Введение к работе
Актуальность проблемы. Важнейшими процессами, обеспечивающими функционирование биологических систем и их взаимодействие с внешним миром, являются специфические процессы узнавания друг друга молекулами и клетками. Лектины, взаимодействуя с гликоконъюгатами, принимают непосредственное участие в разнообразных процессах меж- и внутриклеточного узнавания. Интерес к эндогенным лектинам связан с их способностью активировать систему комплемента, инактивировать бактерии и вирусы, регулировать процесс клеточной адгезии при воспалительных процессах и метастазировании. Наиболее полно охарактеризованы галектины, выделенные из почек, печени и головного мозга животных, а также коллектины гепатоцитов. О лектинах, циркулирующих в крови, данных мало. Структура определена только для маннансвязывающих лектинов, сывороточного амилоидного компонента Р, С-реактивного белка и селектиков, а их биологическая роль в организме человека выяснена лишь частично. Для всех этих лектинов так и не определена клетка-мишень и не выявлен специфический рецептор. Практически ничего не известно о галактозоспецифических лектинах сыворотки крови, хотя мембраносвязанные и внутриклеточные лектины этой специфичности распространены широко. В связи с этим представляет большой интерес поиск, выделение и изучение углеводной специфичности, а в последующем - биологической функции этих лектинов.
Для изучения структуры необходимо работать с лектинами высокой степени чистоты. Выделение лектинов сопряжено с рядом трудностей, так как они, как правило, являются гидрофобными белками, лабильны, быстро теряют свою активность, концентрация их в организме невелика.
Целью данной работы являлась разработка эффективного способа выделения лектинов из различных источников с использованием композиционных сорбентов на основе макропористого стекла с привитой полиакриламидной фазой, поиск и выделение лектинов из сыворотки крови человека, определение углеводной специфичности и первичных структурных характеристик полученных белков.
Научная новизна и практическая значимость работы. В результате проведенных исследований разработана методология выделения и очистки лектинов с помощью композиционных сорбентов на основе макропористого стекла с полиакриламидной привитой фазой. На примере лектина из Bacillus subtilis и лектина из Misgumus fossilis показано, что данная схема может быть применена при выделении лектинов из различных
источников. Выделены два ранее не известных лектина из сыворотки крови человека,
определена их углеводная специфичность, аминокислотный и углеводный составы, N-
концевая аминокислотная последовательность.
Апробация работы и публикации. Результаты исследований докладывались на б
конференциях. По материалам работы опубликовано 4 статьи.
Структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 116 страницах
машинописного текста и состоит из следующих частей: введение, список сокращений, обзор
литературы, обсуждение результатов, экспериментальная часть, выводы и список
цитируемой литературы. Библиография включает 183 источника, работа проиллюстрирована
42 рисунками и 21 таблицей.
