Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Актуальность парентерального питания в хирургической клинике (Обзор литературы) 11
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования 28
ГЛАВА III. Научное обоснование получения ксенолимфы бычков и ее компонентов для парентерального питания 37
III.1. Возможность получения ксенолимфы и ее компонентов для приготовления липидных препаратов из цельной ксенолимфы бычков для парентерального питания 39
ІІІ.2. Оценка пригодности ксенолипида для парентерального питания 47
Заключение 58
Выводы 72
Практические рекомендации. 73
Список литературы. 74
- Актуальность парентерального питания в хирургической клинике (Обзор литературы)
- Возможность получения ксенолимфы и ее компонентов для приготовления липидных препаратов из цельной ксенолимфы бычков для парентерального питания
- Оценка пригодности ксенолипида для парентерального питания
Введение к работе
Актуальность темы. Острая хирургическая патология сопровождается нарушениями гомеокинеза у 30-50% больных. Нарушения гомеокинеза невозможно адекватно скомпенсировать даже с помощью современных трансфузионных препаратов. Появляется дефицит лимфоцитов-эффекторов иммунитета на фоне недостаточного поступления жировых композиций и дисбаланса белковых фракций (Лопухин Ю.М., 1971, 1981; Савельев B.C., 1975; Гостищев В.К. и соавт., 1992; Воробьев А.И. и соавт., 2000; Ермолов А.С. и Абакумов М.М., 2000; Федоров В.Д. и соавт., 1990; Шуркалин Б.К., 2000). Коррекция в послеоперационном периоде недостаточности иммунитета, повышение неспецифической реактивности и усиление специфического иммунитета в основном проводится с помощью иммуномодуляторов и других лекарственных препаратов (Шабалин В.Н. и соавт., 1979; Лопухин Ю.М., 1981; Петров Р.В. и соавт., 1981; Пол У. и соавт., 1987; Сапин М.Р., 1999; Колобов СВ., Ярема И.В., 2000; Paul Е., 1984; Dale М.М., 1989). Потребность в жирах при острой хирургической патологии бывает настолько велика, что отсутствие или их минимальное поступление в организм вызывает серьезные, необратимые явления, вплоть до развития жировой дистрофии. Организм, обладая резервами жира, не способен длительно обеспечить себя за счет имеющихся жировых ресурсов, которые быстро иссякают, а их синтез неполноценен. Для восполнения потребностей в жирах у больных с хирургической патологией используются липидные препараты, которые созданы искусственно и вводятся в организм, минуя кишечную стенку, то есть, лишены индивидуальности в строении липидов характерных для человека (Андрианова И.Г. и Богомолова Г.Г., 1963; Корзан В.А. и Синдоре В., 1965; Качоровский Б.В., 1972; Гланц P.M., 1972,1985; Суджан А.В., 1973;
Хартиг В., 1982; Гальперин Ю.М. и Лазарев П.И., 1985, 1986; Исаков Ю.Ф., 1985; Валеман Л.С., 1987; Вретлинд А. и Суджан А., 1990; Бурштейн С, 1995; Федоров В.Д. и соавт. 1990; Звенг Т. и Штродель В., 1996; Костюченко А.Л. и соавт., 1996; Ермолов А.С. и Абакумов М.М., 2000; Малышев В.Д., 2000; Hartig W.,1979; Owen О.Е., 1988; Peterson V.M. et al., 1988; Gibson R.S., 1990; Keller U., 1993;). Они имеют побочные реакции (сонливость, повышение температуры, тошноту) и осложнения (анафилактические реакции, повреждение печени и других органов). Нарушения белкового обмена при гнойной хирургической патологии находится в прямой зависимости от тяжести клинического течения. Проведенные исследования В.К.Гостищевым и соавт. (1992), Б.К.Шуркалиным (2000) у хирургических больных показали прямую зависимость изменений общего белка и белковых фракций от тяжести интоксикации. Наблюдается снижение уровня альбуминов в циркулирующей крови за счет нарушения синтеза в печени (печеночная недостаточность), обусловленной интоксикацией и расходами белка на энергетические нужды (не полное парентеральное питание, отсутствие поступление жировых композиций или поступающие жировые композиции содержат длинноцепочечные жирные кислоты и вызывают дисфункцию макрофагов).
Научные исследования, проводимые на кафедре госпитальной хирургии Московского медицинского стоматологического института им. Н.А.Семашко (ныне Московский государственный медико-стоматологический университет) в области экспериментальной и клинической лимфологии позволили подойти к решению проблемы переливания больному компонентов ксенолимфы грудного протока крупного рогатого скота (бычков).
Впервые переливание центральной лимфы от человека к человеку (донорской лимфы) с лечебной целью успешно провели И.ВЛрема и
Б.М.Уртаев (03.11.1977 г.) на клинической базе кафедры госпитальной хирургии лечебного факультета Московского медицинского стоматологического института им. Н.А.Семашко в ГКБ № 36 (при научном руководстве доктора медицинских наук, профессора Р.Т.Панченкова). Лимфа от человека вначале была получена как компонент комплексной терапии наружного отведения лимфы при интоксикации, затем наружный дренаж грудного лимфатического протока у больного пережимался с целью закрытия наружной лимфатикофистулы, а полученная лимфа возвращалась этому же больному внутривенно. Первым реципиентом донорской лимфы стал больной с травматологическим перитонитом, осложнившимся вторичным иммунодефицитом (донорская лимфа подошла по гистосовместимости). Оба* больные в последующем выздоровели, динамически наблюдались (Панченков Р.Т. и соавт., 1979, 1985). Сегодня в практическом здравоохранении получение донорской лимфы по-прежнему невозможно (Ярема И.В. и Уртаев Б.М., 1993-1995). Однако, использование жирной лимфы крупного рогатого скота ((бычков) (отпадает необходимость в дорогостоящих гомогенезаторах и другой технике для эмульгирования растительных жиров)) для получения из нее жировых композиций для парентерального питания возможно, что актуально для больного хирургического профиля. В научной литературе нет сведений о заготовки центральной ксенолимфы бычков и получении липидных препаратов из цельной ксенолимфы бычков для парентерального питания. Отсюда вытекают цель и задачи исследования.
Цель исследования
Разработать методы забора центральной (цельной) ксенолимфы от
крупного рогатого скота (бычков) и технологии получения препаратов из центральной (цельной) ксенолимфы бычков.
Поставленная цель определила следующие задачи исследования:
Обосновать возможность получения ксенолимфы от крупного рогатого скота (бычков) с помощью лимфатикостомы грудного лимфатического протока.
Разработать методы забора, консервирования центральной (цельной) ксенолимфы бычков и получения трансфузионных препаратов в качестве парентерального питания.
Изучить особенности физико-химического состава и клеточного строения центральной ксенолимфы и полученных препаратов из ксенолимфы бычков.
Научная новизна работы
Изучены особенности физических свойств химического состава и клеточного строения центральной ксенолимфы крупного рогатого скота (бычков) натощак и после приема белковой и жирной пищи.
Определены способы забора ксенолимфы крупного рогатого скота (бычков) и технологии консервирования цельной ксенолимфы крупного рогатого скота (бычков).
Разработаны методы получения препаратов из ксенолимфы грудного лимфатического протока крупного рогатого скота (бычков).
Практическая значимость работы
Впервые предложены для практического здравоохранения новые средства инфузионно-трансфузионной терапии, полученные из ксенолимфы грудного лимфатического протока бычков (возраст 8-12 месяцев):
плазма ксенолимфы бычков;
ксеносыворотка лимфы бычков;
жирная ксенолимфа;
ксенолипид (жирная сывортка ксенолимфы бычков, лишенная белков) не обладающая видовой специфичностью.
Основные положения, выносимые на защиту
Острая хирургическая патология у 30-50% больных сопровождается нарушениями белкового, жирового и электролитного баланса. Восполнить этот дефицит возможно с помощью компонентов для парентерального питания, полученных из ксенолимфы бычков.
Ксенолимфу грудного лимфатического протока бычков можно использовать в качестве сырья для получения трансфузионных сред, содержащие жировые компоненты (ксенолипид).
Получить ксенолимфу бычков можно в значительных объемах и создать из ксенолимфы для парентерального питания жировой препарат ксенолипид в необходимых количествах.
Апробация диссертации
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:
V конференции хирургов-гепатологов (Томск, 1997);
Межвузовская научно-практическая конференция «Актуальные вопросы хирургии» Мытищи, 1999;
Научно-практической конференции «Вопросы частной хирурги и маммологии» (Москва, МГМСУ, май, 2002); Научно-практической конференции «Современные технологии в клинической больнице», посвященной 30-летию клинической больницы Центросоюза РФ (Москва, МГМСУ, декабрь, 2002);
Совместной научно-практической конференции кафедр: госпитальной хирургии, оперативной хирургии и топографической
анатомии, патологической анатомии Московского государственного медико-стоматологического университета; патологической анатомии, гастроэнтерологии, лаборатории оперативной хирургии Российской медицинской академии последипломного образования; ГКБ № 33 им. проф. А.А.Остроумова, № 40 и 52, клинической больницы Центросоюза Российской Федерации (г.Москва) 24 апреля 2003 г.;
Научно-практической конференции «Вопросы частной и торакальной хирурги» (Москва, МГМСУ, ноябрь, 2004).
Реализация результатов исследования
Способы получения центральной лимфы грудного протока у крупного рогатого скота (бычков) внедрены на: кафедре оперативной хирургии и топографической анатомии, кафедре госпитальной хирургии лечебного факультета Государственного общеобразовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет» Министерства здравоохранения и социальной защиты Российской Федерации (ГОУ ВПО МГМСУ), научно-исследовательском медицинском стоматологическом институте (НИМСИ) при ГОУ ВПО МГМСУ ив программу обучения студентов на кафедре оперативной хирургии и топографической анатомии, кафедре госпитальной хирургии лечебного факультета ГОУ ВПО МГМСУ. Основные положения диссертации используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах.
Публикации
По результатам исследований опубликовано 6 научных работ, в которых изложены основные положения диссертации.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 101 странице текста компьютерной верстки (шрифт Times New Roman размером 14 через 1,5 интервала) и состоит из введения, 3 глав, выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает 167 источников отечественных и 100 зарубежных источников. Диссертация иллюстрирована 5 рисунками и 3 таблицами. Компьютерное обеспечение: INTEL PENTIUM III 600 MHz, монитор View Sonic G810-21" и ОС MS Windows ГОе.
Работа выполнена на кафедре оперативной хирургии и
топографической анатомии Государственного общеобразовательного
учреждения высшего профессионального образования
«Московский государственный медико-стоматологический университет» (ГОУ ВПО МГМСУ) Министерства здравоохранения и социальной защиты Российской Федерации (заведующий кафедрой, доктор медицинских наук, профессор Колобов Сергей Владимирович).
Экспериментальные исследования основаны на наружном дренировании грудного лимфатического протока у годовалых бычков и заборе цельной ксенолимфы (фермы крупного рогатого скота "Восток" и "Заветы Ильича" Щелковского района Московской области), полученные препараты из ксенолимфы (и компоненты) опробованы на экспериментальных животных (самцах (21 беспородной собаке и 31 морской свинке) в НИМСИ при МГМСУ (ректор - Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Ющук Николай Дмитриевич) и лаборатории оперативной хирургии (ГОУ ВПО РМАПО) Российской медицинской академии последипломного образования (зав. - Академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор Выренков Юрий Евгеньевич).
В основу работы положены результаты работы с лабораторными животными: получение ксенолимфы от бычков, далее лабораторные исследования на самцах беспородных собак, морских свинках и крысах
линии Wistar. Все работы с лабораторными животными проводились с учетом Приказа Минздрава СССР от 12.08.1977 "О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм с использованием экспериментальных животных", а также с учетом Этической комиссии по гуманному обращению с животными. Все оперативные вмешательства и исследования проводились под местным обезболиванием; животное выводилось из эксперимента передозировкой тиопентала натрия (Лопухин Ю.М., 1971; Шалимов С.А. и соавт., 1989).
Лабораторные исследования включали общепринятые исследования и специальные исследования для исключения какой-либо патологии у бычков в возрасте 8-12 мес (к этому времени у животного полностью сформирован иммунитет и выявлена возможная патология). Лабораторно изучены физико-химический состав и структура клеточных элементов лимфы бычков.
Статистическая обработка материала
Выполнялась с помощью методов вариационной статистики, вычисляли: среднюю величину признака, среднее квадратичное отклонение, ошибку средней арифметической величины. Обработку результатов производили по Стьюденту (Рунион Р., 1982; Лисицын Ю.П., 1998; Миняев В.А. и соавт., 1998; Решетников А.В., 2000; Медик В.А. и соавт., 2001) и др. Различие считалось достоверным при р<0,05. Статистический анализ результатов также проведен с использованием пакета статистических программ "Statgraphix" и ее версии "Stadia".
Актуальность парентерального питания в хирургической клинике (Обзор литературы)
Согласно мировой статистике частота госпитального истощения составляет 30-50%, что обусловлено физиологическими, анатомическими нарушениями поступления пищи, ее расщепления и ассимиляции, а также выраженными метаболическими нарушениями, сопровождающее хирургического больного. Недостаточность питания наиболее характерно для больных хирургического стационара, а парентеральное питание позволяет достоверно снизить частоту послеоперационных осложнений, длительность пребывания в стационаре и летальность. В настоящее время необходимость нутритивной поддержки не вызывает сомнения, обсуждается только способ доставки питательных компонентов (Суджан А.В., 1973; Бахман А.Л., 2001; Бурштейн С, 1995; Валеман Л.С., 1987; Вретлид А. и Суджан А., 1990; Гальперин Ю.М. и Лазарев П.И., 1986; Гланц P.M., 1985; Ермолов А.С. и Абакумов М.М., 2000; Жизневский Я.А., 1994; Кемпбелл И., 1996; Козинец Г.И. и соавт., 1996; Костюченко А.Л. и соавт., 1996; Курыгин А.А. и соавт., 2000; Малышев В.Д., 1998, 2000; Покровский А.А., 1984; Попова Т.С. и соавт., 1991, 1996; Рябов Г.А. и соавт., 1991; ХартигВ., 1982; Хорошилов И.Е., 2000; Федоров В.Д., 1990; Шлыгин Г.К., 1997; Adolph М., 2001; Hartig W., 1979; Campillo В. etal., 1992; Keller U., 1993; Bach A. et al., 1996). Опыт использования искусственного лечебного питания в РНЦХ РАМН показал, что 20-40% больных хирургического профиля нуждаются именно в парентеральном питании. Основная цель, которого это обеспечение больного необходимым количеством калорий и сохранение его собственного белка.
Основные принципы парентерального питания: 1) своевременность начала проведения (кахексию легче предупредить, чем лечить); 2) оптимальность сроков проведения парентерального питания (до момента стабилизации основных параметров - метабилических, иммунологических, антропометрических и др.); 3) адекватность, то есть полноценное (белки-жиры-углеводы, витамины и минеральные вещества. Лечение хирургических больных направлено на поддержание центральной и периферической гемодинамики до операции, во время операции и ближайшем послеоперационном периоде (Анненков Я., 1981; Бобринская И.Г. и соавт., 1998; Воробьев А.И. и соавт., 2000; Ермолов А.С. и Абакумов М.М., 2000; Hartig W., 1979; Keller U., 1993). Медикаментозное лечение хирургического больного в периоперационном периоде состоит из введения препаратов, способствующих стабилизации энергетических процессов в миокарде и улучшающих его сократительную функцию, введение коллоидных и плазмозамещающих растворов, дезинтоксикационная и деэскалационная терапия под контролем клинических и функциональных параметров. Парентеральное питание является одним из видов инфузионной терапии и подразделяется на частичное парентеральное питание и полное (полноценное) парентеральное питание. При полном парентеральном питании источником энергии является не только глюкоза, но и жировые эмульсии (Рябов Г.А. и соавт., 1978; Гланц P.M., 1985; Попова Т.С. и соавт., 1991, 1996; Abe М. et al., 1997; Bandt J.P., 1994; Barton R., 1994; Calder P.C., 2001; Bowling Т.Е. et al., 2003; Braga M., 1994; Cataldi-Betcher E.L. et al., 1983; Rolandelli R.H. et al, 1997; Fukuchi S., 1998; Gianotti L. et al., 1997; Grimble G.K., 1994; Hasse J. et al., 1995; Ferezou J. и Bach A., 1999; Ferezou J. et al., 1994; Ferrannini E., 1988; Cameheim C. et al., 1995; Hyltander A., 1992; Klahr S., 1992).
Гиперметаболизм — генерализованная реакция, при которой происходит мобилизация энергии и субстратов для поддержания воспаления, иммунных реакций и регенерации тканей. Летальность при синдроме гиперметаболизма колеблется от 25 до 40%.
Основными причинами низкой эффективности предоперационной подготовки у больных являются несоответствие интенсивности и объема предоперационного лечения с интенсивностью роста патофизиологических изменений в организме хирургического больного. Среднесуточные затраты организма при гнойно-хирургической инфекции в фазу напряжения в катаболическую фазу составляет около 4000 ккал. В раннем послеоперационном периоде основной задачей терапии является коррекция нарушенных функций сердечно-сосудистой и дыхательной систем, что достигается в основном инфузионной терапией. Факторами, препятствующими стабилизации функциональной деятельности жизненно важных систем организма, являются эндогенная интоксикация, стрессорное влияние операции и анестезиологического пособия, выполненных на фоне течения основного заболевания и перитонита, снижение адаптивных возможностей органов и тканей на фоне деструктивных и дегенеративных изменений в них, секвестрация жидких сред в интестициальном пространстве. Эти задачи решаются с помощью инфузий эритроцитарной массы, плазмы крови, альбумина, протеина, коллоидных кровезаменителей, кристаллоидных растворов, осмотически ; активных средств, ингибиторов протелоиза, дезагрегантов, глюкозы, сердечных гликозидов, витаминов, коферментов, вазодилатирующих, веноспазмирующих веществ, глюкокортикоидных гормонов, і антибиотиков, а также с помощью полного парентерального питания (Гланц P.M., 1985; Исаков Ю.Ф. и соавт., 1985; Вретлид А. и Суджан А., 1990; Гальперин Ю.М. и Лазарев П.И., 1986; Гостищев В.К. и соавт., 1992; Ерюхин И.А. и Шашков Б.В., 1995; Костюченко А.Л. и соавт., 1996; Бобринская И.Г. и соавт., 1998; Воробьев А.И. и соавт., 2000; Ермолов А.С. и Абакумов М.М., 2000; Курыгин А.А. и соавт., 2000; Покровский А.А., 1984; Попова Т.С. и соавт., 1991, 1996; Рябов Г.А. и соавт., 1991; ХартигВ., 1982; Хорошилов И.Е., 2000; Федоров В.Д., 1990; Шлыгин ПК.,! 1997; Campillo В. et al., 1992; Keller U., 1993; Bach A., et. al.,.. 1996;} Rodriguez D., 1996 Adolph M., 2001; Abe M. et al., 1997; Hartig W., 1979; Pingleton S.K., 2001; Mattox T.W., et al., 1991; McWhirter J.P. и Pennington C.R., 1994; Shenkin A., 1988; Blok W.L. et al., 1996; Berger R. и Adams L., 1989; Bowling Т.Е. et al., 2003; Braga M., 1994; Cataldi-Betcher E.L. et al., 1983; Rolandelli R.H. et al., 1997; Fukuchi S., 1998; Gianotti L. et al., 1997; Grimble G.K., 1994; Hasse J. et al., 1995; Marulendra S. и Kirby D.F., 1995; Payne-James, J., 1988; Peck M.D., 1994; Peters R.A. и Westaby D., 1994; Peterson V.M. et al., 1988; Rombeau R.H. и Roladelli I.I., 1997). По мере удлинения продолжительности послеоперационного периода усложняются задачи лечения больных. Важнейшим аспектом лечебных мероприятий становится нейтрализация иммуносупрессивного воздействия на больного операционной травмы, наркоза, интоксикации, интенсивного катаболизма. Самостоятельное значение имеет проблема восстановления равновесия метаболических процессов в организме с последующим снижением! интенсивности катаболизма и максимальным усилением! анаболизирующего эффекта от парентерально и энтерально вводимых: питательных веществ (Рябов Г.А. и соавт., 1978, 1979; Лукомский Г.И. и? Алексеева М.Е., 1983; Малышев В.Д., 1998, 2000; Марусанов В.Е. и соавт., 1995; Словентатор В.Ю. и соавт., 1990; Шуркалин Б.К., 2000).
Возможность получения ксенолимфы и ее компонентов для приготовления липидных препаратов из цельной ксенолимфы бычков для парентерального питания
Успешное и; надежное дренирование грудного лимфатического протока у бычков стало возможным после изучения топографической анатомии грудного лимфатического протока у бычков в возрасте 8-12 мес, что позволило стабильно получать центральную ксенолимфу от бычков в необходимых объемах от одного животного. Исследования были проведены на 46 бычках в возрасте 8-12 мес (в этом возрасте у животного сформировалась иммунная система и выявлены основные заболевания).
Накануне операции бычкам проводили осмотр, ветеринарный контроль, брались анализы на бруцеллез, лейкоз, туберкулез, губчатый энцефалит. Визуально и с помощью лабораторных методов регистрировалась динамика общего состояния животного. Перед операцией животное получало обрат или молоко, комбикорм и/или рыбий жир. Бычки фиксировались на операционном столе в положении на правом боку с вытянутыми и фиксированными конечностями (левая передняя конечность отводилась кпереди и назад). Лимфатикостома бычкам создавалась под местной анестезией 0,25% раствором новокаина по Вишневскому.
Грудной лимфатический проток у бычков начинался на уровне 2-го поясничного позвонка после слияния правого и левого главных поясничных стволов. Начало протока у 7 животных имело небольшое расширение. На уровне заднего конца 1-го поясничного позвонка он выходит из-под ножек диафрагмы и дальше до 5-го грудного позвонка следует дорсально и вправо от аорты. Начиная с 5-го грудного позвонка грудной проток, располагаясь ниже m.longuscolli на левой стороне пищевода. На уровне заднего позвоночного конца 1-го ребра грудной лимфатический проток пересекает медиальную сторону левого общего реберно-шейного ствола в месте ответвления от него передней межреберной артерии, далее проток направляется вниз и вперед, выходя на 2-2,5 см за пределы 1-го ребра. В этом месте проток образует дугу, обращенную выпуклостью аборально, после чего он направляется к общей левой яремной вене, в которую впадает на расстоянии 1-1,5 см от переднего края первого ребра. Перед впадением проток, как правило, имеет ампуловидное или звездчатое расширение. В грудной части проток часто на протяжении 2-3 см раздваивается, образуя между своими ветвями «островок», заполненный рыхлой соединительной тканью. У 5-й бычков мы наблюдали правостороннее расположение грудного лимфатического протока. На уровне 5-го грудного позвонка проток раздваивается: одна его ветвь 2-3 мм диаметром, следует вперед сначала с левой стороны m.longuscolli, затем посередине левой стороны пищевода. На границе верхней и средней третей 1-го ребра эта ветвь выходит из грудной полости дугой выпуклостью к голове бычка, опускается к левой яремной вене и впадает в нее на расстоянии 2,5 см от переднего края 1-го ребра. Основной проток диаметром 5-7 мм углубляется и следует вперед дорсально и вправо от пищевода. Со 2-го грудного позвонка он косо пересекает правую сторону трахеи, спускается вниз и на границе верхней и средней третей 1-го ребра выходит из грудной полости. Спереди от переднего края 1-го ребра проток образует дугу, выпуклостью обращенную в сторону головы, и направляется к правой яремной вене, в которую он впадает на расстоянии 0,5-1 см спереди от 1-го ребра.
У бычков с 5-го грудного позвонка возможны два варианта положения грудного лимфатического протока. Наиболее частое левое положение с впадением его в левую общую яремную вену, менее частое -правое положение и впадение его в правую общую яремную вену.
Под местной анестезией 0,25% раствором новокаина продольно рассекается кожа и подкожная клетчатка по нижнему краю длинной мышцы шеи. Выделяется внутренняя яремная вена по направлению к ребру, берется на резиновую держалку и отводится в латеральную сторону, и мы проникаем в жировую клетчатку подлестничного пространства, в толще которой находится грудной проток, направляющийся из средостения в область шеи. На шее на расстоянии 2,5 см от переднего края первого ребра грудной лимфатический проток образует дугу выпуклую к голове и впадает в яремную вену.
У 46 оперированных бычков грудной лимфатический проток удалось дренировать: слева на шее - у 39 бычков, справа - у 5 (грудной лимфатический проток не был обнаружен слева), у 4 бычков терминальный отдел грудного лимфатического протока не был обнаружен ни справа, ни слева (технические особенности освоения методики).
В качестве дренажных трубок используют полихлорвиниловые или полиэтиленовые мягкие трубки диаметром 1,5-3 мм. Применение мягких и достаточно тонкостенных трубок оправдано тем, что при их фиксации лигатурой по окружности катетера создается желоб, который предотвращает выпадение дренажа из протока. Иногда для погружения катетера на достаточную глубину и надежной фиксации препятствовал клапан грудного лимфатического протока. Для предупреждения этого грудной лимфатический проток у бычков вскрывался непосредственно за клапаном, который хорошо заметен по белесоватому уплотнению стенки протока, или производить вскрытие в непосредственной близости от клапана и затем провести катетер, путем вращательных, несколько насильственных, но осторожных; движений за клапана. Повреждения стенки протока при этом приеме мы ни разу не наблюдали. В случае, если имеется дуга рассыпного типа и конечный отдел грудного лимфатического протока образует несколько ветвей, слившихся перед устьем в общий ствол, или рукавов, впадающих самостоятельно, техника дренирования существенно не отличается от изложенной выше. При этом проток вскрывают в области восходящего колена дуги, так как здесь проток представлен одним стволом, а разделение его на рукава, по данным наших анатомических исследований, происходит на расстоянии 2 см от устья (дельтовидный вариант). В тех случаях, когда обнаруживается несколько дуг грудного лимфатического протока, дренаж осуществляют: в стволе наибольшего диаметра, а остальные стволы не перевязывают. После закрепления катетера в протоке, нужно создать удобное положение с целью свободного лимфотока, чтобы ось трубки соответствовала ходу протока в вышележащем его отделе, являлась продолжением его оси, то есть без перегибов.
Оценка пригодности ксенолипида для парентерального питания
Ретикулоцитарный тест (РТ). Для теста использовали активированные ретикулоциты крыс линии Wistar (самцы) и изучали в дальнейшем скорость дифференцировки ретикулоцитов в ксенолимфе. Если в ксенолимфе содержались биологически активные вещества, ЦИК, аутоантитела и эндотоксины наступал блок дифференцировки активированных ретикулоцитов периферической крови в культуре клеток. При анализе токсичности ксенолимфы учитывали в мазке содержание только молодых (I и II типы по Гайльмейеру) на 100 посчитанных ретикулоцитов. Молодые типы ретикулоцитов в норме быстро дифференцируются в более зрелые сетчатые ретикулоциты, дополнительным критерием служил размер клетки, который был большим у молодого ретикулоцита. В обычных (контрольных) условиях молодые ретикулоциты успевают за 6 часов дифференцироваться в зрелые, а в опыте происходит задержка их дифференцировки. Результат оценивали по количеству задержанных в дифференцировке молодых ретикулоцитов по сравнению с контролем; норма (доноры отделения переливания крови ГКБ №40): РТ-3,6±0,4% (при других результатах ксенолимфа выбраковывались).
Степень пригодности (токсичности) ксенолимфы оценивалась еще семенным индексом (СИТ), метод основан на определении степени подвижности бычьих сперматозоидов в биологических жидкостях. Подсчет количества движений половых клеток (бычьих сперматозоидов) ведется автоматически лазерным зондом с выводом полученных результатов на компьютер. Принцип метода состоит в том, что обладающие подвижностью сперматозоиды теряют ее в результате воздействия на них цитотоксических комплексов, биологически активных веществ, аутоантител и эндотоксинов, находящихся в ксенолимфе бычков. Отношение среднего времени жизни семенных клеток в ксенолимфе и полученных препаратов в исследуемой среде к среднему времени жизни сперматозоидов в контрольном растворе называется семенным индексом токсичности. СИТ выше 75% соответствовал нормальным показателям ксенолимфы все, что было ниже 75%, требовало выбраковывания. После получения результатов посевов на бактериальную обсеменность, ретикулоцитарного теста, семенного индекса токсичности ксенолифы бычков, то есть пригодности ее для переработки и получения ксенолипидов для парентерального питания, вставал вопрос об устранении видовой специфичности. Введение жирной ксенолимфы бычков в кровяное русло других животных и тем более человека невозможно без соответствующей обработки, так как гетерогенная сыворотка лимфы обладает анафилактическими свойствами, немедленно вызывающими побочные реакции и осложнения, которые могут привести животное к смерти. Поэтому перед нами стояла задача найти способ обработки сыворотки лимфы крупного рогатого скота, устраняющий развитие возможных осложнений. Кроме того, обработка не должна была существенно изменять биохимический состав и физико-химические свойства сыворотки лимфы, а также разрушать жиры.
Экспериментальное получение липидного препарата из жирной (центральной) ксенолимфы бычков для парентерального питания.
Накануне операции - дренирования грудного лимфатического протока, бычкам проводился очередной текущий осмотр и повторялись анализы на бруцеллез, лейкоз, туберкулез, губчатый энцефалит.
Экспериментальное животное фиксировались на операционном столе в положении на правом боку с вытянутыми и фиксированными конечностями. Лимфатикостома бычкам создавалась под местной анестезией. Животное за 3-4 часа до операции эксфузии (забора) лимфы, получало около 8-10 литров молока, в рацион питания животного включался специальный комбикорм с рыбьим жиром (ненасыщенные жирные кислоты со-3), обратом и/или молоком. Забор лимфы осуществлялся отдельно от каждого животного без введения антикоагулянтов.
Разделение ксенолимфы на фракции: добавляя гепарин или без него и далее методом центрифугирования (при 2000 об/мин) в течение 20 мин и последующим раздельным забором фракций с помощью вакум-отсоса.
После отстаивания лимфы в течение 2-3 часов образовывался рыхлый сгусток, который удалялся, после центрифугирования получали лимфосыворотку, часть, затем бралась для исследования без обработки, другая часть поступала в обработку для снятия видовой специфичности. После получения жирной ксенолимфосыворотка, вставал вопрос о лишении ее специфичности, которая связана с наличием белка.
Для удаления белковых фракций в сыворотке лимфы, мы применяли полупроницаемые мембраны. Видовая специфичность лимфосыворотки устранялась нами комплексной, физической, химической и термической обработкой (рисунок № 3). Полупроницаемые мембраны позволяли получать фильтрат, содержащий минимальное количество белка. Химический метод обработки заключался в том, что на 100 мл полученной лимфосыворотки добавлялось 6-7 грамм глюкозы в сухом виде. После химической обработки осуществлялась термическая обработка путем нагревания лимфосыворотки до 50С в течение 30-40 мин, что позволяло устранить ее антигенные свойства (устранение видовой специфичности).
К полученному ксенопрепарату не содержащий белков, добавлялся 40% раствор глюкозы из расчета 200 мл на 1000 мл. Лишенной белка, жировой препарат, не обладающий видовой специфичностью мы назвали Урлипид - опалесцирующая жидкость с молочно-желтоватым оттенком (рисунок № 4).
