Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Структурно-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов 11
1.1.1. Железосодержащие компоненты антибактериальных систем 17
1.1.2. Роль свободных ионов железа в генерации активных форм кислорода нейтрофилами 21
1.1.3. Не содержащие железо компоненты антибактериальных систем... 23
1.1.4. Неферментные катионные белки 26
1.1.5. Активационный потенциал ядер нейтрофилов 28
1.2. Клинико-морфологическая характеристика железодефицитной анемии 31
Глава 2. Материал и методы исследования 35 .
2.1. Характеристика объекта исследования 35
2.2. Цитохимические методы 37
2.3. Поляризационный метод определения активности ядерного хроматин 43
2.4. Компьютерная морфометрия изображения нейтрофильных лейкоцитов 45
2.5. Статистические методы 52
Глава 3. Оценка периферического звена эритрона 53
3.1. Гематологические показатели 54
3.2. Включения в эритроцитах 58
3.2.1. Сидероциты 59
3.2.2. Ретикулоциты 62
3.3. Резюме 65
Глава 4. Цитохимические признаки функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов 67
4.1. Железосодержащие компоненты антибактериальных систем 71
4.1.1. Миелопероксидаза 72
4.1.2. НАДФН-оксидаза 76
4.2. Не содержащие железо компоненты антибактериальных систем 78
4.2.1. Щелочная фосфатаза 78
4.2.2. Нафтол-АЗ-Б-хлорацетат эстераза 82
4.3. Неферментные катионные белки 84
4.4. Резюме 88
Глава 5. Морфофункциональная характеристика ядер нейтрофильных лейкоцитов 90
5.1. Сегментация ядер 92
5.2. Структурная организация ядерного хроматина 96
5.3. Резюме 103
Глава 6. Обсуждение результатов исследования 105
Выводы 119
Список литературы
- Железосодержащие компоненты антибактериальных систем
- Поляризационный метод определения активности ядерного хроматин
- Сидероциты
- Не содержащие железо компоненты антибактериальных систем
Введение к работе
Актуальность темы
Железодефицитная анемия (ЖДА) - это широко распространенная патология эритрона (Воробьев А.И., 1985; Cook J.D., Lynch S.R., 1986; Воробьев П.А., 2001; Маликова Г.Б. и соавт., 2001). Основным этиологическим фактором заболевания часто становится хроническая кровопотеря, как правило, связанная либо с патологией желудочно-кишечного тракта, либо с обильными менструальными кровотечениями у женщин детородного возраста (Левина А.А. и соавт., 2001; Козинец Г.И. и соавт., 2003). Истощение общего количества железа в организме приводит к появлению анемического и сидеропенического синдромов заболевания (Погорелов В.М. и соавт., 2004).
ЖДА сопровождается снижением активности железосодержащих окислительно-восстановительных ферментов клеток различных тканей, что способствует развитию мышечной слабости, кардиомиопатии, дистрофическим и атрофическими изменениями кожи, слизистых оболочек (Зюбина Л.Ю. и соавт., 2002; Малова Н.Е. и соав., 2002; Schaefer N. et al., 2004; Gupta К. et al., 2006). При дефиците железа нарушается миелинизация нервных волокон, возникают изменения в интеллектуальной сфере (Lozoff В. et al., 2000; Algarin С. et al., 2003).
Рядом исследований установлено, что при ЖДА появляются изменения в гуморальном и клеточном звене иммунной системы (van Heerden С, 1981; Головин А.А. и соавт. 1988; Сафуанова Г.Ш. и соавт. 2002, 2004; Eciz С. et al., 2005). Больные с ЖДА чаще страдают от инфекционно-воспалительных заболеваний, принимающих у них хроническое течение (Hasan S.M. et al., 1989; Fishbane ., 1999; Левина А.А. и соавт., 2001; Жданова Е.В. и соавт., 2002; Демихов В.Г., 2003). Патогенетические механизмы этого явления до сих пор остаются мало изученными.
Учитывая, что нейтрофильные лейкоциты играют важную и порой определяющую роль в развитии воспалительных процессов, представляет интерес исследование функциональной активности этих клеток при ЖДА.
Нейтрофильные лейкоциты первыми появляются в зоне повреждения ткани (Мазинг Ю.А., 1991; Пауков B.C. и соавт., 2005). Дегрануляция компонентов антибактериальных систем нейтрофилов в фаголизосомы или внеклеточное пространство способствует уничтожению микроорганизмов и очищению очага воспаления от некротизированных тканей (Саркисов Д.С, Пальцын А.А., 1992; Сапрыкин В.П., Галапкин В.Н., 1998; Faurschou М., Borregaard N., 2003; Brinkmann V. et al., 2004).
He вызывает сомнения тот факт, что депрессия функциональной активности нейтрофилов приводит к возникновению и прогрессированию гнойно-септических процессов (Bondestam М. et al., 1986; Newburger Р.Е. et al., 1986; Segel E.K. et al., 1987; Галанкин B.H., Токмаков A.M., 1991; Хаитов P.M, Пинегин Б.В, 1995; Tralau Т. et al., 2004). Изучение состояния антибактериальных систем нейтрофильной зернистости и активационного потенциала ядер позволит расширить современные знания о морфофункциональных особенностях нейтрофильных лейкоцитов у больных ЖДА, что представляется актуальным в связи с глобальной распространенностью железодефицитных состояний.
Цель исследования
Выявить характерные для железодефицитной анемии структурно-цитохимические изменения в нейтрофильных лейкоцитах периферической крови, связанные с нарушением функционально-метаболической активности внутриклеточных антибактериальных систем и ядерного хроматина.
Задачи исследования 1. 'Выявить обусловленные дефицитом железа изменения в
зернистости нейтрофильных лейкоцитов на основе компьютерного мониторинга цитохимических маркеров гранул: миелопероксидазы, НАДФН-оксидазы, щелочной фосфатазы, нафтол-А8-0-хлорацетат эстеразы и неферментных катионных белков.
2. Оценить активационныи потенциал ядер нейтрофильных
лейкоцитов в периферической крови у больных ЖДА по интенсивности
анизотропного эффекта хроматина.
Определить изменение активности железосодержащих и не содержащих железо компонентов антибактериальных систем нейтрофилов в зависимости от степени тяжести ЖДА.
Установить характер взаимосвязи между цитохимическими признаками функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови и показателями состояния периферического звена эритрона у больных ЖДА.
5. Выявить различия структурно-цитохимических признаков
функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови у больных
с острой и хронической постгеморрагической (железодефицитной)
анемией.
Научная новизна исследования
1. Получены новые данные, характеризующие состояние
железосодержащих (миелопероксидаза, НАДФН-оксидаза) и не
содержащих железо (щелочная фосфатаза, нафтол-АБ-О-хлорацетат
эстераза) компонентов антибактериальных систем нейтрофилов крови у
больных с ЖДА.
2. Выявлены неизвестные ранее морфофункциональные особенности
ядер нейтрофильных лейкоцитов у больных ЖДА, связанные с
увеличением в них количества сегментов и доли гетерохроматина.
3. Представлены новые сведения о возрастании активности
миелопероксидазы и щелочной фосфатазы в нейтрофильных лейкоцитах
периферической крови у больных с острой постгеморрагической анемией, указывающие на повышение функциональной активности этих клеток.
4. Предложен новый способ для оценки состояния запасного фонда железа, основанный на определении количества сидероцитов в периферической крови.
Научно-практическая значимость
Новые данные об угнетении функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов у больных с ЖДА расширяют современные представления о состоянии иммунной системы при этой патологии эритрона, поэтому могут применяться в научно-исследовательской работе, а также в учебном процессе со студентами медицинских и биологических специальностей.
Выявленные различия в активности цитохимических маркеров антибактериальных систем нейтрофилов у больных с острой и хронической постгеморрагической анемиями могут быть использованы в дифференциальной диагностики патологии эритрона.
Исследование содержания сидероцитов в периферической крови может применяться в оценке запасного фонда железа при железодефицитных состояниях.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Нейтрофильные лейкоциты периферической крови больных с железодефицитной анемией характеризуются депрессией функционально-метаболической активности, которая проявляется структурно-цитохимическими изменениями в' цитоплазматической зернистости и обусловлена зависимым от концентрации гемоглобина в крови угнетением активности железосодержащих ферментов - миелопероксидазы и НАДФН-оксидазы. Не содержащие железо компоненты антибактериальных систем
сохраняют свой функциональный потенциал в нейтрофилах больных, однако активность щелочной фосфатазы снижается при среднетяжелом течении заболевания.
2. В ядрах нейтрофильных лейкоцитов периферической крови у больных с железодефицитной анемией возрастает анизотропный эффект, что указывает на увеличение доли гетерохроматина и угнетение активационного потенциала ядер. Наряду с этим в крови повышается количество полисегментированных нейтрофилов.
3. Острая постгеморрагическая анемия характеризуется активацией нейтрофильных лейкоцитов в периферической крови. В цитоплазме клеток возрастает активность миелопероксидазы и щелочной фосфатазы. Сохраняются показатели активности НАДФН-оксидазы и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы, а также содержание неферментных катионных белков. Морфофункциональные параметры ядер нейтрофилов не изменяются.
Апробация работы и публикации
По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 4 в центральной печати.
Основные положения диссертации представлены на 32 научно-практической конференции студентов и молодых ученых вузов южного федерального округа (Краснодар, 2005), научно-практической конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ (Курск, 2005), IV всероссийской университетской научно-практической конференции молодых ученых и студентов по медицине (Тула, 2005), IX итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и медицинская наука в 21 веке» (Киров, 2005), юбилейной конференции молодых ученых и студентов, посвященной десятилетию
Кубанского медицинского института «Актуальные вопросы медицинской науки и здравоохранения» (Краснодар, 2005), международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005), XXXIII научной конференции студентов и молодых ученых вузов южного федерального округа (Краснодар, 2006).
Апробация работы осуществлена на расширенном заседании сотрудников кафедр патологической анатомии, патологической физиологии, гистологии, клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики Кубанского государственного медицинского университета 7 сентября 2006 года.
Реализация и внедрение результатов исследования
Работа выполнена на кафедре патологической анатомии Кубанского государственного медицинского университета. Материалы исследования внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии, клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики Кубанского государственного медицинского университета. Практические рекомендации используются в работе отдела клинической и экспериментальной иммунологии Центральной научно-исследовательской лаборатории Кубанского государственного медицинского университета.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц, 21 рисунок (гистограммы, изображения эритроцитов и нейтрофильных лейкоцитов). Работа состоит из введения, 6 глав, выводов, указателя использованной литературы. Библиография включает 253 источника, из них 83 на русском языке и 170 - на иностранных языках.
Железосодержащие компоненты антибактериальных систем
НАДФН-оксидаза. Генерация активных форм кислорода фагоцитами - необходимое звено фагоцитарного процесса, позволяющее клеткам эффективно уничтожать инфекционные агенты, а также влиять на метаболизм тканей (Clark R.A., Borregaard N., 1985; Hampton M.B. et al., 1996; Меньшикова Е.Б., Зенков H.K., 1997; Chen X.L. et al., 2004).
В физиологических условиях подавляющее большинство нейтрофилов находятся в состоянии функционального покоя. Они не имеют морфологических признаков активации на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях (Сапрыкин В.П., Кузнецов С.Л., 2001). Однако в ответ на стимулирующие факторы клетка в течение нескольких секунд способна переходить в активированное состояние. Это проявляется изменением метаболической активности фагоцитов и развитием респираторного взрыва (Дуглас С.Д., Куй П.Г., 1983; Ward R.A. et al., 2000; Герасимов И.Г., 2004). Большая часть (или весь) кислород, потребляемый клеткой во время респираторного взрыва, расходуется на образование супероксидного аниона (Klebanoff S.J., 1999). Супероксидный анион быстро подвергается дисмутации с образованием перекиси водорода - известного бактерицидного вещества, эффективного против широкого спектра микроорганизмов (Murgia R. et al., 2002; Freudenstein-Dan A. et al., 2003). :
Установлено, что фермент, катализирующий респираторный взрыв -это мембрано-ассоциированная пиридиннуклеотид-оксидаза или НАДФН-оксидаза (Козинец Г.И., Макаров В.А., 1997; Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А., 1999). НАДФН-оксидаза - мультиферментный комплекс, состоящий из мембранных и цитозольных компонентов. В неактивизированном состоянии мембранные компоненты представлены флавопротеидом и цитохромом Ь558- Цитохром Ь558 содержит, в свою очередь, две субъединицы: а с молекулярной массой 22кДа (p22phox) и р — 91 кДа (p91phox). Мембранные компоненты НАДФН-оксидазного комплекса локализованы в популяции специфических гранул нейтрофильных лейкоцитов (Kjeldsen L. et al., 1993; Seguchi H. et al., 2002; Ambruso D.R. et al., 2004).
После стимуляции клеток цитозольные компоненты комплекса -белки p47phox, p67phox, p40phox и Rac2, перемещаются к плазматической мембране. Слияние специфических гранул, содержащих флавоцитохром 0558з с плазмолеммой завершается сборкой всех компонентов и экспрессией активности НАДФН-оксидазной системы (Karlsson A., Dahlgren С, 2002).
Механизм действия НАДФН-оксидазы связан с восстановлением молекулярного кислорода до супероксидного аниона за счет переноса электронов цитохромом b558 (Foroozan R. et al., 1992).
Цитохром b558 относится к гемопротеидам (Ленинжер А., 1974). Он обладает железопорфириновой простетической группой, участвующей в переносе электронов от флавопротеида к молекулярному кислороду. Непосредственный перенос атомов водорода и электронов осуществляется благодаря изменению валентности железа гема в составе этого хромопротеида (Мари Р. и соавт., 2004).
Таким образом, цитохромом Ь558 представляет собой железосодержащий компонент НАДФН-оксидазного комплекса.
Функционирование НАДФН-оксидазы в активированных фагоцитах приводит к генерации активных форм кислорода, которые, накапливаясь в фагоцитарной вакуоли, способствуют умерщвлению микроорганизмов. В работе Н. Rosen с соавторами (2002) при исследовании химических реакций, протекающих в фаголизосоме нейтрофила, показано, что нитрование и хлорирование белков бактерий требуют присутствия НАДФН-оксидазы и не происходят в клетках с дефицитом этого фермента.
Хорошо известен тот факт, что больные хронической гранулематозной болезнью имеют врожденный дефект фагоцитоза, связанный с наличием мутаций и делеций в генах, кодирующих НАДФН-оксидазную систему. Спектрофотометрическое исследование, проведенное Р .Е. Newburger с сотрудниками в 1986 году, показало полное отсутствие цитохрома b в гранулоцитах или их субклеточных фракциях.
Фактором, повреждающим механизмы респираторного взрыва, может выступать дефицит железа. В эксперименте in vivo показано, что нейтрофильные лейкоциты крыс с железодефицитной анемией алиментарного генеза характеризовались уменьшенной продукцией радикалов кислорода и угнетением бактерицидной активности (Moore L.L., Humbert J.R. 1984; Li Q. et al., 1991).
Миелопероксидаза. Этот фермент признан маркерным белком азурофильной зернистости нейтрофильных лейкоцитов (Bainton D.F., 1999; Faurschou М. et al., 2002). Биосинтез миелопероксидазы можно обнаружить на самой ранней стадии гранулоцитопоэза - в миелобластах (Borregaard N. etal.,1995).
В соответствии с современными представлениями, нейтрофильные лейкоциты обладают миелопероксидазной системой, состоящей из фермента, его субстрата - перекиси водорода и ионов галогенов (Klebanoff S.J. et al., 1993; Klebanoff S.J., 1999, 2005; Jiang Q. et al., 2003). Каталитические реакции миелопероксидазы осуществляются при участии молекулы гема в составе фермента. Железо гема, обладая переменной валентностью, непосредственно участвует в окислительных реакциях миелопероксидазы (Abu-Soud Н.М., Hazen S.L., 2000; Арнхольд Ю., 2004).
Катализируемая миелопероксидазой реакция между перекисью водорода и хлором завершается образованием гипохлорной кислоты. Этот биооксидант разрушает белковые компоненты мембран через хлоризацию аминокислот и низкомолекулярных пептидов (Davies M.J., Hawkins C.L., 2000; Rosen Н. et al., 2002).
Поляризационный метод определения активности ядерного хроматин
Известно, что в ядре транскрипционной активностью не обладает гетерохроматин, который соответствует максимально конденсированным участкам комплекса ДНК-гистоны. В этих участках при окраске толуидиновым синим после солянокислого гидролиза возникает эффект анизотропии (двулучепреломления), тем более сильный, чем более упорядоченной является структура хроматина. Механизм реакции состоит в том, что толуидиновый синий взаимодействует как с фосфатными группами ДНК, так и с открывшимися после гидролиза альдегидными группами, пространственная ориентация которых различна. Указанный эффект усиливается после блокады альдегидных групп гидроксиламином или бисульфатом натрия. Это связано с возникновением дополнительной химической связи: альдегидная группа - блокатор — краситель. При этом необходимо, чтобы расстояние между молекулами красителя составляло не более 50 нм. Подобное условие выполняется только при определенной степени конденсации хроматина, а значит и при определенном уровне его биологической активности.
Оцределение уровня анизотропного эффекта ядерного хроматина в нейтрофилах производили по методике А.А. Евглевского (1999).
Фиксация мазков крови в течение 15 минут смесью 96 этилового спирта и ацетона в соотношении 1:1. Фиксированные препараты высушивали на воздухе. Окрашивание: Готовят 5н раствор соляной кислоты для гидролиза (85 мл концентрированной HCL доводят до 200 мл дистиллированной водой). Выдерживают мазки крови в 5н растворе соляной кислоты в течение 40 минут при 20С. Ополаскивают 0,00ЇМ цитратным буфером с рН 5,0. Инкубируют в солянокислом гидроксиламине при 23 С в течение 3 часов (Лилли Р., 1969). Ополаскивают однократно цитратным буфером с рН 5,0. Окрашивают 0,05% раствором толуидинового синего, приготовленного на 0,001М цитратном буфере (рН 5,0), в течение 25 минут. Ополаскивают однократно цитратным буфером, высушивают на воздухе.
Результат реакции. При исследовании под поляризационным микроскопом при скрещенном анализаторе и поляризаторе в местах локализации конденсированного хроматина образуется свечение желто-зеленого цвета.
Для оценки интенсивности анизотропного эффекта в нейтрофильных лейкоцитах использовали модификацию полуколичественного метода Астальди и Верга, адаптированного для изучения ядер в поляризованном свете. В каждом мазке крови подсчитывали 100 клеток. По интенсивности свечения были определены 5 степеней анизотропии: 0 - отсутствие анизотропного эффекта в ядре; 1 - низкая степень анизотропии: свечение занимает не более чем V , часть площади ядра; 2 - умеренная степень анизотропии: свечение занимает до 1/2 части площади ядра; 3 - высокая степень анизотропии: свечение занимает более 1/2 части площади ядра; 4 — очень высокая степень анизотропии: свечение занимает все ядро.
Учитывая наличие обратной связи между степенью анизотропии хроматина и его транскрипционной активностью (высокая анизотропия — высокая конденсация хроматина — низкая транскрипционная активность) использован показатель активности хроматина (ПАХ), который рассчитывали по формуле: ттлл, л 0«а+ l b + 2»c + 3 d + 4«e, ПАХ=4- ioo где а, Ь, с, d, е - количество клеток с одной из пяти степеней анизотропии.
Цитологические анализы крови, широко применяемые в клинике, служат незаменимым источником информации при диагностике множества заболеваний. Однако визуальное исследование мазков крови трудоемко и не всегда воспроизводимо. Внедрение новых методов с использованием компьютерного анализа позволило не только ускорить проведение рутинных исследований, но и открыть ранее неизвестные возможности в изучении морфологических характеристик клеток (Козинец Г.И. и соавт., 1990).
Применение компьютеров в анализе изображения цитологических и гистологических препаратов позволяет производить количественный системный анализ биологических объектов с использованием современных статистических методов (Автандилов Г.Г., 1993, 1996). При помощи компьютерной обработки изображения клеток и их внутриклеточных структур возможно сохранение огромного количества информации, объективность ее обработки, получение комплекса количественных характеристик, которые после статистической обработки могут использоваться в медицинской практике (Погорелов В.М. и соавт., 1997).
Сидероциты
Железодефицитная анемия. У больных с ЖДА в одном эритроците наблюдалось от 1 до 4 сидеросомы, которые локализовались в цитоплазме отдельно друг от друга. Количество сидеросом в цитоплазме эритроцитов у здоровых людей колебалось от 1 до 10 гранул в одной клетке, часто с характерным расположением в виде розеток.
У .больных с легкой степенью ЖДА количество сидероцитов в периферической крови в 1,6 раза меньше по сравнению с больными без анемии (табл. 3.3.). Кроме того, этот показатель был в 3 раза ниже, чем у здоровых людей. У больных со средней " степенью тяжести ЖДА количество сидероцитов составило 0,63±0,07%о, что в 2,7 раза меньше, чем у больных без анемии (р 0,01). При сопоставлении количества сидероцитов у больных ЖДА и здоровых людей установлено, что при легкой степени анемии количество этих клеток ниже в 1,4 раза, а при средней степени в 4,8 раза по сравнению со здоровыми людьми.
Острая постгеморрагическая анемия. Содержание сидероцитов в периферической крови при этой анемии не имело статистически значимых отличий от значений в группе больных без анемии, однако оказалось ниже, чем у практически здоровых людей, в 1,6 раза.
Корреляция. Установлена прямая корреляционная связь средней силы между содержанием сидероцитов в периферической крови и уровнем гемоглобина (табл. ЗА.). Корреляция между содержанием сидероцитов и цветовым показателем носила слабый характер, между содержанием сидероцитов и количеством эритроцитов - средней силы (р 0,05). Для эритроцитарных индексов (МСН, МСНС) и количества сидероцитов определена достоверная корреляционная взаимосвязь слабой силы (р 0,05). Статистически достоверной корреляционной связи между числом сидероцитов и средним объемом эритроцита (MCV) не обнаружено (р 0,05).
Железодефицитная анемия. Содержание ретикулоцитов в периферической крови у больных с легкой степенью ЖДА не имело статистически значимых отличий от группы больных без анемии и составило в среднем 3,38±0,10%о (табл. 3.3.). Ретикулоцитарный индекс, отражающий регенераторную способность красного костного мозга, у больных с легким течением ЖДА составил 1,53±0,05%, что в 1,5 раза меньше, чем в группе больных без анемии (рис.3.3.).
При средней степени тяжести ЖДА количество ретикулоцитов в 1,3 раза ниже по сравнению с больным без анемического синдрома (р 0,05). Ретикулоцитарный индекс снизился в 2,4 раза - до 0,94±0,04% (р 0,01).
Острая постгеморрагическая анемия. При этом виде анемии не установлено статистически достоверных различий в содержании ретикулоцитов и значении ретикулоцитарного индекса по сравнению с больными без анемии (табл. 3.3.). Так, в этой группе больных количество ретикулоцитов составило 3,31±0,08%о, при ретикулоцитарном индексе равном 2,20±0,11%.
Корреляция. Статистический анализ показал отсутствие корреляционной связи между количеством ретикулоцитов в периферической крови и гематологическими показателями (табл. 3.4.). Также не обнаружено связи между ретикулоцитарным индексом и показателями красной крови (р 0,05).
Железодефицитная анемия характеризуется снижением количества сидероцитов в периферической крови при легкой степени в 1,6 раза, а при средней степени тяжести - 2,7 раза. Это указывает на истощение запасного фонда железа в виде ферритина и гемосидерина у больных ЖДА, которое нарастает по мере прогрессирования заболевания.
Содержание ретикулоцитов не изменяется при легкой степени ЖДА, а при средней снижается в 1,3 раза. Однако падение ретикулоцитарного индекса в 1,5 раза происходит уже при легкой степени анемии, а при средней степени тяжести этот параметр снижен в 2,4 раза, что свидетельствует об угнетении эритропоэза и развитии гипорегенераторного состояния красного костного мозга у больных ЖДА.
Выявлена прямая корреляционная связь между уровнем гемоглобина и количеством сидероцитов в периферической крови. Падение уровня гемоглобина крови сопровождается уменьшением числа эритроцитов, в которых.обнаруживаются гранулы негеминового железа. Также в прямой корреляционной связи находятся размер эритроцитов, содержание в них гемоглобина и количество сидероцитов в периферической крови. Увеличение показателей микроцитоза и гипохромии эритроцитов сопровождается снижением числа сидероцитов в крови.
В отличие от ЖДА острая постгеморрагическая анемия, развившаяся на 1-2 сутки после маточного кровотечения, не сопровождается изменением количества сидероцитов и ретикулоцитов в периферической крови больных. При этом виде анемии не изменяется ретикулоцитарный индекс, что свидетельствует о сохранении эритропоэтической функции костного мозга.
Не содержащие железо компоненты антибактериальных систем
Железодефицитная анемия. Количество нейтрофилов с положительной реакцией на щелочную фосфатазу при легком течении анемии составило 81,8±6,6%, что достоверно не отличалось от процента реагирующих клеток у больных без анемии (табл. 4.3.). Активность фермента в клетках составила 4,56±0,5 отн.ед., что не имело статистически значимых отличий от показателя в группе больных без анемического синдрома (рис. 4.7.А.).
Площадь ДГ-зоны продукта реакции на щелочную фосфатазу в цитоплазме клеток у больных с легкой степенью ЖДА составила 40,8±2,6 мкм" при оптической плотности - 0,11±0,01 отн.ед. Таким образом, в показателях компьютерной морфометрии клеток нами не было обнаружено достоверных отличий между группой с легким течением ЖДА и группой больных без анемии (р 0,05).
При средней степени тяжести заболевания количество реагирующих на фермент клеток уменьшилось в 1,6 раза - до 51,2±8,4% (р 0,05). Активность щелочной фосфатазы в нейтрофилах оказалась снижена в 2,7 раза и выходила за пределы нижней границы интервала "среднее±1,5 сигмы" у больных без анемии (р 0,01). Снижение активности фермента сопровождалось уменьшением размеров ДГ-зоны в цитоплазме клеток в 2,1 раза (р 0,01), а оптической плотности продукта реакции в 1,6 раза (Р 0,05).
Острая постгеморрагическая анемия. Количество нейтрофильных лейкоцитов, в цитоплазме которых обнаружен продукт цитохимической реакции на щелочную фосфатазу, при ОПТА увеличено в 1,2 раза по сравнению с больными без анемии (р 0,05). Активность фермента, определенная по ИЦП, выше в 1,4 раза и составляет 6,70±0,7 отн.ед. (р 0,05).
Морфометрия изображения клеток показала увеличение площади ДГ-зоны щелочной фосфатазы в 1,4 раза (р 0,05). Оптическая плотность продукта реакции в цитоплазме клетки составила 0,12±0,01 отн.ед., что статистически достоверно не отличалось от значений этого параметра в группе больных без анемии (р 0,05).
Корреляция. Корреляционная взаимосвязь между активностью щелочной фосфатазы и гематологическими параметрами носит слабый характер и не является статистически достоверной (а 0,05). Так, коэффициент ранговой корреляции (rs) между активностью щелочной фосфатазы и уровнем гемоглобина крови составил 0,14, между цветовым показателем и активностью фермента - 0,04, средним объем эритроцита (MCV) - 0,07, содержанием гемоглобина в эритроците (МСН) —0,02, шириной распределения эритроцитов по объему (RDW) - -0,32.
Железодефицитная анемия. У больных с легкой степенью ЖДА не обнаружено статистически достоверных изменений в средних значениях активности фермента и количестве положительно реагирующих на нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразу клеток (рис. 4.7.Б.). Среднее значение размеров площади ДГ-зоны фермента и оптической плотности продукта цитохимической реакции в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов при легком течении заболевания не имело статистически значимых отличий от показателей в группе больных без анемии (табл. 4.4.).
Также как и легкая ЖДА средняя степень тяжести анемии не сопровождалась статистически достоверными изменениями в количестве положительно реагирующих нейтрофилов и активности нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы в них (р 0,05). При морфометрии клеточного изображения установлено, что размеры площади ДГ-зоны нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов у больных со средней степенью тяжести ЖДА составили 16,4±2,2 мкм , а оптическая плотность продукта реакции - 0,12±0,01 отн.ед. (р 0,05).
Острая постгеморрагическая анемия. Количество нейтрофилов с положительной реакцией на нафтол-А8-0-хлорацетат эстеразу у больных с ОПТА равно 99,5±0,5%. Активность фермента составила 2,71±0,5 отн. ед., что статистически достоверно не отличалось от значений активности нафтол-АБ-Б-хлорацетат эстеразы в группе больных без анемии (р 0,05).
При ОПТА не обнаружено изменений в показателях размеров площади ДГ-зоны и оптической плотности продукта цитохимической реакции в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов периферической крови.
Корреляция. Статистическое исследование с применением корреляционного анализа не установило зависимости между активностью фермента и гематологическими параметрами. Коэффициент корреляции (rs) между активностью нафтол-АБ-О-хлорацетат эстеразы и уровнем гемоглобина крови составил -0,02, цветовым показателем - 0,07, средним объем эритроцита (MCV) - 0,13, содержанием гемоглобина в эритроците (МСН) - 0,06, шириной распределения эритроцитов по объему (RDW) -0,04 (а 0,05).
![Маркеры воспаления и оксидантная активность лейкоцитов у больных с различными формами ишемической болезни сердца [Электронный ресурс]](/i/i/4393/188471.png "Маркеры воспаления и оксидантная активность лейкоцитов у больных с различными формами ишемической болезни сердца [Электронный ресурс] Алексеева Галина Васильевна")
