Введение к работе
Актуальность проблемы
Острая печёночная недостаточность (ОПН) развивается как одно из грозных осложнений экзо- и эндотоксикозов различной этиологии (Э.И. Гальперин 1978; Е.А. Лужников 1989; И.И. Шиманко и С.Г. Мус-селиус 1993; F. Badosa 1988). В настоящее время проблема лечения ОПН сохраняет свою сложность и всё ещё не получила разрешения. Смертность при данной патологии остается на чрезвычайно высоком уровне, достигая 60 - 100% (А.С. Блюгер, 1984; С.Д. Подымова, 1993; В.И. Шумаков, Н.А. Оншденко, 1994; A.S. Stiber, L.A. Makowka, 1988).
Низкая эффективность лечения во многом связана с отсутствием патогенетической терапии. Одной из основных задач лечения ОПН является поддержание печени больного в течение "критического" периода (Е.М. Маргулис, 1985; Н.Ю. Корухов, 1989; С.Н. Соринсон, 1987). Такой подход обусловлен значительными резервными возможностями печени для восстановлеігая своих жизненно важных функций.
Неудовлетворительные результаты лечения ОПН при использовании традиционных методов лечения диктуют необходимость поиска новых. По мнению многих исследователей, наиболее перспективным направлением в комплексном лечении печеночной недостаточности является использование клеточной терапии, включающей изолированные ксено-нли аллогепатоциты (В.Г. Бруслик, 1979; В.Ю. Берелавичус, 1975; В.И. Шумаков, 1980; Е.М. Маргулис, 1986; B.Eiseman, 1966; L. Makowka 1980; A.A. Demetriou, 1986).
Вместе с тем, публикации, в которых анализируется опыт клинического использования аллогенных гепатоцитов при ОПН токсического ге-неза, немногочисленны (Б.Д. Комаров и соавт., 1982; Б.Ц. Рималнс, 1983; И.И. Шиманко и соавт., 1993).
С целью восстановления утраченных функций печени в большинстве работ, использовали гепатоциты, храїшвшиеся при гипотермнческих (+4С) температурах. Такой подход не позволяет внедрить методику лечения для широкого клинического использования, т.к. при гипотермнческих температурах клетки хранятся лишь непродолжительное время. (Н.П. Суббота, 1986; В. Fuller, 1987). Поэтому необходим поиск методов и методических приёмов, позволяющих хранить свежевыделенные гепатоциты длительное время в жизнеспособном состоянии.
Наиболее перспективным и успешно разрабатываемым направлением при решении этой проблемы является использование с целью длительной консервации клеточных суспензий субнулевых (-196С) температур (Н.П. Суббота, 1983; A.M. Белоус и соавт., 1987; В.Ю. Тощаков, 1988; В. Rubinsky, 1987; В. Fuller et all 1985;). Благодаря использованию
этого метода стало реальным создание банка клеток и их использование "до востребования".
Создание банка клеток для клинического использования особенно актуально при экстренном поступлении больных с ОПН, а также в случае массовых отравлений гепатотоксичными ядами.
Однако остаются неизученными вопросы функционально-метаболической активности аллогенных гепатоцитов после деконсервации, их влияния на восстановительные процессы в печени реципиента при использовании в клинике у больных с ОПН. Не исследована эффективность применения в клинике гепатоцитов плода человека. У больных с ОПН не проведена оценка эффективности клеточной терапии с использованием изолированных криоконсервированных гепатоцитов при их применении в комплексе с активными методами детоксикации.
Вместе с тем, в литературе имеются данные об эффективности использования в эсперименте не только изолированных клеток, но и гомо-генатов, и цитозольных фракций печени. (La Brecque, 1979; В.Г. Бруслпк, 1989; O'Neill et all, 1982; L. Makowka, 1980; R. Grundmann, 1986). Однако, механизм их действия при ОПН окончательно не выяснен ни в эксперименте, ни в клинике. Неизученными остаются вопросы воздействия биосубстратов печени (гомогенат, суспензия клеток, цитозольные фракции) выделенных из органа человека или животных разного уровня онтогенетического развития.
Решение вышеизложенных проблем позволит расширить новые научно-обоснованные подходы к лечению ОПН и выработать рекомендации по их применению в клинике.
Актуальность работы обусловлена необходимостью поиска новых эффективных методов лечения ОПН, позволяющих снизить летальность в этой тяжёлой группе больных.
Цель работы
Целью настоящего исследования является сравнительное изучение эффективности использования аллогенных гепатоцитов, хранившихся при различных температурных условиях (2 + 4С; -196С) в комплексном лечении больных с ОПН и в модельных экспериментах на животных.
Задачи исследования
-
Изучение структурно-функционального состояния гепатоцитов животных и человека после выделения и различных условий низкотемпературного (-19бС) хранения.
-
Исследование динамики клинических, биохимических и инструментальных показателей у больных с ОПН при использовании в комплексном лечении криоконсервированных гепатоцитов.
-
Проведение сравнительного анализа клинической эффективнос-
ти использования гепатоцитов, хранившихся при гнпотермических (2 + 4"С) и субпулевых (-1%"С) температурах.
4. Исследование в эксперименте лечебного эффекта биосубстратов печени (гомогенат, гепатоциты, цитозольные фракции), выделенных из печени плода человека и взрослых доноров.
Научная новизна
Впервые изучены в сравнительном аспекте морфофункциональные параметры гепатоцитов, изолированных из печени людей, скоропостижно скончавшихся от острой сердечно-сосудистой недостаточности, и печени плода человека, полученных в результате абортов поздних сроков развития по медицинским показаниям. Показано, что изолированные из печени плода гепатоциты характеризуются сохраненными морфофункционалыш-ми свойствами и обладают способностью к выполнению органоспецифи-ческих функций, в частности к захвату ксенобиотика бифенила.
Впервые изучена динамика биохимических показателей у животных с моделью ОПН при использовании натнвных и криоконсервирован-ных биосубстратов печени: гомогенатов, гепатоцитов, цитозольных фракций. Установлено, что наиболее выраженным эффектом обладает препарат, включающий деконсервированную цитозольную фракцию из печени плода.
В работе впервые проведено комплексное сравнительное изучение эффективности использования аллогенных гепатоцитов у больных с ОПН, развившейся вследствие отравления гепатотропными ядами.
Установлено, что эффективность действия клеток, хранившихся длительное время при температуре жидкого азота, не снижается. Показано что улучшение результатов лечения ОПН достигается при включении в комплекс активных методов детоксикации "клеточных диализов" с аллогенными гепатоцитами, хранившимися как при гнпотермических, так и при субнулевых температурах. Впервые в комплексном лечении больных с ОПН были использованы в качестве компонента диализирующей среды гепатоциты печени плода человека.
Практическая значимость
Метод криоконсервирования изолированных аллогенных гепатоцитов по 2-этапной программе в среде с 10% димексидом позволяет сохранять их неограниченное время в криобанке клинического профиля. Стало возможным создать запас клеток и использовать их не только в плановом лечении больных, но и в экстренных случаях, а также при необходимости транспортировать биопрепараты в сосудах Дыоара на большие расстояния.
На основании изучения динамики клшшко-биохимических показателей у больных с ОПН токсического генеза доказана необходимость вве-
пения d комплекс активных методов детокснкации "клеточных диализов" с криоконсершрованнымигепатоцитами.
Показано, что использование криоконсервированных гепатоцнтов позволяет снизить летальность и сократить время пребывания в стационаре больных с данной патологией.
Основные положения, выносимые на защиту
-
Криоконсервированные по 2-этапной программе в среде с 10% димексидом аллогенные гепатоциты сохраняют высокий уровень жизнеспособности и органоспецифические свойства.
-
Применение в комплексе активных методов детокснкации клеточной терапии с использованием гепатоцигов повышает эффективность лечения у больных с ОПН.
-
Использование аллогенных гепатоцитов, хранившихся в условиях низкотемпературного банка, эффективнее гепатоцитов, хранившихся при гипотермических температурах (от 2 до 10 суток).
-
В эксперименте показано, что для лечения ОПН можно использовать не только изолированные гепатоциты, но и биосубстраты печени, а наиболее эффективным является использование деконсервированной цитозолыгой фракции из печени плода.
Практическое внедрение работы
Результаты работы внедрены в клиническую практику отделения по лечению острых эндотоксикозов НИИ СП им. Н.В. Склифосовского, реанимационного отделения областной больницы и токсикологического центра Ульяновска, реанимационного отделения 1-й гор. больницы Омска, реанимационного отделения больницы СМП. Архангельска, токсикологического центра больницы СМП Тулы, реанимационного и токсикологического отделений 33-й больницы Нижнего Новгорода.
Апробация работы
Материалы настоящего исследования доложены на межклинических конференциях и заседаниях проблемно-плановых комиссий НИИ СП. им. Н.В. Склифосовского (1993, 1994,1995 гг.); на 17-й, 21-й, 23-й научных конференциях гастроэнтерологов с участием зарубежных ученых (Москва, 1988, 1992, 1994 гг.); советско-американских конференциях "Экстренная помощь при неотложных состояниях" (Санкт-Петербург 1992, 1993 гг.); 2-й Международной конференции "Успехи современной криобиологии" (Харьков 1992 г.); Международной конференции "Теоретические основы криоконсервирования" (Градец Кралов, ЧСФР, 1992 г.); на заседании круглого стола "Холелитиаз и его осложнения" 1-х международных хирургических дней молодых учёных (Киев, 1993 г.); научно-практической конференции НИИ СП им. Н.В. Склифосовского "Новое в экспериментальной и клинической патологии неотложных состояний
(Москва, 1993); 1-й украинско-американской конференции по неотложной помощи (Одесса, 1993 г.); на 1-м Международном конгрессе "Эндогенные интоксикации" (Санкт-Петербург, 1994); 1-м Международном конгрессе по Биологической медицине (Тель-Авив, Израиль, 1994 г.); на 1-м Международном съезде хирургов (Москва, 1995); на 32-м Международном конгрессе "Крио-95" (Висконзен, США, 1995 г.); на заседании круглого стола "Клеточная терапия" 1-го съезда криобиологов Украины (Харьков, 1995 г.); международном симпозиуме "Сорбщюнная детоксика-ция внутренних сред организма." (Новосибирск, 1995 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 24 печатные работы в отечественной и зарубежной печати.
Объём и структура диссертации
Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста; состоит из введения, обзора литературы, одной главы "Материалы и методы", четырех глав изложения результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа содержит 23 таблицы, 21 рисунок, 1 схему. Библиографический указатель включает 96 источников отечественных и 118 зарубежных авторов.
![Диагностика ранних стадий острого повреждения легких при тяжелой сочетанной травме (клинико-экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4358/191790.png "Диагностика ранних стадий острого повреждения легких при тяжелой сочетанной травме (клинико-экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Лысенко Дмитрий Владимирович")
