Содержание к диссертации
Введение
1 .Общая характеристика работы 4
1.1. Актуальность темы 4
1.2. Цели и задачи исследований 6
1.3. Научная новизна 6
1.4. Практическая значимость работы 7
1.5,Основные положения, вынесенные на защиту 8
1.6. Апробация работы 8
1.7. Публикации результатов исследования 8
1.8. Объем и структура диссертации 9
2. Обзор литературы 10
2.1. Общая характеристика кожных болезней собак 10
2.2. Кожа как иммунный орган 13
2.2.1. Болезни кожи и ее производных, вызываемые бактериями 14
2.2.2. Паразитарные болезни кожи 16
2.2.3. Грибковые заболевания кожи 19
2.2.4. Характеристика аутоиммунных, эндокринных и аллергических болезней кожи собак
2.3. Критерии оценки иммунного статуса животных 26
2.4. Средства, применяемые для коррекции иммунного статуса животных
2.4.1. Характеристика цитокинов и интерлейкинов 31
2.4.2. Характеристика препарата ронколейкина 34
2.8. Заключение по обзору литературы 36
3. Собственные исследования 40
3.1. Материалы и методы 40
3.2. Этиопатогенетическая характеристика болезнейкожи собак различных пород и возрастных групп 43
3.2.1. Результаты бактериологических, клинических, гематологических и
иммунологических исследований собак при пиодермиях 43
3.2.2.Результаты микологических и клинических исследований собак при
дерматофитозах 48
3.2.3. Результаты арахноэтномологических исследований собак, имевших признаки поражения кожного покрова 52
3.3. Гематологические и иммунологические показатели крови у клинически здоровых собак 56
3.4. Результаты гематологических и иммунологических исследований собак при пиодермиях 65
3.5. Результаты гемалогический и иммунологических исследований при дерматомикозах 70
3.6. Результаты гематологических и иммунологических исследований при демодекозе собак 76
3.7. Влияние ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели собак при пиодермиях 88
3.8. Влияние ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели собак, больных дерматофитозами 94
3.9. Влияние ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели собак, больных демодекозом 98
3.10. Терапевтическая эффективность гипохлорита натрия и ронколейкина при поверхностной пиодермии собак 105
4. Обсуждение полученных результатов 110
5. Выводы 127
6. Практические предложения 130
7. Список использованной литературы
- Цели и задачи исследований
- Кожа как иммунный орган
- Этиопатогенетическая характеристика болезнейкожи собак различных пород и возрастных групп
- Влияние ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели собак, больных дерматофитозами
Цели и задачи исследований
Целью исследований являлось изучение гематологических и иммунологических показателей при кожных болезнях различного генеза и определение эффективности ронколейкина для коррекции иммунного статуса животных. Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи: 1. Определить клинический, гематологический и иммунный статус у собак различного возраста и породы, при кожных патологиях различного генеза. 2. Определить диагностический алгоритм кожных болезней и их место в структуре патологии у собак. 3. Изучить динамику гематологических и иммунологических показателей больных собак при применении ронколейкина в качестве иммуностимулирующего средства. 4. Определить терапевтическую эффективность ронколейкина при заболеваниях кожи различного генеза у собак. 5. Разработать рекомендации по коррекции иммунного статуса у собак с заболеваниями кожи различного генеза. 1.3. Научная новизна В результате проведенной работы: - комплексно изучены этиопатогенетические аспекты кожных патологий собак, обусловленных бактериями, патогенными грибами и клещами рода Demodex; б - определены параметры гематологических и иммунологических показателей собак при пиодермиях, дематофитозах и демодекозах; - установлено, что болезни кожи собак различного генеза всегда сопровождаются значительными изменениями в морфологическом, биохимическом и иммунологическом составе крови и сыворотки крови; - впервые на основе клинических, бактериологических, микологичеких, арахнологичеких, гематологических и иммунологических исследований обоснована целесообразность применения препарата ронколейкина в комплексе терапии собак при пиодермиях, дерматофитозах и демодекозах для коррекции иммунного статуса организма. 1.4. Практическая значимость работы Результаты гематологических и иммунологических исследований используются при диагностике и оказании лечебной помощи больным с кожной патологией собак.
Применение ронколейкина у собак с кожными заболеваниями различного генеза, сопровождающимися вторичными иммунодефицитными состояниями, повышает эффективность терапии и значительно сокращает сроки выздоровлония.
Результаты исследований используются в учебном процессе при чтении лекций и проведения практических занятий на кафедрах эпизоотологии и инфекционных болезней и паразитология и инвазионные болезни животных для студентов факультета ветеринарной медицины и ветеринарным врачам клиник на факультете повышения квалификации в МГАВМиБ.
Разработаны «Методические положения по определению иммунного статуса животных»,утверждены академик-секретарем отделения ветеринарной медицины РАСХН 01.06.2011 г. Разработаны «Методические рекомендации по применению препарата ронколейкина в комплексной терапии собак при кожных патологиях».Рекомендации утверждены директором ВНИТИПБ 27 сентября 2011г. 1.5.Основные положения, вынесенные на защиту 1. Клинический, иммунологический и гематологический статус собак, при кожных патологиях различного генеза. 2. Динамика гематологических и иммунологических показателей больных собак при применении ронколейкина в качестве иммунокорректирующего средства. 3. Терапевтическая эффективность ронколейкина при заболеваниях кожи собак различного генез
Основные положения диссертационной работы отражены в итоговых отчетах ГНУ ВНИИТБП за 2010-2011гг. Материалы доложены и обсуждены на заседаниях ученного совета ГНУ ВНИИТБП (2010-2011гг), а также на конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных», посвященной 100-летию со дня рождения бывшего ректора Казанской академии ветеринарной медицины профессора Х.Г.Гизатуллина, 26 ноября 2010г. (Казань,2010), на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства», Самара, 2010, на Международной научно-практической конференции «Задачи ветеринарной науки в реализации докторины продовольственной безопасности Российской Федерации» 16-17марта 2011г. (Покров,2011г.), на конференции молодых ученых Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии (27апреля 2011г.) г. Москва.
Кожа как иммунный орган
По мнению Федорова Ю.Н. (2006) стратегия развития ветеринарии в настоящее время привела к пониманию того, что почти любая патология является причиной или следствием иммунологических нарушений, которые способствуют хронизации основного заболевания и его осложнениям. Такая ситуация требует применения иммунокорригирующих средств, без которых быстрое и полное излечение пациента представляется затруднительным.
Иммунологическая тактика лечащего врача, в первую очередь, должна базироваться не только на адекватной оценке иммунологического статуса, но и на правильном толковании отдельных параметров иммунологической реактивности, на знании ее возрастной динамики и иммунологических механизмов, понимании роли отдельных лимфоидных органов в поддержании гомеостаза.
С иммунобиологических позиций состояние здоровья животных в настоящее время характеризуется снижением иммунологической реактивности и, как следствие, повышением заболеваемости, связанной с возбудителями инфекционных болезней и условно-патогенными микроорганизмами. В связи с этим большой интерес исследователей и практических специалистов привлекают препараты, оказывающие воздействие на иммунитет. По эффекту действия на иммунную систему препараты, корригирующие процессы иммунитета, можно разделить на иммуносупрессоры, иммуностимуляторы и иммуномодуляторы. Последние оказывают разнонаправленное действие на иммунную систему в зависимости от ее исходного состояния. Такие препараты повышают пониженные и понижают повышенные показатели иммунного статуса. Однако, в настоящее время препаратов с четко доказанным разнонаправленным действием на иммунную систему, т.е. собственно иммуномодуляторов, не так много. В настоящее время практическая медицина располагает довольно широким арсеналом препаратов, обладающих способностью воздействовать на различные звенья иммунной системы организма. Основанием для проведения иммунотерапии являются результаты клинических и иммунологических исследований с оценкой иммунного статуса организма.
Большинство иммунотропных препаратов подробно описаны в различных фармацевтических справочниках, однако в настоящее время на ветеринарном рынке России появляются новые коммерческие иммунокорригирующие средства. Характеристика большинства приведенных в данной главе препаратов, их показания к применению и потенциальная эффективность приведена на основе Нормативных документов, представленных авторами, рассмотренных и утвержденных в установленном порядке.
Все природные вещества, обладающие способностью оказывать влияние на иммунную систему, можно разделить на экзогенные и эндогенные. Среди подавляющего большинства первых - это вещества микробного происхождения, в основном бактериального и грибкового. Известны препараты и растительного происхождения (экстракт коры мыльного дерева, полисахарид из проростков картофеля- вегетан). Вещества эндогенного происхождения условно разделяются на две подгруппы: иммуно- регуляторные пептиды и цитокины. Первые представляют собой в основном экстракты из органов иммунной системы (тимус, селезенка) или продукты их жизнедеятельности. Препараты из тимуса могут содержать его гормоны. К цитокинам относят совокупность биологически активных белков, продуцируемых лимфоцитами и макрофагами: интерлейкины, монокины и интерфероны. В иммунотерапии они обычно используются в виде рекомбинантных препаратов. Необходимо выделить третью группу иммунокорригирующих препаратов: синтетические и (или) химически І чистые. Это аналоги препаратов микробного или животного происхождения; известные лечебные препараты, обладающие дополнительно иммунотропными свойствами; вещества, полученные в результате направленного химического -синтеза.
Достижением современной клинической иммунологии является внедрение в комплексную терапию различных заболеваний иммунокорригирующих препаратов, устраняющих расстройства иммунной системы. Эти препараты начинают широко применяться в ветеринарной клинической практике.
Цитокины - гормоноподобные низкомолекулярные белки, секретируемые различными группами клеток (например, клетками селезенки, тимуса, эпителиальными, эндотелиальными, тучными клетками, фибробластами и лимфоцитами) и регулирующие функцию других клеток, выполняя таким образом роль медиаторов в межклеточном взаимодействии. Основная функция цитокинов, к числу которых, например, относятся интерфероны и интерлейкины, - регуляция интенсивности и длительности иммунных реакций. На уровне организма цитокины осуществляют связь между иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной и другими системами и служат для их вовлечения в организацию и регуляцию защитных реакций (А.С.Симбирцев, 2002).
Выяснение роли цитокинов в гомеостазе и патофизиологии затрудняется тем, что большинство из них оказывают плейотропное действие, и тем, что они способны действовать как локально, так и системно, наподобие гормонов. Более того, они часто работают синергично и взаимодействуют с клетками и другими медиаторами для тонкой регуляции иммунного ответа (Зимина И.В., 1994). Наиболее важное достижение биологической науки, а в частности иммунологии - это протеины, выделяемые активированными клетками иммунной системы, которые в ответ на иммунологическую стимуляцию образуют сложные связи внутриклеточных сигнальных молекул. Совокупность этих протеинов называют интерлейкинами, и они вырабатываются главным образом активированными моноцитами и лимфоцитами. В более общем смысле интерлейкины, интерфероны и колониестимулирующие факторы, вырабатываемые не только лейкоцитами, но также клетками многочисленных тканей.
Этиопатогенетическая характеристика болезнейкожи собак различных пород и возрастных групп
Таким образом полученные нами результаты морфологических и биохимических показателей крови клинически здоровых животных разных возрастных групп в основном совпадают с литературными данными.
Из представленных данных таблицы 9 видно, что с возрастом у клинически здоровых собак практически все основные показатели специфического и неспецифического иммунитета возрастают. Так, средний уровень иммуноглобулина класса А от 2,1 г/л у животных возраста до 1 года к 3-хлетенему достигает 2,4, а старше 3-х лет - 2,7 г/л. Аналогичные данные получены по другим иммуноглобулинам, за исключением иммуноглобулина класса G, где отмечено незначительное снижение, что также согласуется с многочисленными литературными данными.
Одним из важных критериев, характеризующем иммунный статус организма животного является определение лизоцимной активности сыворотки крови. Из таблицы 9 следует, что этот показатель у клинически здоровых собак до одного года составляет 10,2% лизиса, а с возрастом постепенно увеличивается до 14% лизиса у животных старше 3-х лет. Необходимо отметить при многоразовых исследованиях сыворотки крови клинически здоровых собак старше 5, 7 лет и старше этот показатель не увеличивается и особенно не уменьшается в пределах статистической погрешности.
Аналогичные данные получены при бактериальной активности сыворотки крови клинически здоровых собак различных возрастных групп. Так у собак до 1 года этот показатель составлял 60,4 (±2,26)% лизиса Е.соИ, с 1 до 3 лет 68,6 ± 0,20, соответственно.
При определении уровня циркулирующих иммунных комплексов отмечено, что у молодых собак она составляет в среднем 14,2±2,2 условных единицы, а у взрослых увеличивается почти в два раза (от 1 года до 3 лет 22,4±4,2, 3 года и старше 24,5±0,48).
Известно, что уровень циркулирующих иммунных клеток является одним из важнейших критериев оценки функциональной зрелости гуморального звена иммунной системы организма. По мнению Лавровой К.М. (2009) повышение уровня циркулирующих иммунных клеток связано со снижением шчнкииональной активности макрофагов и интенсивной р!,ягк глсш1 имм - :!окомиоменткых клеток лимфоидной ткани организма.
Показатели фагоцитарной активности крови, точнее нейтрофилов, относится к факторам неспецифической резистентности организма. Из представленных в таблице 9 данных видно, что параметры фагоцитарной активности неиірофилов, а іакжс фатоциіарное число и фаіициіарньїи индекс с возрастом сооак гакже увеличиваются, чти связано с увеличением КОЛИЧеСТВа СеГМеНТОЯДерНЫХ НеЙТрОфШЮЬ, цпрвулпуужшцпл г НерИферИЧССКОй КрОоп Таким образом, при иммунологических исследованиях крови и сыворотки крови клинически здоровых собак разных возрастных групп установлено, что эти показатели в пределах нормы и согласуются с литературными данными.
При обработке статистических данных выявлено, что пиодермиты составляют около 70% случаев в структуре кожных патологий собак независимо от возраста и пород. Этиопатогенетические аспекты таких дерматитов (они изложены в разделе 3.2.1 диссертационной работы) довольно разнообразны: укусы насекомых, порезы, ушибы, химические и физические травмы, различные бактерии, патогенные грибки и т.д. важное значение в развитии инфекционного процесса при пиодерматитах имеет состояние иммунной системы организма. Врожденные и приобретенные иммунодефицита, особенно при нарушении киллерной функции фагоцитов и синтеза секреторного иммуноглобулина А способствуют снижению активности иммунологических реакций. По мнению П.Е.Игнатова (1995) стафилококки, которые являются основным этиологическим фактором пиодермии, способны активно провоцировать в организме состояние иммунодефицита.
Поэтому для эффективной терапии собак при пиодермиях важно не только установление этиологического фактора, но и определить состояние иммунного статуса организма с целью его коррекции, с применением иммуностимулирующих препаратов.
Для проведения гематологических и иммунологических исследований нами были отобраны 25 собак с поверхностной и 17 собак с глубокой пиодермией. Морфологические показатели крови собак при поверхностной и глубокой пиодермиях приведены в таблице 10. В качестве контроля использовали эти же показатели крови клинически здоровых собак в возрасте от 1 до 3 лет, изложенные в разделе 3.3 «Гематологические и иммунологические показатели крови у клинически здоровых животных», таблица 7.
При анализе таблицы 10 установлено, что у собак с поверхностными и глубокими пиодермиями количество эритроцитов уменьшалось на 1 и 1,5 млн/мкл соответственно, по сравнению с показателями клинически здоровых собак. Отмечается также снижение гемоглобина более чем на 15% по сравнению с значением данного показателя у клинически здоровых животных (140,9±3,37 г/л).
У больных собак уменьшилось общее количество лейкоцитов на 5 и 14 % соответственно при поверхностной и глубокой пиодермиях по сравнению с количеством лейкоцитов у клинически здоровых животных (8,70±0,20 тыс/мкл). В лейкоцитарной формуле отмечено уменьшение количества эозинофилов (4,24±0,7 при поверхностной и 4,15±0,49 при глубокой пиодермиях, а у клинически здоровых собак этот показатель 5,92±0,46). Относительно резкие изменения претерпевают процентное соотношение сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов. Если количество первых увеличилось на 10-12%, то вторых уменьшилось на столько же, что характерно для хронических и особенно острых воспалительных процессов происходящих в организме, в частности и в коже и ее производных.
Таким образом, результаты морфологических изменений крови при поверхностной и глубокой пиодермиях собак согласуются общеизвестными факторами, а именно: при гнойных воспалительных процессах происходит изменения в составе крови, и чем тяжелее они (процессы), тем резко эти изменения выражены.
При биохимических исследованиях крови собак, больных поверхностной и глубокой пиодермией не установлены достоверные изменения, за исключением показателя общего белка. Параметры общего белка при поверхностной пиодермии колебались от 70,6 до 80,6г/л, при норме 40-73г/л, а при глубокой свыше 90 г/л, что свидетельствует о более высокой интенсивности и динамичности инфекционного процесса при глубоких пиодермиях.
Результаты иммунологического анализа крови собак, больных поверхностной и глубокой пиодермиях приведены в таблице 11. Рисунок 2. Концентрация общего белка (г/л) в крови собак, больных пиодермией
Влияние ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели собак, больных дерматофитозами
В разделе 3.4. диссертационной работы были проведены результаты гематологических и иммунологических исследований собак, больных поверхностными и глубокими пиодермиями. Было установлено, что при таких патологиях происходит не только внешне легко обнаруживаемые изменения в различных участках кожного покрова но и в различной степени выраженные изменения в морфологическом, биохимическом и иммунологическом составе преферической крови.
Целью проведённой работы являлась оценка лечебной эффективности и влияния ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели больных пиодермиях собак. Полученные современными методами биотехнологии и генной инженерии препарат ронколейкин является полным структурным и функциональным аналогом эндогенного интерлейкина-2. Нами, в условиях сети клиник ветеринарной медицины «Лебеди» было обследовано более 210 собак различных пород и возрастных групп, имеющих признаки поражения кожного покрова. На основании анализа клинических признаков и результатов бактериологических исследований 64 собакам был поставлен диагноз пиодермия. Характерными клиническими признаками у 50 из 64 обследованных собак являлись неглубокие эрозии у основании ушей, шеи,, подгрудка, брюшной1 стенки: У большинства больных животных наблюдали; сильныйгзуд и расчёсы в области, поражения! кожи; характерными для поверхностной пиодермии. У остальных 14 собак поражения.кожного покрова, были более обширными. Клинически заболевания проявлялись фурункулёзами, изъязвлениями, увеличение регионарных лимфатических узлов, изнуряющим зудом и усиленными экссудативными явлениями. У 4 больных собак, из 14 болезнь сопровождалась гнойными отитами. Эти признаки являются характерными для глубокое пиодермии.
До оказании лечебной помощи были взяты; пробы крови для, гематологических и иммунологических исследований(результаты. этих исследований изложены в разделе 3.4). При этом установлено, что у больных. собак с поверхностной и глубокой формами пиодермии значительное уменьшение количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, а в лейкоформуле эозинофилов и лимфоцитов. Отмечено, так же увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов и содержания общего белка в крови, что характерно для гнойных воспалительных процессов.
Уровень иммуноглобулинов класса А\ и G так же уменьшились стастически до верных параметрах.. Отмечено так же снижение лизоцимной, бактериальной фагоцитарной активности крови собак, больных пиодермией. Для определения лечебной эффективности ронколейкина при пиодермии собак и влияние его на гематологические и иммунологические показатели крови, было сформировано 4 группы животных. 1 группа - 20 больных поверхностной формой пиодермии. Лечебная помощь больным была оказана с применением антисептических препаратов (3%-ный раствор перекиси водорода, 0,05%-ный раствор хлоргексадин), наложением антибактериальных мазей(линкомициновая, эротромициновая) и комплексого препарата «Тридерм», обладающего антибактериальным,противовоспалительным т противогрибковым действием. 2 группа - 30 больных собак поверхностной формой пиодермии. Для лечения больных собак 2 группы кроме выше указанных лекарственных препаратов назначали раствор ронколейкина в дозе 10000МЕ, 3 инъекции через 24 часа,подкожно. 3 группа - 6 больных собак с диагнозом глубокая пиодермия. Лечебные процедуры больным собакам 3 группы осуществляли так же, как животным 1 группы. 4 группа - 7 больных с диагнозом глубокая пиодермия. Лечение животных 4 группы осуществляли так же,как больных 2 группы. Курс лечения больных собак поверхностной пиодермии составлял в среднем 10, а глубокой 15 дней.
За животными всех групп проводилось ежедневное наблюдение в течении 20ти дней. При этом учитывали общее состояние больного животного, степень выраженности расчёсов и экссудации. Через каждые 5 дней проводили замеры поражённых участков кожи. Для определения гематологических и иммунулогических параметров по окончанию курса лечения брали кровь.
Клиническими исследованиями установлено, что у животных 1 групп и 3 группы процесс заживления поражённых участков кожи в основном протекало медленнее, чем у больных 2 и 4 групп. Хотя признаки зуда, расчёсов и экссудации у животных всех групп постепенно ослаблялись и к концу курса лечения практически исчезли. У 2х животных из 20ти 1 группы и 3-х 3 группы и 1-го животного 4 группы через 20 дней(по окончанию курса лечения) была установлена незначительная экссудация серозного характера.
В таблице 21 приведены результаты гематологических и иммунологических анализов до и после лечения собак, больных поверхностной и глубокой пиодермией. Из данных таблицы видно, что морфологическая картина крови у животных опытных групп после курса лечения значительно улучшилась. В частности увеличились количества эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов, а в лейкоцитарной формуле лимфоцитов. Однако при сравнительном анализе данных по опытным группам имеют существенные различия. Так животным, которым лечебная помощь оказана с применением препарата (2 и 4 группы) практически вышеуказанные показатели крови на порядок болыпе,чем у животных, которых лечили без ронколейкина.
Наиболее статистически достоверным изменениям претерпевала уровень общего белка во всех опытных группах. Так, если у животных 1 и 3 групп,подвергнутых лечению без применения ронколейкина, снизилась на 8 и 15% соответственно, то 2 и 4 группах на 20 и 25%.,что предполагает о положительном влиянии данного препарата на протеинового белка в организме.
Прослеживая динамику уровней иммуноглобулина класса А, отмечено что в 1 группе происходит его увеличение в 2 раза, во 2 группе 2,5 раза, в 3 -1,4 и 4 в 2,5 раза. Аналогичные данные получены и по иммуноглобулину класса G. То есть, в группах 2 и 4(лечение больных собах проводилось с применением ронколейкина) уровень обоих иммуноглобулинов была выше чем у животных 1 и 3 групп(без применения ронколейкина).
Уровень циркулирующих иммунных комплексов в 1 группе составляла 18,0 у.е, во 2 - 19,3, в 3 - 20,0 и в 4 - 21,8 ,при норме 22,4 у.е., что так же свидетельствует о положительном влиянии ронколейкина (2 и 4 группы) на иммунную систему организма больных пиодермией собак.
Анализируя показатели не специфической резистентности, нами выявлено, что в 1 и 3 группах лизоцимная активность была значительно ниже(10,0 и 9,0 соответственно, при норме 11,62% лизиса), чем у животных 2 и 4 групп(13,4 и 12,6% лизиса), где при лечении больных пиодермией собак, кроме антисептических, антибактериальных препаратов, применяли ронколейкин. Аналогические результаты были получены при расчете бактериальной и фагоцитарной активности. Так в 1 группе бактериальная активность до лечения составляла 46,4 % лизиса E.coli, после курса лечения 55,2, во 2 группе - 46,4 и 65,4, в Зей - 46,6 и 60,5. Этот показатель у клинически здоровых животных был равен 66,4 % лизиса E.coli. Фагоцитарная активность нейтрофилов в 2 и 4 группах была значительно выше(в среднем 7%) чем, в 1 и 3 группах.
