Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Сырье животного происхождения как перспективный источник биологически активных соединений 9
1.2. Строение и функция иммунной системы 15
1.3. Биологически активные факторы тимуса и лечебные препараты на их основе 27
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 39
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Модификация способа получения иммуномодулирующего средства 50
3.1.1, Оптимизация процесса автолиза 50
3.1.2. Консервирование «Иммуноактив-Т» методом сублимационного высушивания при атмосферном давлении 58
3.1.3. Исследование физико-химических свойств и состава «Иммуноактив-Т» 62
3.2. Оценка иммунобиологической эффективности «Иммуноактив-Т» на лабораторных животных 67
3.2.1. Влияние «Иммуноактив-Т» на показатели активности и интенсивности фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в условиях иммунодефицита, вызванного азатиоприном 68
3.2.2. Изучение функции клеточного звена иммунитета при воздействии «Иммуноактив-Т» на фоне иммунодефицита 69
3.2.3. Исследование иммуномодулирующего действия «Иммуноактив-Т» на гуморальный иммунитет при вторичном иммунодефицитном состоянии 71
3.2.4. Оценка функциональной активности антигенспецифических Т- супрессоров экспериментальных животных при воздействии «Иммуноактив-Т» 73
3.2.5. Исследование динамики изменения иммунобиологической эффективности «Иммуноактив-Т» 75
3.3. Определение безопасности «Иммуноактив-Т» 78
3.3.1. Анализ микробиологической контаминации 78
3.3.2. Оценка токсичности 80
3.4. Получение твердой дозированной формы «Иммуноактив-Т» 84
3.5. Разработка модельного образца мясных консервов «Колбасный фарш отдельный» с добавлением «Иммуноактив-Т» 88
3.5.1. Оценка качественных характеристик продукта 89
3.5.2. Исследование иммуномодулирующих свойств продукта 92
Обсуждение результатов 95
Выводы 105
Список литературы 107
Приложения 127
Введение к работе
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Сырье животного происхождения как перспективный источник 9 * биологически активных соединений
Строение и функция иммунной системы 15
Биологически активные факторы тимуса и лечебные препараты на 27 их основе
Строение и функция иммунной системы
Физиологической функцией органов иммунной системы является иммунологическая реактивность, направленная на защиту организма от живых тел и веществ, несущих признаки генетически чужеродной информации. Иммунологическая реактивность организма реализуется через распознавание, обезвреживание и элиминацию чужеродных антигенов и проявляется выработкой специфических антител и специфическими клеточными реакциями. Основное свойство лимфоидных органов и тканей -способность обеспечивать структурную, и функциональную. целостность и - индивидуальность организма [Иммунология: Практикум, 1989].
В настоящее время к органам иммунной системы относят костный мозг, тимус, сумку Фабрициуса (бурсу), селезенку, аппендикс, лимфатические узлы, скопления лимфоидной ткани, расположенные в стенках полых органов пищеварительной, дыхательной систем и мочеполового аппарата (миндалины, лимфоидные бляшки тонкой кишки, одиночные лимфоидные узелки), а также диффузно рассеянную в слизистой оболочке внутренних органов лимфоидную ткань, ассоциированную с кишечником, бронхами и многочисленные лимфоциты, находящиеся в крови, лимфе, тканях и органах, где они выполняют функции поиска, обнаружения и уничтожения генетически чужеродных веществ [Сапин М.Р. и соавт., 1996].
Функционально органы и ткани иммунной системы разделяют на центральные и периферические. Тимус, костный мозг, сумка Фабрициуса, в которых из стволовых клеток дифференцируются лимфоциты, относятся к центральным органам иммунной системы, остальные являются периферическими органами иммуногенеза: в эти органы лимфоциты выселяются из центральных органов.
Материалы и методы исследований
Эксперименты выполнены на 500 половозрелых мышах линии СВА и гибридах F1 (СВАхС57В1/6) массой 20-22 г., полученных из питомника РАН «Столбовая», 10 самцах морских свинок массой 150-200 г. Все животные находились на стандартном рационе в условиях вивария при одинаковом уходе [Западнюк И.П. и соавт., 1983]. Экспериментальные исследования проводились при соблюдении правил, сформулированных в приказах МЗ dCCP №1 от 10.10.1989 г. и №1045-73 от 6.04,1973 г. Животных умерщвляли с помощью дислокации шейных позвонков, согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ СССР № 755 от 12 августа 1977 г.).В работе были использованы: иммуномодулирующее средство «Иммуноактив-Т», полученное из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота до 3 лет; азатиоприн (Московское производственное химфарм. объединение им. Н.А. Семашко) в концентрациях 50мг/кг в реакциях in vivo и 0,5 мг/мл - in vitro.В Проблемной научно-исследовательской лаборатории Восточно-Сибирского государственного технологического университета разработан способ выделения активной фракции тимуса убойных животных (АФТ), которая в дальнейшем была иммобилизована на цеолите, с целью получения кормовой добавки «Цеохол-Т» [Дырдуева Н.Б., 2000].
В настоящей работе представлены результаты разработки иммуномодулирующего средства из тимуса телят и молодняка КРС, получившего название «Иммуноактив-Т». За основу была взята схема получения АФТ. Содержание белка определяли по методу Лоури [Lowry О. и соавт., 1951] и по биуретовому методу.
Содержание влаги оценивали согласно ГОСТ Р51 479-99; количество жира - методом Сокслета, золы - стандартным методом сухого озоления [Журавская Н.К. и соавт., 1985]. Растворимость определяли по методике, описанной в Государственной Фармакопее СССР (1987),
Оптимизация процесса автолиза
Известно, что тимус вырабатывает ряд биологически активных соединений, которые играют важную роль в регуляторных процессах иммунной системы. Существуют различные схемы получения биологически активных факторов из тимуса различных видов животных [Арион В.Я. и соавт., 1997; Гриневич ЮА и соавт., 1989; Ломакин М.С. и соавт., 1992; Морозов В.Г. и соавт., 1981; Сафронов Б.Н. и соавт,, 1984; Мотавкина и соавт., 1996; Лысенко Н.П..И соавт., 2003; Safien-Garabedian В. и соавт., 1992; Bach J.F. и соавт., 1989]. І
В Проблемной научно-исследовательской лаборатории (ПНИЛ) Восточно-Сибирского. государственного технологического университета (ВСГТУ) разработаны способы получения иммуномодулирующих средств из различных органов иммунной системы убойных животных [Галанова О.Г., 1998; Бильдуева Д.Г., 200lf Битуева А.В., 2003], в частности, из тимуса телят и молодняка КРС [Дырдуева Н.Б., 2000]. Данный способ был взят за основу при получении иммуномодулирующего средства, получившего название
«Иммуноактив-Т». : Схема выделения биологически активной фракции тимуса (АФТ), і разработанная в ПНИЛ ВСГТУ, представлена на рисунке 2. Как видно из рисунка, технологию АФТ возможно оптимизировать только на одном г технологическом этапе, а именно, автолизе. В результате автолиза под действием собственных ферментов органа I происходит накопление низкомолекулярных белков и пептидов, определяющих биологическую активность препаратов на основе тимуса. # Данный процесс требовал более глубокого изучения.
