Введение к работе
Актуальность проблемы. Апоптоз представляет собой нормальный физиологический процесс гибели, направленный на удаление генетически дефектных клеток, а также на поддержание постоянства численности и обеспечение правильного соотношения клеток различных типов. Апоптоз является защитным механизмом от нерегулируемого клеточного деления.
Баланс процессов пролиферации и гибели клеток имеет особое значение в поддержании гомеостаза в активно пролиферирующих тканях. Нарушение апоптоза является важным звеном в патогенезе многих так называемых пролиферативных заболеваний. Показано, что опухолевые процессы в различных тканях сопровождаются не только увеличением скорости пролиферации клеток, но и снижением их способности к апоптозу. Наиболее изученными заболеваниями, при которых происходит ингибирование апоптоза, являются лейкозы и лимфомы, развитие которых сопряжено с изменением экспрессии регуляторов апоптоза, в частности, с гиперэкспрессией ингибитора апоптоза Bci-2 [Cleary et al, 1986; Korsmeyer etal., 1992].
В то же время, данные литературы о нарушениях процесса апоптоза и его роли в патогенезе пролиферативных заболеваний эндометрия очень противоречивы. Выбор эндометрия в качестве объекта исследования обусловлен тем, что в течение менструального цикла в этой ткани происходят последовательные процессы пролиферации, дифференциации и элиминации клеток, в связи с чем эндометрий представляет собой хорошую модель для изучения процессов клеточной пролиферации и гибели. По данным литературы, апоптоз играет ключевую роль в опосредованном гормонами циклическом отторжении клеток функционального слоя эндометрия [Gompel et al., 1994]. Несбалансированность гормональной стимуляции эндометрия в течение менструального цикла приводит к нарушению баланса пролиферации и гибели клеток и гиперпластическим изменениям эндометрия. Гиперпластические процессы в эндометрии в ряде случаев являются предвестником неопластической трансформации клеток и развития аденокарциномы. Частота перехода гиперплазии в рак колеблется от 2 до 30% [Савельева и Серов, 1980; Бохман, 1989; Макаров и соавт., 1993]. В этой связи необходим поиск маркеров, позволяющих оценить изменения, которые происходят при переходе от нормальной пролиферации, контролируемой конкурентным процессом клеточной гибели, к неконтролируемой пролиферации, приводящей к гиперплазии и неоплазии эндометрия.
Одним из главных критериев апоптоза является расщепление ДНК на олигонуклеосомные фрагменты, которые выявляются при электрофорезе в виде дискретных полос [Wyllie et al., 1984; Cohen et al., 1993]. Межнуклеосомная фрагментация ДНК осуществляется, главным образом,
Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbiMii эндонуклеазами (СМЭ), локализованными в клеточном ядре [Ribeiro and Carson, 1993; Khodarev and Ashwell, 1996; Pandey et al., 1997]. Изменение активности Са2+Лк<%2+-зависимых эндонуклеаз отмечено при некоторых патологических процессах [Kyprianov et al., 1988; McConkey et al., 1996]. В частности, наблюдаемое при лимфопролиферативных заболеваниях значительное снижение активности ядерных Са2+/М2+-зависимых эндонуклеаз, считается признаком нарушения апоптоза [Соколова и соавт., 1988; Ткачева и соавт., 1990].
Цель работы:
Исследование активности ядерных Са2+/М2+-зависимых эндонуклеаз при физиологических и патологических состояниях эндометрия, сопровождающихся изменением баланса пролиферации и гибели клеток.
Задачи исследования:
Разработать метод определения активности Ca2+/Mg2+-3aBHcnMbix эндонуклеаз в эндометрии.
Исследовать зависимость активности СМЭ в эндометрии от фазы менструального цикла.
Определить активность Ca2+/Mg2+-3aBHCiiMbix эндонуклеаз в тканях эндометрия с разной степенью выраженности гиперпластических и неопластических процессов.
Оценить уровень активности СМЭ в мононуклеарных клетках периферической крови в зависимости от состояния эндометрия.
Научная новизна работы:
Впервые показано, что гиперплазия ткани эндометрия сопровождается уменьшением активности СМЭ в измененных участках ткани, но не в клетках периферической крови. Активность СМЭ в ткани эндометрия при его гиперпластических и иеогшастических изменениях снижается в ряду: неизмененный эндометрий - гиперпластический эндометрий - аденокарцинома эндометрия. Выявлена зависимость между уровнем активности СМЭ и степенью дифференцированности аденокарцином эндометрия. Активность Са27М2+-зависимых эндонуклеаз снижается по мере уменьшения степени дифференцировки аденокарцином,
Практическая значимость работы:
Проведена адаптация метода оценки активности Ca2+/Mg2+-зависимых эндонуклеаз для исследования эндометрия. Предложен новый способ расчета эндонуклеазной активности. Показано, что снижение активности СМЭ зависит от степени выраженности патологического процесса в эндометрии. Снижение активности Са2+Я^24-зависимых
эндонуклеаз, по-видимому, может быть использовано в качестве маркера нарушений процесса апоптоза, приводящих к изменению баланса клеточной пролиферации и гибели в ткани эндометрия. Предложенный метод измерения уровня активности СМЭ позволяет выявить нарушения механизмов регуляции апоптоза в эндометрии и оценить степень риска их малигнизации.
Основные положения, выносимые на защиту:
Разработан метод определения активности СМЭ в эндометрии.
Активность СМЭ в эндометрии не зависит от фазы менструального цикла.
Снижение активности СМЭ в эндометрии коррелирует со степенью выраженности гиперпластических и неопластических процессов.
Уменьшение активности СМЭ в трансформированных тканях эндометрия не сопровождается изменением активности нуклеаз в клетках периферической крови.
Апробация работы. Результаты работы были представлены на 6-ом международном конгрессе гинекологов-эндокринологов в Швейцарии (Гран-Монтана, 1998); на 13-ом конгрессе Европейской ассоциации акушеров и гинекологов в Израиле (Иерусалим, 1998); на 7-ом международном конгрессе репродуктивной иммунологии в Индии (Ныо Дели, 1998); на 4-ом международном симпозиуме "Механизмы локального иммунитета" в Хорватии (Опатия, 1998).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 99 страницах машинописного текста, содержит 8 таблиц и 14 рисунков. Список литературы включает 150 источников.
