Введение к работе
Актуальность проблемы. Тяжелая печеночная недостаточность (ТПН) является одним из грозных осложнений многих заболеваний (хронического гепатита, цирроза печени, механической желтухи и др.). Общая смертность от хронической печеночной недостаточности занимает 5-е место в мире, а острая печеночная недостаточность в 80% случаев заканчивается летально, достигая 100% при тяжелой ее форме (Э.И Гальперин и соавт., 1978, В.И. Шумаков и соавт., 1981,1994).
Пересадка донорской печени является единственным радикальным методом лечения больных с ТПН. Однако из-за большого дефицита донорских органов, чрезвычайно высокой стоимости операции, сложности и ее травматич-ности, трансплантация печени в России выполняют лишь единицам нуждаю-щихся (В.И. Шумаков, 2005; СВ. Готье и соавт., 2005).
Трансплантация фетальных гепатоцитов, способны активизировать регенерацию поврежденной печени, стимулировать функциональную активность сохранившихся клеток печени (B.C. Репин, Г.Т. Сухих, 1998; В.И. Кулаков, Г.Т. Сухих, 1998; А.Я. Величко и соавт., 2005; СМ. Habibullah et al, 1994).
Для избежания этических проблем использования тканей и органов плода в клинической медицине, мы считали важным изучить возможность восстановительной индукции с помощью внезародышевьгх тканей, в частности, хориона. Последний для плода вьтолняет функцию плаценты на ранних сроках гестации (5-12 нед.) и вьщеляет биологически активные вещества (В.М. Маркушев; 1970; Г.Г. Мингазов, 1988; О.П. Рябчиков и соавт., 1998), способствующие регенерации поврежденной печени и потенцирующие терапевтическую активность биоматериала при его комплексном применении.
Актуальность данной работы обосновывается также необходимостью дальнейшего совершенствования биотехнологии консервирования, введения ФК и поиска доступных и легитимных источников донорского биоматериала, способного улучшить функцию тяжело поврежденной печени и снизить летальность при ТПН.
Цель работы: сравнительное изучение в опытах на экспериментальных животных эффективности раздельного и сочетанного применения криокон-сервированного биоматериала - фетальных клеток печени и клеток хориона, для повышения терапевтической активности указанных клеток при ТПН.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Воспроизвести экспериментальные модели ТПН путем резекции больших объемов печени и затравки животных ССЦ, пригодные для изучения рлияния клеточной терапии на процессы регенерации печени
Оценить иммунологическую толерантность организма взрослого реципиента к трансплантации фетального нативного и криоконсервированно-го биоматериала.
На травматической и токсической моделях ТПН изучить отдельно динамику восстановительных процессов в поврежденной печени при изолированной трансплантации КПФ и КХ.
Изучить динамику восстановительных процессов в поврежденной печени при сочетанной трансплантации криоконсервированных КФП и КХ.
Научная новизна. Впервые в эксперименте изучена эффективность трофоб-ластических КХ и КФП при двух разных моделях ТПН. Установлено, что одномоментная резекции 3/5 объема П и курсовая затравка CCU (в дозе 0,4/100 г массы 40% масляного раствора) создают адекватные патогенетические модели ТПН, пригодные для изучения эффективности КТ. Двухэтапная резекция (сначала резекция 2/5, спустя 3 недели резекция 3/5 объема печени) повышает резистентность П к травматическому повреждению и поэтому не может быть использована для моделирования ТПН и изучения эффективности КТ. Впервые установлено, что внезародышевые КХ стимулируют восстановительные процессы в поврежденной П так же, как КФП; КХ могут потенцировать процессы восстановительной регенерации при сочетанном применении с КФП. Трансплантированный фетальный нативный и криоконсервированный биоматериал под кожу экспериментальных животных не подвергается иммунному отторжению и сопровождается высоким уровнем митотической активности фетальных клеток.
При стимуляции репаративной регенерации токсически поврежденной печени ФК важная роль принадлежит ядерному аппарату Г. Уменьшение количества Г с внутриядерными липидными включениями происходит на фоне снижения интенсивности жировой дистрофии клеток П и постоянно нарастающего увеличения двуядерных Г.
Праісгнческая значимость работы. ФК по своей доступности и экономической выгодности могут быть использованы как самостоятельный метод для лечения больных, находящееся на «листе ожидания» для пересадки печени. Однократная доза КФП и КХ (6x104 /100 г массы в 1 мл) способны инициировать процессы восстановительной регенерации в печени при ОПН.
Личное участие автора в получении научных результатов, изложенных в диссертации. Автором освоены методы морфологического: и биохимического контроля эффективности КТ; предложен способ оценки иммунологической реакции организма на введение фетального биоматериала; усовершенствована технология вьщеления и криоконсервацяи ФК с помощью аппарата для механического диспергирования фетального материала, на который получен патент. Эксперименты и анализ полученных данных проводились лично автором.
Основные положения, выносимые на защиту:
Экспериментальные модели с резекцией больших объемов печени у собак и с токсической затравкой ССЦ у крыс яшіяются адекватными воспроизводимыми моделями тяжелой ОПН, пригодными для изучения эффективности КТ.
Клетки хориона являются одним из перспективных видов клеточного материала, способного стимулировать регенерационную активность клеток печени.
Комбинированное применение клеток хориона и фетальных клеток печени способно более эффективно стимулировать восстановительные процесс-сы в печени, чем при их раздельном применении.
Внедрение результатов исследований в клиническую практику и учебный процесс. Основные положения диссертации и результаты исследования используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре факультетской хирургам №2 ГОУ ВПО «Дагтосмедакадемия ФАЗ СР».
Апробация основных положений работы: материалы исследования доложены на Республиканской научно-практической конференции «Новое в хирургии Дагестана» (Махачкала, 2000); XIV съезде хирургов Дагестана (2002); 56-й научно-практической конференции молодых ученых и студентов (Махачкала, 2002); Всероссийской конференции, посвяшепной 75-летию Б.С. Брискина (Москва, 2003); на Ш-й Республиканской научно-практической конференции «Новые технологии в хирургии» (Махачкала, 2003); I съезде врачей железнодорожного транспорта России (Москва, 2004); I, II и III Всероссийских конференциях «Стволовые клетки и перспективы их применения в здравоохранении» (Москва, 2004, 2005, 2006 гг.); на X Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гепатологии: новое в диагностике и терапии» (Махачкала, 2005). Апробация работы состоялась на межкафедральной научной конференции в ДГМА (12.05.2006).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ (1 статья - в рекомендованном ВАК МОН РФ рецензируемом журнале «Южно-российский медицинский журнал»). Получен 1 патент на изобретение (№2275864 от 10.05.06).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах, состоит из введения, обзора литературы (глава I), материала и методов исследования (глава II), трех глав, посвященных результатам собственных исследований и их обсуждению, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 232 источника, из которых 123 отечественных и 109 иностранных; работа иллюстрирована 18 таблицами и 35 рисунками.
