Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Морфологические и иммуногистохимические маркеры предрака и рака шейки матки. Современные представления о канцерогенезе и особенностях паренхиматозно-стромальных взаимоотношений при раке шейки матки (обзор литературы) 14
1.1. Морфофункциональные особенности шейки матки у женщин в различные возрастные периоды 15
1.2. Современные представления о канцерогенезе шейки матки 21
1.3. Особенности взаимодействия паренхимы и стромы, роль сосудистого русла в становлении и развитии рака шейки матки 44
1.4. Иммуногистохимические маркеры предрака и рака шейки матки и их прогностическое значение 60
Глава 2. Материалы и методы исследования 70
Глава 3. Особенности сосудистого компонента коммуникационных систем в интактной шейке матки 87
3.1. Морфологические и морфометрические характеристики сосудистого компонента (сосуды микроциркуляторного русла и клеточные популяции вокруг них) коммуникационных систем в тканях интактной шейки матки 87
3.2. Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей интактной шейки матки 93
3.3. Корреляционный анализ клеточных популяций вокруг разных сосудов микроциркуляторного русла в тканях интактной шейки матки 103
Глава 4. Особенности сосудистого компонента коммуникационных систем в тканях шейки матки при папилломавирусных поражениях 109
4.1. Морфологическая и морфометрическая характеристика сосудистого компонента (сосуды микроциркуляторного русла и клеточные популяции вокруг них) коммуникационных систем в тканях шейки матки при папилломавирусных поражениях 109
4.2. Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей шейки матки при папилломавирусных поражениях 121
4.3. Корреляционный анализ клеточных популяций вокруг разных сосудов микроциркуляторного русла в тканях шейки матки при папилломавирусных поражениях 143
Глава 5. Особенности сосудистого компонента коммуникационных систем в тканях рака шейки 158
5.1. Морфологическая и морфометрическая характеристика сосудистого компонента (сосуды микроциркуляторного русла и клеточные популяции вокруг них) коммуникационных систем в тканях рака шейки матки 158
5.2. Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей рака шейки 170
5.3. Корреляционный анализ клеточных популяций вокруг разных сосудов микроциркуляторного русла в тканях рака шейки 200
Глава 6. Морфологические особенности сосудистого компонента коммуникационных систем — одно из основополагающих звеньев морфогенеза и прогрессии опухоли (заключение) 215
Выводы 235
Практические рекомендации 238
Список принятых сокращений 239
Список литературы
- Особенности взаимодействия паренхимы и стромы, роль сосудистого русла в становлении и развитии рака шейки матки
- Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей интактной шейки матки
- Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей шейки матки при папилломавирусных поражениях
- Корреляционный анализ клеточных популяций вокруг разных сосудов микроциркуляторного русла в тканях рака шейки
Особенности взаимодействия паренхимы и стромы, роль сосудистого русла в становлении и развитии рака шейки матки
Патофизиология и морфология репродуктивной системы женщин в различные возрастные периоды находится под строгим контролем эндокринной, нервной и иммунной систем организма. Рядом отечественных и зарубежных ученых проведена четкая параллель между состоянием шейки матки, влагалища и наружных половых органов у пациенток от подросткового возраста до глубокой постменопаузы (Гуркин Ю.А., 2000; Царева Н.В., 1998; Баггиш М., 2008). Шейка матки и верхняя треть влагалища образуются из парамезонефральных протоков путем их слияния (Волкова О.В., Пекарский М.И., 1976). Процесс начинается с 5–6-й недели внутриутробного развития и заканчивается к 18-й неделе. До 33-й недели шейка матки составляет до 3/4 общей длины матки, к 40-й неделе уменьшается до 2/3. Нижний отдел слившихся парамезонефральных ходов достигает урогенитального синуса и формирует влагалище. Его канализация заканчивается к 21–22-й неделе внутриутробного развития. Шейка матки начинает дифференцироваться с 4-летнего возраста, но обычно ее удается определить с 8–9 лет, когда она составляет 2/3 по отношению к длине матки. К 11–12 годам шейка матки четко дифференцируется, намечается образование угла между телом и шейкой матки. Четко этот угол определяется к 17 годам (Гуркин Ю.А., 2000; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006).
Эпителий шейки матки представлен двумя основными видами: многослойным плоским и цилиндрическим. В постнатальном периоде МПЭ шейки матки вполне зрелый, содержит большое количество гликогена, что обусловлено влиянием материнских эстрогенов. Когда уровень гормонов падает, созревание прекращается, и гликоген быстро исчезает (Иванова О.И., Павлович В.Г., 1983; Хмельницкий О.К., 2004; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006).
Атрофия эпителия сохраняется до периода менархе, после которого под влиянием эстрогенов созревание возобновляется и появляется гликоген (Гур-кин Ю.А., 2000; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006).
Цилиндрический эпителий состоит из одного слоя муцинсекретирующего эпителия, расположенного как поверхностно, так и в железистых структурах. Смещение высокого цилиндрического эпителия на участок влагалищной порции шейки матки называют эктопией. У новорожденных девочек шейка матки на 50% покрыта многослойным плоским эпителием и на 50% — цилиндрическим. От наружного зева и до 2/3 эктоцервикса всю видимую поверхность занимает цилиндрический эпителий (врожденная эктопия).
В препубертантном периоде эта эктопия практически не изменяется в размерах и уменьшается лишь за счет роста мышечных волокон (Гуркин Ю.А., 2000; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006). В этом периоде под действием половых гормонов начинается медленная трансформация призматического эпителия в многослойный плоский неороговевающий эпителий. Она происходит не за счет резервных клеток, а за счет смещения многослойного плоского эпителия от периферии по направлению к наружному зеву. К началу половой жизни весь экзоцервикс в норме должен быть покрыт многослойным плоским эпителием. Если девушка-подросток начинает вести активную половую жизнь с 15–16-летнего возраста, то процесс нормальной метаплазии нарушается с формированием зоны трансформации (Никулин Н.К., Кунцевич Л.Д., Борщевская Р.П., 1999; Гуркин Ю.А., 2000; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006).
В шейке матки имеется линия стыка однослойного призматического эпителия с многослойным плоским эпителием, которая называется зоной трансформации (или переходной или стыковой зоной) в виде так называемого мета-пластического плоского эпителия (Деражне А.Б., 1972; Яковлева И.А., 1979), который встречается настолько часто в различные периоды жизни женщины, что его перестают относить к патологически измененной ткани (Черный А.П., 1986; Черный А.П., Яковлева Н.И., 1990). Локализация оригинальной пограничной линии и распространенность эндоцервикальной эктопии детерминированы эмбриологическим прекращением внутренней миграции плоского эпителия.
Определено два пути, по которым происходит замещение цилиндрического эпителия на многослойный плоский эпителий. Первый характерен для нормальной метаплазии у подростков. Он состоит в прямом врастании нативного многослойного эпителия под цилиндрический эпителий (Никулин Н.К., Кунцевич Л.Д., Борщевская Р.П., 1999; Гуркин Ю.А., 2000; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006). Тяжи многослойного плоского эпителия подрастают под цилиндрический и распространяются между последним и его базальной мембраной. Когда клетки МПЭ развиваются и созревают, эндоцервикальные клетки частично смещаются вверх и затем слущиваются (Черный А.П., Яковлева Н.И., 1990; Никулин Н.К., Кунцевич Л.Д., Борщевская Р.П., 1999; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006).
Процесс плоскоклеточной эпидермизации зависит от местных и окружающих факторов внешней среды, основным из которых является низкий рН влагалища (Никулин Н.К., Кунцевич Л.Д., Борщевская Р.П., 1999).
Второй путь проходит с формированием зоны трансформации. Он основан на дифференцировке резервных клеток цилиндрического эпителия и их превра 18 щении в клетки МПЭ. При этом выделяют две субпопуляции резервных клеток СК17–позитивные в нижней части цервикального канала с функцией клеток-предшественников для плоскоклеточного и цилиндрического эпителия и субпопуляции CK17–отрицательных клеток резервных с функцией клеток-предшественников только для цилиндрических клеток (Narayan G, Murty V.V., 2010, Lpez J., Valdez-Morales F.J. et.al., 2013). Первая стадия этого процесса характеризуется появлением мелких клеток на базальной мембране цервикального эпителия. Они в большом количестве синтезируют нуклеиновые кислоты и являются бипотентными, то есть способными превращаться как в цилиндрический, так и в многослойный плоский эпителий. Далее происходит ранняя плоскоклеточная дифференцировка резервных клеток и их превращение в клетки МПЭ. Именно в этот период незрелые плоскоклеточные элементы наиболее подвержены воздействию вирусных и бактериальных агентов, а особенно инфицированию вирусом папилломы человека (Никулин Н.К., Кунцевич Л.Д., Борщевская Р.П., 1999; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006). Именно на границе многослойного плоского и цилиндрического эпителия чаще всего и возникает опухоль (Бакше-ев Н.С., Миляновский А.И., Ильяшенко Н.А., 1977).
Период половой зрелости (репродуктивный) занимает около 30 лет в жизни женщины. Функция репродуктивной системы в этот период направлена на регуляцию овуляторного менструального цикла. В нейронах гипоталамуса происходит пульсирующий выброс релизинг- и лютеотропного гормонов, которые стимулируют выброс двух гонадотропинов, стимулирующих, в свою очередь, гор-монопродуцирующую функцию яичников. В этот период слизистая оболочка влагалища претерпевает циклические изменения в соответствии с фазами менструального цикла (Никулин Н.К., Кунцевич Л.Д., Борщевская Р.П., 1999; Хмельницкий О.К., 2005; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006).
Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей интактной шейки матки
Количественное распределение экспрессии р53, bcl-2, Кi-67 в строме и эпителии представлено в рисунке 18: как видно, наибольшая экспрессия приходится на маркер супрессии апоптоза bcl-2 в эпителии. Следует отметить, что в тканях передней губы количество позитивных клеток больше (98%), чем в задней (76%), в строме позитивных клеток не выявлено.
Вторым по частоте экспрессии в эпителии был Ki-67, который выявлялся с одинаковой частотой в задней (54%) и передней (55%) губе в строме (13% и 6% соответственно). Наименьшая доля приходится на экспрессию p53, который выявлялся в эпителии передней (17%) и задней губы (14%), в клетках стромы данного маркера не выявлено. Однако достоверных различий в обеих зонах по данным маркерам не было выявлено (р 0,05).
Как было отмечено выше, клеточный инфильтрат в нормальной шейке матки был крайне скудный и представлен следующими клеточными популяциями: фиброцитами, фибробластами, макрофагами, лимфоцитами, плазмоцитами, гра-нулоцитарными лейкоцитами. Уточнение иммунодетекции в клетках инфильтрата проводилось с помощью следующих моноклональных антител: NK1, CD4, CD8, CD79, СD138, CD68.
Как видно из рисунка 19, в ткани интактной ШМ в клеточном инфильтрате преобладала экспрессия СD68. На его долю приходилось 80% всех клеточных популяций. Экспрессия умеренная (рисунки 27, 28). Данный маркер определялся в макрофагах и клетках Лангерганса стромы, а также отмечена его экспрессия в клетках, лежащих в просвете сосудов (моноцитах). Экспрессия CD68 выявлялась во всех исследуемых случаях без исключения как в передней, так и в задней губе шейки матки. Как видно из рисунка 19, их количество практически одинаково в обеих зонах (достоверных различий не выявлено — р 0,05).
В изучаемых зонах интактной ШМ иммунодетекция Т-клеточных маркеров (рисунок 19) была вариабельна. NK1-позитивные клетки определялись в 11 случаях из тридцати — как в передней, так и в задней губе ШМ. На их долю приходилось около 5% клеток в клеточном инфильтрате. Как видно из рисунка 19, их количество практически одинаково в обеих зонах (достоверных различий не выявлено — р 0,05). Экспрессия была умеренной, мембранной (рисунок 21). Как правило, NК1-позитивные клетки располагались дискретно, субэпителиально. Следует отметить, что NK1-позитивные лимфоциты располагались рядом с сосудами венулярного и капиллярного типа. Вокруг артериол позитивных клеток выявлено не было.
Экспрессия CD4 была выявлена в 12 случаях из 30. На долю этой популяции Т-клеток пришлось 3% от всего клеточного инфильтрата. Иммунодетекция CD4 была от слабой до умеренной, мембранная (рисунок 33) и определялась как в передней, так и в задней губе. Достоверных различий в количественном соотношении в обеих зонах выявлено не было (р 0,05). CD4-позитивные клетки располагались дискретно, субэпителиально, рядом с сосудами венулярного и капиллярного типа. Вокруг артериол данные клетки не выявлены.
Иммунодетекция CD8 была выявлена в 12 случаях из 30, экспрессия имела мембранный характер, умеренная (рисунок 23). На долю данной популяции Т-лимфоцитов пришлось около 5% всего клеточного инфильтрата. Достоверных различий по экспрессии CD8 в передней и задней губе не выявлено (р 0,05). CD8-лимфоциты лежали одиночно, как субэпителиально, так и в более глубоких отделах стромы, но преимущественно рядом с венулами и капиллярами. Вокруг артериол данные клетки выявлены не были.
При анализе экспрессии маркеров В-лимфоцитов (CD79) положительные клетки обнаруживались в 10 случаях из 30. Экспрессия была умеренная, мембранная (рисунок 24), на долю данной популяции пришлось около 5% всего клеточного инфильтрата. В-лимфоциты располагались дискретно, субэпителиально. Достоверных различий по экспрессии CD79 в передней и задней губе не выявлено (р 0,05). Данная клеточная популяция обнаруживалась и в более глубоких отделах стромы, причем исключительно вокруг венулярного и капиллярного отдела МЦР.
Экспрессия СD138 (маркера плазматических клеток) выявлена в 9 случаях из 30. Иммунодетекция была слабой, цитоплазматической, на долю данных клеток пришлось 2% всего клеточного инфильтрата. Достоверных различий по экспрессии CD138 в передней и задней губе не выявлено (р 0,05). Плазматические клетки располагались преимущественно субэпителиально и дискретно, исключительно вокруг венул и капилляров, рядом с артериолами данные клетки не выявлены. Следует отметить, что выраженная цитоплазматическая экспрессия CD138 также была обнаружена в клетках базального и шиповатого слоя многослойного плоского эпителия (рисунок 25).
Анализ экспрессии эндотелиального маркера (CD34) показал, что положительная экспрессия была обнаружена во всех исследуемых случаях и во всех исследуемых зонах. Была выявлена выраженная мембранная иммунодетекция в эндотелиальных клетках всех типов сосудов (рисунки 16, 17).
Также было проведено определение площади сосудистого русла на срезах, окрашенных данным антителом, с помощью программы «ВидеоТест 4.0» (подробно методика изложена в главе 2). Как видно из рисунка 20, площадь сосудистого русла в передней и задней губе практически одинакова и отличается всего на 0,24% (достоверных различий в экспрессии выявлено не было р 0,05).
Экспрессия NGFR (рецептор фактора роста нервов) в нервных структурах в тканях передней и задней губы интактной ШМ была выявлена во всех исследуемых случаях. Отмечалась выраженная мембранная иммунодетекция в нервных волокнах шейки матки (рисунок 29). При этом большинство нервных волокон располагалось в глубоких отделах стромы (на отдалении от покровного эпителия ШМ). Следует отметить, что данное антитело накапливалось в клетках базального слоя многослойного плоского эпителия (рисунок 31). При этом экспрессия была слабой, в редких случаях — умеренной. В ряде наблюдений отме 103 чалась неравномерность экспрессии NGFR в клетках эпителия на протяженности всего среза, встречались участки с негативной реакцией (рисунок 30). С помощью программы «ВидеоТест 4.0» (подробное описание методики изложено в главе 2) определили количество NGFR позитивных элементов в обеих зонах ШМ (рисунок 20). Как видно из данного рисунка, в ткани передней губы шейки матки показатель экспрессии NGFR значимо выше (р 0,05) — на 10,11% по сравнению с задней губой шейки матки.
Иммуногистохимическая характеристика экспрессии р53, Ki-67, bcl-2, NKl, СD4, СD8, СD79, CD138, CD68, СD34, NGFR в стромальном и/или эпителиальном компоненте тканей шейки матки при папилломавирусных поражениях
Корреляционный анализ проводился в два этапа. Вначале был выполнен парный корреляционный анализ клеточных популяций в ткани передней и задней губы интактной ШМ вокруг различных сосудистых единиц (артериол, ве-нул, капилляров). Так как парные корреляции не дают полного представления о происходящих межклеточных взаимоотношениях и не исключают влияния иных клеточных элементов на выявленные корреляционные связи, то был проведен частный корреляционный анализ. Следует отметить, что система частных корреляций между клеточными популяциями вокруг различных звеньев сосудистого русла была представлена немногочисленными (всего было выявлено 28 корреляционных связей), но разнообразными по силе и характеру взаимосвязями. Все представленные корреляционные взаимосвязи являлись статистически значимыми (коэффициент корреляции /r/ — от 0,3 до 0,7, p 0,05) и носили прямой характер. Частный корреляционный анализ позволил получить матрицы корреляций, которые и явились исходным материалом для проведения факторного анализа. Факторный анализ позволяет провести редукцию имеющейся об 104 ширной информации путем перехода к новым обобщенным переменным, которые независимы между собой. Такими новыми переменными являются главные компоненты.
Исходными данными для компонентного анализа были коэффициенты парных частных корреляций (таблицы 5, 8). Учитывая, что при частном корреляционном анализе вокруг артериол было обнаружено по одной достоверной связи (в передней губе /r/ — 0,7114, p 0,05; в задней губе /r/ — 0,5151, p 0,05) между фибробластами и фиброцитами, а вокруг капилляров присутствовала единственная достоверная связь между фибробластами и фиброцитами (в передней губе /r/ — 0,4271, p 0,05; в задней губе /r/ — 0,5044, p 0,05), в результате факторного анализа после редукции исходных данных достоверных корреляций выявлено не было. Поэтому далее мы приводим только анализ значимых результатов вокруг венулярного звена МЦР в тканях передней и задней губы ШМ (подробно проведение данного анализа изложено в главе 2).
В тканях интактной ШМ в передней и задней губе с помощью факторного анализа (объем выборки: n = 300 единиц наблюдения) было установлено, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей является венулярный отдел МЦР. Так, вокруг венул в ткани передней губы ШМ были выявлены три главных компоненты, накопленная информативность которых составила 87,752% (таблица 6). В задней губе ШМ вокруг венул накопленная информативность трех главных компонент составила 94,213% (таблица 9). Вокруг капиллярного отдела МЦР передней губы ШМ накопленная информативность трех главных компонент составила 86,424% (таблица 12). Для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры использовали факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблицах 7, 10, 13 они выделены значком ).
Третий основной фактор в данной ситуации имеет устойчивые корреляции с паренхимой органа. Как известно, паренхиматозные клетки (в нашей ситуации это многослойный плоский эпителий) начинают активно реагировать на любое повреждение путем пролиферации и созревания резервных клеток. Таким образом, они запускают механизмы регенерации. Учитывая данный факт, нам представляется возможным назвать третий фактор пролиферирующим.
Выделение этих трех основных факторов в интактной шейке матки поможет нам в дальнейшем в проведении корреляционного анализа при различной патологии ШМ, а именно при ВПЧ инфекции и раке шейки матки. Как известно, прогрессия папилломавирусных поражений шейки матки приводит к дисплазии эпителия, а в дальнейшем и плоскоклеточному РШМ. Патогенетические механизмы, определяющие возможные морфогенетические потенции патологического процесса, можно раскрыть путем изучения межклеточных взаимодействий, поддерживающих структуру и функцию любой ткани, включая и опухолевую, так как известно, что изменения эпителиального и стромального компонентов происходят синхронно.
Ткань ШМ вне зоны поражения ВПЧ. При обзорной микроскопии срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, под многослойным плоским неорого-вевающим эпителием на различной глубине располагались сосуды МЦР. Микрососуды в данной зоне были представлены артериолами, капиллярами и вену-лами (рисунки 34–38). На светооптическом уровне МЦР сохраняло типичное гистологическое строение: артериолы имели трехслойное строение, характерное для сосудов артериального типа (рисунки 34, 38). Строение венул и капилляров также соответствовало классическим описаниям данных структур (рисунки 35– 39). При изучении гистологических срезов, окрашенных по ван Гизону и Габу-Дыбану для выявления эластических и соединительнотканных волокон, отмечалась однотипность строения одноименных сосудов. Эластический и коллагено-вый каркас во всех типах сосудов был сохранен, имел непрерывное строение (рисунки 35–37). Таким образом, строение сосудов МЦР вне зоны поражения ВПЧ практически полностью соответствует строению сосудов в интактной шейке матки.
Как видно из данных таблицы, наиболее часто определялись высоко онко-генные типы вируса папилломы человека. Важно отметить, что у 10 пациенток отмечалась ассоциация ВПЧ 16/18 и 6/11, 31/33-го типов.
При обзорной микроскопии наблюдались признаки папилломавирусного поражения многослойного плоского эпителия, такие как койлоцитоз, акантоз, папилломатоз. В ряде случаев наблюдалось формирование кондилом с различными типами роста (выявлялись плоские кондиломы, кондиломы с инвертирующим ростом, а также кондиломы с экзофитным ростом), отмечались явления ЦИН различной степени выраженности (рисунки 40–43), явления лейкоплакии (рисунок 44).
Сосуды МЦР представлены артериолами, венулами и капиллярами. При просмотре гистологических срезов, окрашенных по методу ван Гизона и Габу-Дыбану для выявления эластических и коллагеновых волокон регистрировались структурные изменения в соединительнотканном каркасе сосудов. Базальная мембрана сохранялась, но границы ее не везде четкие. Коллагеновые и эластические волокна окрашены не всегда равномерно, отмечались их разволокнение и фрагментация (рисунки 40, 41).
Корреляционный анализ клеточных популяций вокруг разных сосудов микроциркуляторного русла в тканях рака шейки
Экспрессия NGFR в нервных структурах в тканях контрлатеральной зоны от РШМ была выявлена во всех исследуемых случаях. Отмечалась выраженная иммунодетекция в нервных волокнах в данной зоне ШМ. При этом нервные волокна располагались как в глубоких отделах стромы (рисунки 141, 142), так и субэпителиально. Они также обнаруживались рядом с клеточным воспалительным инфильтратом. В ряде случаев клетки инфильтрата окружали NGFR-позитивные нервные волокна. Следует отметить, что данное антитело накапливалось в клетках базального слоя многослойного плоского эпителия (рисунок 144). При этом экспрессия была умеренной или ярко выраженной. Экспрессия данного маркера в клетках МПЭ зависела от степени ЦИН. Так, при ЦИН 1-й степени отмечалась выраженная, но неравномерная экспрессия NGFR в клетках эпителия на протяженности всего среза. Иногда встречались участки с негативной реакцией. При ЦИН 2-й степени экспрессия NGFR была равномерной и хорошо выраженной в базальном и парабазальном слоях МПЭ. В нервных волокнах сохранялась умеренная экспрессия данного антитела. При ЦИН 3-й степени отмечалась яркая экспрессия данного маркера во всех слоях МПЭ. Однако встречались случаи, когда экспрессия NGFR полностью отсутствовала в МПЭ (рисунок 143), а в нервных волокнах экспрессия была слабо или умеренно выраженная. Экспрессия данного антитела была обнаружена даже в клетках воспалительного инфильтрата (лимфоциты, макрофаги).
Ткань плоскоклеточного РШМ (зона опухоли). При анализе экспрессии маркера апоптоза р53 выявлена умеренная или выраженная ядерная экспрессия (рисунки 145–148) данного моноклонального антитела в опухолевых клетках (экспрессия обнаружена в 28 случаях). В 8 случаях отмечалась слабая детекция р53 в клетках стромы (лимфоцитах и фибробластах).
Маркер супрессора апоптоза bcl-2 экспрессировался в опухолевых клетках (рисунок 150). Окрашивание было умеренным (чаще выраженным), цитоплаз-матическим и отмечалось в 21 случае. При этом в 17 случаях данный маркер определялся как в эпителии, так и в клетках стромы в лимфоцитах (рисунок 149). В 3 случаях наблюдалась слабая экспрессия данного маркера в опухолевых клетках.
Экспрессия маркера пролиферации Ki-67 определялась в опухолевых клетках во всех 30 случаях. При этом экспрессия данного антитела определялась во всех полях зрения. Окрашивание было ядерное, от умеренного до ярко выраженного (рисунки 151, 152). В 18 случаях экспрессия Ki-67 была обнаружена в клетках стромы (лимфоцитах и фибробластах). Пролиферативный индекс по Ki-67 в эпителии колебался от 40 до 65% (в клетках стромы около 20–35%).
Количественное распределение экспрессии р53, bcl-2, Кi-67 в строме и эпителии в данной зоне представлено на рисунке 153. Как видно, наибольшая экспрессия в эпителии приходится на маркер пролиферативной активности Ki-67 (86%). За ним по частоте экспрессии стоит р53, на его долю приходится около 54%. Последнее место занимает маркер супрессии апоптоза bcl-2 — на его долю приходится около 40%. В строме количественное распределение данных маркеров меняется. Обращает на себя внимание, что в строме доля позитивных клеток по Ki-67 снижается до 18%. Вторым по частоте экспрессии в строме остается р53, однако его доля резко снижается и составляет всего около 10%. На последнем месте был супрессор апоптоза bcl-2, однако его доля резко снижается до 6%.
Как видно на рисунке 153, доля р53-позитивных клеток в эпителии в 1,8 раза, а в строме — в 3,5 раза больше в тканях зоны опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. Что касается Ki-67, то количество этих позитивных клеток в эпителии в 1,2 раза, а в строме в 1,8 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. При анализе экспрессии bcl-2-позитивных клеток выявлено, что в эпителии этих клеток в 1,92 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ, а вот в строме картина противоположная: в зоне опухоли количество bcl-2-позитивных клеток — в 1,3 раза меньше, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. При этом имелись достоверные различия (p 0,05) в количественном распределении вышеуказанных маркеров между КЛЗ от РШМ и зоной опухоли.
Клеточный инфильтрат в данной зоне был представлен фиброцитами, фибробластами, макрофагами, лимфоцитами, плазмоцитами и полиморфноядер-ными лейкоцитами. Уточнение принадлежности клеток в инфильтрате к различным клеточным популяциям проводилось с помощью следующего набора антител: NK1, CD4, CD8, CD79, СD138, CD68.
Как видно из рисунка 158, в данной зоне в клеточном инфильтрате преобладала экспрессия СD68. На его долю приходилось 92% всех клеточных популяций. Экспрессия от умеренной до ярко выраженной (рисунки 154–156). Данный маркер определялся в макрофагах и клетках Лангерганса стромы. Была отмечена экспрессия в клетках, лежащих в просвете сосудов (моноцитах). Очень часто СD68-позитивные клетки располагались периваскулярно, преимущественно вокруг сосудов венулярного и капиллярного типов, иногда вокруг мелких арте-риол. Экспрессия CD68 выявлялась во всех исследуемых случаях без исключения и во всех полях зрения. При сравнении этих двух зон (контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли) видно, что количество CD68-позитивных клеток в 2,3 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ, при этом имелись значимые различия (p 0,05) по данным показателям. ПР53 Ki-67 bcl-2
NK1-позитивные клетки в данной зоне определялись во всех исследованных случаях. Как видно из рисунка 158, на их долю приходилось около 25% клеток в клеточном инфильтрате. Экспрессия была умеренной, мембранной (рисунки 158, 161). Как правило, NК1-позитивные клетки располагались дискретно или мелкими скоплениями, субэпителиально. Следует отметить, что NK1-позитивные лимфоциты располагались рядом с сосудами венулярного и капиллярного типов. Вокруг артериол позитивные клетки выявлялись крайне редко.
Следует отметить, что при сравнении этих двух зон (контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли) видно, что количество NК1-позитивных клеток в 7,5 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ, при этом имелись значимые различия (p 0,05) по данным показателям.
