Введение к работе
Актуальность темы. К важнейшим задачам ветеринарной науки относится внедрение научных достижений в производство, разработка эффективных методов диагностики, профилактики и ликвидация инфекционных болезней животных, среди которых особое место занимает – бешенство. По данным ВОЗ бешенство по наносимому экономическому ущербу занимает пятое место среди инфекционных болезней (Груздев К.Н., Недосеков В.В., 2001).
Проблемы проявления бешенства в Российской Федерации и в отдельных ее регионах отражены в работах ведущих отечественных специалистов по вопросам рабической инфекции: Селимов М.А. (1978, 1998); Кузнецов П.П., Таршис М.Г., (1981); Сочнев В.В. (1987); Кузьмин И.В. (2001); Авилов В.М. (2002); Джупина С.И. и др.(2002, 2007); Макаров В.В., Воробьев А.А. (2002, 2004); Ботвинкин А.Д. (2004); Иванов В.С. и др. (2004); Хрипунов Е.М. и др. (2005); Сидорова Д.Г. (2009); Сидоров Г.Н. и др. (1995, 1998, 2011); Ведерников В.А. и др. (2010); Иванов А.В., Хисматуллина Н.А., Чернов А.Н., Гулюкин А.М. (2010); Самуйленко А.Я., Гринь С.А. и др. (2012), Дудников С.А. (2012) и др.
Особенностям эпизоотологии бешенства животных и эффективности профилактических мероприятий в Московской области посвящены исследования Цвиль Л.А., Родиной Л.В. и др. (2001, 2002); Балдиной И.В. (2003, 2004); Мовсесянц А.А. (2003, 2011); Заводских А.В. (2007). Причины сохранения напряженности эпизоотической обстановки по бешенству в таком быстроизменяющемся регионе, как Московская область, требуют дополнительного изучения. При этом необходимо проанализировать современную эпизоотическую ситуацию по бешенству с учетом влияния экологических и социальных факторов в сочетании с экспериментальными исследованиями.
Опасность распространения бешенства связана с особенностью патогенеза заболевания – передачей вируса зараженными животными при укусе или ослюнении. По данным Роспотребнадзора, в Российской Федерации за период 2008–2011 гг. зарегистрировано 57 летальных случаев среди людей. На территории Московской области в 2011 году зарегистрировано 3 чрезвычайных ситуации, связанные с укусами и ослюнениями бешеными безнадзорными собаками и кошками, от которых пострадало 50 человек. В этой связи постановка своевременного диагноза с применением экспресс-методов для обнаружения антигена вируса бешенства является актуальной задачей.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является анализ эпизоотической ситуации по бешенству животных на территории Московской области и разработка иммунохроматографической тест-системы для экспресс-выявления антигена вируса бешенства.
Достижение поставленной цели включало решение следующих задач:
-
Провести анализ социально-экономического положения Московской области и оценить ситуацию по бешенству животных в регионе за период 2008–2012 гг.;
-
Изучить роль собак в проявлении бешенства в Московской области;
-
Разработать технологию получения компонентов для конструирования иммунохроматографической тест-системы;
-
Определить эффективность применения разработанной тест-системы для экспресс-диагностики бешенства.
Научная новизна. Охарактеризованы особенности эпизоотического и эпидемического проявления бешенства с учетом экологической ситуации и современного социально-экономического положения Московской области. Показано, что предпосылками к обострению эпизоотической обстановки по бешенству в Московской области за период 2008–2012 гг. служили активизация природных очагов инфекции, увеличение популяции лисиц и вовлечение в эпизоотии «городского» бешенства безнадзорных собак.
Получены компоненты, предложена схема и условия постановки иммунохроматографического анализа для индикации антигена вируса бешенства, основанные на использовании конъюгата антирабических антител с коллоидным золотом, антинуклеокапсидных и антивидовых антител.
Показана эффективность применения разработанной иммунохроматографической тест-системы при выявлении антигена вируса бешенства в ткани мозга, слюне и культуре клеток. Предлагаемая тест-система, с использованием указанных реагентов, может быть использована в качестве экспресс-метода для диагностики бешенства.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и предложены:
набор реагентов для определения уровня специфических антител в сыворотке крови вакцинированных против бешенства животных методом непрямого ИФА;
тест-система для выявления вируса бешенства методом иммунохроматографии;
Результаты исследований представляют практическую ценность для оптимизации противоэпизоотических мероприятий по борьбе с бешенством.
Основные положения работы, выносимые на защиту:
-
Анализ эпизоотической ситуации по бешенству животных в Московской области за период 2008–2012 гг. с учетом экологического и социально-экономического положения региона.
-
Разработка технологии получения компонентов иммунохроматографической тест-системы и оценка ее эффективности при выявлении антигена вируса бешенства.
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы проводились совместно с к.б.н. Истоминой М.А. Автор выражает благодарность доктору биологических наук, профессору Матвеевой И.Н., главному ветврачу ЗооВетЦентра «Лебеди» к.б.н. Масимову Э.Н., ветврачу питомника «Восторг» Вдовиной И.М., ветврачу клиники «Добрый доктор» Царьковой К.Г.
Апробация результатов работы. Основные положения работы и результаты исследований доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета и Методической комиссии ГНУ ВНИИТБП 2011–2013 гг. в виде ежегодных отчетов по теме задания 08.06.01 «Разработать технологию изготовления и применения новых диагностикумов, средств профилактики и иммунокоррекции наиболее распространенных и экономически значимых инфекционных болезней животных на основе современного оборудования и технологических процессов».
Материалы диссертации представлены на: Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты интегрированной защиты животных от болезней», посвященной 50-летию ГНУ ВНИИВЭА (Тюмень, 2011); II-ой конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине» (Покров, 2012); Международной конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК» (Щелково, 2012); Международном конгрессе «Инновации – основа модернизации АПК» (Санкт-Петербург, 2012); на секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Щелково, 2011, 2013).
На Международной выставке «Биоиндустрия-2012», Санкт-Петербург, 11-13 октября 2012 г. «Набор компонентов для определения уровня специфических антител в сыворотке крови вакцинированных против бешенства животных» награжден серебряной медалью.
Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ («Ветеринарная медицина – 1, «Ветеринария и кормление» – 2).
Объем и структура диссертации. Диссертация объемом 152 стр. машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждений, выводов, практических предложений, списка использованных источников литературы и приложений. Список литературы включает 242 источника, в том числе 126 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 20 рисунками и 14 таблицами.