Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Стрессорная реактивность и цитохром р450-зависимые монооксигеназы у гипертензивных крыс (обзор литературы) 10
Глава 2. Материалы и методы исследования 32
Глава 3. Особенности цитохром р450-зависимых монооксигеназ и системы иммунобиологического надзора у нестрессированных крыс вистар и нисаг 48
Глава 4 .Особенности воспалительной и стрессорной реактивности нормотензивных и гипертензивных крыс при ежедневных иммобилизациях 57
Глава 5. Особенности воспалительной и стрессорной реактивности нормотензивных и гипертензивных крыс при редко-чередующихся иммобилизациях 81
Заключение 109
Выводы 116
Список литературы 117
- Стрессорная реактивность и цитохром р450-зависимые монооксигеназы у гипертензивных крыс (обзор литературы)
- Материалы и методы исследования
- Особенности цитохром р450-зависимых монооксигеназ и системы иммунобиологического надзора у нестрессированных крыс вистар и нисаг
- .Особенности воспалительной и стрессорной реактивности нормотензивных и гипертензивных крыс при ежедневных иммобилизациях
Введение к работе
Система цитохром Р450-зависимых монооксигеназ обеспечивает
поддержание гомеостаза, как на уровне клетки, так и на уровне организма за
счёт выполнения двух основных функций: а именно защиты организма от
чужеродных низкомолекулярных соединений-ксенобиотиков и
битрансформации эндогенных липофильных молекул - эндобиотиков. С помощью изоформ цитохрома Р450 осуществляется биосинтез и катаболизм холестерина, стероидных гормонов, так называемых «цитохромных» метаболитов арахидоновой кислоты, обладающих вазотропным действием. По этой причине как у пациентов с ГБ, так и у гипертензивных крыс отмечены изменения активности изоформ цитохрома Р450, принимающих участие в реакциях инактивации глюкокортикоидов (CYP3A) и вовлечённых
в метаболизм арахидоновой кислоты (CYP1A1,CYP1A2,CYP2B1,CYP4A).
Важно отметить, что среди цитохромных метаболитов арахидоновой кислоты присутствуют факторы (20-НЕТЕ), обладающие прессорным действием. Более того, именно они вовлечены в развитие глюкокортикоид-индуцированной гипертензии.
У пациентов с ГБ и у гипертензивных крыс отмечено повышение содержания провоспалительных цитокинов, для которых характерна способность активировать гипоталамо-гипофизарно-адреналовую систему, что в условиях гипертензии приводит к дополнительному увеличению мощности стресс-реализующих систем. Необходимо отметить, что при рассмотрении проблем, касающихся неиммунной функции иммунной' системы, от внимания исследователей нередко ускользает ещё один важный аспект. Речь идёт о взаимосвязи иммунной системы с системой цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Известно, что содержание цитохрома Р450 и его монооксигеназная активность снижаются при развитии бактериальной и вирусной инфекциях, иммунизации различными антигенами, а также в условиях фармакологической иммуностимуляции. Этот эффект опосредован провоспалительными цитокинами. Депремирующее воздействие на цитохром Р450 - зависимые монооксигеназы оказывают IL-1, IL-2, IL-11, TNF и.т.д.
Таким образом, регуляторное влияние иммунной системы на эндокринный и метаболический статус может реализоваться через систему , цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Этот путь становится особенно значимым при ГБ, характеризующейся дополнительной активацией стресс-реализующих систем.
Экспериментальной моделью, позволяющей охарактеризовать роль наследственности и стрессорных воздействий в развитии ГБ, является линия гипертензивных крыс НИСАГ (Наследственная, Индуцированная Стрессом Артериальная Гипертензия) полученная в Институте Цитологии и Генетики СО' РАН А.Л.Маркелем. В ходе многолетних исследований у этой линии изучено состояние основных стресс-реализующих систем, сердечнососудистой и выделительной системы. Однако, остаётся неизученным
состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ и иммунный статус в пределах иммунохимической функциональной системы гомеостаза у гипертензивных крыс.
Цель исследования: Изучить состояние иммунохимической функциональной системы гомеостаза у гипертензивных крыс линии НИСАГ в условиях хронического стресса.
Задачи исследования:
Провести сопоставление по активности цитохром Р450 зависимых монооксигеназ, содержанию циркулирующего кортикостерона, IL-1, IL-6, количества кариоцитов и особенностей клеточного цикла в иммунных органах у нестрессированных нормотензивных и гипертензивных крыс.
Изучить способность иммуностимулятора пирогенала корригировать уровень артериального давления у крыс линии НИСАГ.
Изучить, влияние ежедневных иммобилизаций на активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в. печени и в почках гипертензивных крыс.
Исследовать влияние различных режимов хронического иммобилизационного стресса на чувствительность гипертензивных крыс к иммунизации.
Изучить влияние редко чередующихся иммобилизаций на активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в печени гипертензивных крыс
Изучить влияние редко чередующихся иммобилизаций на чувствительность иммунных органов и печени к действию глюкокортикоидного препарата триамцинолона ацетонида.
Научная новизна. Впервые у гипертензивных крыс линии НИСАГ
определены особенности цитохром Р450-зависимого моноксигенирования,
состояние иммунных органов и чувствительности к флогогенам.
Установлено, что у нестрессированных крыс линии НИСАГ по сравнению с нестрессированными крысами Вистар в печени повышена активность изоформ CYP1A1 и CYP3A и снижена активность изоформы CYP2B1/2, а в почках увеличен уровень СУР2В1/2-зависимого монооксигенирования. Впервые обнаружена способность пирогенала снижать уровень артериального давления у гипертензивных крыс линии НИСАГ. Установлено, что после завершения ежедневных и редко-чередующихся иммобилизаций у гипертензивных крыс по сравнению с нормотензивными снижен уровень Th-І зависимого иммунного ответа и повышен уровень цитохром Р450-зависимого монооксигенирования. Обнаружен более высокий уровень провоспалительных цитокинов в сыворотке стрессированных и нестрессированных гипертензивных крыс. При редко-чередующихся иммобилизациях отмечено повышение чувствительности лимфоидных органов к гипоплазирующему действию* глюкокортикоидного препарата т повышение эффективности его антивоспалительного действия по отношению к печени.
Теоретическое и практическое значение. Выполненное исследование позволяет охарактеризовать особенности реакции цитохром Р450-зависимых*; монооксигеназ и системы иммунобиологического надзора у стрессированных гипертензивных крыс с позиции концепции иммунохимической функциональной системы гомеостаза и адаптационных стратегий. Практическое значение определяется участием изученных изоформ в метаболизме антигипертензивных препаратов. При их назначении нужно учитывать модифицируещее действие стресса. Результаты, касающиеся модифицирующего влияния хронического стресса на систему цитохром Р450-зависимых монооксигеназ, целесообразно учитывать при терапии антигипертензивными препаратами.
Положения, выносимые на защиту:
У нестрессированных и стрессированных гипертензивных крыс активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ имеет органоспецифичный характер.
У стрессированных гипертензивных крыс вне зависимости от режима стрессирования снижена интенсивность ГЗТ-реакции и повышен уровень цитохром Р450-зависимого монооксигенирования
При редко чередующихся иммобилизациях повышение содержания циркулирующего кортикостерона ассоциировано с повышением чувствительности иммунных органов к гипоплазирующему действию глюкокортикоидного препарата и повышением эффективности антивоспалительного гепатотропного действия экзогенного глюкокортикоида.
Внедрение результатов исследования
Результаты исследования внедрены в научно-практические занятия и-лекционный материал по теме «цитохром Р450» кафедры биохимии- ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская, академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской -
Федерации».
Апробация исследования. Основные положения работы изложены и представлены на 12 International Congress of Immunology (Montreal.,Canada., 2004) межрегиональной научно-практической конференции «IV конференции иммунологов Урала, (Челябинск,, 2005), международном молодежном медицинского конгресс «Санкт-Петербургские научные чтения», (Санкт- Петербург., 2005), International society for adaptive medicine VIII Word congress, (Moscow., Russia 2006), IV съезде российского общества биохимиков и молекулярных биологов (г.Новосибирск, 2008).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них 3 в рецензируемом журнале по перечню ВАК Минобразования РФ.
Структура и объём диссертации
Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Библиографический указатель включает 245 источников: 145 - на русском языке и 100 - на иностранном. Работа содержит 15 таблицы, 8 рисунков.
Стрессорная реактивность и цитохром р450-зависимые монооксигеназы у гипертензивных крыс (обзор литературы
В настоящее время не вызывает сомнений полиэтиологическая природа гипертонической болезни (ГБ), причём каузальные факторы могут действовать как изолированно, так и в тесном взаимодействии друг с другом и с некоторыми способствующими болезни обстоятельствами (Маркель А.Л., 2000). Наряду с внешними (средовыми) факторами, велико значение генетической компоненты в комплексе причин, приводящих к развитию ГБ. Причем, она не является моногенной патологией, то есть болезнью, детерминированной одним геном, а типичным полигенным заболеванием, развитие которого связано с определённой констелляцией генов, каждый из. которых вносит свой вклад в повышение АД. Помимо полигении, для гипертонической болезни характерно наличие генетической гетерогенности -когда у разных индивидуумов заболевание может детерминироваться разными наборами полигенов, часть которых являются общими для некоторой группы людей. Наличие семейной предрасположенности к гипертонической болезни является хорошо установленным фактом. У детей и юношей с повышенным артериальным давлением, так же как и у некоторых детей, родители которых страдают артериальной гипертонией, отмечали повышение периферического сосудистого сопротивления и увеличение массы левого желудочка (P. Lund-Johansen, 1984). В целом считают, что популяционная вариабельность величин артериального давления у детей примерно на 50 % определяется генетическими и на 50% — экологическими факторами (Feinleib М. et al., 1980). При изучении семейной предрасположенности к гипертонии отмечена корреляция между уровнем пролактина и артериальным давлением (Wessols F. et al., 1981). У животных со спонтанной (генетической) гипертонией ограничение пищевого рациона снижает артериальное давление и увеличивает продолжительность их жизни до нормального уровня и, напротив, стресс вызывает развитие ожирения, гиперфункцию коры надпочечников, инволюцию тимуса и стойкое повышение артериального давления (Wexler В., McMurtry J., 1983). Таким образом, не вызывает сомнения наличие факторов генетической предрасположенности к развитию гипертонии у человека, при этом некоторые механизмы такой предрасположенности выявляются при анализе гормонально-метаболических сдвигов у животных с врожденной гипертонией (Дильман В.М., 1987).
Часто генетические и средовые факторы взаимодействуют таким образом, что генетическая предрасположенность к повышенному АД проявляется лишь в определённых условиях среды. Полигения, генетическая гетерогенность, наличие межгенных, взаимодействий и взаимодействий генотипа со средой значительно осложняют понимание картины, формирования гипертонической болезни, и использование экспериментальных генетических моделей гипертонической болезни является широко распространенным подходом в проводимых в последнее время исследованиях. К настоящему времени получен ряд линий-крыс (SHR и SHRSP - в Японии; GH - в Новой Зеландии; LH - во Франции; MHS - в Италии) с повышенным АД, причём АД у крыс этих линий повышается спонтанно и мало зависит от средовых вариаций. Исходя из общепризнанных представлений об этиологии гипертонической болезни, следует считать более адекватными человеческой патологии такие экспериментальные модели, в которых развитие артериальной гипертонии обусловлено не только генетическими факторами, но и определёнными средовыми воздействиями Адаричев, В.А., 1998)
Регуляция артериального давления относится к кардинальным функциям жизнеобеспечения и контролируется различными, механизмами. Эти механизмы, хотя и скоординированы между собой, но функционируют или активируются отдельно друг от друга, в зависимости от ряда факторов, требующих изменения артериального давления (Алмазов В. А. и др., 1983). Система ренин—ангиотензин—альдостерон организует взаимосвязанное регулирование в организме баланса натрия, калия и объема жидкости. Например, если вследствие кровотечения или алиментарного дефицита натрия артериальное давление снижается, то снижается и почечный кровоток, что приводит к стимуляции секреции ренина, последний, действуя энзиматически, стимулирует появление ангиотензина-П, который помимо своего непосредственного прессорного действия, стимулирует секрецию альдостерона. В свою очередь этот гормон, действуя на почки, вызывает задержку натрия и, в результате, приводит к повышению артериального давления. Одновременно система ренин — ангиотензин регулирует калиевый гомеостаз, а концентрация ионов натрия определяет интенсивность прессорного сосудистого эффекта ангиотензина-П. Развитие гипертонии может быть преимущественно связано с нарушениями в системе, контролирующей одновременно сосудистое периферическое сопротивление, путем усиления ответа на различные гуморальные факторы из-за изменения состояния рецепторного аппарата при накоплении натрия в клетках (Insel Р., Motulsky Н., 1984) и объем циркулирующей жидкости.
Вторая система регуляции артериального давления осуществляется высшими отделами ЦНС, гипоталамусом с его комплексными связями, включающими симпатическую и парасимпатическую системы, баро- и хеморецепторы. Типичным примером активации этого комплекса является стресс. В механизме нейрогенного повышения артериального давления при стрессе прежде всего играет роль увеличение сердечного выброса и затем увеличение сосудистого периферического сопротивления, причем в этом измененном эффекте существенна роль норадреналина, который непосредственно действует через а-рецепторы мышечных клеток сосудов (хотя нормальный ответ на увеличение сердечного выброса состоит. в
снижении периферического сопротивления). Кроме того, симпатическая нервная система стимулирует секрецию ренина. В этом отношении представляет интерес существование и мозговой ренин-ангиотензиновой системы, а также сердечных и сосудистых натрий-уретических гормонов, что может создавать взаимодействие между нейрогенными и гемодинамическими (преимущественно почечными) механизмами регуляции артериального давления.
Материалы и методы исследования
Исследования проведены на 230 половозрелых крысах-самцах массой 200 - 260 г линий Вистар и НИСАГ из популяции вивария ИЦиГ СО РАН. Крысы линии НИСАГ (наследственная индуцированная стрессом артериальная гипертензия) селекционированы на патологию в виде повышения артериального давления на эмоциональный стресс из аутбредных крыс Вистар, и отличаются от них по ряду физиологических и поведенческих признаков.
Животных содержали в условиях лабораторного вивария в стандартных пластмассовых клетках при комнатной температуре 16-24 С при относительной влажности 50-70%, при питании натуральным кормом в количестве, соответствующем суточным нормам. За 24 часа до эксперимента животным прекращали подачу пищи при неограниченном доступе к воде.
Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными (Кополадзе Р.А., 1998), отраженными в "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" (Страсбург, 1985). Эвтаназию грызунов осуществляли цервикальной дислокацией под эфирным наркозом. Моделирование иммобилизационного стресса.
Хронический стресс воспроизводился 1-часовыми иммобилизациями,которые осуществлялись путём фиксации животного за конечности на спине с применением для этих целей прямоугольных планшет из фанеры (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Были использованы два режима повторных стрессорных воздействий. Для первого режима повторных стрессорных воздействий характерно доминирование резистентной стратегии адаптации и наличие поведенческих расстройств тревожно-депрессивного характера (Волчегорский И.А., 2002). Его воспроизводили одночасовыми иммобилизациями, с интервалом 72 часа между отдельными стрессорными эпизодами (редко - чередующиеся иммобилизации - РЧИМ). Всего животные четырежды подвергались 1 часовому иммобилизационному стрессу. Данную модель анксиогенного стресса можно рассматривать как модификацию классической модели повторных стрессорных воздействий по R. Kvetnansky (1970), связанную с сокращением в 2 раза количества эпизодов 1 часового иммобилизационного стресса и увеличения промежутков между отдельными иммобилизациями. Увеличение временного интервала между отдельными стрессорными эпизодами затрудняет развитие габитуации и каждое новое воздействие на животное содержит определённый элемент внезапности. Поэтому данный режим иммобилизационного стресса гомологичен «стрессу повседневной жизни».
Второй режим воспроизводился путём ежедневных 1-часовых иммобилизаций (ЕИМ) в течение 3 суток. При таком способе моделирования хронического стресса доминирует толерантная стратегия адаптации (Волчегорский и соавт. 1998., Цейликман В.Э., 1998). В отдельных сериях экспериментов животные были подвергнуты дополнительным воздействиям через 24 часа после завершения последнего сеанса стрессорного воздействия. С целью моделирования стрессорной активации ГГАС подкожно вводили им пролонгированный глюкокортикоидный препарат триамцинолона ацетонид (кеналог, Veb Berlin Chemie, Германия) в дозе 2 мг/кг, предварительно суспендированный в 0,9% растворе NaCl (Волчегорский И.А., 1993; Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Животные другой группы получали эквиобъёмное количество 0,9% NaCl. Еще две группы крыс получали аналогичные инъекции без предварительного стрессирования и через тот же промежуток времени. Временной интервал между последним стрессорным эпизодом и последующим введением глюкокортикоидного препарата мотивируется следующими соображениями. Дополнительное воздействие экстремальным фактором через 24 часа после завершения периодических воздействий является «золотым стандартом» при экспериментальном моделировании адаптационных реакций организма (Меерсон Ф.З., 1993; Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Исторически подобная ситуация сформировалась из-за того, что ранние работы по изучению механизмов «адаптации к стрессу», были выполнены на модели ежедневных иммобилизаций (стресс по R. Kvetnansky). Предложенная Ф.З.Меерсоном (Меерсон Ф.З. и соавт., 1993) модификация - этой модели заключалась в однократном действии более мощного стрессогенного фактора в последние сутки хронического эксперимента. Например, через сутки после завершения ежедневных 1 часовых иммобилизаций в течение двух недель животные подвергались 9ти,» часовому „ иммобилизационному стрессу. А также в связи с тем, что через 24 часа происходит нормализация показателей лейкоцитарного звена системы в ответ на острый иммобилизационный стресс (Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И., 1983). Таким образом, выбранный нами временной интервал между завершением стрессорных эпизодов и дополнительным воздействием позволяет корректно сопоставлять полученные результаты с данными других лабораторий. Через 96 ч с момента подкожного введения триамцинолона ацетонида или 0,9% NaCl крыс забивали под эфирным наркозом, путём цервикальной дислокации. Чувствительность к ГКГ оценивали по степени кеналогиндуцированного снижения массы вилочковой железы (Волчегорский И.А. и соавт., 2000).
Особенности цитохром р450-зависимых монооксигеназ и системы иммунобиологического надзора у нестрессированных крыс вистар и нисаг
Полученные результаты о более низком базальном уровне кортикостерона у крыс линии НИСАГ хорошо согласуется с данными других исследователей. Факт более высокого содержания циркулирующего IL-6 соответствует клиническим и экспериментальным данным о повышенном уровне цитокинов у пациентов с гипертонической болезнью и у гипертензивных крыс. Скорее всего, соотношение глюкокортикоиды/провоспалительные цитокины может выступать в роли индекса, характеризующего соотношение между стресорной и воспалительной реактивностью. В данном случае рост воспалительной реактивности создал благоприятный фон для корригирующего действия иммуностимулятора пирогенала на гипертонию, что лишний раз свидетельствует об эффективности предложенного И.А.Волчегорским подхода, связанного с использованием иммуностимуляторов в терапии «неиммунных заболеваний». Вполне возможно, что позитивный эффект пирогенала реализуется благодаря активации индуцибельной NO-синтазы. Более высокая выраженность отёка стопы в ответ на введение формалина может быть связана с сенситизацией гипертензивных крыс к действию минералокортикоидов и/или вазопрессина. Повышение активности печёночной МАО-Б у крыс линии НИСАГ также может быть связано, со снижением содержания кортикостерона, поскольку известно, что глюкокортикоиды угнетают активность МАО-Б. Более низкий уровень изопропанол-растворимых молекулярных продуктов ПОЛ в печени крыс линии НИСАГ можно связать со сниженным уровнем кортикостерона, для которого характерна способность потенцировать десатурацию насыщенных жирных кислот и тем самым создавать фонд субстратов для ПОЛ (Грек О.Р. и соавт., 2007).
Обращает на себя внимание наличие у гипертензивных крыс более высокого уровня активности большинства исследованных цитохром Р450 зависимых монооксигеназ, несмотря на повышенный уровень циркулирующего IL-6. Известно, что провоспалительные цитокины характеризуются способностью подавлять активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Поэтому мы склонны рассматривать данный факт как результат десенситизации ряда изоформ цитохрома Р450 к депремирующему действию провоспалительных цитокинов. Важно отметить, что среди «устойчивых» изоформ присутствует CYP3A, осуществляющая терминальную биотрансформацию глюкокортикоидов путём 6-(3-гидроксилирования. Возможно, повышенная активность этой изоформы причастна к формированию такого конститутивного признака линии НИСАГ, как более низкий уровень кортикостерона. Помимо стероидных гормонов вовлекается в метаболизм широкого круга ксенобиотиков. В частности, у человека CYP3A метаболизирует едва ли не до 50% всех лекарственных форм. Если окажется, что у больных гипертонической болезнью наблюдается аналогичная ситуация, то тогда появятся основание полагать, что лица, страдающие этим заболеванием являются быстрыми «метаболайзерами». В свою очередь это влечёт за собой увеличение потребления 02 в микросомальном окислении. Интересно отметить, что крысы с низкой устойчивостью к гипоксии характеризуются большим напряжением микросомального окисления. Для гипертензивных крыс также как и для крыс с низкой устойчивостью к гипоксии характерен более высокий уровень CYP1A1-зависимого монооксигенирования.
Активацией убиквитин-зависимого протеолиза этой изоформы, имеющего NO-зависимый характер может быть обусловлен более низкий уровень CYP2B1/2 зависимого монооксигенирования в печени крыс (Morgan Е.Т., 2007). Важно отметить, что в почках гипертензивных крыс повышен уровень активности изоформы CYP2B1/2. Таким образом, разнонаправленные изменения активности в печени и почках CYP2B1/2 ассоциируются с оппозитным характером активности фермента 11р-стероидцегидрогеназы, регулирующей уровень активных глюкокортикоидов. Благодаря десенситизации к провоспалительным цитокинам у гипертензивных крыс не сформировался более высокий уровень иммуновоспалительного процесса по реакции ГЗТ, чем у нормотензивных крыс. Не исключено, что более низкий уровень апоптоза в тимусе препятствовал эффективной клональной селекции иммунокомпетентных клеток.
.Особенности воспалительной и стрессорной реактивности нормотензивных и гипертензивных крыс при ежедневных иммобилизациях
При ежедневных иммобилизациях (ЕИМ) происходит переход от первоначальной резистентной стратегии адаптации к толерантной, являющейся филогенетически более древней (Волчегорский И.А. и соавт., 1998; Цейликман В.Э., 1998). Эта тенденция у различных линий крыс проявляется с различной степенью. Здесь определяющим фактором является выраженность стрессорнои и воспалительной реактивности. Ранее И.А.Волчегорский (1993-2000) на модели ожогового поражения крыс сформулировал принцип реципрокности механизмов стрессорнои и воспалительной реактивности. В дальнейшем был показан универсальный характер этой закономерности и её связь с характером доминирующей адаптационной стратегии (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). В частности, с доминированием толерантной стратегии адаптации ассоциируется усиление воспалительной реактивности. Отсюда следует, что к адаптивным эффектам толерантной стратегии относятся усиление системы иммунобиологического надзора и повышение устойчивости к гипоксии. К дезадаптивным эффектам относится снижение устойчивости к действию флогогенов и увеличение риска иммонупролиферативных и иммуновоспалительных заболеваний (Волчегорский И.А и соавт., 2000). Установлено, что доминирование толерантной стратегии более отчётливо у животных с конститутивно более низким уровнем стрессорнои реактивности (Цейликман О.Б., 2005). Из этого следует, что у животных с повышенным уровнем стрессорнои реактивности переход от резистентной к толерантной стратегии может быть затруднён. В таком случае правомерно ожидать разнонаправленные изменения чувствительности к флогогенам у животных с различным уровнем стрессорнои реактивности в ответ на однотипный вариант стрессорных воздействий. Ранее было показано, что при ежедневных 1 часовых иммобилизациях у беспородных крыс и у крыс популяции Вистар наблюдался переход от первоначальной резистентной к толерантной стратегии адаптации (Цейликман В.Э., 1998), проявлявшийся в увеличении выраженности иммуновоспалительного процесса. Логично предположить, что у крыс с более высоким уровнем стрессорной реактивности блокирование естественной смены адаптационной стратегии сопряжено с повышенной устойчивостью к флогогенам. Для проверки этого предположения в исследование были включены животные гипертензивной линии НИСАГ, характеризующиеся повышенным уровнем стрессорной реактивности.
Влияние ежедневных иммобилизаций на выраженность ГЗТ реакции и, воспалительного отёка стопы в ответ на введение формалина у нормотензивных и гипертензивных крыс. Изменения воспалительной реактивности после завершения ежедневных иммобилизаций соответствовавали правилу исходного состояния Вальдера-Лейтеса (1968). У гипертензивных крыс отмечено постстрессорное снижение выраженности отёчности лапы, а у крыс Вистар тот же самый стресс привёл к увеличению выраженности отёчности лап (таблица 4.1). Таким образом, у линии с исходно повышенной воспалительной реактивностью иммобилизационнй стресс снижал выраженность воспалительного отёка. Напротив, у крыс с исходно пониженной воспалительной реакитвностью иммобилизационный стресс усиливал выраженность воспалительной реакции стопы после введения формалина. Установлено, что у стрессированных крыс Вистар наблюдалось увеличение интенсивности реакции ГЗТ, что свидетельствует о стимуляции клеточного звена иммунитета (таблица 4.1). Полученный результат также свидетельствует о постстрессорном повышении чувствительности к флогогенным факторам, так как реакцию ГЗТ принято рассматривать как проявление иммунно - воспалительного процесса (Волчегорский И.А., Долгушин И.И. и соавт., 2000). Для стрессированных крыс линии НИСАГ отмечена тенденция к снижению интенсивности ГЗТ-реакции не достигшая статистически значимой величины. Вследствие этого у стрессированных крыс по уровню ГЗТ наблюдались межлинейные различия, характеризующиеся более низкой выраженностью ГЗТ реакции у крыс НИСАГ (таблица 4.1). Примечание: реакцию ГЗТ индуцировали иммунизацией ЭБ в объёме 0,05 мл под апоневроз стопы. В качестве сенсибилизирующей дозы использовали 1x10 ЭБ, а в качестве разрешающей - 5x107 ЭБ. Выраженность реакции ГЗТ оценивали вошомометрически через 24 часа после разрешающей иммунизации антигена. Асептическое воспаление изучали на моделе формалинового отека, который индуцировали субплантарным введением в правую заднюю конечность 0,1 мл 3% раствора формалина. Онкометрию осуществляли через 24 часа после введения 3% формалина. Индекс реакции вычислялся по среднему проценту увеличения объема воспаленной лапы по отношению к здоровой. - внутрилинейные статистически значимые отличия. - межлинейные статистически значимые отличия. Данные обработаны с использованием критерия Вальда-Вольфовица; р 0,05 Таким образом, при ежедневных 1 часовых иммобилизациях для нормотензивных крыс характерна более высокая чувствительность клеточного звена иммунитета к антигенному воздействию. В целом, полученные результаты свидетельствуют о более высоком уровне ответа на флогогенную стимуляцию у нормотензивных крыс. Это может быть связано с межлинейными различиями нейро-эндокринного статуса в ответ на предъявленное стрессорное воздействие. 4.2. Влияние ежедневных иммобилизаций на содержание IL-1, IL-6 в сыворотке крови. У стрессированных крыс линии НИСАГ содержание сывороточного IL-6 превышало на 12 % уровень, характерный для нормотензивных крыс (ЕИМ Вистар 41,07±22,7 пг/мл (п=7); ЕИМ НИСАГ 46,42±25 (n=7), р=0,038 WW). В тоже время, для IL-1 не было зарегистрировано подобных различий (ЕИМ Вистар 50,62 ±7,3 пг/мл (п=7); ЕИМ НИСАГ 39,2±20,6 пг/мл (п=7). Факт повышенного содержания провоспалительных цитокинов при одновременном снижении воспалительной реактивности у гипертензивных животных -даёт основание предполагать наличие десенситизации к провоспалительным цитокинам у гипертензивных крыс. Поэтому мы посчитали целесообразным в дальнейших исследованиях провести сопоставление между нормотензивными и гипертензивными крысами по ряду цитокин-зависимых показателей в условиях ежедневных иммобилизаций. 4.3. Влияние ежедневных иммобилизаций на выраженность лейкоцитарного звена системы крови. Установлено, что через 24 часа после завершения ЕИМ у крыс Вистар увеличилось общее количество лейкоцитов в циркулирующей крови, при этом выросло количество палочкоядерных нейтрофилов и увеличилось содержание сегментоядерных нейтрофилов (таблица 4.2). В итоге общее содержание циркулирующих нейтрофилов было в 2 раза повышено по сравнению с контролем.
