Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Богачев Андрей Александрович

Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс]
<
Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс]
>

Данный автореферат диссертации должен поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - 240 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Богачев Андрей Александрович. Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс] : Диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.15

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1. Патоморфологические аспекты алкогольного поражения почек 11

1.1. Современные данные о морфологии и физиологии нейро-эндокринного аппарата почек 11

1.2. Почки как орган-мишень этанола и спиртсодержащих жидкостей... 20

1.3. Морфологические изменения нервной ткани при алкогольной интоксикации и других патологических состояниях 26

1.4. Системные изменения в организме при хронической алкогольной интоксикации и их роль в танатогенезе 30

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 37

2.1. Материал и его характеристика 37

2.2. Морфологические методы исследования 40

2.2.1. Методы забора и фиксации материала 40

2.2.2. Общие гистологические и нейрогистологические методики 41

2.2.3. Иммуногистохимические методики 42

2.3. Методы морфометрии и математической обработки данных 43

ГЛАВА 3. Собственные исследования 45

3.1. Изменения в почках у лиц основной исследуемой группы и группы сравнения 45

3.1.1. Результаты гистологического исследования ...45

3.1.2. Результаты иммуногистохимического исследования 57

3.1.3. Результаты морфометрии 62

3.2. Изменения в аорто-почечных ганглиях и нервах почек лиц исследуемой группы и группы сравнения 65

3.2.1. Результаты гистологического исследования 65

3.2.2. Результаты морфометрии 72

Обсуждение полученных результов 76

Выводы 88

Список литературы

Введение к работе

Актуальность работы.

Длительное употребление спиртных напитков приводит к хронической алкогольной интоксикации, при которой все органы и системы организма вовлекаются в сложный процесс, описываемый понятием «алкоголь-зависимые состояния» [Курляндский Б.А., 2002; Пермяков А.В., Витер В.И., 2002; Писарев В.Б., 2003, 2005; Гуров Д.Ю., 2005; Wetterling Т., 2000; Carrero R.J., Husain К., 2005].

Систематическое употребление алкоголя неизбежно приводит к нарушению всех видов обмена веществ. В результате изменяется морфологическая структура клеток и тканей организма. Происходящие при этом в организме человека изменения составляют субстрат алкогольной болезни. В настоящее время значительную часть потребляемого алкоголя в нашей стране составляют его суррогаты. Среди них наибольшее распространение получили самогон и спиртные напитки кустарного производства, изготовленные из синтетического, гидролизного или пищевого этилового спирта. Для характеристики интоксикации такими напитками используется термин спиртсодержащая жидкость (ССЖ). Он характеризует основу субстанции -этиловый спирт, и наличие в ней примесей [Сафрай А.Е., 1996; Нужный В.П., 1998; Заиграев ГГ., 2002; Пауков B.C., Ерохин Ю.А., 2004].

Продолжительность жизни людей, злоупотребляющих алкоголем, на 15 — 20 лет короче среднестатистической. В основном это лица трудоспособного возраста. Длительное течение алкогольной болезни, а также частая смена периодов «запоя» и «отмены» определяют различные варианты тана-тогенеза при этой патологии. В первом случае наиболее значимыми являются нарушения всех видов обмена, кислотно-щелочного равновесия, след-

6 ствием которых может быть декомпенсированная гипогликемия и кетоаци-доз. Прекращение приема алкоголя при его ежедневном длительном употреблении приводит к развитию алкогольного абстинентного синдрома -«синдром отмены». Особенностью этого состояния является выраженная стрессовая реакция, сопровождающаяся активацией нейроэндокринной системы с выбросом в кровь катехоламинов, ренина, кортизола. В этот период, помимо нарушений обмена веществ, первостепенное значение приобретает дизрегуляция со стороны вегетативной нервной системы и, как следствие, изменения внутриорганного кровотока и системного артериального давления, что может являться одним из механизмов развития внезапной смерти [Павлова Л.И., 1998; Усатенко М.С., Шабанов П.Д., 1998; Шабанов П.Д., 1999; Кактурский Л.В., 2000; Акмаев И.Г., 2001; Харрисон Т.Р., 2002; Крыжановский Г.Н. с соавт., 2003; Мазур НА., 2003; Капустин А.В., 2004; Wakabayashi I., 2001; Klatsky L., 2004].

Таким образом, в формировании структурных изменений во внутренних органах при алкогольной болезни важную роль играет не только токсическое действие этанола, примесей и их метаболитов, но также нарушения различных видов обмена веществ и нейроэндокринный дисбаланс [Акмаев И.Г., 2001; Богомолов Л.В. с соавт., 2003]. Почки в этом аспекте не являются исключением. Морфологические проявления нервной дизрегуляции были показаны в различных экспериментальных исследованиях [Евсеев В.А. с соавт., 2001; Писарев В.Б. с соавт., 2004; Фролов В.И., 2004; Di Bona G.F., 2000]. Помимо этого, напряжение симпатической нервной системы при длительном течении алкогольной болезни предполагает значительное напряжение нейроэндокринно-го аппарата почек, регулирующего почечный кровоток и системное артериальное давление. Структурную основу вегетативной дизрегуляции почек и напряжение их эндокринного аппарата следует искать, прежде всего, в измене-

ниях со стороны вегетативных ганглиев, иннервирующих почки. Это послужило основанием к нашему исследованию.

Цель работы — выявить особенности морфологических изменений в паренхиме и нервном аппарате почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь, и значение этих изменений в танатогенезе в период абстиненции.

Задачи исследования.

1. Изучить изменения в паренхиме почек, характерные для лиц,
умерших в период абстиненции на фоне длительного употребления спир-
тсодержащих жидкостей.

  1. Изучить морфологические изменения в вегетативных ганглиях почек при хроническом употреблении алкоголя и их роль в механизме внезапной смерти во время абстинентного синдрома.

  2. Дать морфометрическую и иммуногистохимическую характеристику процессам, происходящим в почках при хроническом употреблении спиртсодержащих жидкостей.

  3. Выявить наиболее значимые морфологические критерии изменений аорто-почечных ганглиев и почек при хроническом употреблении алкоголя и смерти в период абстиненции.

Научная новизна.

В работе показаны изменения сосудов, клубочков и тубулоинтерстици-ального компонента почек, характерные для лиц, смерть которых наступила в период острой отмены на фоне длительного употребления ССЖ. Для особенностей поражения канальцев и характера новообразования соединительной ткани предложены механизмы, связанные с формированием патологии в аорто-почечных ганглиях, иннервирующих почку. Мозаичность поражения

аорто-почечных ганглиев с наличием нейронов с повышенным структурно-функциональным потенциалом представлена в качестве субстрата местной вегетативной дизрегуляции. Данный механизм предложен в качестве обоснования танатогенеза у изученного контингента лиц.

Научно-практическая значимость.

Полученные данные расширяют представления об особенностях морфогенеза поражения почек при хроническом алкоголизме и механизмах наступления смерти в острый период отмены (абстиненции).

Предложенные диагностические критерии позволяют улучшить точность посмертной диагностики у лиц, длительно употребляющих спиртсодержащие жидкости, что повышает диагностические возможности в токсикологической, судебно-медицинской и патолого-анатомической практике.

Основные положения, выносимые на защиту.

  1. Между морфологическими изменениями в почках и аорто-почечных ганглиях у лиц, длительно употреблявших спиртсодержащие жидкости и умерших в острый период отмены, существуют закономерные взаимосвязи, имеющие существенное значение в механизмах танатогенеза.

  2. Вегетативный дисбаланс, вызванный хроническим поражением нервного аппарата почек при длительной алкогольной интоксикации, может вызывать изменения в почках, выявляемые при их морфологическом исследовании.

Апробация работы и публикации.

Основные результаты исследования докладывались и обсуждались на итоговых научных сессиях Волгоградского государственного медицинского университета (2003, 2005), на заседаниях Петербургского общества су-

дебных медиков (2003, 2005), Всероссийском научном симпозиуме «Эндо-токсикоз: природа, диагностика, принципы коррекции» (Волгоград, 2005), на конференции Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования, посвященной памяти проф. Н.К. Хмельницкого (СПб, 2005), 4-й Всероссийской научной конференции «Проблемы морфологии» (Астрахань, 2005), Международном конгрессе «Вегетативная дизре-гуляция в медицине» (Донецк, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакто-риальной патологии» (Курск, 2006).

Апробация работы осуществлена на расширенном заседании отдела общей и экспериментальной патологии Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области 28 января 2006 года.

По теме диссертации опубликовано 9 научных работав том числе 1 в центральной печати и 1 — в зарубежной печати.

Реализация и внедрение результатов исследования.

Работа была выполнена в отделе общей и экспериментальной патологии (зав. отделом - член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.Б. Писарев) Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области (директор - академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.И. Петров).

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии, судебной медицины, анестезиологии и реаниматологии ФУВ, Волгоградского государственного медицинского университета. Практические рекомендации используются в работе Волгоградского бюро судебно-медицинской экспертизы и Волгоградского патоло-го-анатомического бюро.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц, иллюстрирована 26 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов. Список использованной литературы содержит 180 источников (109 на русском и 71 на иностранных языках).

Современные данные о морфологии и физиологии нейро-эндокринного аппарата почек

Ренин-ангиотензиновая система (РАС), входящая в эндокринную систему почек, является прессорной структурой организма, занимает ключевую роль в регуляции функции сердечно-сосудистой системы и почек. Активация этой системы приводит к повышению артериального давления за счет возрастания объема циркулирующей крови, увеличения общего периферического сосудистого сопротивления и активности других вазоконст-рикторных факторов. Установлено, что РАС в организме существует в двух формах: гуморальной (эндокринной) и тканевой (аутокринно-паракринной). Гуморальная, общая для организма РАС играет роль «скорой» помощи, например при кровотечении, падении АД, остром инфаркте миокарда и других острых ситуациях. Тканевая РАС, функционирующая в органах, прежде всего в сердце, почках, мозге, сосудах, периферической мускулатуре. Под воздействием основного эффектора РАС - ангиотензина II на ангиотензино-вые рецепторы первого типа она стимулирует пролиферацию клеток и процессы, получившие название ремоделирование органов и тканей. В почках хроническая активация локальной РАС сопровождается развитием клубоч-ковой гипертензии с последующей гибелью клубочков, постепенным снижением фильтрации, ростом протеинурии, потерей электролитов, уменьшением диуреза и появлением признаков хронической почечной недостаточности. Ремоделирование сердца проявляется гипертрофией миокарда, развитием фиброза миокарда, гибелью кардиомиоцитов, что приводит к гипертрофии левого желудочка и развитию хронической сердечной недостаточ ности. Основными компонентами РАС являются ферменты: ренин, ангио тензинпревращающий фермент (АПФ), называемый еще кининаза II и гормоны: ангиотензин (AT) I, II и III. Отдельные компоненты гуморальной РАС продуцируются в различных органах. Так, ренин секретируется в почках, ангиотензиноген продуцируется в печени, ангиотензинпревращающий фермент (АПФ) - в легких. Под действием ренина из вырабатываемого в печени ангиотензиногена образуется гормон ангиотензин I, переходящий под влиянием находящегося в легких, почках и плазме АПФ в AT П. Последний вызывает системный и локально-почечный спазм артериол с повышением общего периферического сопротивления и сопротивления внут-рипочечных сосудов, а также вызывает усиление реабсорбции натрия, действуя непосредственно на почечные канальцы и усиливая секрецию альдостерона. Из AT II образуется его метаболит AT III, который обладает слабо-выраженным прессорным действием, но в значительной степени стимулирует секрецию альдостерона корой надпочечников [Браун А.В., Лейкин М.Д., 1972; Ушкалов А.Ф., Вихерт A.M., 1972; Пальцев М.А., 1987; Шейман Д.А., 1999, 2002; Кутырина И.М., Михайлов А.А., 2000; Hackenthal Е., 1986; Seldin D.W., Giebisch G., 1992; Price S.A., Wilson L.M., 1996; Vander A., 2000].

Ренин синтезируется миоэпителиоидными клетками дистальной части афферентных артериол, входящими в ЮГА почки. Ген, регулирующий синтез ренина, локализован в хромосоме 1. Большая часть ренина в физиологических условиях синтезируется в клетках ЮГА кортикальных нефронов. Синтезируется ренин в форме проренина. Содержащие проренин гранулы идентифицированы в комплексе Гольджи и в цистернах эндоплазматиче-ского ретикулума. По мере созревания гранул и увеличения в них количества проренина он превращается в активную форму под влиянием ферментов, среди которых наибольшее значение придается катепсину В. Гранулы могут выделять как активный, так и неактивный ренин. В крови постоянно при сутствуют обе эти формы. При этом в плазме крови неактивный ренин составляет около 80 - 90 % от содержания всего ренина. Неактивный ренин может абсорбироваться на поверхности различных клеток, где он превращается в активную форму, выполняющую определенные локальные функции. У человека около 90 % проренина постоянно секретируется клетками ЮГА по мере его синтеза и лишь 10 % сохраняются в гранулах и превращаются в ренин. Регуляция секреции ренина включает в себя внутрипочеч-ные и внепочечные механизмы. Как стимулирующие, так и ингибирующие синтез ренина влияния реализуют свое действие через экспрессию гена ренина. Этот процесс регулируется системой внутриклеточных посредников (мессенджеров), концентрация или, активность которых в клетке тесно связана с состоянием рецепторного аппарата. В ряде исследований показано, что одним из наиболее важных мессенджеров при регуляции синтеза ренина является кальций. При этом все воздействия, приводящие к повышению концентрации свободного кальция в цитоплазме клеток ЮГА, ингибируют синтез и секрецию ренина. Одной из важных особенностей клеток ЮГА является низкая концентрация свободного кальция в цитоплазме. В других исследованиях среди внутриклеточных посредников важную роль отводят не только кальцию, но ц-АМФ и ц-ГМФ. При этом отмечено, что повышение внутриклеточной концентрации кальция и ц-ГМФ приводит к ингиби-рованию секреции ренина, а повышение концентрации ц-АМФ к ее усилению [Pedraza-Chaverri J. et al., 1989; Kurtz A. et al., 1998].

Морфологические изменения нервной ткани при алкогольной интоксикации и других патологических состояниях

При острой интоксикации алкоголем были выявлены структурные изменения нейронов головного мозга человека: острое набухание нейронов, лизис тигроидной субстанции, гидропическая дистрофия. Выявлялись темные сморщенные нейроны, некроз клеток с макрофагальной реакцией. Причиной изменения нейронов считают непосредственное действие этанола на нейроны и расстройство микроциркуляции, возникающее как его следствие, ведущее к гипоксии и ишемии нервной ткани [Зороастров О.М., 1995; Шор-манов СВ., 2004]. Дистрофические изменения нейронов головного мозга были описаны также и при стрессовых реакциях организма [Писарев В.Б. с соавт., 1995].

Морфологические изменения в периферической нервной системе при различных патологических состояниях являются следствием воздействия различных факторов. Однако все они приводят к однотипным изменениям, клетках, нервных волокнах, в сосудистой системе и соединительнотканной строме ганглиев [Швалев В.Н., 1999]. Картина изменений сходна с таковой в симпатических ганглиях, но менее интенсивна. Для тигроидной субстанции характерен процесс распыления, ядра - сплющены, вытянуты и пикно-тизированы, иногда теряют контуры. Сателлиты и гистиоциты в большинстве случаев имеют круглую форму и пролиферированы, местами тесно прилегают к ганглиозным клеткам [Чарыева И.Г. с соавт., 2002].

Была установлена взаимосвязь между изменениями внутренних органов (печени, легких, почек) при хроническом эндотоксикозе и количественными показателями вегетативных нервных структур этих органов. Во влиянии вегетативных нервных структур на развитие органопатологии были выделены элементы повреждения, а также защитное действие. Изменения в вегетативных нервных ганглиях рассматриваются как субстрат вегетативной дизрегуляции и способствуют изменениям во внутренних органах. Для подтверждения этого в эксперименте было проведено моделирование эндо-токсикоза в условиях применения адреномиметиков и адреноблокаторов. В условиях применения адреноблокаторов изменения в почках имели меньшую выраженность, чем в базовой модели. Наиболее неблагоприятные изменения были отмечены при хроническом эндотоксикозе на фоне применения адреномиметиков [Фролов В.И., Новочадов В.В., 2003; Новочадов В.В. с соавт., 2004]. Изменения нейронов вегетативных ганглиев носили мозаичный характер. Были выявлены ультраструктурные признаки раздражения (просветление нейроплазмы, появление большого числа нейрофиламентов, нейротрубочек), а также повышение структурно-функционального потенциала нервных клеток (нарастание объема цитоплазмы, насыщенность ор-ганеллами, везикулярными и гранулярными элементами). Деструктивные изменения были более выражены в симпатических ганглиях [Фролов В.И., 2004]. альтернативным введением ЛПС. При внутрибрюшинном введении ЛПС в течение 20 дней изменения в мозге примерно соответствовали таковым у крыс-алкоголиков. В экспериментальном исследовании была изучена реактивность нейроцитов вегетативных нервных узлов различного уровня, в том числе брыжеечного и чревного, при введении в организм крыс пирогенала. В нейроцитах всех изученных образований выявлены ультраструктурные признаки раздражения (просветление нейроплазмы, появление большого числа нейрофиламентов и нейротрубочек). Наряду с этим, отмечено повышение структурно-функционального потенциала нервных клеток (нарастание объема цитоплазмы, насыщенность органеллами, везикулярными и гранулярными элементами). Функциональное напряжение нейроцитов нередко сопровождалось деструкцией органелл, чаще всего энергетического аппарата. Деструктивные изменения более значительны в симпатических ганглиях по сравнению с парасимпатическими. Это связывают с общей активацией всей гипофиз-адреналовой системой [Ковалева Н.М. с соавт., 2003].

Симпатические ганглии являются, по мнению большинства авторов, наиболее поражаемыми при экзогенных и эндогенных интоксикациях. Наиболее выражены такие признаки как дегенерация нейронов, микроциркуля-торные изменения, пролиферация глиальных элементов. При инфекционной токсемии наблюдается особенно сильное разрастание соединительнотканной стромы, уменьшение количества нейронов и их атрофия. Около сосудов и в их стенке отмечается лимфоцитарная инфильтрация, а клетки-сателлиты увеличены в числе местами с образованием очагов заместительного сател-литоза. Нейрофибриллы часто выступают неотчетливо, местами утолщены или зернисты, в некоторых клетках совершенно отсутствуют [Чарыева И.Г. с соавт., 2002].

Морфологические методы исследования

Морфологическому исследованию во всех случаях были подвергнуты корковое и мозговое вещество почек, включая зону ворот органа. От каждой почки, таким образом, получали по два кусочка ткани размером 1x1x2,5 см в виде вертикальных столбиков, ориентированных от капсулы вглубь почки.

Также осуществляли исследование аорто-почечных вегетативных ганглиев с соответствующих почкам сторон. Аорто-почечные ганглии парные, располагаются в клетчатке в углу, образованном верхним или нижним краем начальной части почечной артерии и брюшным отделом аорты соот ветственно, с обеих сторон. Они представляют собой овальной или округлой формы образования небольших размеров, плохо различимы в массе окружающей жировой клетчатки.

Забор кусочков почек и вегетативных ганглиев осуществлял и не позднее 6—12 часов от момента смерти.

Перед изготовлением микропрепаратов проводили фиксирование фрагментов почек и ганглиев в течение 48 часов в 10% растворе нейтрального формалина. После фиксации материал проводили по общепринятой гистологической методике через батарею спиртов возрастающей концентрации, хлороформ и заливали в парафин. С парафиновых блоков готовили срезы толщиной 4-6 мкм [Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996].

Полученные срезы с блоков тканей почек окрашивали общепринятыми методиками: гематоксилином и эозином, по ванГизону [Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996].

Для изучения элементов нервной системы производили окрашивание блоков тканей аорто-почечных ганглиев по методу Ниссля. С этой целью депарафинизированные срезы окрашивали тионином в разведении 1:1000 в термостате при температуре 37 С в течение 12-14 часов. Затем стекла со срезами споласкивали водопроводной водой 1-2 минуты, дифференцировали чистым 95% спиртом, помещали в абсолютный спирт, просветляли в ксилоле и заключали в бальзам [Коржевский Д.Э., 2005].

Для изучения нервных элементов в области ворот почек, а также для оценки взаиморасположения нервных волокон, нейронов и глии в ганглиях использовали метод импрегнации микропрепаратов азотнокислым серебром по Бильшовскому в модификации Ландау для парафиновых срезов. Если импрегнация оказывалась слишком сильной, то ее ослабляли 10 % - ным раствором йодида калия; если она была слишком слаба, то после восстановления в формалине вновь капали раствор аммиачного серебра [Сарки-сов Д.С., Перов Ю.Л., 1996].

Визуальное исследование осуществляли предварительно на малом увеличении, затем - прицельно не менее чем в пяти полях зрения для ткани почек и по всей площади аорто-почечного ганглия на срезе (от 2 до 7 полей зрения.

Исследование препаратов сочетали с микрофотосъемкой, которая осуществлялась цифровой камерой Canon (Japan, 5.0 мегапикселей) на базе микроскопа Axiostar plus (Карл Цейс, Германия) с использованием объектива х40, хЮО и окуляра х10.

Для выявления пролиферативной активности в ткани почек использовали моноклональные антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA, DakoCytomation, Дания). При анализе результатов окраски учитывали, что экспрессия PCNA выявляется не только в клетках, вступающих в стадию пролиферации, но и на этапах внутриклеточной регенерации после ее обратимого повреждения.

Также использовали моноклональные антитела к макрофагальному антигену (НАМ 56, DakoCytomation, Дания). Данный антиген выявляется как в моноцитах крови, так и в тканевых мононуклеарных фагоцитах (резидентных и мигрирующих из кровотока). Визуализацию проводили с помощью непрямого иммунопероксидазного метода с высокотемпературной и ферментной демаскировкой антигенов. Для достоверности полученных результатов применяли позитивные и негативные контроли антигенов, а так же негативные контроли антител [Петров СВ., Райхлин Н.Т., 2004; Adams C.W., Poston R.N., 1990; Hall P.A. et al., 1990; Waseem N.H., Lane D.P., 1990; Rowlands D.C. et al., 1991; Yu C.C.-W., Filipe M.I., 1993; Kelman Z., 1997; Rosa M.A. et al., 2000; Paunesku T. et al., 2001].

Изменения в почках у лиц основной исследуемой группы и группы сравнения

Таким образом, сосудистые нарушения в почках лиц, длительное время употреблявших спиртсодержащие жидкости, имевших морфологические признаки длительной алкогольной интоксикации в сердце и печени, и умерших в период абстиненции, были представлены равномерным полнокровием перитубулярных капилляров и вен, а также полнокровием капилляров клубочков в сочетании с диапедезом эритроцитов в периваскулярные пространства и в просвет капсулы клубочков, транссудацией в просвет капсулы клубочков и отеком интерстиция.

В 48 % случаев обнаруживался белковый экссудат в просвете капсулы одной трети клубочков, а в единичных случаях - гиалиноз клубочков и ар-териол, сморщивание и склероз клубочков почек.

Изменения канальцев почек были равномерно выражены как в проксимальных, так и в дистальных отделах нефронов. Они были представлены смешанной дистрофией (зернистой и гидропической) и некрозом клеток в сочетании с очаговой облитерацией просвета канальцев белковым коагулятом, слущенным эпителием и расширением необтурированных канальцев.

В единичных случаях наблюдалась очаговая лейкоцитарная инфильтрация стромы. Очаговое отложение солей кальция в просвете канальцев было отмечено в 35 % случаев.

Расширение мезангия клубочков почек за счет склероза, а также утолщение самой капсулы таких клубочков за счет склероза носило повсеместный характер. На этом фоне примерно в одной трети нефронов количество соединительной ткани было больше.

Расширение стромы почек за счет склероза было диффузным. Однако в каждом случае преобладали изменения вокруг проксимальных и дистальных извитых канальцев почек.

На этом фоне в каждом случае были не единичными очаги соединительной ткани. При этом они практически всегда обнаруживались в корковом веществе почек. Размеры таких очагов были различными, но преобладали очаги небольших размеров (менее размера одного клубочка). Значительных размеров участки соединительной ткани (размером более чем 2-3 клубочка) обнаруживались менее чем в одной трети случаев. Вокруг таких участков отмечалась атрофия окружающих канальцев.

Таким образом, гистологическое исследование почек у лиц, длительно употреблявших ССЖ, и умерших в острый период отмены, выявило, в целом картину хронической нефропатии с элементами острых изменений.

Соотношение острых и хронических изменений, а также их выраженность, явно недостаточная, чтобы быть субстратом фатальной почечной недостаточности, требует изучения отдельных изменений в почках методами иммуногистохимии и количественной морфологии (морфометрии).

При проведении реакции на выявление ядерного антигена пролифе-рирующих клеток отмечалось позитивное окрашивание ядер иногда с рассеянными нечеткими единичными включениями иммунопозитивного материала в цитоплазме клеток. Клетки с экспрессией PCNA встречались во всех отделах нефрона и в строме почек. Наиболее часто позитивно окрашивались на PCNA клетки эпителия проксимальных и дистальных извитых канальцев, а также макрофаги. В межуточной ткани встречались позитивно окрашенные ядра фибробластов. Между капиллярных петель клубочков выявлялись мезангиоциты с экспрессией PCNA (рис. 12).

Позитивное окрашивание ядер эпителия проксимальных и дистальных извитых канальцев зависело от степени их токсического повреждения. Чем меньше клеток на срезе канальца было некротизировано, тем больше обнаруживалось клеток с экспрессией PCNA (рис. 13).

Обращало на себя внимание наличие участков, где высокая степень экспрессии PCNA в эпителиоцитах сочеталась с присутствием макрофагов в ближайшем окружении канальца, которые имели также высокую степень экспрессии PCNA (рис. 14).

В результате проведенной иммуногистохимической окраски с использованием моноклональных антител к макрофагальному антигену было выявлено позитивное цитоплазматическое окрашивание клеток макрофагаль-ного происхождения (моноциты и тканевые макрофаги).

Похожие диссертации на Морфология нервного аппарата и паренхимы почек у лиц, длительно употреблявших алкоголь и умерших в период абстиненции [Электронный ресурс]