ООО «Полисинтез» (г. Белгород).
Апробация результатов исследований. Результаты исследований были представлены на всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Е. Н. Павловского (Казань, 2004), международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2004) и международной межвузовской начно-производственной конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2004), расширенном заседании кафедры физиологии, фармакологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Белгородской ГСХА (2003, 2004).
Основные положения, выносимые на защиту:
бетавитон и бетацинол являются малотоксичными препаратами, не обладают аллергизирующими, местнораздражающими, тератогенными и эмбриотоксическими свойствами;
физиологическая активность бетавитона, бетацинола и нитамина проявляется улучшением общего состояния животных, интенсификацией роста, повышением сохранности молодняка, снижением затрат корма на приросты, стимуляцией воспроизводительной функции самок;
биохимические аспекты в действии препаратов связаны с улучшением А, Е, С-витаминной обеспеченности организма, большей насыщенностью крови гемоглобином, активацией ферментов переаминирования, повышенным содержанием в крови общего белка и факторов естественной резистентности организма;
профилактическая эффективность и ростостимулирующее влияние бетацинола выше, чем бетавитона и нитамина;
изучаемые препараты улучшают биохимический состав, органолепти-
ческие и товарные показатели качества мяса;
на основании данных физиологических наблюдений, биохимических анализов крови и печени, оценки качества продукции даётся обоснование о возможности использования в рационах кроликов бетавитона, бе-тацинола и нитамина как эффективных водно-дисперсных каротинсо-держащих и витаминных препаратов.
Публикации результатов исследований. Материалы диссертации опубликованы в 4 научных статьях.
Структура и объём диссертации. Диссертация представляет собой рукопись компьютерного набора объёмом 136 страниц. Состоит из разделов: введения, обзора литературы, описания материала и методик исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, предложений производству. В списке использованной литературы 214 публикаций, в т. ч. 151 отечественных авторов. Текст иллюстрирован 29 таблицами. Рїмеется приложение.
Защитная роль каротина в организме животных
Каротин является углеводородом (С40Н50) и существует в виде трёх структурных изомеров: а, р\ у-каротинов. Наиболее распространенным в природе является (3-каротин.
Уже в 1933 г. немецкий исследователь Р. Кун установил, что наличие в молекуле р-каротина двух колец бета-ионона обеспечивает ему двукратную биологическую активность по сравнению с а- или у-каротином. Ликопин, имеющий ту же эмпирическую формулу, что и каротин, но содержащий вместо бета-иононовых два псевдоиононовых кольца, провитаминным действием не обладает (М. И. Смирнов, 1974; S. A. Desobry, 1998). Молекула бета-каротина расщепляется в тонком кишечнике с образованием двух молекул витамина А.
В те же годы было установлено, что свойства Р-каротина определяются не только наличием бета-иононовых колец, но и строением углеводородной цепи с системой сопряженных двойных связей. Насыщение этих связей водородом приводило к обесцвечиванию бета-каротина и потере его биологической активности (А. Р. Вальдман, 1984).
Провитаминная активность структурных и отдельных пространственных изомеров каротина различна. Наиболее выраженной активностью обладает транс-транс-форма любого изомера. Среди отдельных структурных изомеров наиболее активен бета-каротин. Если принять активность бета-каротина за 100%, то у его альфа-изомера она 53, а у гамма-формы - 52. Ещё меньше выражена активность у цис-изомеров, так как в результате транс-цис-изомеризации изменяется первоначальная структура каротина и этим затрудняется влияние ферментов, превращающих его в витамин А (А.К. Adams, Е.О. Weimuth, Р.Е. McBride, 1999; A. A. Abushita et al., 2000).
Считают, что изомеризация транс-формы бета-каротина в цис-изомеры может происходить при таких технологических операциях, как термическая обработка, и это снижает его биодоступность и биологическую активность (S. A. Desobry, F. М. Netto, Т. P. Labuza, 1998). В отличие от бета-каротина, цис-формы ликопина хорошо абсорбируются.
Единой научно обоснованной теории специфического действия бета-каротина еще не существует. Один из возможных механизмов состоит в том, что биологически активные молекулы бета-каротина нейтрализуют разнообразные свободные радикалы, присоединяя их по местам разрыва двойных связей. При этом молекулы бета-каротина распадаются на неактивные фрагменты, которые выводятся из организма (G. Block, L. Langseth, 1989; Ю. В. Букин, 1995; Н. Р. Поддубный, А. М. Сампиев, 2000). На основании химической природы витамина А и каротина, относящихся к группе ненасыщенных оснований, высказано мнение, что основное физиологическое значение этих соединений заключается в их участии в окислительных процессах (N. I. Krinsky, 1998; Ю. Д. Холодова, П. П. Чаяло, 1990; Е. Kolb, 1995).
Известно, что при авитаминозе А у животных существенно увеличивается потребление кислорода различными органами, интенсивно выделяется углекислый газ (Е. Kolb, 1995), образуются высокоактивные формы кислорода и другие свободные радикалы, которые могут вызывать изменения даже в структуре ДНК (G. Bolduan et. al., 1993). Клетка располагает специальной системой защиты от воздействий агрессивных форм кислорода и свободных радикалов. Эта защитная система включает набор специальных ферментов и низкомолекулярных антиоксидантов, к числу которых относятся и бета-каротин (Н. Kasper, 1974; А. А. Чиркин, И. А. Маллак, 1995; J. L. Charleux, 1996; А. А. Чиркин с соавт., 1997; Т. R. Kramer, 1997; М. Franko, 1998; F. J. Kelly, 1998; А. К. Adams, 1999; А. А. Abushita et. al., 2000).
Исследованиями последних лет доказано, что в основе всех патологических состояний организма, независимо от вызывающих их причин, лежит повышенное образование свободных радикалов и неспособность организма справляться с их нейтрализацией. Для координации комплекса защитных ре 11 акций в организме функционирует сложная система, обеспечивающая равновесие между образованием и нейтрализацией свободных радикалов. Активными звеньями этой системы являются бета-каротин, аскорбиновая кислота и витамин Е (N. I. Krinsky, 1998). Они эффективно защищают организм от агрессивных прооксидантов способных генерировать активные формы кислорода и даже свободные радикалы (P. Goldhaber et.al., 1980).
Механизм антиоксидантного действия бета-каротина отличается от природных антиоксидантов фенольной структуры например, токоферолов. Вероятно он связан с малоактивными углерод-центрированными резонансными радикалами, которые образуются в изопреноидной цепи при взаимодействии с органическими гидропероксидами (G. W. Burton, 1984. 1989).
Способность гасить свободные радикалы и нейтрализовать агрессивные формы кислорода лежит в основе антиканцерогенного действия бета-каротина (P. Z. Margalith, 1999). Особенно эффективно бета-каротин нейтрализует синглетный кислород ( Ог) - особую форму активированного кислорода с возбужденным электроном, занимающим более высокую орбиталь по сравнению с обычной. Синглетный кислород, время полураспада которого в клетке составляет около 1 миллионной доли секунды, опасен не только тем, что за это сверхкороткое время сам может повреждать ДІЖ, но и тем, что инициирует цепные реакции генерации других свободных радикалов. Многие потенциальные химические канцерогены, например бенз(а)пирен, сами по себе не могут вступать в реакцию с ДНК, но приобретают эту способность после активации, превращаясь в клетке в истинные канцерогены (Р. А. Cerutti, 1985). Указанный процесс образования истинных канцерогенов требует участия активных форм кислорода. Поэтому бета-каротин нейтрализующий активные формы кислорода, подавляет в клетке образование такого рода канцерогенов из их предшественников и тем самым защищает организм от канцерогенеза (J. S. Bertram, 1991, 1994; J. R. Lane, 1997).
Процесс канцерогенеза начинается с необратимого изменения структуры ДНК. Эта химическая модификация носит название стадии инициации канцерогенеза и может происходить очень быстро - в течение нескольких минут или даже секунд. Но последующая стадия превращения инициированной клетки в злокачественную (стадия промоции канцерогенеза) протекает очень медленно и может длиться месяцы и годы (A. Boos, 1987). Её провоцируют не только канцерогены, но и некоторые неканцерогенные агенты, которые носят название промоторов (помощников) канцерогенеза. К их числу относятся и активные формы кислорода, необезвреженные бета-каротином (Р. A. Cerutti, 1991; В. А. Драудин-Крыленко, 1992). Таким образом, бета-каротин может не только подавлять инициацию канцерогенеза, но и блокировать его стадию промоции (В. А. Драудин-Крыленко, 1992).
Антиканцерогенное действие бета-каротина и витамина А, объясняется также активацией межклеточного обмена. Истинным активатором межклеточных контактов является, судя по всему, ретиноевая кислота (В. R. Hammond, 1997). Она образуюется в тканях как из бета-каротина, так и из витамина А по схеме: бета-каротин - витамин А -» ретиноевая кислота.
Биологическая роль аскорбиновой кислоты
Аскорбиновая кислота (витамин С), отдавая протон, восстанавливает различные окисленные субстраты, превращаясь при этом в дегидроаскорби-новую кислоту. Последняя под влиянием фермента дегидроаскорбатредукта-зы и в присутствии глутатиона может вновь восстанавливаться до аскорбиновой или необратимо окисляется до дикетогулоновой кислоты.
С участием аскорбиновой кислоты происходит окисление органических кислот в цикле Кребса и синтез ДНК в клеточном ядре, восстановление дисульфидных групп ферментов в сульфгидрильные, гидроксилирование пролина в оксипролин и образование соединительнотканных опорных белков коллагена и хондромукоидов, а также эластина, определяющего эластичность стенки капилляров и ее проницаемость для белков плазмы крови, окисление тирозина и превращение дофамина в норадреналин, триптофана - в предшественник серотонина 5-окситриптофан, последующее окисление и распад ка-техоламинов, синтез интерферона. Аскорбиновая кислота стимулирует синтез гормонов, в особенности кортикостероидов, снижает сенсибилизацию к аллергенам, повышает сопротивляемость организма животных к стрессам (В. С. Бузлама с соавт., 1987), увеличивает отложение гликогена в печени, снижает уровень холестерола и мочевой кислоты в крови, обеспечивает поддержание в крови нормального уровня микроэлементов — меди, марганца, цинка (Л. И. Слуцкий, 1969). Она активирует всасывание железа в кишечнике, стабилизирует железоорганические соединения в более активной, двухвалентной форме, ускоряет реакцию протопорфирина с закисным железом и образование гема, как редуцирующий агент способствует высвобождению железа из ферритина.
Аскорбиновая кислота относится к естественным антиоксидантам и предотвращает накопление перекисей в тканях. Она активирует многие ферменты и, усиливая окисление естественных метаболитов и ксенобиотиков, способствует детоксикации организма. Доказаны антиоксидантные ее свойства в отношении гемоглобина и способность восстанавливать метгемогло-бин.
По данным Л.А. Кононенко, аскорбиновая кислота повышает иммунную устойчивость растений к различным заболеваниям - листовой ржавчине, мучнистой росе, а также к пероноспорозу. При обработке растений аскорбиновой кислотой снижается губительное воздействие пестицидов и уменьшаются мутационные преобразования, вызванные действием тяжелых металлов.
Отмечено, что уровень аскорбиновой кислоты в организме снижается, если в кормах недостаточно содержание витамина А. Однако при избытке витамина А у экспериментальных животных возникает клиническая картина с характерными для цинги признаками. Обобщая имеющиеся в литературе данные, можно сказать, что антагонизма между витаминами А и С нет, но не исключено влияние других субстанций, находящихся в масляных растворах препаратов ретинола.
Аскорбиновая кислота снижает содержание ретинола в печени и, возможно, за счет этой мобилизации из депо может устранять легкие А-гиповитаминозы. Взаимосвязь между этими двумя витаминами не означает однонаправленного их действия. Так, по отношению к холестеролу у них выявлен антагонизм: витамин А повышает, в то время как аскорбиновая кислота снижает его содержание в крови.
Другой жирорастворимый витамин - витамин Е - находится с аскорбиновой кислотой в более надежной синергетической связи. Это доказывается как в опытах по применению витамина Е и определению содержания в крови и тканях аскорбиновой кислоты, так и в опытах, где добавки токоферола к пище производились на фоне потребления субнормальных доз аскорбиновой кислоты. Витамин С способен в той или иной мере даже предохранять организм животных от Е-гиповитаминоза, связанного с обеднением пищевого рациона токоферолами.
Между аскорбиновой кислотой и витамином К тоже существует определенное взаимодействие, особенно выраженное во влиянии на синтез коллагена, проницаемость и резистентность капилляров. Полагают, что геморрагические явления при К-авитаминозе являются следствием вторичной недостаточности аскорбиновой кислоты.
Тесная связь отмечена между аскорбиновой кислотой и витаминами группы В (А. Р. Вальдман с соавт., 1985). Тиамин и рибофлавин способствуют биосинтезу и накоплению ее в тканях (В. Т. Самохин, 1981).
При недостатке же тиамина и рибофлавина ее содержание в крови, печени, мозге, легких и почках цыплят и крыс снижается, что можно объяснить уменьшением всасывания ее в кишечнике. В то же время увеличенное поступление аскорбиновой кислоты с пищей способствует выведению с мочой цианокобаламина, а назначение витамина Выведет к снижению ее содержания в легких, гипофизе, поджелудочной железе и мозжечке (Ю. М. Островский, 1979; А. М. Алешейхов, 1980). Наиболее типичный межвитаминный синергизм наблюдается между аскорбиновой кислотой и биофлавоноидами: комплексный препарат аскорутин превосходит по своей эффективности сумму воздействий тех же доз каждого компонента в отдельности. Это связывают с тем, что витамин Р ускоряет переход аскорбиновой кислоты в дегидроа-скорбиновую. Синергизм между витаминами С и Р может быть нарушен тиамином, поскольку последний связывается с полифенолами и переводит их в неактивные комплексы. «Нейтрализация» таким образом, витамина Р создает условия для предохранения аскорбиновой кислоты от окисления.
С-витаминный обмен сопряжен также с обеспеченностью организма микроэлементами. Так, кобальт, добавленный к кормам, способствует накоплению аскорбиновой кислоты во внутренних органах (Я. М. Берзинь, 1987), а цинк уменьшает ее выведение с мочой .
Витамин С принимает участие в свертывании крови, стимулирует эри-тропоэз, повышает активность пищеварительных ферментов, благоприятно влияет на функцию печени, обладает противовоспалительным действием, проявляет выраженное ростостимулирующее влияние.
Об уровне С-витаминной обеспеченности организма можно судить по содержанию аскорбиновой кислоты в крови и органах животных. В надпочечниках - самая высокая концентрация аскорбиновой кислоты по сравнению с другими органами (28-38 мг%).
Причинами С-гиповитаминоза могут быть: недостаточное поступление аскорбиновой кислоты с пищей, ослабление её биосинтеза в организме или ускоренное разрушение в тканях. Вторая причина имеет место при дисбалансе между содержанием витамина в кормах и потребностью организма, третья может быть алиментарного или эндогенного происхождения. Замечено, что если в кормовом рационе не хватает протеина или минеральных солей, то возможно ослабление биосинтеза витамина С и развитие гиповитаминоза даже у тех животных, которые не нуждаются в экзогенном его поступлении. Биосинтез может задерживаться при накоплении в крови некоторых метаболитов или ксенобиотиков, подавляющих окислительно-восстановительные процессы в тканях.
Определение безвредности бетавитона и бетацинола
Из данных таблицы видно, что средняя продолжительность гексенало-вого сна контрольных и опытных крыс после применения изучаемых препаратов различалась незначительно, и эти различия были статистически недостоверны. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии отрицательного влияния бетавитона и бетацинола на детоксицирующую функцию печени, так как препараты не задерживали и не ускоряли окисление гексенала, которое, по общепризнанным представлениям, совершается в печени.
С целью определения влияния препаратов на выделительную функцию почек ежемесячно проводили контрольный учет диуреза подопытных крыс и лабораторный анализ мочи.
В результате проведенных исследований не обнаружено каких-либо значимых изменений спонтанного диуреза ни в одной из групп. Значение рН мочи колебалось в пределах физиологической нормы для крыс (6,8-7,4), при этом не обнаружено существенных различий между контрольными и опытными группами. Белок, сахар и ацетон в моче не выявлены.
Таким образом, установлено, что бетавитон и бетацинол не оказывали отрицательного влияния на функцию почек и физико-химические показатели мочи.
После окончания эксперимента всех крыс декапитировали под эфирным наркозом и определяли абсолютную массу внутренних органов; проводили их визуальное и микроскопическое изучение. В результате проведённых исследований можно заключить, что абсолютная масса внутренних органов крыс, потреблявших различные дозы бе-тавитона и бетацинола находилась в пределах физиологической нормы и ничем не отличалась от данных контрольных групп. При макроскопическом исследовании не выявлено никаких изменений анатомического строения и топографии внутренних органов. У подопытных крыс головной мозг имел гладкий рельеф, тонкие прозрачные оболочки. На разрезе вещество мозга серовато-белого цвета. Сердце: эпикард гладкий, блестящий, венечные сосуды полнокровны, миокард буровато-красного цвета. Селезенка покрыта гладкой полупрозрачной капсулой, на разрезе темно-вишневого цвета, эластичная. Желудок наполнен пищевой массой, слизистая оболочка серовато-розового цвета. Поджелудочная железа имеет дольчатое строение, на разрезе серовато-желтоватого цвета. Легкие полнокровны, серовато-розовые. Каких-либо различий с животными контрольной группы не обнаружено. При гистологическом исследовании внутренних органов крыс, получавших изучаемые препараты в максимальных дозах, выявлено следующее. Головной мозг с тонкой мозговой оболочкой и умеренно полнокровными сосудами. Нервные клетки во всех отделах представлены четко, сохраняют свои размеры и форму. Ядра нервных клеток имеют округлую, овальную и неправильную форму, соответствующую отделам мозга. Сосуды умеренно полнокровны. Сердце: мышечные волокна с хорошо выраженной поперечной ис-черченностью, обычных размеров. Миокардиоциты чётко контурированы с богатыми хроматином овальными ядрами и эозинофильной цитоплазмой. Межмышечная соединительная ткань развита хорошо. Сосуды умеренно заполнены кровью. Почки: клубочки коркового слоя хорошо выражены, обычных размеров. Эпителий извитых канальцев цилиндрической формы. Базальные мем 53 браны без изменения. Строма представлена умеренно полнокровными сосудами с преимущественно лимфогистиоцитарными клеточными элементами. Печень с ровной гладкой капсулой, сохранено дольчатое строение паренхимы. Гепатоциты печеночных балок имеют четкие контуры, неправильной многоугольной формы, с ярко выраженной эозинофильной зернистостью. Центральные вены и межбалочные капилляры умеренно полнокровны. Селезенка имеет нормальное соотношение красной и белой пульпы. Лимфоидные фолликулы на всем протяжении сохранены. Красная пульпа полнокровна. В поджелудочной железе дольчатое строение сохранено. Дольки обычных размеров, разделены тонкими прослойками соединительной ткани. Ацинарные клетки с четкими контурами, конусовидной, кубической формы и обильной базофильной цитоплазмой. Островки четко представлены в виде скоплений светлых мелких клеток округлой формы. В желудке слизистая оболочка на всем протяжении сохранена, рельеф обычный. Покровный эпителий с четкими контурами, цилиндрической формы, со светлой вакуолизированной цитоплазмой. Подлежащие слои стенки желудка без видимых изменений. В тонкой и толстой кишках слизистая оболочка сохранена на всем протяжении. Покровный эпителий контурирован, представлен бокаловидными и цилиндрическими клетками с базофильной цитоплазмой. Подслизи-стая, мышечная и серозная оболочки стенки кишки обычного вида, с умеренно полнокровными сосудами, с преимущественно лимфогистиоцитарными клеточными элементами в составе стромы. В легких просвет альвеол свободный, межальвеолярные перегородки сохранены. Стенки бронхов чистые, тонкие. Таким образом, гистоструктура внутренних органов животных при длительном воздействии бетавитона и бетацинола в максимальных дозах соответствовала норме и не отличалась от таковой контрольных животных. Исследование местнораздражающего действия проводили на морских свинках и кроликах. Морским свинкам препараты наносили на депилированные участки кожного покрова в нативном виде и в разведении 1:10. При наблюдении за животными в течение 3 суток никаких изменений на кожном покрове не выявлено. Кроликам препараты вносили в конъюнктивальный мешок в чистом виде и в разведении 1:10. Через 6 ч и через сутки проводили осмотр глаз. При осмотре не было обнаружено изменений со стороны конъюнктивы и просвета зрачка. Следовательно, бетавитон и бетацинол не обладают мест-нораздражающим действием. Аллергизирующее действие каждого препарата изучалось на 30 морских свинках путём накожных аппликаций. Белые участки кожного покрова депилировали и ежедневно 1 раз в течение 20 сут на них наносили 0,1 мл испытуемого препарата. Через 21 сут на интактный участок противоположной стороны наносили испытуемый препарат в разрешающей дозе. После аппликаций учитывали ректальную температуру, брали пробы крови и подсчитывали содержание лейкоцитов, проводили реакцию специфической агломерации лейкоцитов.
Биохимический состав крови и содержание витаминов в печени
Из этих данных видно, что в исходном состоянии содержание гемоглобина было в пределах физиологической нормы и колебалось по отношению к группе, выбранной для контроля, в пределах 0,8-3,6 г/л, или 0,7-3,0%. За период применения препаратов содержание гемоглобина в крови контрольных кроликов снизилось на 8,6 млн/мкл, или 7,3% (р 0,05). В опытных группах снижения не отмечалось. Более того, наблюдалось некоторое его повышение: во второй группе - на 5,5 г/л, или 4,6%; в третьей - на 1,8 г/л, или 1,5%; в четвёртой - на 3,4 г/л, или 2,8% (во всех случаях р 0,05). С учётом прямо противоположных изменений в контрольной и опытных группах разница с контролем оказалась существенной. Во второй группе содержание гемоглобина было выше на 14,9 г/л, или 13,6% (р 0,05); в третьей - на 14,0 г/л, или 12,7%% (р 0,05); четвёртой - на 13,4 г/л, или 12,2% (р 0,05).
Содержание общего белка в сыворотке крови в исходном состоянии по отношению к группе, выбранной для контроля, так же, как и гемоглобина, колебалась в пределах, заниженных на 0,24-0,30 г/л, или 4,0-4,9% при р 0,05. За время применения препаратов отмечались следующие изменения: в контрольной группе содержание общего белка осталось прежним (6,07 и 6,05 г%), во всех опытных повысилось. Повышение составило в группе, получавшей бетацинол, 1,46 г%, или 25,0 (р 0,05); от бетавитона - 1,34 г%, или 23,2% (р 0,05); от нитамина - 1,48 г%, или 25,4% (р 0,05). В связи с более низким содержанием белка в опытных группах и меньшим размахом его индивидуальных колебаний по окончании срока применения препаратов разница с контрольной группой была во второй группе - 1,24 г/л, или 20,5% (р 0,01); в третьей - 1,06 г/л, или 17,5% (р 0,05); в четвёртой 1,25 г/л, или 20,7%р 0,01).
Содержание фосфора в сыворотке крови до применения препаратов отклонялось в опытных группах от выбранного контроля на -0,54-0,39 л г%, или -6,2-4,5% при р 0,05. За время опыта в контрольной группе оно практически не изменялось (8,72 и 8,75л г%), в группах, где применялись препараты изменения по отношению к исходным данным были незначительными (от -0,57 до +0,47 л г%) и не подтверждались статистически (р 0,05).
Примерно такая же картина наблюдалась и по кальцию: до начала опыта различия по отношению к выбранному контролю составляли в пределах -0,12-0,09, или -1,8-1,3% (р 0,05); за время опыта содержание кальция в сыворотке контрольной, второй и третьей группах уменьшилось на 1,2; 1,4 и 3,3% (р 0,05), в четвёртой увеличилось на 1,3% (р 0,05). Однако в конце опыта достоверных различий с контролем не наблюдалось.
Более существенные различия отмечались по содержанию витамина А в исходном состоянии мало различалось по группам (к контролю - от -8,2 до +3,1%, р 0,05), то за время опыта оно повысилось в контрольной группе на 0,4 мкг%, или 4,1% (р 0,05), во второй опытной - на 3,8 мкг%, или 42,2% (р 0,001), третьей опытной - на 2,30 мкг%, или 23,9% (р 0,05), четвёртой опытной - 2,9 мкг%, или 28,4% (р 0,01).
В исходном состоянии активность АсАТ отклонялась от показателей контрольной группы на ±0,01 нмоль/(ч л), или ±1,9% (р 0,05). За время опыта в контрольной группе она снизилась на 0,04 нмоль/(ч л), или 7,4% при р 0,05, тогда как в опытных группах повысилась: во второй опытной - на 0,14 нмоль/(ч л), или 26,4% (р 0,05); третьей опытной - на столько же при р 0,05; четвёртой опытной - на 0,15 нмоль/(ч л), или 27,3% (р 0,05). В итоге разница с контролем составила по второй опытной группе - 0,17 нмоль/(ч л), или 34,0%, третьей опытной - 0,14 нмолъ/(ч л), или 28,0%; четвёртой опытной — 0,20 нмоль/(ч л), или 40,0% (во всех случаях р 0,05).
Активность АлАТ в исходном состоянии колебалась относительно группы, взятой для контроля, в пределах от -0,02 до +0,01 (р 0,05). За период опыта в контрольной группе наблюдалось её небольшое повышение (на 0,02 нмоль/(ч л), или 8,7%, р 0,05). В опытных группах это повышение оказалось более существенным: во второй - на 0,13 нмоль/(ч л), или 61,9% при р 0,01; в третьей - на 0,06 нмоль/(ч л), или 25,0% , при р 0,05; четвёртой - на 0,13 нмоль/(ч л), или 59,% , при р 0,01. В итоге к концу опыта различие с контролем в пользу опытных групп составило, нмолъ/(чл): во второй опытной - 0,11, или 36,0% (р 0,05); третьей опытной - 0,05, или 20,0% (р 0,05), четвёртой опытной - 0,1, или 40,0% (р 0,05).
Как видно из анализа данных таблицы, введение в рацион кроликов бетацинола, бетавитона и нитамина вызывало достоверное увеличение гемоглобина в крови, общего белка и витамина А в сыворотке. Изменения в содержании кальция и фосфора в сыворотке были незначительными, что позволяет отнести их к случайным, обусловленным индивидуальными колебаниями у разных животных и пределами точности анализов.
Особо следует отметить активацию ферментов переаминирования. Активность АсАТ достоверно увеличивали все три препарата, тогда как АлАТ - существенно только бетацинол и нитамин. Бетавитон оказывал менее выраженный эффект, не подтверждённый статистически.
