Введение к работе
Актуальность проблемы. Самой распространенной вирусной инфекцией человека в настоящее время является герпетическая [И. Ф. Баринский и соавт., 1986; А. А. Каспаров, 1994; R. J.Whitley, 1990]. Вирус простого герпеса (ВПГ) ответственен за значительную долю инфекционной патологии человека [А. Г. Коломиец и соавт., 1986; В. М. Жданов, 1990]. Это обусловлено его способностью поражать различные органы и системы человеческого организма с формированием, как правило, хронически протекающих заболеваний [А. Г. Букринская, В. М. Жданов, 1991].
Заболевания, обусловленные ВПГ, занимают второе место (15,8%) после гриппа (35,8%) как причина смертности от вирусных инфекций [И. Ф. Баринский, С. Л. Нестерчук, 1995]. Выявлена этиологическая роль ВПГ - 2 при раке шейки матки и карциноме предстательной железы [Т. А. Посевая и соавт., 1991; R. Ashley et al., 1994]. Внутриутробная инфекция плода, являющаяся результатом трансплацентарного проникновения вируса, приводит к развитию врожденных уродств [L. М.. Frencel, 1994]. Рост числа больных герпетической инфекцией отмечается и у детей [И. В. Хамаганова, 1993], имеются сообщения о возможной роли герпетической инфекции в развитии аутоиммунной патологии [О. В. Катышева и соавт., 1995].
В последние годы отмечена тенденция к увеличению количества заболеваний вызванных ВПГ, в том числе и герпетических поражений - органа зрения [А. А. Каспаров, 1994]. Герпес роговицы составляет среди взрослых 20-57%, а среди детей 70-80% от числа всех воспалительных заболеваний роговицы [И. Ф. Баринский и соавт., 1986; А. А. Каспаров, 1994].
Установлено, что при герпетическом кератите меняется активность ферментов слезы [Н. А. Терехина, 1990]. Состав слезной жидкости отражает состояние не только органа зрения, но и всего организма, что может быть использовано с диагностическими и прогностическими целями [Б. С. Касавина, Т. П. Кузнецова, 1978; II. А. Терехина и соавт., 1988; Н. А. Терехина и соавт., 1989; Ю. А. Петрович, Н. А. Терехина, 1990; Е. Е. Сомов, В. В. Бржеский, 1994; Н. Б. Чеснокова, Т. П. Кузнецова, 1995; N. J. Van Haeringen, 1981; I. L. Kahan, 1982; M. Imayasu et al., 1992]. Анализ слезы был использован
для прогнозирования рецидивов офтальмогерпеса [Н. А. Терехина и соавт., 1988; Н. А. Терехина, 1990].
Развитие герпетического кератита сопровождается активацией
процессов свободнорадикального окисления в роговице и снижением
ее антиоксидантної! защиты [Ю. А. Петрович и соавт., 1987; Н. А.
Терехина, 1990; Yu. A. Petrovich et al., 1995]. При герпетическом
кератите в роговице происходит резкое падение активности
антиоксидантных ферментов: глутатионпероксидазы и
супероксидисмутазы, возрастает хемилюминесценция роговицы [Ю. А.
Петрович и соавт., 1987; Н. А. Терехина, 1990; N. A. Teryokhina, 1991].
При герпетическом кератите в роговице резко снижается содержание
аскорбиновой кислоты [П. С. Каплунович, Г. А. Винькова, 1973].
Слезная жидкость теряет способность ингибировать образование
гидроксил-радикала, из нее исчезает аскорбиновая кислота [Н. А.
Терехина, 1990]. Применение в лечении больных офтальмогерпесом
комплекса неферментативных антиоксидантов (витамины С и Е)
показало их высокую терапевтическую активность [Н. А. Терехина и
соавт., 1994]. Однако, в доступной литературе недостаточно освещены
вопросы изменения активности ферментов-антиоксидантов слезы при
герпетическом кератите. Показано, что активности
супероксиддисмутазы нет ни в слезе здоровых ни у больных офтальмогерпесом [Н. А. Терехина, 1990].
При герпетической инфекции ВПГ способен транспортироваться по аксонам (нейрогенный путь распространения инфекции) [И. Ф. Баринский и соавт., 1986; R. В. Norgen et al., 1992], а также и с клетками крови [А. А. Каспаров, 1994; Н. S. Larsen et al., 1984]. В инфицированных клетках ВПГ способен реплицироваться, перестраивая метаболизм этих клеток, способствуя хронизации и диссеминации герпетической инфекции [Ю. А. Петрович, Н. А. Терехина, 1990]. ВПГ, реплицируя в лимфоцитах, перестраивает их ферментные системы, снижает активность лактатдегидрогеназы, малатдегидрогеназы, глутатионпероксидазы, кислой фосфатазы, но увеличивает активность супероксиддисмутазы и гшокозо-6-фосфатдегидрогеназы [Н. А. Терехина, 1990]. В литературе мы не нашли данных об активности других антиоксидантных ферментов лимфоцитов.
Тенденция к росту числа заболевших ^офтальмогерпесом и утяжеление клинического течения заболевания с более частыми
рецидивами свидетельствуют о необходимости дальнейшего изучения биохимических изменений в герпесинфицированных тканях.
Целью работы явилось изучение в эксперименте и клинике активности ферментов слезы, тканей герпесинфицированного глаза, мопопуклеаров периферической крови больных для выяснения отдельных биохимических звеньев патогенеза герпетического кератита, использование полученных результатов для оценки эффективности лечения.
Основные задачи исследования.
1. Исследовать содержание общего белка, лактоферрина,
глюкозы, мочевой кислоты в слезе больных различными формами
герпетического кератита в динамике заболевания.
-
Изучить активность антиоксидантных ферментов в слезной жидкости и мононуклеарах периферической крови человека при различных клинических формах герпетического кератита. Использовать полученные результаты для оценки эффективности лечения герпетического кератита.
-
Изучить активность аминотрансфераз, изофермептный спектр лактатдегидрогеназы в мононуклеарах периферической крови больных различными формами герпетического кератита.
-
При экспериментальном герпетическом кератите у кроликов исследовать изоферментный спектр лактатдегидрогеназы тканей переднего отдела глаза, активность каталазы и активность альфа-1-антитрипсина.
Научная новизна исследования.
Впервые проведено изучение активности ряда ферментов-антиоксидантов слезы (каталазы, глутатионредуктазы, пероксидазы) у больных с герпетическими поражениями роговицы.
Впервые изучена активность каталазы, глутатионредуктазы, аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, изоферментный спектр лактатдегидрогеназы в мононуклеарах периферической крови человека при герпетическом кератите.
При экспериментальном герпетическом кератите в водянистой влаге и тканях переднего отдела глаза изучена активность каталазы, а \-антитрипсина, изоферментный спектр лактатдегидрогеназы.
Практическая ценность работы:
Подтверждена высокая диагностическая значимость анализа слезной жидкости для оценки состояния тканей переднего отдела глаза. Обнаружено, что выявление каталазной активности в слезной жидкости пораженного глаза свидетельствует об активном цитолизе клеток роговицы (эпителия и стромы), а обнаружение активности данного энзима на фоне проводимой терапии свидетельствует о низкой ее эффективности.
Усовершенствован метод определения активности каталазы в сыворотке крови (рационализаторское предложение № 1764), а также предложен метод определения активности каталазы в жидкостях с высоким содержанием пигментов и низким содержанием белков, например, в желчи (рационализаторское предложение № 1763). Результаты диссертации включены в курс лекций кафедры биохимии Пермской государственной медицинской академии.
Обнаруженная способность слезной жидкости вызывать неспецифическую агглютинацию в высоком титре некоторых эритроцитарных диагностикумов ограничивает использование метода гемагглютинации эритроцитов для исследования слезы.
Полученные результаты о падении антиоксидантной защиты в
тканях герпесинфицированного глаза и антиоксидантов слезной
жидкости подтверждают целесообразность применения в лечении
герпетического кератита комплекса неферментативных
антиоксидантов и дают возможность прогнозировать наличие терапевтической активности и ферментов-антиоксидантов при данном заболевании.
Апробация диссертации:
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на ежегодных кафедральных научных конференциях по клинической биохимии(Пермь, 1993, 1994, 1995, 1996) Пермской государственной медицинской академии, на конференции Кировского НИИ гематологии и переливания крови "Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины" (Киров, 1993 и 1995 гг.), на научно-практической конференции "Актуальные вопросы современной вирусологии" (Екатеринбург, 1995 г.), симпозиумах "Неинвазивные методы исследования" (Москва, 1994; 1995), на заседании кафедры биохимии ПГМА (1995 г.), на межкафедральном заседании Пермской государственной медицинской академии (1995), на
научной сессии Пермской государственной медицинской академии (1996).
Публикации.
Основные положения работы освещены в 12 опубликованных работах, 5 из них в центральной печати.
Внедрение в практику:
Результаты исследования внедрены в практику работы клинико-диагностических лабораторий городской клинической больницы N 6 г. Перми, МСЧ N 4 г. Перми, отделенческой больницы станции Пермь-2 Свердловской железной дороги, областной клинической больницы г. Перми. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедрой биохимии Пермской государственной медицинской академии.
Получены удостоверения на рационализаторские предложения N 1764 "Модифицированный метод определения активности каталазы в сыворотке крови", и N 1763 "Методика определения активности каталазы в желчи" от 25 ноября 1994 г.
Положения выносимые на защиту.
1. При герпетическом кератите происходит изменение
качественного и количественного состава белков слезной жидкости,
которое зависит от клинической формы заболевания и его тяжести.
2. При офтальмогерпесе изменяется метаболизм не только тканей
герпесинфицированного глаза, но и мононуклеаров периферической
крови.
3. Уменьшение активности пероксидазы и содержания
лактоферрина в слезе, каталазы в эпителии герпесинфицированного
глаза свидетельствуют о снижении антиоксидантной защиты
роговицы.
Структура и объем диссертации.
