Введение к работе
Актуальность проблемы. Мурамилпептиды - класс соединений, открытый в результате поиска иммуноактивного компонента клеточных стенок микобактерий, входящих в состав полного адъюванта Фрейнда, широко используемого при иммунизации экспериментальных животных. Минимальным фрагментом клеточной стенки, который может заменить целые бактерии в полном адъюванте Фрейнда, является ГІ-ацетилмурамоил-Ь-аланил-О-изоглутамин (МДП). МДП обладает широким спектром биологических эффектов, среди которых наиболее важны адъювантная активность, стимуляция неспецифической резистентности к бактериальным и вирусным инфекциям, пирогенное и сомногенное действие. Во многих лабораториях мира, в том числе и в России, были синтезированы аналоги МДП с ярко выраженной иммуномодулирующей активностью..
Большая группа N-ацетилглюкозаминсодержащих мурамилпепти-дов была синтезирована в лаборатории химии пептидов ИБХ им. М. М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, и среди них N-ацетилглю-козаминил-(Р1-4)-N-ацетилмурамоил-аланил-О-изоглутамин (ГМДП), обладающий помимо выраженной адъювантной активности и противоопухолевым действием. Иммуномодулирующая и противоинфекционная активность ГМДП открыли возможность его клинического использования. В 1995 г таблетированная лекарственная форма ГМДП-"Ли-копид"- была зарегистрирована в Государственном Реестре лекарственных средств Российской Федерации. Однако, для создания новых эффективных лекарственных препаратов на основе ГМДП требуется знание механизма его'действия, который, несмотря на'значительное число исследований, до настоящего времени остается невыясненным.
Наличие связи между биологической активностью мурамилпеп-тидов и их пространственной конфигурацией, а также насыщаемый характер зависимости доза-ответ говорят в пользу рецепторного механизма действия. Однако полученные к началу данной работы сведения о рецепторах мурамилпептидов и их локализации являлись противоречивыми. Хотя МДП-связывающие молекулы и были обнаружены на поверхности макрофагов, были опубликованы данные о том, что биологическое действие МДП является результатом его проникновения внутрь клетки-мишени (макрофага) и взаимодействия со специфическими внутриклеточными рецепторами. Ничего не
было известно о наличии МП-связывающих молекул на других типах клеток. Поэтому для понимания механизма действия мурамилпепти-дов и. в частности, ГМДП, идентификация и характеристика внутриклеточных ГМДП-связывающих молекул представляли собой актуальную задачу.
Цель работы. Данная работа является составной частью исследований молекулярного и клеточного механизма действия ГМДП, проводимых в лаборатории иммунохимии Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН.
Целями настоящей работы являлись идентификация, выделение и характеристика ГМДП-связывающих белков иммунокомпетентных клеток, прежде всего, макрофагов.
Научная новизна и практическая значимость работы. С использованием флюоресцентно-меченого производного ГМДП было впервые определено число внутриклеточных сайтов связывания ГМДП в иммунокомпетентных клетках различной этиологии. С использованием иод(125)-меченного производного ГМДП охарактеризованы молекулярные массы макрофагальных ГМДП-связывающих белков. Впервые показано, что ГМДП-связывающие белки могут быть элюированы с субклеточных фрагментов макрофагов высокой концентрацией КС1. а в случае клеток WEHI-3 также и хелатирующими агентами. Разработаны схемы очистки ГМДП-связывающих белков с молекулярными массами 32 и 34 кДа из клеток WEHI-3 и перитонеальных макрофагов мыши. Эти белки выделены в гомогенном состоянии, и показана их идентичность гистонам HI.
Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на следующих симпозиумах: 11-ом Съезде Европейской Федерации Иммунологических Обществ (Эспоо, Финляндия, 1991), симпозиумах "Структура и функции регуляторных полипептидов" (Москва, 1992) и "Современные тенденции в исследовании лейкозов" (Ст.-Петербург. 1994), 3-м международном симпозиуме по биоорганической химии (Дагомыс, Россия, 1995).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 10 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 162 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы, состоящего из 300 наименований. Работа содержит 32 рисунка и 6 таблиц.
